2.2.2 動(dòng)物細(xì)胞融合和單克隆抗體

1、專(zhuān)題二 細(xì)胞工程2.2動(dòng)物細(xì)胞工程2.2.2 動(dòng)物細(xì)胞融合和單克隆抗體 回顧：植物體細(xì)胞雜交技術(shù)的過(guò)程(畫(huà)出流程圖)一、動(dòng)物細(xì)胞融合（又叫：細(xì)胞雜交）1.概念：指          或          動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的過(guò)程，也稱(chēng)細(xì)胞雜交。2.結(jié)果：融合形成的具有原來(lái)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞遺傳信息的單核細(xì)胞，稱(chēng)為        

2、0;  細(xì)胞。3.動(dòng)物細(xì)胞融合原理：細(xì)胞膜的          。4.誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合的方法物理方法: 化學(xué)方法: 生物方法: 。5.過(guò)程： 6.意義：細(xì)胞融合突破了有性雜交方法的局限，使           成為可能。這一技術(shù)成為研究          、     &

3、#160;    、腫瘤和生物          培育的重要手段。二、單克隆抗體問(wèn)題1：抗體由什么細(xì)胞產(chǎn)生？長(zhǎng)期以來(lái)，人們是如何獲得抗體的方法？ 問(wèn)題2：這種抗體有什么缺點(diǎn)？為什么？問(wèn)題3：如何獲得大量性質(zhì)單一的抗體呢？1概念：由單一B淋巴細(xì)胞進(jìn)行無(wú)性生殖形成的細(xì)胞所產(chǎn)生的化學(xué)性質(zhì) 、 強(qiáng)的抗體。2.單克隆抗體的制備過(guò)程：第一步：將 注射到小鼠體內(nèi)進(jìn)行免疫；第二步：從該小鼠脾臟中獲得能夠產(chǎn)生抗體的細(xì)胞，與小鼠的細(xì)胞在，或聚乙二醇的誘導(dǎo)下融合；第三步：在特定的培養(yǎng)基中，篩選出細(xì)

4、胞；第四步：克隆化培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞，進(jìn)行抗體檢測(cè)，從中挑選出的細(xì)胞群，繼續(xù)培養(yǎng)；第五步：將該雜交瘤細(xì)胞在 條件下大規(guī)模培養(yǎng)或注射到小鼠 內(nèi)增殖，然后再?gòu)呐囵B(yǎng)液或小鼠腹水中提取，分離純化單克隆抗體；3.單克隆抗體的應(yīng)用（1）單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)：性質(zhì)單一，          強(qiáng)、          高，并可能          

5、; 。（2）作為診斷試劑：診斷病毒引起的疾病和用癌細(xì)胞制備的單克隆抗體定位診斷優(yōu)點(diǎn)： 。（3）用于治療疾病和運(yùn)載藥物：運(yùn)用藥物與單克隆抗體連接在一起制成 優(yōu)點(diǎn)： ?！究偨Y(jié)歸納】植物體細(xì)胞雜交與動(dòng)物細(xì)胞融合比較植物細(xì)胞雜交(番茄馬鈴薯植株)動(dòng)物細(xì)胞融合(單克隆抗體制備)過(guò)   程第1步原生質(zhì)體的制備(酶解法)正常小鼠的處理(注射滅活抗原)第2步原生質(zhì)體的融合(物化法)動(dòng)物細(xì)胞融合(物化生法)第3步雜種細(xì)胞的篩選和培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞的篩選和培養(yǎng)第4步雜種植株鑒定提純單克隆抗體(特異性強(qiáng)、靈敏度高)原理/理論基礎(chǔ)細(xì)胞膜的流動(dòng)性、植物細(xì)胞的全能性細(xì)胞膜的流動(dòng)性、細(xì)胞增殖融合前

