輸血前檢查中的不規(guī)則抗體篩選課件

1、 輸血前檢查中的不規(guī)則抗體篩選 不規(guī)則抗體的篩選不規(guī)則抗體產(chǎn)生原因：輸血、妊娠對受血者的血清或血漿進(jìn)行抗體篩查是非常必要的，因為有臨床意義的抗體會導(dǎo)致溶血性輸血反應(yīng)，破壞輸入的不配合的紅細(xì)胞或縮短其壽命，或引起新生兒溶血病。 不規(guī)則抗體的篩選重要性抗體篩選的重要性可以在配血前早期發(fā)現(xiàn)和確認(rèn)具有臨床意義的意外抗體，獲得充足的時間來選擇缺少相應(yīng)抗原的相配合的血，避免一些可能的情況造成病情延誤 。 待檢血液樣本要求樣本管上要明確標(biāo)注能確認(rèn)被檢者身份的信息。如姓名、住院號等?？刹捎肊DTA抗凝、肝素抗凝以及不抗凝血樣。 EDTA能螯合鈣并阻止補(bǔ)體激活，避免補(bǔ)體附著在篩選紅細(xì)胞上引起非特異性反應(yīng)。 建議

2、不要使用血清分離管：因為管中有凝膠，很難獲得不被凝膠污染的自身紅細(xì)胞。溶血的標(biāo)本不能使用，因為可能掩蓋抗體引起的溶血。自身細(xì)胞、篩選細(xì)胞使用前最好洗滌病歷信息臨床診斷妊娠史輸血史近期使用的藥物種族抗體篩選的試劑抗體篩選紅細(xì)胞抗人球蛋白試劑增強(qiáng)介質(zhì)的添加LissPEG4000酶凝聚胺 抗體篩選用的紅細(xì)胞抗體篩選用的紅細(xì)胞：雙人份細(xì)胞和三人份細(xì)胞組。其Rh血型為：CCDee、ccDEE、和ccdee.必須具備全部Rh因子，還應(yīng)該含有其他常見抗原：M, N, S, s,Lea ,Leb, k, Fya, Fyb, Jka,和 Jkb 抗原，還必須具有Dia 抗原。兩細(xì)胞和三細(xì)胞的篩選紅細(xì)胞示意圖Rh

3、 Kell Duffy Kidd Lewis P MN Lutheran XgCell D C c E e K k Fya Fyb Jka Jkb Lea Leb P1 M N S s Lua Lub XgaR1R1 + + o o + + + + o + + o + o + + + + o + +R2R2 + o + + o o + + + + o + o + + o + + + + oRh Kell Duffy Kidd Lewis P MN Lutheran XgCell D C c E e K k Fya Fyb Jka Jkb Lea Leb P1 M N S s Lua Lub X

4、gaR1R1 + + o o + + + + o + + o + o + + + + o + +R2R2 + o + + o o + + + + o + o + + o + + + + orr o o + o + o + + + + o + o + o + + + + o + 篩選紅細(xì)胞試劑紅細(xì)胞是保存在保存液中，一旦用生理鹽水或 Liss液洗滌后則應(yīng)該在小時內(nèi)使用，否則會因污染、抗原（Lewis系統(tǒng)抗原）丟失導(dǎo)致試驗錯誤。 抗人球蛋白試劑抗人球蛋白分類：單特異性的抗-IgG，抗C3d，多特異性的抗IgG+C3d?？?IgG、抗IgG+C3d的多特異性抗球蛋白試劑都可用于抗體檢測?？笽gG+C

5、3d可增加一些補(bǔ)體依賴稀有抗體的檢出，如Kidd血型系統(tǒng)的一些抗體; 與單純的抗IgG相比，抗IgG+C3d 與這些需要補(bǔ)體參與反應(yīng)的抗體可產(chǎn)生更強(qiáng)的反應(yīng)。 多特異性抗球蛋白試劑的缺點(diǎn)是容易產(chǎn)生假陽性反應(yīng)。 使用抗IgG可以避免補(bǔ)體引起的非特異反應(yīng)，但降低了補(bǔ)體依賴抗體的檢測靈敏度?？贵w篩選技術(shù)（1）技術(shù)要求：盡可能多的檢測出有臨床意義的抗體。 (靈敏度高）盡可能少的檢測出無臨床意義的抗體。（特異性好）盡可能快的完成抗體檢測。 （簡單、快速、易操作）抗體篩選技術(shù)（2）選擇的技術(shù)不僅要能檢查出不配合的IgM抗體，還必須能檢查出盡可能多的不配合的IgG抗體。最大限度的減少抗體的漏檢。 每種方法都有

