瘰疬清膠囊藥效學(xué)研究

1、    瘰疬清膠囊藥效學(xué)研究作者：羅宇慧 彭蘊(yùn)茹 葉其正 王志剛 石磊 沈明勤【摘要】  目的觀察瘰疬清膠囊對動物的止咳、抗炎及提高機(jī)體免疫力的作用。方法小鼠灌胃瘰疬清膠囊16.0，8.0和4.0 g生藥/kg后，采用濃氨水噴霧法進(jìn)行止咳實驗，觀察動物咳嗽潛伏期及咳嗽次數(shù)。大鼠灌胃瘰疬清膠囊8.0，4.0和2.0 g生藥/kg的后，采用大鼠慢性炎癥瓊脂肉芽腫法，觀察肉芽腫濕重及抑制率的變化，采用角叉菜膠致大鼠足腫脹法，測定大鼠足腫脹度及足腫脹抑制率。注射環(huán)磷酰胺（CY）造成小鼠免疫功能低下模型，觀察灌胃瘰疬清膠囊16.0，8.0和4.

2、0 g生藥/kg后，小鼠免疫功能的改變。結(jié)果瘰疬清膠囊能明顯延長小鼠咳嗽潛伏期和減少咳嗽次數(shù)，對大鼠慢性炎癥瓊脂肉芽腫具有一定的抑制作用，對角叉菜膠致大鼠足腫脹具有一定的抑制作用，瘰疬清膠囊能明顯對抗CY作用，提高免疫抑制小鼠的免疫功能。結(jié)論瘰疬清膠囊對實驗動物具有一定的止咳、抗炎及提高機(jī)體免疫力的作用。 【關(guān)鍵詞】  瘰疬清膠囊； 動物； 止咳； 抗炎； 免疫功能瘰疬清膠囊由生牡蠣、夏枯草、七葉一枝花、玄參等組成，臨床上主要用于 治療 瘰疬，頸部淋巴結(jié)核。本實驗主要觀察瘰疬清膠囊對動物的止咳、抗炎及提高機(jī)體免疫力的作用，為臨床應(yīng)用提供實驗依據(jù)。1 器材 1.1 動物清潔級

3、KM小鼠：兼有，體重1822 g；清潔級SD大鼠：，體重280360 g，購于上海斯萊克實驗動物有限責(zé)任公司，合格證號：SCXK（滬）2002-0010號。1.2 試藥瘰疬清膠囊（干粉）：含6.88 g生藥/g，批號20030718，江蘇省中醫(yī)藥研究院中藥制劑研究室提供。枸櫞酸噴托維林片（咳必清）：每片含枸櫞酸噴托維林25 mg，批號020118-2，蘇州醫(yī)藥集團(tuán)有限公司生產(chǎn)。濃氨水：分析純，批號981125，益林化工廠生產(chǎn)。乙酰水楊酸腸溶片(阿司匹林)：25 mg/片，批號20020404，南京第二制藥廠生產(chǎn)，使用時以蒸餾水配成濃度為10 mg/ml的藥液供灌胃給藥。瓊脂：批號980424，

4、 中國 藥品生物制品檢定所。角叉菜膠(Type)：批號232-524-2，美國SIGMA公司生產(chǎn)。環(huán)磷酰胺粉針(CY)：200 mg/瓶，江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司生產(chǎn)，批號2003041521。鹽酸左旋咪唑片：25 mg/片，南京第二制藥廠,批號20010104。5%雞紅細(xì)胞懸液的制備：由市售肉雞采血約10 ml，以肝素生理鹽水抗凝，再按11加入注射用0.9% NaCl液(NS)，充分混勻洗滌后，3 000 r/min離心15 min，棄去上清液，余下的紅細(xì)胞再洗滌23次。取洗凈離心后的紅細(xì)胞4 ml，用NS液配制成5%濃度，現(xiàn)配現(xiàn)用。1.3 儀器S-888型超聲波霧化器，中外合資道芬 電子

5、有限公司生產(chǎn)；PB303-N千分之一電子天平 上海產(chǎn)；隔水式電熱水浴箱；BH-2OLYMPUS顯微鏡：日本進(jìn)口。2 方法 2.1 小鼠止咳實驗14取小鼠50只，稱重，隨機(jī)分為5組，每組10只，各半，分別為模型對照組（蒸餾水20 ml/kg）、陽性藥咳必清對照組(0.05 g/kg)和瘰疬清膠囊大、中、小劑量組(16.0，8.0和4.0 g生藥/kg)。各組動物灌胃(ig)給藥，給藥量均為20 ml/kg，給藥1 h后各動物分別置于噴霧箱內(nèi)，用超聲波霧化器以相同強(qiáng)度將濃氨水霧化后噴入活動箱內(nèi)，噴霧1 5 s后，立即觀察動物咳嗽潛伏期（在吸入氨水氣霧后至發(fā)生咳嗽所需時間為潛伏期），并記錄2 min

