自身免疫性疾病抗體譜及其實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)進(jìn)展_汪付兵

1、·綜述·自身免疫性疾病抗體譜及其實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)進(jìn)展汪付兵綜述,涂建成審校(武漢大學(xué)中南醫(yī)院檢驗(yàn)科/基因診斷中心,湖北武漢430071關(guān)鍵詞:自身免疫疾病;實(shí)驗(yàn)室技術(shù)和方法;抗體D O I:10.3969/j.i s s n.1673-4130.2013.07.005文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A文章編號(hào):1673-4130(201307-0776-02自身抗體是診斷自身免疫病的重要依據(jù),每種自身免疫疾病都伴有特征性的自身抗體譜1-2,是早期診斷必不可少的生物學(xué)指標(biāo)?；颊哐褐写嬖诟咝ё陨砜贵w是自身免疫性疾病的特點(diǎn)之一,也是臨床確診自身免疫疾病的重要依據(jù)。某些自身抗體因?qū)膊〉脑\斷具有高度特異性

2、,已成為診斷相應(yīng)疾病的金標(biāo)準(zhǔn)1,3。1臨床常見自身免疫性疾病自身抗體譜1.1自身免疫性肝病及其自身抗體譜4-8自身免疫性肝病是由自身免疫反應(yīng)引起的、不明原因的肝臟疾病,主要包括自身免疫性肝炎、原發(fā)性膽汁性肝硬化、原發(fā)硬化性膽管炎以及其重疊綜合征。在這幾類肝臟疾病中,自身抗體的檢測(cè)在臨床診斷中起重要作用?？购丝贵w是自身免疫性肝炎最常見的自身抗體,主要出現(xiàn)在型A I H中并且常與抗平滑肌抗體同時(shí)出現(xiàn)。A N A對(duì)A I H不具有診斷的特異性,可見于多種結(jié)締組織疾病和其他自身免疫性疾病。若A N A和A S MA同時(shí)出現(xiàn),則高度提示型A I H?？垢文I微粒體抗體和抗肝溶質(zhì)抗原型抗體為型A I H的特

3、異性標(biāo)志?？箍扇苄愿慰乖?肝胰抗原抗體是型自身免疫性肝炎最特異性的指標(biāo)。高滴度的抗線粒體抗體M2是原發(fā)性膽汁性肝硬化的標(biāo)志。原發(fā)性硬化性膽管炎最常見的自身抗體為核周型抗中性粒細(xì)胞胞質(zhì)抗體。1.2血管炎及其自身抗體譜9-11抗中性粒細(xì)胞胞質(zhì)抗體(A N C A是一種以中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞胞漿成分為靶抗原的自身抗體,對(duì)系統(tǒng)性血管炎、炎性腸病、結(jié)締組織病等多種疾病的診斷與鑒別診斷具有重要意義。該項(xiàng)目以間接免疫熒光為檢測(cè)方法,可分出兩種不同的熒光模型:(1抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體其主要靶抗原為蛋白酶3;(2抗中性粒細(xì)胞核周抗體其常見靶抗原為髓過氧化物酶。該檢測(cè)方法可初步判斷A N-C A的靶抗原。1.3類

4、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎R(shí) A及其自身抗體譜12-15類風(fēng)濕因子(R F、抗角質(zhì)蛋白抗體(A K A、抗S a抗體、抗核周因子(A P F、抗R A33抗體、抗C C P抗體、抗突變型瓜氨酸波形蛋白抗體(a n t i-M C V?？笴 C P抗體的檢測(cè)對(duì)類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(R A的診斷有較高的特異性,并可用于R A的早期診斷。目前認(rèn)為抗C C P抗體對(duì)R A診斷敏感性為50%78%,特異性為96%,早期患者陽性率可達(dá)80%?？笴 C P抗體陽性R A患者較抗C C P抗體陰性R A患者通常出現(xiàn)更為嚴(yán)重的關(guān)節(jié)骨質(zhì)損害7。抗C C P抗體常與R F(類風(fēng)濕因子呈正相關(guān)。建議臨床聯(lián)合R F、C C P抗體進(jìn)行檢測(cè)