6、自己的特點(diǎn)，適應(yīng)于不同范圍及情況。到目前為止，還沒有任何單一的技術(shù)方法可以檢測出所有的血型抗體?？贵w篩選技術(shù)（3）在進(jìn)行抗體篩選時，不能只選用IAT方法，必須同時選用立即離心技術(shù)和其他技術(shù)。立即離心法是間接抗人球法無法替代的。 抗體篩選技術(shù)（鹽水試驗）立即離心鹽水試驗技術(shù)：可以用于檢測IgM性質(zhì)的鹽水反應(yīng)活性抗體。此方法缺點(diǎn)是檢查出無臨床意義的抗體，如冷凝集素抗及抗等；且漏檢IgG性質(zhì)的抗體。 發(fā)現(xiàn)和確認(rèn)緡錢現(xiàn)象發(fā)現(xiàn)冷特異性抗體（如抗-Lea)發(fā)現(xiàn)冷自身抗體抗體篩選技術(shù)（經(jīng)典間接抗人球蛋白試驗）程序程序：2滴血清、1滴2-5%的紅細(xì)胞，37孵育45-60分鐘，生理鹽水洗滌3遍后傾倒上清液，控干

7、，加2滴抗人球蛋白試劑，離心后判讀結(jié)果。用抗體致敏的紅細(xì)胞檢測試驗結(jié)果的正確性。優(yōu)點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)：特異性好。缺點(diǎn)缺點(diǎn)：靈敏度比Liss-IAT、PEG-IAT、凝膠卡差，耗時長?？贵w篩選技術(shù)（LISS-間接抗人球蛋白試驗）原理：1、Liss液可以降低紅細(xì)胞周圍的離子云，促進(jìn) 抗體致敏紅細(xì)胞。 2、降低反應(yīng)體系中的離子強(qiáng)度，使抗體易于 接近抗原，縮短紅細(xì)胞致敏時間優(yōu)點(diǎn)：1、縮短孵育時間 2、使用抗-IgG，可以減少假陽性反應(yīng)。缺點(diǎn)：1、易出現(xiàn)假陽性反應(yīng) 2、方法的靈敏度要弱于PEG-IAT法程序：程序：2滴血清、1滴2-5%的紅細(xì)胞，加2-4滴LISS液后混勻，37孵育15分鐘，離心觀察細(xì)胞的凝集情況，

8、用生理鹽水洗滌3遍后傾倒上清液，控干，加2滴抗人球蛋白試劑，離心后判讀結(jié)果?？贵w篩選技術(shù)（PEG-間接抗人球蛋白試驗）原理：1、破壞紅細(xì)胞水膜層，使抗原抗體容易結(jié)合 2、固定水分子，使反應(yīng)體系中抗體濃度相對提高（ 空間排斥效應(yīng)）優(yōu)點(diǎn)：1、大幅提高IAT的反應(yīng)強(qiáng)度和靈敏度 2、特異性好，假陽性反應(yīng)低于凝聚胺方法。缺點(diǎn)：1、促進(jìn)自身抗體的檢出 2、不能觀測37孵育后結(jié)果 3、對于高蛋白血清或血漿，會出現(xiàn)蛋白析出。程序程序： 2滴血清、1滴2-5%的紅細(xì)胞，加4滴PEG溶液后混 勻，37孵育15分鐘，生理鹽水洗滌3遍后傾倒上清液，控干，加2滴抗人球蛋白試劑，離心后判讀結(jié)果。 抗體篩選技術(shù)（酶試驗）原