6、處理酶解法除去細(xì)胞壁：纖維素酶、果膠酶注射特定抗原法免疫處理正常小鼠促融因子物理法：電刺激、離心、振動(dòng)化學(xué)法：聚乙二醇物化法：與植物相同生物法：滅活的仙臺(tái)病毒意義和用途(1)克服有性遠(yuǎn)緣雜交不親和性障礙(2)培育作物新品種制備單克隆抗體有助于疾病的診斷、治療、預(yù)防【課堂反饋】一、選擇題1科學(xué)家用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與某種細(xì)胞融合，得到雜交細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)可產(chǎn)生大量的單克隆抗體，與骨髓瘤細(xì)胞融合的是 （ ）A.經(jīng)過(guò)免疫的B淋巴細(xì)胞 B.不經(jīng)過(guò)免疫的T淋巴細(xì)胞C.經(jīng)過(guò)免疫的T淋巴細(xì)胞 D.不經(jīng)過(guò)免疫的B淋巴細(xì)胞2動(dòng)物細(xì)胞融合的目的中最重要的是 （ ）A.克服遠(yuǎn)源雜交不親和 B.制備單克隆抗體 C.培育新物種

7、 D.生產(chǎn)雜種細(xì)胞3植物體細(xì)胞雜交與動(dòng)物細(xì)胞工程中所用技術(shù)與原理不相符的是 （ ） A纖維素酶、果膠酶處理和胰蛋白酶處理酶的專(zhuān)一性 B植物組織培養(yǎng)和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞的全能性 C原生質(zhì)體融合和動(dòng)物細(xì)胞融合生物膜的流動(dòng)性 D紫草細(xì)胞培養(yǎng)和雜交瘤細(xì)胞的培養(yǎng)細(xì)胞分裂4下列關(guān)于動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的敘述，正確的是 （ ）A培養(yǎng)中的人效應(yīng)T細(xì)胞能產(chǎn)生單克隆抗體B培養(yǎng)中的人B細(xì)胞能夠無(wú)限地增殖C人的成熟紅細(xì)胞經(jīng)過(guò)培養(yǎng)能形成細(xì)胞株D用胰蛋白酶處理肝組織可獲得單個(gè)肝細(xì)胞5單克隆抗體技術(shù)在疾病診斷和治療以及生命科學(xué)研究中具有廣泛的應(yīng)用。下列關(guān)于單克隆抗體的敘述，錯(cuò)誤的是 （ ）A特異性強(qiáng)、靈敏度高 B與抗癌藥物結(jié)合可制成

8、“生物導(dǎo)彈”C體外培養(yǎng)B淋巴細(xì)胞可大量分泌單克隆抗體D由效應(yīng)B細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合而成的雜交瘤細(xì)胞分泌6關(guān)于單克隆抗體，下列敘述不正確的是 （ ）A可以制成診斷盒用于疾病的珍斷 B可以與藥物結(jié)合，用于病變細(xì)胞的定向治療C可以利用基因工程技術(shù)生產(chǎn) D可以在生物體內(nèi)生產(chǎn)，不能體外生產(chǎn)7用動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)獲取單克隆抗體，下列實(shí)驗(yàn)步驟中錯(cuò)誤的是 （ ）A將抗原注入小鼠體內(nèi)，獲得能產(chǎn)生抗體的B淋巴細(xì)胞B用纖維素酶處理B淋巴細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞C用聚乙二醇（PEG）作誘導(dǎo)劑，促使能產(chǎn)生抗體的B淋巴細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞融合D篩選雜交瘤細(xì)胞，并從中選出能產(chǎn)生所需抗體的細(xì)胞群，培養(yǎng)后提取單克隆抗體8動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)