6、內(nèi)的咳嗽次數(shù)，各給藥組與模型對照組進(jìn)行組間t檢驗統(tǒng)計學(xué)處理。2.2 大鼠肉芽腫實驗14肉芽腫模型：大鼠背部中線處取2.0 cm×2.0 cm面積脫毛，消毒，皮下注射2%瓊脂(56水浴保溫)2 ml，注射后立即凸起球狀包塊即成。隔日取50只肉芽腫模型大鼠，全，隨機(jī)分5組，每組10只，分別為模型對照組(蒸餾水10 ml/kg)、陽性藥阿司匹林組(0.1 g/kg)、瘰疬清膠囊大、中、小3個劑量組 (8.0，4.0和2.0 g生藥/kg)。各組動物ig給藥，給藥量均為10 ml/kg。ig 1次/d，連續(xù)給藥7 d，每日觀察肉芽腫變化，末次藥后1 h脫椎處死大鼠，剪開肉芽部位皮膚，剝離肉芽

7、腫瓊脂塊，稱取濕重，各給藥組與模型對照組進(jìn)行組間t檢驗統(tǒng)計處理。肉芽腫抑制率(%)按下列公式 計算 ：抑制率（%） =模型對照組均值 - 給藥組均值模型對照組均值 ×100%2.3 大鼠足腫脹實驗 14取大鼠50只，稱重，隨機(jī)分為5組，每組10只,全，分別為模型對照組（蒸餾水10 ml/kg）、阿司匹林組（0.1 g/kg）、瘰疬清膠囊大、中、小3個劑量組(8.0，4.0和2.0 g生藥/kg)。給藥量均為10 ml/kg。用足跖測定器測量每只大鼠左后肢正常足跖容積（10 ml注射器，上口刻有標(biāo)記，內(nèi)含中性洗滌劑的水溶液，通過硬塑料管連接另一5 ml注射器），用記號筆在大鼠左后肢踝關(guān)

8、節(jié)周圍做一標(biāo)記，將大鼠左后肢浸入容器，使注射器上口標(biāo)記與大鼠后肢關(guān)節(jié)標(biāo)記和液面重疊，多余液體則抽入5 ml注射器內(nèi)，抽入注射器內(nèi)的液體量即為足跖容積。測量完給藥前的正常足跖容積后，各組動物ig給藥，30 min后,于左后肢足跖皮下注入1%角叉菜膠0.1 ml，注射0.5 h后（給藥后1 h）按上述方法測量0.5，1，2，4，6，8 h的足跖容積,記錄結(jié)果，并分別按下式計算腫脹率（%）和抑制率（%）。各給藥組與模型對照組進(jìn)行t檢驗統(tǒng)計處理。腫脹率（%）=致炎后足跖容積致炎前足跖容積 致炎前足跖容積×100% 抑制率（%） =對照組平均腫脹度 - 給藥組平均腫脹度對照組平均腫脹度

9、5;100%2.4 小鼠免疫實驗2.4.1 小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬實驗取小鼠60只，隨機(jī)分為6組，每組10只, 各半。分別為正常組和環(huán)磷酰胺（CY）模型組(蒸餾水20 ml/kg)、陽性藥左旋咪唑組(25 mg/kg)、瘰疬清膠囊大、中、小劑量組(16.0，8.0和4.0 g生藥/kg)。各組動物灌胃(ig)給藥，給藥量均為20 ml/kg，ig 1次/d，連續(xù)給藥7 d，第5天除正常對照組外，每組動物腹腔注射CY 40 mg/kg (0.1 ml/10 g)，第6天各重復(fù)注射1次，末次給藥后1 h小鼠腹腔注射5%雞紅細(xì)胞懸液0.5 ml/只。再經(jīng)2 h后脫頸椎處死動物，酒精消毒腹部，腹腔注射生

