牛蒡不同部位_牛蒡子不同產(chǎn)地中牛蒡苷和牛蒡苷元含量比較及指紋

1、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)v基金項(xiàng)目 國家/十一五0支撐計(jì)劃課題(2006BA I09B02-6 和遼寧省教育廳創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)項(xiàng)目(2007T 115 通訊作者*竇德強(qiáng), E -m a i:l doudeqiang2003yahoo 1co m 1cn牛蒡不同部位、牛蒡子不同產(chǎn)地中牛蒡苷和牛蒡苷元含量比較及指紋圖譜分析v康凱1, 竇德強(qiáng)1*, 康廷國1, 許亮1, 呂智1, 常禹2, 劉淼2(11遼寧中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院, 遼寧 大連 116600;21中國科學(xué)院沈陽生態(tài)研究所, 遼寧 沈陽 110016摘要 目的:應(yīng)用HPLC 同時(shí)測定采集于全國34份牛蒡子和牛蒡不同部位中牛蒡苷和牛蒡苷元的含量; 建立牛蒡子藥材H P

2、LC 指紋圖譜。方法:采用A g il ent T C -C 18(416mm 250mm, 5L m 色譜柱; 流動(dòng)相:甲醇-水(水:0m i n ,55%;10m i n ,46%; 20m in , 30%線性梯度, 檢測波長為280n m 。結(jié)果:牛蒡苷的線性方程為Y =540183X -937102(r =019999,n =6, 平均回收率為97186%,RSD =1158%; 牛蒡苷元的線性方程為Y =381257X -241926(r =019998 , n =6, 平均回收率為98133%,RSD =1174%。本實(shí)驗(yàn)建立的牛蒡子藥材H PLC指紋圖譜相似度均在0190110

3、0。結(jié)論:本方法簡便、準(zhǔn)確、靈敏, 可同時(shí)測定牛蒡苷和牛蒡苷元的含量, 可用作牛蒡子藥材的質(zhì)量控制方法。本實(shí)驗(yàn)建立的H PLC 指紋圖譜分析方法可用于評(píng)價(jià)牛蒡子藥材的內(nèi)在質(zhì)量。牛蒡不同部位所含牛蒡苷和牛蒡苷元考察結(jié)果表明, 牛蒡絨毛、果皮、總苞、芽較其他部位含有較多牛蒡苷和牛蒡苷元。關(guān)鍵詞 HPLC ; 牛蒡子; 牛蒡苷; 牛蒡苷元; 指紋圖譜牛蒡子為菊科植物牛蒡A rctium l a ppa L 1的干燥成熟果實(shí)。具疏散風(fēng)熱, 宣肺透疹, 解毒利咽的功能。用于風(fēng)熱感冒, 咳嗽痰多, 麻疹, 風(fēng)疹, 咽喉腫痛, 痄腮丹毒, 癰腫瘡毒1。牛蒡子主要化學(xué)成分為木脂素類化合物, 主要為牛蒡苷、牛蒡

4、苷元等2。藥理活性主要是抗菌、降血糖、利尿及瀉下、抗腫瘤作用和免疫活性等?，F(xiàn)代藥理研究結(jié)果表明牛蒡子中的活性成分為牛蒡苷元。在口服條件下牛蒡苷在腸內(nèi)菌作用下也很快轉(zhuǎn)變?yōu)榕］蜍赵@一活性形式3-4。所以同時(shí)控制牛蒡子藥材中牛蒡苷和牛蒡苷元的含量, 才能真正達(dá)到控制該藥材質(zhì)量的目的。目前牛蒡不同部位中牛蒡苷和牛蒡苷元的含量測定尚未見報(bào)道。為了對(duì)不同產(chǎn)地牛蒡子的質(zhì)量和對(duì)牛蒡不同部位的開發(fā)與利用有更深入了解, 本文對(duì)不同產(chǎn)地牛蒡子中牛蒡苷和牛蒡苷元的含量進(jìn)行了研究, 同時(shí)對(duì)牛蒡不同部位的牛蒡苷和牛蒡苷元的含量進(jìn)行了比較, 并建立了牛蒡子藥材H PLC 指紋圖譜。1 儀器與材料111儀器Ag ilent

5、 1100高效液相色譜儀; 四元泵; 在線脫氣機(jī); 柱溫箱; KQ-250DE 型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司; 高速萬能粉碎機(jī)(天津市泰斯特儀器有限公司 。112試藥牛蒡苷對(duì)照品、牛蒡苷元對(duì)照品(均購自中國藥品生物制品檢定所 。甲醇為色譜純(天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司 。水為重蒸餾水。113樣品本實(shí)驗(yàn)所采用的牛蒡子藥材于2007年9月、10月采自于全國7個(gè)大區(qū)34個(gè)產(chǎn)地, 經(jīng)遼寧中醫(yī)藥大學(xué)康廷國教授鑒定均為Arctiu m lappa L 1, 牛蒡子編號(hào)及來源見表1。牛蒡不同部位采自沈陽蘇家坨。2 方法與結(jié)果211溶液配制21111對(duì)照品溶液的制備 精密稱定干燥至恒重的牛蒡苷對(duì)照