5、,以保證R A的正確診斷。1.4自身免疫性糖尿病及其自身抗體譜16-18抗胰島細(xì)胞抗體(I C A,胰島素自身抗體(I A A,谷氨酸脫羧酶自身抗體(G A D,酪氨酸磷酸化酶抗體(I A2。血清中I C A陽性說明有針對(duì)胰島細(xì)胞的自身免疫反應(yīng)的存在,其結(jié)果可以造成胰腺細(xì)胞的自身免疫損害而誘發(fā)糖尿病,而且多為胰島素依賴型糖尿病(I D D M,能作糖尿病高危指標(biāo)。測(cè)定血清中抗胰島素抗體的含量,用于監(jiān)測(cè)糖尿病的療效?？笹 A D是1型糖尿病自然病程中細(xì)胞功能損傷一個(gè)指標(biāo),對(duì)確定糖尿病分型,指導(dǎo)治療具有一定意義。I A2-A b是G A D-A b后發(fā)現(xiàn)的又一重要的胰島細(xì)胞自身抗原,是與胰島結(jié)合分

6、泌相關(guān)的抗體,是胰島免疫早期成分,能反應(yīng)重要的細(xì)胞損壞而導(dǎo)致的早期發(fā)病,作用比G A D-A b更具有特異性。1.5胃腸疾病自身抗體譜19-21體外定性檢測(cè)人血清中的麥膠蛋白抗體、抗組織型谷氨酰胺轉(zhuǎn)移酶抗體、抗釀酒酵母抗體、抗壁細(xì)胞抗體、抗內(nèi)因子抗體,輔助診斷麩質(zhì)過敏癥(乳糜瀉、炎性腸病、自身免疫性胃炎、惡性貧血等消化系統(tǒng)疾病。麥膠蛋白I g A、I g G抗體和抗組織轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶I g A抗體,對(duì)乳糜瀉有較高的確診價(jià)值。血清陽性患者,可避免小腸黏膜活檢。對(duì)于患有選擇性I g A缺乏癥的乳糜瀉患者,須檢測(cè)血清總I g A水平及I g G抗體?？贯劸平湍缚贵w是C r o h ns病和慢性炎癥性腸

7、功能紊亂的標(biāo)志。在C r o h ns病中具有高度特異性(97%和高陽性預(yù)期值(96%,尤其是在與抗中性粒細(xì)胞抗體陰性結(jié)果聯(lián)合評(píng)價(jià)時(shí)?？贡诩?xì)胞抗體和抗內(nèi)因子抗體出現(xiàn)于A型慢性萎縮性胃炎、惡性貧血、維生素B12缺乏性貧血、橋本甲狀腺炎、型糖尿病。1.6抗磷脂抗體綜合征(A P S自身抗體譜22A P S是由抗磷脂抗體(a P L介導(dǎo)或與之密切相關(guān)的臨床綜合征,臨床主要表現(xiàn)為反復(fù)動(dòng)靜脈血栓、病態(tài)妊娠和血小板減少等癥狀。這些癥狀可單一出現(xiàn)或多個(gè)共同存在。實(shí)驗(yàn)室診斷A P S的自身抗體:抗心磷脂抗體,抗2-糖蛋白(a B2G P1I g G和I g M,狼瘡抗凝物(L A C。2自身抗體的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)及

8、進(jìn)展自身抗體實(shí)驗(yàn)室常規(guī)檢測(cè)方法主要有間接免疫熒光法、膜條免疫印跡法及酶聯(lián)免疫吸附法。間接免疫熒光法一直是最常用的自身抗體檢測(cè)方法,A N A篩選的經(jīng)典試驗(yàn),也是鑒定新的自身抗體的基本方法。膜條免疫印跡法是目前測(cè)定E N A 抗體的主要方法,硝酸纖維膜上平行包被多種純化、鑒定的抗原,臨床操作簡(jiǎn)便。酶聯(lián)免疫吸附法是較為靈敏和客觀的檢測(cè)自身抗體的方法,可對(duì)自身抗體的水平進(jìn)行定量測(cè)定。在現(xiàn)有的技術(shù)條件下,實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)自身抗體的模式是間接免疫熒光法篩選,膜條免疫印跡法和酶聯(lián)免疫吸附法進(jìn)行確認(rèn)。·677·國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志2013年4月第34卷第7期I n tJL a bM e d,A p

9、 r i l2013,V o l.34,N o.7作者簡(jiǎn)介:汪付兵,男,主管技師,主要從事臨床免疫檢驗(yàn)技術(shù)研究。通訊作者,E-m a i l:j i a n_1999y a h o o.c o m。芯片技術(shù)分為微陣列和微流控兩大類。以微陣列為基礎(chǔ)的免疫芯片技術(shù)是種高通量、微型化和自動(dòng)化的蛋白質(zhì)分析方法,其原理類似于E L I S A的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｊ?主要是基于抗原與抗體特異性結(jié)合反應(yīng)來設(shè)計(jì)的。微流控芯片是采用微加工方法,在平方厘米級(jí)大小的芯片刻蝕出扁平的通道和其他功能單元,通過不同的網(wǎng)絡(luò)通道、反應(yīng)器、檢測(cè)單元等的設(shè)計(jì)和布局,實(shí)現(xiàn)樣品的進(jìn)樣、分離、反應(yīng)、檢測(cè)的微型實(shí)驗(yàn)裝置。繼免疫微陣列芯片之后,微流控

