云南白藥創(chuàng)可貼的藥理毒理研究

1、云南白藥創(chuàng)可貼的藥理毒理研究張立群1 張志偉 1 高崇昆 1 （1.云南白藥研究院,云南 昆明650032）摘要：目的 研究云南白藥創(chuàng)可貼的藥理毒理作用。方法 采用二甲苯所致小鼠耳廓腫脹、ADP誘導(dǎo)血小板聚集、小鼠剪尾法、冰醋酸所致的小鼠疼痛、器械所致家兔皮膚損傷、皮膚刺激性試驗(yàn)及皮膚過敏性試驗(yàn)，觀察云南白藥創(chuàng)可貼對皮膚小創(chuàng)傷的藥理毒理作用。結(jié)果云南白藥創(chuàng)可貼對小鼠耳廓腫脹有明顯的抑制作用；并有促ADP誘導(dǎo)的血小板聚集；并有促小鼠止血、減少出血量的作用；并有鎮(zhèn)痛及促傷口愈合作用；對皮膚無刺激性和過敏性。結(jié)論 云南白藥創(chuàng)可貼具有抗炎、止血、鎮(zhèn)痛、愈傷的作用，且無明顯皮膚刺激性和過敏性。關(guān)鍵詞：云

2、南白藥創(chuàng)可貼；抗炎；鎮(zhèn)痛；止血；愈傷；毒理The Pharmacological and Toxicological Effect Study of Yunnan Baiyao Wound-plasterZHANG Li-qun1，ZHANG Zhi-wei1，GAO Chong-kun1，(1.Research Institute of Yunnan Baiyao, Yunnan Kunming 650032； )Abstract：Objective: To study the pharmacological and toxicological effects of Yunnan Baiya

3、o wound-plaster. Methods: Ear edema model induced by xylene in mice, ADP-induced platelet aggregation, mice tail-cut methods, pain caused by acetic acid, skin injury of rabbit caused by physical instruments, skin irritation and allergy test were used to investigate the pharmacological effects of Yun

4、nan Baiyao wound-plaster in curing small skin wound. Results: Yunnan Baiyao wound-plaster can significantly inhibit the edema induced by xylene in mice; promote the platelet aggregation induced by ADP; accelerate hemostasis and reduce bleeding volume. Also it had the analgesic action and can acceler

5、ate the wound heeling, with no skin allergy or irritation. Conclusion: Yunnan Baiyao wound-plaster has the effects of anti-inflammation, hemostasis, Analgesia and wound heeling, with no obvious toxic and side effects.Key words: Yunnan Baiyao wound-plaster；Antiinflammatory；Analgesia；Hemostasis；Wound

6、healing；Toxicology云南白藥是具有百年歷史的傷科經(jīng)典名藥，具有止血和愈傷作用。云南白藥創(chuàng)可貼充分利用云南白藥止血愈傷的顯著功效，與現(xiàn)代先進(jìn)的衛(wèi)生材料有機(jī)結(jié)合，使用方便，快捷、有效。云南白藥創(chuàng)可貼是云南白藥外用的一次變革，它不僅具有傳統(tǒng)創(chuàng)可貼物理止血與保護(hù)創(chuàng)口的作用，而且由于內(nèi)置云南白藥提取物的藥芯，具備了云南白藥的功效。本試驗(yàn)用炎癥、疼痛、出血、創(chuàng)傷的不同動(dòng)物模型，研究了云南白藥創(chuàng)可貼抗炎、鎮(zhèn)痛、止血、愈傷的功效及對皮膚的刺激性和過敏性。1、材料與儀器1.1動(dòng)物小鼠：ICR種，昆明醫(yī)學(xué)院動(dòng)物室提供，合格證號(hào)：SCXK（滇）2005-0008；家兔：云南省昆明市光明農(nóng)場提供。1.