6、品置10mL 容量瓶中, 加甲醇溶解并定容至刻度, 配成11149m g #mL -1的牛蒡苷對(duì)照品溶液。精密稱定干燥至恒重的牛蒡苷元對(duì)照品置10mL 容量瓶中, 加甲醇溶解并定容至刻度, 配成010519mg #mL -1的牛蒡苷元對(duì)照品溶液。21112供試品溶液的制備將牛蒡子干燥并粉碎, 過60目篩, 取粉末015g , 精密稱定, 置50mL 容量瓶中, 加甲醇45mL , 在超聲波發(fā)生器內(nèi)提取20m i n (150W, 20kH z, 取出放冷, 加甲醇至刻度, 搖勻。經(jīng)微孔濾膜(0145L m 過濾, 即得。表1全國34個(gè)產(chǎn)地牛蒡子編號(hào)及來源區(qū)域省或直轄市樣品編號(hào)產(chǎn)地東北黑龍江1佳

7、木斯2富錦3五常4牡丹江吉林5四平石嶺6梅河口丘鳳7通化8撫松9樺甸10膠河11延吉遼寧12本溪縣13寬甸14岫巖15鐵嶺16清原17北鎮(zhèn)華東浙江18建德江蘇19徐州山東20蒼山華南陜西21太白縣22寧陜(采 西北甘肅23會(huì)川24天水(采 25岷縣(采、綠 26宕昌華北河北27承德華中河南28禹州(采 29河南灤川西南四川30雅安31松潘華中湖北32恩施33神農(nóng)架34巴東 212色譜條件色譜柱為Ag ilent TC -C 18(416mm 250mm, 5L m ; 流動(dòng)相:甲醇-水(水:0m i n , 55%; 10m i n , 46%; 20m i n , 30%線性梯度; 流速11

8、0mL #m i n -1; 檢測波長280n m; 柱溫25e ; 檢測時(shí)間20m in 。213方法學(xué)考察21311線性關(guān)系2131111牛蒡苷線性范圍考察精密吸取牛蒡苷對(duì)照品溶液4, 6, 8, 10, 12, 14L L 分別注入液相色譜儀, 測定牛蒡苷的色譜峰面積, 以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo), 以峰面積為縱坐標(biāo), 得牛蒡苷回歸方程為Y = 540183X -937102, r =019999, 牛蒡苷在41596 161086L g 線性關(guān)系良好。2131112牛蒡苷元線性范圍考察精密吸取牛蒡苷元對(duì)照品溶液2, 4, 6, 8, 10, 12L L 分別注入液相色譜儀, 測定牛蒡苷元的色譜峰

9、面積, 以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo), 以峰面積為縱坐標(biāo), 得牛蒡苷元回歸方程為Y =381257X -241926, r =019998。牛蒡苷元在011038016228L g 線性關(guān)系良好。21312精密度試驗(yàn)按樣品測定方法對(duì)同一樣品溶液連續(xù)進(jìn)樣6次, 牛蒡苷、牛蒡苷元RSD 分別為2117%、1182%, 說明本試驗(yàn)精密度試驗(yàn)符合有關(guān)規(guī)定。21313重現(xiàn)性試驗(yàn)按樣品測定方法對(duì)牛蒡子樣品進(jìn)行5次平行實(shí)驗(yàn), 牛蒡苷、牛蒡苷元RSD 分別為1137%、1119%, 說明本試驗(yàn)重現(xiàn)性試驗(yàn)符合有關(guān)規(guī)定。21314穩(wěn)定性試驗(yàn)在室溫條件下, 精密吸取同一樣品溶液。按樣品測定方法在0, 2, 4, 6, 8h 時(shí)

10、間間隔內(nèi)分別測定牛蒡苷和苷元的峰面積, 結(jié)果牛蒡苷、牛蒡苷元的RSD 分別為1172%、1170%, 表明牛蒡苷和牛蒡苷元在8h 內(nèi)基本穩(wěn)定。21315加樣回收率試驗(yàn)精稱6份已知牛蒡苷和牛蒡苷元含量的樣品0125g , 分別加入牛蒡苷和牛蒡苷元對(duì)照品。按供試品溶液制備項(xiàng)下方法處理, 按上述色譜條件操作, 計(jì)算回收率。結(jié)果見表23。表2牛蒡苷回收率序號(hào)取樣量/g樣品中量/mg對(duì)照品加入量/mg測得量/mg回收率/%平均回收率/%9718611582009年4月第11卷第4期中國現(xiàn)代中藥M odern Chi nese M ed i c i ne A pr 12009V o l 111N o 14