10、芯片免疫檢測(cè)的研究近年來備受關(guān)注,與前者相比,微流控免疫芯片更具有發(fā)展?jié)摿?。它可以通過微通道實(shí)現(xiàn)抗體或試劑的順序引入,并可將樣品的前處理和分離過程都集成到芯片上來完成,特別適用于血液及其他復(fù)雜樣品中痕量物質(zhì)的檢測(cè)?；诩{米材料的新型標(biāo)記成像技術(shù)及新的生物傳感技術(shù)有著廣泛的應(yīng)用前景。隨著微流體技術(shù)、納米技術(shù)的發(fā)展,自身抗體檢測(cè)系統(tǒng)的微型化已成為發(fā)展的趨勢(shì),將進(jìn)一步推動(dòng)自身免疫性疾病自身抗體譜實(shí)驗(yàn)診斷技術(shù)發(fā)展23-24。3自身免疫性疾病實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)新進(jìn)展研究抗原特異性T淋巴細(xì)胞,是闡明發(fā)病機(jī)制和進(jìn)行有效診療的關(guān)鍵。四聚體技術(shù)使抗原特異性T淋巴細(xì)胞的檢測(cè)技術(shù)有了新的發(fā)展25。熒光標(biāo)記為基礎(chǔ)的四聚體分析

11、技術(shù)是基于MH C/抗原肽復(fù)合物與T細(xì)胞表面受體(T C R相互作用的原理而設(shè)計(jì)的。MH C-抗原肽四聚體是借助親和素-生物素結(jié)合的原理,在體外將MH C分子及其所提呈的抗原肽組裝成的MH C/抗原肽四聚復(fù)合物,作為T C R結(jié)合的配體,用于檢測(cè)和分離特異性T細(xì)胞。雖然MH C-肽四聚體與T C R的結(jié)合與細(xì)胞的激活狀態(tài)無關(guān),但可用來檢測(cè)自身反應(yīng)性T細(xì)胞的真實(shí)比例,判斷自身反應(yīng)性T細(xì)胞在何時(shí)何處與抗原相遇。這有助于闡明自身免疫疾病的發(fā)病機(jī)制,為實(shí)驗(yàn)室診斷自身免疫疾病開拓了新的思路1-2。參考文獻(xiàn)1仲人前,耿紅蓮.自身免疫性疾病實(shí)驗(yàn)室診斷進(jìn)展J.中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2005,28(8:867-86

12、9.2M a l a g u a r n e r aM,C r i s t a l d iE,R o m a n oG,e ta l.A u t o i m m u n i t yi nt h ee l d e r l y:I m p l i c a t i o n sf o rc a n c e rJ.JC a n c e rR e sT h e r,2012,8(4:520-527.3仲人前.自身免疫性疾病研究中的挑戰(zhàn)和機(jī)遇J.中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2004,27(6:337-339.4閆惠平.自身免疫性肝病的自身抗體檢測(cè)及報(bào)告規(guī)范J.臨床肝膽病雜志,2011,27(6:595-597.5S

13、e l m iC,C o c c h iC A,Z u i nM,e ta l.T h ec h e m i c a lp a t h w a yt op r i-m a r yb i l l i a r yc i r r h o s i sJ.C l i nR e vA l l e r gI m m u n o l,2009,36(1: 23-29.6閆惠平,莊輝,劉燕敏,等.原發(fā)性膽汁性肝硬化患者的免疫學(xué)特點(diǎn)分析J.中華肝臟病雜志,2005,13(1:12-16.7M a n n sM P,C z a j aAJ,G o r h a mJ D,e ta l.D i a g n o s i

14、sa n dm a n a g e-m e n to fa u t o i m m u n eh e p a t i t i sJ.H e p a t o l o g y,2010,51(6:2193-2213.8M a n n sM P,C z a j aA J,G o r h a mJ D,e ta l.D i a g n o s i sa n dm a n a g e-m e n to fa u t o i m m u n eh e p a t i t i sJ.H e p a t o l o g y,2010,51(6:2193-2213.9K a l l e n b e r gC G