7、2 試藥與試劑：云南白藥創(chuàng)可貼浸膏（云南白藥提取物），云南白藥研究院提供；阿斯匹林片：40mg/片，昆明友誼制藥廠生產(chǎn)，批號(hào)：061117；ADP：Sigma公司生產(chǎn)，配制成100g/ml生理鹽水溶液；冰醋酸：天津市博迪化工有限公司生產(chǎn)2，4二硝基氯化苯：上海試劑一廠生產(chǎn)2、實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果2.1 云南白藥創(chuàng)可貼對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響1取ICR小鼠50只，雄性，體重2325g,隨機(jī)分為空白對照組、云南白藥創(chuàng)可貼高、中、低劑量組、阿斯匹林組?？瞻讓φ战M灌胃等量的蒸餾水，其余各組按劑量灌胃給藥；一小時(shí)后，每鼠左耳涂501二甲苯致炎，右耳作對照，30分鐘后拉頸處死動(dòng)物，剪下兩耳并打下圓耳片，分

8、析天平上稱重，以（左耳重-右耳重）/右耳重作為腫脹率并計(jì)算抑制率，比較各給藥組與空白對照組的腫脹率，結(jié)果見表1。表1 云南白藥創(chuàng)口貼對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響組 別動(dòng)物數(shù)（只）給藥劑量（g/kg）腫脹率（）抑制率（%）空白對照10 00.55±0.80云南白藥創(chuàng)口貼高劑量100.500.13±0.06*76.4云南白藥創(chuàng)可貼中劑量100.250.18±0.16*67.3云南白藥創(chuàng)可貼低劑量100.120.21±0.15*61.8阿斯匹林100.400.17±0.07*69.1*與空白對照組比較P0.01實(shí)驗(yàn)結(jié)果：云南白藥創(chuàng)可貼高、中、低劑量

9、組均能明顯對抗二甲苯所致小鼠耳廓腫脹。2.2 云南白藥創(chuàng)可貼對ADP誘導(dǎo)的家兔血小板聚集的影響1取家兔6只，體重22.5kg，心臟取血，EDTA抗凝，離心分別取出PRP及PPP。于血小板聚集儀上體外側(cè)定云南白藥創(chuàng)可貼提取物高、低劑量對ADP誘導(dǎo)的家兔血小板聚集作用，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2。表2 云南白藥創(chuàng)可貼對ADP誘導(dǎo)的家免血小板聚集的影響組 別樣本數(shù)(個(gè))藥物濃度(g/ml)血小板最大聚集強(qiáng)度（%）空白對照組6024.46±11.06云南白藥創(chuàng)可貼高劑量60.05 88.02±10.42*云南白藥創(chuàng)可貼低劑量60.02570.45±9.67*與空白對照組比較P0.01

10、實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：云南白藥創(chuàng)可貼能促進(jìn)ADP誘導(dǎo)的血小板聚集。2.3 云南白藥創(chuàng)可貼對小鼠出血時(shí)間及出血量的影響2取ICR小鼠80只，1822克，雌雄各半，隨機(jī)分為對照組，云南白藥創(chuàng)可貼高劑量，云南白藥創(chuàng)可貼低劑量組，陽性藥對照組（云南白藥混懸液）。每天灌胃給藥一次，連續(xù)3天，于末次給藥后小時(shí)以利剪將小鼠尾尖8mm處剪斷，待血液自行溢出開始計(jì)時(shí)，每隔30s用濾紙吸去血滴一次，直至血液自然停止，記錄出血時(shí)間，剪下滲血濾紙，置堿液中萃取，萃取液于520mm波長處比色，以透光率間接表示出血量，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表3。表3 云南白藥創(chuàng)可貼對小鼠出血時(shí)間及出血量的影響組別動(dòng)物數(shù)（只）給藥劑量(g/kg)出血時(shí)間（）

11、透光率（）對照組206.49±2.9424.58±21.86云南白藥創(chuàng)可貼高劑量200.52.92±2.79*72.78±32.89*云南白藥創(chuàng)可貼低劑量200.253.92±2.56*47.66±34.93*云南白藥混懸液202.5g/kg3.28±2.78*62.52±33.30*與空白對照組比較P0.01實(shí)驗(yàn)結(jié)果：云南白藥創(chuàng)可貼高低劑量均能縮短小鼠剪尾出血時(shí)間，減少出血量。2.4 云南白藥創(chuàng)可貼對冰醋酸所致小鼠疼痛的影響2取ICR小鼠40只，雌雄各半，體重1822g，隨機(jī)分為對照組，云南白藥混懸液組，云南白藥