11、表3牛蒡苷元回收率試驗(yàn)序號(hào) 取樣量/g樣品中量/mg測得量/mg回收率/%平均回收率/%RSD /%981331174注:牛蒡苷元對(duì)照品加入量均為0180mg結(jié)果表明本試驗(yàn)加樣回收率試驗(yàn)符合有關(guān)規(guī)定。214樣品的測定精密吸取供試品溶液10L L , 注入高效液相色譜儀中, 測定牛蒡苷和苷元的色譜峰面積, 用外標(biāo)法計(jì)算樣品中牛蒡苷和苷元的含量。平行做2份。結(jié)果見表4, 色譜圖見圖13。表4全國34個(gè)產(chǎn)地牛蒡子中牛蒡苷和 72 21534個(gè)不同產(chǎn)地牛蒡子指紋圖譜的測定21511牛蒡子藥材H PLC 指紋圖譜中共有指紋峰的標(biāo)定與技術(shù)參數(shù)的設(shè)定將34批不同產(chǎn)地牛蒡子藥材指紋圖譜輸入國家藥典委員會(huì)指定的

12、指紋圖譜相似度測試軟件中, 進(jìn)行圖形匹配及其數(shù)據(jù)匹配后, 建立了供試品指紋圖譜的共有模式, 共有10個(gè)色譜峰, 其中5, 10號(hào)峰分別為牛蒡苷和牛蒡苷元的色譜峰, 結(jié)果見圖45。將4號(hào)峰作為內(nèi)參比峰, 各峰相對(duì)保留時(shí)間、相對(duì)峰面積結(jié)果見表5。2015030114330168501403S 11000110006112440115471128901186811702011259117400129821512牛蒡子藥材指紋圖譜相似度檢驗(yàn)利用指紋圖譜相似度計(jì)算軟件, 以夾角余弦作為測度, 計(jì)算樣品與共有模式之間的相似度4, 結(jié)果見表6。表634個(gè)產(chǎn)地牛蒡子相似度評(píng)價(jià)結(jié)果216牛蒡不同部位所含牛蒡苷和

13、牛蒡苷元的考察按211供試品溶液的制備方法分別對(duì)牛蒡野生根、栽培根、二年生葉、一年生葉、二年生莖、一年生葉柄、絨毛、總苞、果皮、芽進(jìn)行制備, 分別取10L L , 按212色譜條件進(jìn)樣, 測定牛蒡苷和牛蒡苷元的色譜峰面積, 用外標(biāo)法計(jì)算牛蒡不同部位中牛蒡苷和牛蒡苷元的含量, 結(jié)果見表7。表7牛蒡不同部位中牛蒡苷和牛蒡苷元含量測定/mg#g -1部位牛蒡苷含量牛蒡苷元含量野生根0139-栽培根-二年生葉-一年生葉-二年生莖-一年生葉柄-絨毛31710145總苞81990170果皮61912130芽9112828165注:(1 -表示沒有檢測到牛蒡苷或牛蒡苷元; (2 n =33討論對(duì)采于全國34

14、個(gè)地區(qū)牛蒡子藥材中牛蒡苷和牛蒡苷元進(jìn)行了含量測定, 根據(jù)含量測定結(jié)果, 采于吉林梅河口丘鳳的牛蒡子藥材品質(zhì)最好。對(duì)5中國藥典6牛蒡子提取方法中關(guān)于提取所用甲醇的濃度和超聲提取時(shí)間進(jìn)行了驗(yàn)證, 結(jié)果表明采用純甲醇超聲提取20m in 效果最好。本實(shí)驗(yàn)建立的牛蒡子藥材H PLC 指紋圖譜相似度均在0190 1100, 因此, 在分析未知樣品時(shí), 凡未知樣品與標(biāo)準(zhǔn)樣本間的相似度達(dá)到以上標(biāo)準(zhǔn), 其他項(xiàng)目均符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)時(shí), 均可作為合格藥材入藥。對(duì)牛蒡不同部位所含牛蒡苷和牛蒡苷元的含量進(jìn)行了考察, 結(jié)果顯示牛蒡野生根、栽培根、二年生葉、一年生葉、二年生莖、一年生葉柄里不含有牛蒡苷和牛蒡苷元或僅含有少量牛

15、蒡苷或牛蒡苷元。牛蒡絨毛、果皮、總苞、芽含有較多牛蒡苷和牛蒡苷元, 其中芽里含有較多牛蒡苷元。參考文獻(xiàn)1國家藥典委員會(huì)1中國藥典(一部 S1北京:化學(xué)工業(yè)出版社, 2005:48-4912江蘇新醫(yī)學(xué)院1中藥大辭典M1上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社, 1977, 6(3:21713N o se M 1Structural transfo r ma ti on o f li gnan co m pounds in rat g astro i ntesti nal tractJ1P lantaM ed , 1992, 58(6:5201 4N o se M 1Structural transfo r ma