9、的細(xì)胞來(lái)自于 （ ）A任何個(gè)體的細(xì)胞 B只能取自動(dòng)物胚胎細(xì)胞C只能取自幼齡動(dòng)物的組織細(xì)胞 D胚胎或幼齡動(dòng)物的器官和組織細(xì)胞9動(dòng)物細(xì)胞工程常用的技術(shù)手段中，最基礎(chǔ)的是 （ ）A.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng) B動(dòng)物細(xì)胞融合 C單克隆杭體 D胚胎、核移植10.如用動(dòng)物的細(xì)胞進(jìn)行克隆實(shí)驗(yàn)應(yīng)該選擇的細(xì)胞核不能是 （ ） A、乳腺細(xì)胞的 B、卵細(xì)胞的 C、胃腺細(xì)胞的 D、囊胚時(shí)期的胚胎細(xì)胞的11研究單克隆抗體治療癌癥的思路是 （ ）A利用單克隆抗體特異性地對(duì)抗癌細(xì)胞 B以單克隆抗體作抗癌藥物殺死癌細(xì)胞C抗癌物質(zhì)在克隆細(xì)胞中大量合成 D單克隆抗體攜帶抗癌藥物特異性地與癌細(xì)胞結(jié)合12用于動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的組織和細(xì)胞大都取自胚胎

10、或出生不久的幼齡動(dòng)物的器官或組織，其主要原因是這樣的組織細(xì)胞 （ ）A.容易產(chǎn)生各種變 B具有更強(qiáng)的全能 C.取材十分方便 D分裂增殖的能力強(qiáng)13動(dòng)物細(xì)胞融合和植物體細(xì)胞雜交的比較中，正確的是 （ ）誘導(dǎo)融合的方法完全相同 所用的技術(shù)手段不相同 所采用的原理完全相同 都能形成雜種細(xì)胞A. B. C. D.14（多選）下列關(guān)于單克隆抗體的制備和應(yīng)用的敘述中，正確的是 （ ）AB淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞的融合，一般不需要滅活的仙臺(tái)病毒或聚乙二醇誘導(dǎo)B融合后形成的雜交瘤細(xì)胞既能無(wú)限增殖，又能產(chǎn)生單克隆抗體C體外培養(yǎng)時(shí)，一個(gè)效應(yīng)B淋巴細(xì)胞可以產(chǎn)生抗體，但不能無(wú)限增殖D單克隆抗體與常規(guī)抗體相比，特異性強(qiáng)，靈

11、敏度高，優(yōu)越性明顯15（多選）關(guān)于制備單克隆抗體的敘述不正確的是 （ ）A單克隆抗體產(chǎn)自淋巴細(xì)胞 B單克隆抗體的制備要經(jīng)過(guò)細(xì)胞融合C單克隆抗體的獲得不需要使細(xì)胞癌變D必須同時(shí)在體內(nèi)和體外培養(yǎng)挑選出所需抗體的細(xì)胞群16（多選）對(duì)細(xì)胞全能性的表述不正確的有 （ ）A沒(méi)有離體植物細(xì)胞也能表現(xiàn)出全能性 B動(dòng)物細(xì)胞融合標(biāo)志著動(dòng)物細(xì)胞全能性的實(shí)現(xiàn)C單克隆抗體的制備原理依據(jù)是細(xì)胞的全能性 D花粉可培育成單倍體，是細(xì)胞全能性的體現(xiàn)17（多選）將小鼠骨髓瘤細(xì)胞與一種B淋巴細(xì)胞融合，可使融合的細(xì)胞經(jīng)培養(yǎng)產(chǎn)生單克隆抗體，其依據(jù)是 （ ）AB淋巴細(xì)胞只有與骨髓瘤細(xì)胞融合后才能產(chǎn)生抗體BB淋巴細(xì)胞可以產(chǎn)生抗體，但不能無(wú)

12、限增殖C骨髓瘤細(xì)胞可以產(chǎn)生抗體，但不能無(wú)限增殖D骨髓瘤細(xì)胞可以無(wú)限增殖，但不能產(chǎn)生抗體18（多選）1975年米爾斯坦和柯勒成功地獲得了單克隆抗體。下列細(xì)胞中與單克隆抗體的制備有關(guān)是                                    

13、;                （ ）A.效應(yīng)B細(xì)胞        BT淋巴細(xì)胞      C.骨髓瘤細(xì)胞 D雜交瘤細(xì)胞二、非選擇題19、下圖為細(xì)胞融合的簡(jiǎn)略過(guò)程（只考慮兩個(gè)細(xì)胞的融合），請(qǐng)據(jù)圖回答：I若A、B是基因型分別為rrHH、RRhh兩個(gè)煙草品種細(xì)胞的花粉，且這兩對(duì)基因位于非同源染色體上，由于一對(duì)隱性純合基因(rr或hh) 的作