12、創(chuàng)可貼高劑量組、低劑量組，每天灌胃給藥一次，連續(xù)3天，于末次給藥后0.5小時(shí)，每鼠腹腔注射0.6%冰醋酸0.1ml/10g，記錄注射致痛劑后20分鐘內(nèi)各鼠扭體次數(shù)，結(jié)果見表4。表4 云南白藥創(chuàng)可貼對冰醋酸所致小鼠疼痛的影響組 別動(dòng)物數(shù)（只）給藥劑量（g/kg）扭體次數(shù)抑制率（%）對照組10 60.4±11.7云南白藥創(chuàng)可貼高劑量10 0.5 32.0±18.4* 47.0云南白藥創(chuàng)可貼低劑量10 0.25 30.8±12.7* 49.0云南白藥粉混懸液10 2.5 31.6±13.7* 47.7與對照組比較 *P0.05 * P0.01實(shí)驗(yàn)結(jié)果：云南白藥

13、創(chuàng)可貼高低劑量組均可明顯減少小鼠注射致痛劑后產(chǎn)生的扭體次數(shù)。2.5 云南白藥創(chuàng)可貼對家兔破損皮膚的影響破損皮膚的制備：家兔10只，用手術(shù)刀片在家兔脫毛皮膚上劃破，深度為0.3cm，長度為2cm，以出血為度。每只家兔的6塊破損皮膚上分別貼創(chuàng)可貼8mg/片兩塊，23mg/片兩塊、空白創(chuàng)可貼（不含云南白藥）兩塊，24小時(shí)后，撕去創(chuàng)可貼，觀察傷口的愈合情況。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)Ridit法檢驗(yàn)，空白組分別與云南白藥創(chuàng)可貼8mg/片組、24mg/片組比較均有極顯著性差異（P0.01）；8mg/片組與24mg/片組之間無顯著性差異（P0.05）。結(jié)果表明：云南白藥創(chuàng)可貼對家兔破損皮膚有較好的愈創(chuàng)作用。2.6 云南白藥

14、創(chuàng)可貼皮膚刺激性試驗(yàn)32.6.1 對完整皮膚的刺激性試驗(yàn)成年健康家兔12只，雌雄各半，體重22.5kg，試驗(yàn)前24h將家兔背部脊柱兩側(cè)共四塊皮膚去毛，每塊面積約4cm2，將左側(cè)的兩塊以完整的皮膚分別貼含云南白藥提取物8mg/片及23mg/片的云南白藥創(chuàng)可貼各一片，將右側(cè)的兩塊以完整的皮膚貼不含藥的創(chuàng)可貼作為對照。貼藥24h后，用溫水清洗皮膚，觀察貼藥皮膚的紅斑和水腫反應(yīng)，連續(xù)貼藥7天，以同樣方法觀察皮膚反應(yīng)。按皮膚刺激性反應(yīng)評分標(biāo)準(zhǔn)評分，計(jì)算刺激性反應(yīng)值。結(jié)果表明：云南白藥創(chuàng)可貼8mg/片及23mg/片組對家兔完整皮膚的刺激性反應(yīng)值均為0；試驗(yàn)結(jié)果表明：云南白藥創(chuàng)可貼對家兔完整皮膚無刺激性。2

15、.6.2 對破損皮膚刺激性試驗(yàn)成年健康家免12只，雌雄各半，體重22.5kg，用上述方法制備去毛皮膚，再制作破損皮膚，即采用手術(shù)刀將去毛皮膚消毒并劃破，以輕度滲血為度。給藥及觀察方法同完整皮膚刺激性試驗(yàn)。按皮膚刺激性反應(yīng)評分標(biāo)準(zhǔn)評分，計(jì)算刺激性反應(yīng)值。試驗(yàn)結(jié)果：云南白藥創(chuàng)可貼8mg/片及23mg/片組對家兔破損皮膚的刺激性反應(yīng)值均為0；試驗(yàn)結(jié)果表明：云南白藥創(chuàng)可貼對家兔破損皮膚無刺激性。2.7 云南白藥創(chuàng)可貼皮膚過敏性試驗(yàn)3豚鼠24只，雌雄各半，體重250300g，隨機(jī)分成3組，生理鹽水對照組、云南白藥創(chuàng)可貼組（云南白藥提取物0.05g/ml）、陽性對照組（1%2、4二硝基氯代苯）。試驗(yàn)前24