10、理鹽水2 ml，輕揉腹部，剪開皮膚，暴露腹膜，剪一小口用消毒吸管吸取腹腔細(xì)胞懸液0.2 ml，涂敷于玻片上，然后將玻片平放于潮濕的培養(yǎng)皿內(nèi)在37的孵育箱內(nèi)孵育30 min。再用NS沖洗去未粘附的細(xì)胞，待 自然 晾干后，甲醇固定15 min，姬氏染色，計數(shù)100個巨噬細(xì)胞，按下列公式計算吞噬百分率和吞噬指數(shù)。各給藥組與模型對照組進(jìn)行t檢驗統(tǒng)計處理。吞噬百分率 （%）= 吞噬雞紅細(xì)胞的巨噬細(xì)胞數(shù)觀察的100個巨噬細(xì)胞數(shù)×100%吞噬指數(shù)=被吞噬的雞紅細(xì)胞總數(shù)100個巨噬細(xì)胞數(shù)2.4.2 小鼠PHA誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率實驗取小鼠60只，體重1822 g，隨機(jī)分為6組，每組10只, 各半。分別

11、為正常組和CY模型組(蒸餾水20 ml/kg)、陽性藥左旋咪唑組(25 mg/kg)、瘰疬清膠囊大、中、小劑量組(16.0，8.0和4.0 g生藥/kg),其中瘰疬清膠囊大劑量相當(dāng)于擬臨床人日用量的24倍。將供試藥品在超凈工作臺中配成相應(yīng)濃度并紫外線消毒后，各組動物灌胃(ig)給藥，給藥量均為20 ml/kg，ig1次/d，連續(xù)給藥8 d，于給藥第1天起，每只小鼠每天肌內(nèi)注射PHA 10 mg/kg ( 0.1 ml/20 g)，共3 d，第6天除空白對照組外,其余各組動物腹腔注射CY 40 mg/kg(0.1 ml/10 g)，第7天重復(fù)注射1次,末次藥后1 h小鼠眼眶后靜脈叢取血，推片，甲

12、醇固定,姬氏染色，水洗，晾干，高倍鏡下計數(shù)100個淋巴細(xì)胞中淋巴母細(xì)胞數(shù)，按下式 計算 淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率。各給藥組與模型對照組進(jìn)行t檢驗統(tǒng)計處理。淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率 （%）= 轉(zhuǎn)化細(xì)胞數(shù)轉(zhuǎn)化細(xì)胞數(shù)+未轉(zhuǎn)化細(xì)胞數(shù)×100%2.4.3 小鼠血清溶血素水平測定取小鼠60只，體重1822 g，隨機(jī)分為6組，每組10只, 各半。分別為正常組、CY模型組(蒸餾水20 ml/kg)、陽性藥左旋咪唑組(25 mg/kg)、瘰疬清膠囊大、中、小劑量組(16.0，8.0和4.0 g生藥/kg)。將供試藥品在超凈工作臺中配成相應(yīng)濃度并紫外線消毒后，各組動物灌胃(ig)給藥，給藥量均為20 ml/kg，1次/d，

13、連續(xù)給藥12 d，于給藥后第5天各組動物腹腔注射5%雞紅細(xì)胞懸液0.2 ml/只進(jìn)行免疫,再于給藥后第10天除正常對照組外，每組動物腹腔注射CY 40 mg/kg (0.1 ml/10 g)，第11天重復(fù)注射1次，末次給藥后1 h小鼠眼眶后靜脈叢取血，離心，取10 l血清用生理鹽水稀釋100倍，與5%雞紅細(xì)胞懸液0.5 ml及10%補(bǔ)體0.5 ml混合，37恒溫水浴中保溫30 min后，0冰水浴中終止反應(yīng)，離心，取上清液于貝克曼DU640型紫外分光光度計540 nm波長處比色,測光密度(OD)值，另設(shè)不加血清的空白對照,取上清液作為比色時調(diào)0的基準(zhǔn)。以O(shè)D值作為判定血清溶血素水平的指標(biāo)。各給藥組與模型對照組進(jìn)行t檢驗統(tǒng)計處理。2.4.4 小鼠血清免疫球蛋白水平測定取小鼠60只，體重1822 g，隨機(jī)分為6組，每組10只，各半。分別為正常組和CY模型組(蒸餾水20 ml/kg)、陽性藥左旋咪唑組(25 mg/kg)、瘰疬清膠囊大、中、小劑量組(16.0，8.0和4.0 g生藥/kg),其中瘰疬清膠囊大劑量相當(dāng)于擬臨床人日用量的24倍。將供試藥品在超凈工作臺中配成相應(yīng)濃度并紫外線消毒后，各組動物灌胃(ig)給藥，給藥量均為20 ml/kg，1次/d，連續(xù)給藥8 d，于給藥后第6天除正常對照組外，每組動物腹腔注射CY 40 mg/kg (0.1 ml/10 g)，第