15、.P a t h o g e n e s i so fA N C A-a s s o c i a t e dv a s c u l i t i s,a nu p d a t eJ.C l i nR e vA l l e r g yI m m u n o l,2011,41(2:224-231.10C i a v a t t aD J,Y a n gJ,P r e s t o nG A,e ta l.E p i g e n e t i cb a s i sf o ra b e r-r a n tu p r e g u l a t i o no fa u t o a n t i g e ng e

16、n e si nh u m a n sw i t hA N C A v a s c u l i t i sJ.JC l i nI n v e s t,2010,120(9:3209-3219.11F a l kR J,G r o s sW L,G u i l l e v i nL,e ta l.G r a n u l o m a t o s i sw i t hp o l y-a n g i i t i s(W e g e n e rs:a na l t e r n a t i v en a m ef o rW e g e n e rsg r a n u l o-m a t o s i sJ.

17、A r t h r i t i sR h e a m,2011,63(4:863-864.12K e y s t o n eE C,S m o l e nJ.D e v e l o p i n ga ne f f e c t i v et r e a t m e n ta l g o-r i t h mf o rr h e u m a t o i da r t h r i t i sJ.R h e u m a t o l o g y(O x f o r d,2012, 51(S u p p l5:v48-54.13C a d e rM Z,F i l e rA D,B u c k l e yC

18、 D,e ta l.T h er e l a t i o n s h i pb e t w e e nt h ep r e s e n c eo fa n t i-c y c l i cc i t r u l l i n a t e dp e p t i d ea n t i b o d i e sa n dc l i n-i c a lp h e n o t y p ei nv e r ye a r l yr h e u m a t o i da r t h r i t i sJ.B M CM u s c u-l o s k e l e tD i s o r d,2010,11(1:187.

19、14G i l l i a mB E,M o o r eT L.T h er o l eo fa n t i-c y c l i cc i t r u l l i n a t e dp e p-t i d e(C C Pa n t i b o d i e si ne a r l yd e t e c t i o no fr h e u m a t o i da r t h r i t i s:a no v e r v i e wo ft h eI N O V AD i a g n o s t i c s,I n c.Q U A N T AL i t eC C Pa s s a y sJ.E x

20、 p e r tO p i nM e dD i a g n,2012,6(4:359-369.15J a y a s u n d a r aK S,K e y s t o n eE C,P a r k e rJ L.R i s ko ff a i l u r eo fac l i n-i c a ld r u gt r i a li np a t i e n t sw i t hm o d e r a t et os e v e r er h e u m a t o i da r-t h r i t i sJ.JR h e u m a t o l,2012,39(11:2066-2070.16

21、P a lA,B c hB M,A n d r e wJ,e ta l.E v a l u a t i o no fs e r u m1.5a n-h y d r o g l u c i t o ll e v e l sa sac l i n i c a lt e s tt od i f f e r e n t i a t es u b t y p e so fd i a be t e sJ.D i a b e t e sC a r e,2010,33(2:252-257.17L u n d g r e nVM,I s o m a aB,L y s s e n k oV,e ta l.G A

22、D Aa n t i b o d yp o s i-t i v i t yp r e d i c t st y p e2d i a b e t e si na na d u l tp o p u l a t i p nJ.D i a b e t e s, 2010,59(2:416-422.18M u r a oS,K o n d oS,O h a s h iJ,e ta l.A n t i-t h y r o i dp e r o x i d a s ea n t i-b o d y,I A-2a n t i b o d y,a n df a s t i n gC-p e p t i d e

23、l e v e l sp r e d ic tb e t ac e l lf a i l u r ei np a t i e n t sw i t hl a t e n ta u t o i m m u n ed i a b e t e si na d u l t s(L A-D A-a5-y e a rf o l l o w-u po ft h eE h i m es t u d yJ.D i a b e t e sR e sC l i nP r a c t,2008,80(1:114-121.19王為,周國(guó)華.血清學(xué)標(biāo)志物在炎癥性腸病中的研究進(jìn)展J.臨床消化病雜志,2011,23(5:31

24、4.20S c h o e p f e rAM,T r u m m l e rM,S e e h o l z e rP,e ta l.D i s c r i m i n a t i n gI B Df r o mI B S:c o m p a r i s o no ft h et e s tp e r f o r m a n c eo ff e c a lm a r k-e r s,b l o o dl e u k o c y t e s,C R P,a n dI B Da n t i b o d i e sJ.I nf l a m mB o w-e lD i s,2008,14(1:32-39.21S u t t o nC L,Y a n gH,L iZ,e ta l.F a m i l i a le x p r e s s i o no fa n t i-S a c c h a-r o m y c e sc e r e v i s i a em a n n a na n t i b o d i e si na f f e c t e da n du n a f f e c