16、 ti on o f li gnan co m pounds in rat g astro i ntesti nal tract ; Se ru m concentrati on o f lignans and the ir m etabolitesJ1P l anta M ed , 1993, 59(2:13115國家藥品監(jiān)督管理局1中藥注射劑指紋圖譜研究的技術(shù)要求(暫行 M 120001(收稿日期2008-10-21 (下轉(zhuǎn)第37頁 參考文獻(xiàn)1國家藥典委員會(huì)1中國藥典(一部 S1北京:化學(xué)工業(yè)出版社, 2005:3112宋磊, 丁安偉, 黃海燕1女貞子炮制工藝的研究J1中藥新藥與臨床藥理,

17、 2007, 18(1:64-65, 7713葉定江, 張世臣1中藥炮制學(xué)M 1北京:人民衛(wèi)生出版社, 1999:50214陳亞東, 曹秀蘭, 田長有, 等1高山紅景天對(duì)小鼠耐缺氧、抗疲勞及耐低溫作用的影響J1中國中醫(yī)藥科技, 2002, 9(3 :157-1581 5孫立群, 王宗貴, 朱洪權(quán), 等1紅景天甙抗二倍體細(xì)胞衰老的實(shí)驗(yàn)研究J1中國老年學(xué)雜志, 200, l 2l(3: 225-22616曾維政, 吳曉玲, 蔣明德, 等1紅景天甙對(duì)肝纖維化大鼠肝組織CBP 、S m ad 基因表達(dá)的影響J1世界華人消化雜志, 2005, 13(3 :341-34517王亞平, 李伯祥1A -平滑肌

18、肌動(dòng)蛋白在大鼠腎間質(zhì)損傷時(shí)的表達(dá)及紅景天甙的保護(hù)作用J1中華腎臟病雜志, 2000, 16(2:1181(收稿日期2008-10-31Effec t of Ste w ing Tim e on the Content of Sali d rosi d e in L i g ustru m luc i d um A it 1Zhang Xuelan 1, H ou Jie 1, L iH u ifen 1, W ang Ru ifang 2(11Shandong University of TC M, J inan Shandong 250014, China;21J inan M aterni

19、ty and Chil d CareH os p ital , J inan Shandong 250001, Ch inaA bstractO bjective :To study the effect of ste w ing ti m e on the content of sa li d rosi d e in L igu strum lu ci -dum A it 1M e t hods :L i g ustrum luci d um A it 1and its processed produc ts o f different ste w i n g ti m e (4, 8, 1

20、2, 16, 20, 24h w ith yello w w i n e w ere co m pared w ith the contents of sa li d roside taken as the index 1And the con -ten ts of salidrosi d e w ere deter m i n ed by H PLC 1R esults :The contents o f sa li d rosi d e in 6k i n ds of processed prod -uc ts w are h i g er obv i o usl y than ones

21、of L igustrum lucidum A it 1A nd w ith the pro l o ng i n g o f ste w ing ti m e , the con -ten ts o f sa li d ro si d e i n the pro cessed productsw ere increased g radually 1C onc lusion :The ste w i n g ti m e has a great effec t on the content o f sa li d roside in L igu strum lucidum A it 1, sa

22、 lidrosi d e o f L i g ustrum luci d um A it 1w as pro -duced by stew i n g 1Key w ordsL igustrum lucidum A it 1; Processing w ith w i n e ; Ste w i n g ti m e ; Salidrosi d e(上接第26頁Content Determ ination of A rctii n and A rctigenin in Fructus A rctii fro m D ifferent CultivationP laces and the D i

23、fferent Parts of Arctiu m Lappa L 1and F i n gerprint Analysis of Fruct us A rctii K ang Ka i 1, Dou Deq i a ng 1, Kang T i n gguo 1, Xu Liang 1, L Zh i 1, Chang Yu 2, Liu M iao 2(11L iaoning University of Trad itional ChineseM ed ici n e , Dalian L iaon i n g 116600, China;21Institute of App lie d

24、E cology , Chinese Acade m y o f Sciences , Shenyang L i a oning 110016, ChinaAbstractObj ective :To estab lish a H PLC m ethod to deter m i n e the contents of arctii n and arctigenin i n Fructus Arctii fro m different cu ltivation p l a ces and the d ifferent parts o f Arctium Lappa L 1and fi n gerpri n t o f Fruct u s A rctii 1M et hods :The H PLC m ethod w as e m ployed by taki n g Ag ilent TC -C 18column (416mm 250mm , 5L m and m ethano -l w a