16、h，將豚鼠背部脊柱兩側(cè)去毛各一塊，每塊面積3×3cm，以皮膚涂抹法給藥0.2ml，分籠飼養(yǎng)，試驗(yàn)第7天和第14天以同樣的給藥方法重復(fù)給藥。第28天激發(fā)給藥，將受試物0.2ml涂于豚鼠背部右側(cè)去毛區(qū)，陽性對照組涂1%2、4二硝基氯代苯，6h后洗掉受試物，即刻觀察。于24、48、72h多次觀察皮膚過敏情況，按皮膚過敏性反應(yīng)評分標(biāo)準(zhǔn)評分，將皮膚的紅斑、水腫等全身過敏反應(yīng)的豚鼠例數(shù)除以豚鼠總數(shù)，即得致敏率。試驗(yàn)結(jié)果：陽性對照組豚鼠皮膚致敏率為100%，生理鹽水對照組及云南白藥創(chuàng)可貼組豚鼠致敏率均為0；試驗(yàn)結(jié)果表明：云南白藥創(chuàng)可貼對家兔皮膚無過敏反應(yīng)。3、討論云南白藥創(chuàng)可貼是云南白藥系列產(chǎn)品之

17、一，本試驗(yàn)研究采用的方法多為常用的經(jīng)典方法。近年來，為更好地挖掘云南白藥的新用途，研究人員從各方面對云南白藥及其系列產(chǎn)品進(jìn)行了廣泛、深入的研究，特別對其止血、愈傷的作用機(jī)理進(jìn)行了研究。止血研究結(jié)果表明：云南白藥創(chuàng)可貼具有較強(qiáng)的促血小板聚集作用，有促使凝血酶原時(shí)間、出血時(shí)間和凝血時(shí)間縮短的作用。其止血機(jī)理是促血小板膜表面糖蛋白Gpb/a復(fù)合物和GMP140表達(dá)以及促血小板活化；血小板膜表面糖蛋白與血小板的粘附、聚集和釋放的功能密切相關(guān)4。當(dāng)血小板活化時(shí)，糖蛋白Gpb/a復(fù)合物和GMP140由血小板開放管道系統(tǒng)從膜內(nèi)轉(zhuǎn)移到膜外，使它在膜上的表達(dá)增加5，同時(shí)增加了與纖維蛋白原的結(jié)合，促進(jìn)血小板聚集。

18、云南白藥創(chuàng)可貼的另一重要作用是促傷口愈合，其愈傷機(jī)理是促進(jìn)機(jī)體血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子（VEGF）和堿性成纖維細(xì)胞生長因子（bFGF）的生成，這些生長因子能夠促進(jìn)細(xì)胞不斷增值，加速新生血管生成，從而使傷口組織供血豐富，有益于傷口的愈合6。本試驗(yàn)結(jié)果證明，云南白藥創(chuàng)可貼具有止血、抗炎、鎮(zhèn)痛、愈傷的作用，且對皮膚無刺激性、無過敏性。云南白藥創(chuàng)可貼的應(yīng)用，給小創(chuàng)口帶來了更全面的治療與呵護(hù)，它是云南白藥寶貴價(jià)值的再挖掘。參考文獻(xiàn)：1徐叔云,卞如濂,陳修.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)M.北京:人民衛(wèi)生出版社,1982:532,841.2李儀奎.中藥藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)M.上海:上?？茖W(xué)出版社,1991:496,353.3中華人民共和國衛(wèi)生部藥政局，中藥新藥研究指南Z.1994:210