9、理原理：蛋白水解酶可破壞紅細(xì)胞表面的帶負(fù)電荷的唾液酸基團(tuán)，使紅細(xì)胞表面負(fù)電荷減少，降低了紅細(xì)胞之間的排斥力，縮短了相鄰紅細(xì)胞之間的距離，使IgG抗體凝集紅細(xì)胞。程序程序：2滴血清、1滴2-4%紅細(xì)胞，加入2滴酶，37孵育15分鐘，離心看結(jié)果。優(yōu)缺點(diǎn)：酶試驗（菠蘿酶或木瓜酶）： 用于輸血前檢查中的抗體篩查，因為酶方法會破壞一些紅細(xì)胞抗原，如，F(xiàn)ya和Fyb, 但酶技術(shù)可以增強(qiáng)Rh及Kell系統(tǒng)的抗體檢測。主要用于MNSs系統(tǒng)的抗體檢測。酶可以引起假的陽性和陰性反應(yīng)。酶試驗可以發(fā)現(xiàn)唯酶介質(zhì)反應(yīng)性抗體（如唯酶抗E） 抗體篩選技術(shù)（凝膠卡試驗） 試驗原理代替試管，血清與細(xì)胞在一個微型管內(nèi)反應(yīng) 每個柱中

10、含有約25-30ul的葡聚糖 凝膠。凝膠中還包含有抗人球蛋白成分在離心時，在樣品槽中的RBC在離心力作用下進(jìn)入凝膠管中。血清與游離的血清蛋白因缺乏足夠的重力留在樣品槽中 。實驗操作步驟 用含有抗人球蛋白的凝膠微管 樣品槽中加入25ul的血清/血漿和50ul懸浮在LISS液中的0.8-1的RBC37中孵育15分鐘 ，用專用凝膠卡離心機(jī)在設(shè)定條件下離心 判讀 減少了試驗人員接觸樣本的頻率，減少接觸感染的機(jī)會需要的樣本少在試驗的重復(fù)性方面有著極強(qiáng)的一致性，無需細(xì)胞洗滌步驟以及對技術(shù)的依賴性降低。提供了一個明確的較易判讀的穩(wěn)定的結(jié)果，且結(jié)果可以保留較長時間供多人判讀，還可以拍照永久保存。靈敏度更高。孵

11、育時間短。 15分鐘。凝膠卡試驗的優(yōu)點(diǎn)凝膠卡試驗的缺點(diǎn)要精確調(diào)節(jié)紅細(xì)胞濃度至0.8-1，這較為麻煩。將試劑瓶中的細(xì)胞加入試管要比加入如此小的凝膠孔中要容易的多。 緡錢狀凝集與不完全的小血塊樣本也可造成假陽性。可以檢出大量臨床無意義的抗體。 自身對照試驗必要性自身對照：即使用病人自己的血清和自己紅細(xì)胞進(jìn)行抗體檢測。有助于確定抗體篩選陽性結(jié)果是同種抗體還是自身抗體、或是緡錢引起。 抗體篩選一般程序患者血清或血漿篩選細(xì)胞患者血清或血漿自身細(xì)胞用試管法室溫鹽水離心檢測IgM抗體用抗人球法（試管法、卡）、聚凝胺法、酶法檢測IgG抗體抗體篩選結(jié)果的分析（1） 在分析抗體篩選結(jié)果時，應(yīng)綜合運(yùn)用以下資料：受檢

12、血清與每個篩選細(xì)胞的反應(yīng)結(jié)果受檢血清與自身細(xì)胞的反應(yīng)結(jié)果檢查比較不同反應(yīng)相的結(jié)果，如鹽水介質(zhì)、抗人球蛋白試驗、酶試驗等在試驗中紅細(xì)胞與血清孵育后是否溶血 陽性反應(yīng)的強(qiáng)度，有無劑量效應(yīng)抗體篩選結(jié)果分析（2）患者的血漿與篩選細(xì)胞在不同的介質(zhì)中反應(yīng)，若：抗體篩選陰性陰性，只能說明患者血清中沒有針對篩選細(xì)胞所具有抗原的抗體，不能排除有抗低頻抗原抗體存在的可能?？贵w篩選陽性陽性，說明患者血清中有意外抗體，可進(jìn)一步進(jìn)行抗體鑒定，以確定抗體的特異性?？贵w篩選結(jié)果分析（3）自身對照陽性的解釋存在自身抗體，如自身免疫性溶血性貧血患者。輸血反應(yīng)：如果患者對近期輸入的紅細(xì)胞產(chǎn)生同種抗體，其體內(nèi)獻(xiàn)血者的紅細(xì)胞被抗體致