14、用，在光照強(qiáng)度大于800勒克斯時(shí)，都不能生長(zhǎng)。（1）實(shí)驗(yàn)開(kāi)始時(shí)必須用 除去不利于原生質(zhì)體融合的物質(zhì)。（2）實(shí)驗(yàn)中除獲得雜種細(xì)胞外，還有基因型為 的融合細(xì)胞。（3）設(shè)計(jì)一方法（不考慮機(jī)械方法），從培養(yǎng)液中分離出雜種細(xì)胞，方法： 。（4）將雜種細(xì)胞培養(yǎng)成雜種植株依據(jù)的理論基礎(chǔ)是 。II若該過(guò)程是制備治療“SARS”病毒的單克隆抗體，A為人B淋巴細(xì)胞（染色體組成為2AXX=46），B為鼠骨髓瘤細(xì)胞（染色體組成為2AXX=40）（5）用單克隆抗體制成“生物導(dǎo)彈”主要利用了抗體的 特性。（6）A細(xì)胞來(lái)自于 ，雜種細(xì)胞C共有 個(gè)染色體組。（7）雜交瘤細(xì)胞在體外培養(yǎng)時(shí)與植物組織培養(yǎng)的主要區(qū)別是培養(yǎng)基要用 培

15、養(yǎng)基。（物理狀態(tài)），培養(yǎng)基中除了添加必要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)為還需加入 。20.兩場(chǎng)籌備了10年的“太空結(jié)合”首次在神舟八號(hào)飛船上舉行了,“新人”之一是小白鼠B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞,新人在“產(chǎn)房”電融合儀內(nèi)孕育新生命。160min后,中國(guó)首批“太空娃娃”終于順利誕生。“太空娃娃”誕生和地面實(shí)驗(yàn)如圖所示。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：(1)小白鼠B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞能融合在一起,體現(xiàn)了細(xì)胞膜具有_ _的特點(diǎn)。(2)若用于SARS的預(yù)防上,則宜采用_ _細(xì)胞。科學(xué)工作者正在研究治療癌癥使用的生物導(dǎo)彈是_ _。(3)B淋巴細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞都是由_ 形成的。這種相同細(xì)胞的后代,在形態(tài)、結(jié)構(gòu)和生理功能上產(chǎn)生穩(wěn)定差異的過(guò)程,叫

16、做_             。(4)鼠的淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合后,在培養(yǎng)時(shí)通過(guò)_（有絲/減數(shù)）分裂方式大量繁殖。細(xì)胞中染色體數(shù)目與淋巴細(xì)胞相比有何特點(diǎn)？_；要觀(guān)察融合后的細(xì)胞中的染色體形態(tài)、數(shù)目,可用一定濃度的_       _處理。(5)融合的細(xì)胞具有兩種細(xì)胞的特性,即_和_。211975年科學(xué)家首次利用B淋巴細(xì)胞雜交瘤技術(shù)制備出單克隆抗體。請(qǐng)觀(guān)察下圖，回答問(wèn)題：培養(yǎng)基特殊成分主要作用次黃嘌呤骨髓瘤細(xì)胞不能利用

17、氨基嘌呤阻斷DNA合成胸腺嘧啶核苷脾細(xì)胞用于合成DNA（1）單克隆抗體是指                 ，其特點(diǎn)是                       。（2）制備單克隆抗體的B淋巴細(xì)胞一般從  &

18、#160;      （器官）中采集。從表中看，用于篩選雜交瘤細(xì)胞的是特定的            培養(yǎng)基。（3）大量制備單克隆抗體的方法主要有兩種：體外培養(yǎng)法，可獲得10g/mL的抗體；動(dòng)物體內(nèi)誘生法可獲得520mg/mL的抗體。你選擇的方法及原因是                                      。22、右圖是制備分泌抗X抗