13、敏，使自身對照陽性，很容易誤認(rèn)為是自身抗體。因此了解患者近期輸血史和有無輸血反應(yīng)十分重要抗體篩選結(jié)果的解釋（1） 自身對照陰性自身對照陰性患者血清與篩選細(xì)胞室溫鹽水和抗人球蛋白試驗均陰性，說明抗體篩選陰性?；颊哐迮c篩選細(xì)胞室溫鹽水介質(zhì)凝集，說明有IgM性質(zhì)的同種抗體?；颊哐迮c篩選細(xì)胞室溫鹽水介質(zhì)不凝集，抗人球蛋白試驗陽性，說明有IgG性質(zhì)的同種抗體?；颊哐迮c篩選細(xì)胞室溫鹽水介質(zhì)凝集，用DTT或2Me處理血清后，抗人球蛋白試驗陰性，說明只有IgM抗體，沒有IgG性質(zhì)的同種抗體；抗人球蛋白試驗陽性，說明既有IgM抗體還有IgG性質(zhì)的同種抗體?？贵w篩選結(jié)果的解釋（2） 自身對照陽性自身對照陽性

14、患者血清與篩選細(xì)胞室溫鹽水和抗人球蛋白試驗均陰性，說明抗體篩選陰性?；颊哐迮c篩選細(xì)胞室溫鹽水介質(zhì)凝集，說明有IgM性質(zhì)的自身抗體或/和同種抗體?；颊哐迮c篩選細(xì)胞室溫鹽水介質(zhì)不凝集，抗人球蛋白試驗陽性，說明有IgG性質(zhì)的自身抗體或/和同種抗體?；颊哐迮c篩選細(xì)胞室溫鹽水介質(zhì)凝集，用DTT或2Me處理血清后，抗人球蛋白試驗陰性，說明沒有IgG性質(zhì)的自身或/和同種抗體；抗人球蛋白試驗陽性，說明還有IgG性質(zhì)的自身或/和同種抗體。譜細(xì)胞反應(yīng)結(jié)果的判斷對照篩選細(xì)胞表，通過陰性排除法可初步看出可能有哪些抗體，再通過譜細(xì)胞做抗體鑒定，來確定抗體的特異性微柱凝膠法抗體篩選程序（1）確定待檢樣本符合要求，確

15、定化驗單的檢驗項目包含抗體篩選項目。病歷記錄要包含既往的抗體篩選結(jié)果。準(zhǔn)備實驗材料：將待用試劑平衡至室溫用Liss液將篩選細(xì)胞調(diào)節(jié)到0.8-1%濃度準(zhǔn)備好抗IgG微柱凝膠卡，并標(biāo)記三個微管，分別為1、2、3號。微柱凝膠法抗體篩選程序（2）去除已作標(biāo)記的微管上口的封口膜。按照下表向樣品槽中加入試劑：輕扣凝膠卡，檢查樣品槽中試劑量及液面，保證三管樣品槽中液面均勻且處于同一水平面位置。 微管號微管號 篩選紅細(xì)胞量篩選紅細(xì)胞量 患者血漿量患者血漿量 1一號篩選細(xì)胞50微升 25微升 2二號篩選細(xì)胞50微升 25微升 3三號篩選細(xì)胞50微升 25微升微柱凝膠法抗體篩選程序（3）置抗IgG凝膠卡于37 1 孵育箱中孵育15分鐘。取出凝膠卡，用凝膠卡專用離心機(jī)離心：將卡放入離心機(jī)轉(zhuǎn)子上的卡槽中，注意要保持轉(zhuǎn)子的平衡?？凵想x心機(jī)蓋板。啟動運(yùn)行按鈕。檢查倒計時時間及離心轉(zhuǎn)速符合試驗要求。離心機(jī)運(yùn)轉(zhuǎn)停止且蓋板自動打開后取出凝膠卡。微柱凝膠法抗體篩選程序（4）結(jié)果判定將檢測結(jié)果與既往記錄比較。對于抗體篩選陽性的樣本進(jìn)行抗體鑒定?？箍笽gG卡結(jié)果卡