藥物分析總結(jié) By Brian Wang

1、藥物分析總結(jié)1，新修本草，這是世界上最早的一部藥典。2，國家藥品（質(zhì)量）標(biāo)準(zhǔn)：是國家對藥品質(zhì)量規(guī)格及檢驗方法所作的技術(shù)規(guī)定，是藥品生產(chǎn)、供應(yīng)(經(jīng)營）、使用、檢驗和行政、技術(shù)監(jiān)督管理部門共同遵循的法定技術(shù)依據(jù)。是強制性的法定計術(shù)標(biāo)準(zhǔn)。3，藥典（Pharmacopeia ）：國家關(guān)于藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的法典。4，5，2005年版主要內(nèi)容一部：中藥材及飲片、植物油脂和提取物、成方制劑和單味制劑二部：化學(xué)藥品、抗生素、生化藥品、放射性藥品三部：生物制品（中國生物制品規(guī)程）6，其他重要規(guī)定·水浴溫度： 除另有規(guī)定外，均指 98100 ·室溫： 1030 ·冰?。?0 ·

2、放冷：指放冷至室溫·陰涼處：不超過 20 ·涼暗處：避光并不超過 20 ·1 10 ：固體溶質(zhì)1.0g或液體溶質(zhì)1.0ml加溶劑使成10ml的溶液。·溶液的滴： 20 時，1.0ml水相當(dāng)于20滴·恒重：供試品連續(xù)兩次干燥或熾灼后的重量差異在0.3mg以下。 ·精密稱定：稱取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所取重量千分之一。·稱定：稱取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所取重量的百分之一。·約：指取用量不得超過規(guī)定量的±10%·標(biāo)準(zhǔn)品&對照品：用于鑒別、檢查和含量測定的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，指定單位制備、標(biāo)定、供應(yīng)。 標(biāo)準(zhǔn)品指用于生物檢定、

3、抗生素或生化藥品含量或效價測定的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，一般按效價單位計。 對照品一般指化學(xué)藥品，按百分含量計?？瞻自囼灒?不加供試品或以等量溶劑替代供試液的情況下，按同法操作所得的結(jié)果。7，Solubility極易溶解 系指溶質(zhì)1g（ml）能在溶劑不到 1ml中溶解；易溶 系指溶質(zhì)1g（ml）能在溶劑1不到“10ml中溶解；溶解 系指溶質(zhì)1g（ml）能在溶劑10不到30ml中溶解；略溶 系指溶質(zhì)1g（ml）能在溶劑30不到100ml中溶解；微溶 系指溶質(zhì)1g（ml）能在溶劑100不到1000ml中溶解；極微溶解 系指溶質(zhì)1g（ml）能在溶劑1000不到10000ml中溶解；幾乎不溶或不溶 系指溶質(zhì) 1g（

4、ml）在溶劑 10000ml中不能完全溶解。8，空白試驗不出現(xiàn)正反應(yīng)® 試劑等不干擾鑒別試驗對照試驗呈正反應(yīng)® 試驗條件正常9，藥物的雜質(zhì)檢查一、 藥物的雜質(zhì)和純度的概念1，雜質(zhì)（Impurity，Related Substances，Product-Related Impurity ） 藥物中存在的無治療作用、或影響藥物的療效和穩(wěn)定性、甚至對人體健康有害的物質(zhì)。2，純度（Purity） 藥物的純凈程度。它是判定藥品質(zhì)量優(yōu)劣的一個重要指標(biāo)。對藥物純度的要求是隨著生產(chǎn)工藝的改進(jìn)、變化以及分離分析技術(shù)的發(fā)展而不斷提高、完善的。3，藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的雜質(zhì)不包括變更生產(chǎn)工藝或變更原輔

5、料而產(chǎn)生的新的雜質(zhì)，也不包括參入或污染的外來物質(zhì)。二、 藥物中雜質(zhì)的來源和分類1.雜質(zhì)的主要來源 （1）生產(chǎn)過程中引入 原料藥生產(chǎn)（合成：未反應(yīng)完的原料、反應(yīng)的中間體、副產(chǎn)物、殘留溶劑；提取：藥物結(jié)構(gòu)、性質(zhì)相近的物質(zhì)、殘留溶劑） 制劑生產(chǎn)*注意：生產(chǎn)設(shè)備也可能引入雜質(zhì)（2）貯藏過程中引入：受外界條件影響（溫度、濕度、光線、空氣、微生物）而發(fā)生水解、氧化、分解、異構(gòu)化、晶型轉(zhuǎn)變、聚合、潮解、發(fā)霉等變化2.雜質(zhì)的分類（1）按雜質(zhì)來源：一般雜質(zhì)和特殊雜質(zhì)。 一般雜質(zhì)：指在多種藥物的生產(chǎn)和貯藏過程中容易引入的雜質(zhì)。 特殊雜質(zhì)：指在特定藥物的生產(chǎn)和貯藏過程中引入的雜質(zhì)。（2）按雜質(zhì)結(jié)構(gòu)：無機雜質(zhì)和有機雜

6、質(zhì)。（3）按雜質(zhì)性質(zhì)：信號雜質(zhì)和有害雜質(zhì)。三、雜質(zhì)的限量檢查1雜質(zhì)限量的概念 在不影響藥物療效和不發(fā)生毒性的前提下，藥物中所含雜質(zhì)的最大允許量，叫做雜質(zhì)限量。通常用百分之幾（）或百萬分之幾（ppm）來表示。藥物中雜質(zhì)的檢查，一般也不要求測定其含量，而只檢查雜質(zhì)的量是否超出限量雜質(zhì)限量檢查（Limit Test)2、雜質(zhì)限量的計算3、一般雜質(zhì)的檢查方法（參考課件）氯化物檢查法 標(biāo)準(zhǔn)液：NaCl標(biāo)準(zhǔn)液 硫酸鹽檢查法 標(biāo)準(zhǔn)硫酸鉀溶液鐵鹽檢查法 鹽酸酸性溶液、標(biāo)準(zhǔn)鐵溶液：硫酸鐵銨FeNH4(SO4)2·12H2O重金屬檢查法 標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液：硝酸鉛、硫代乙酰胺法、熾灼破壞法、硫化鈉法、微孔濾膜法

7、砷鹽檢查法 標(biāo)準(zhǔn)砷溶液：三氧化二砷方法：第一法(古蔡氏法)、第二法(二乙基二硫代氨基甲酸銀法 ；Ag-DDC法)古蔡法 （Gutzeit）：加 KI 和 SnCl2目的：© 還原 As5+；© 抑制SbH3生成；© 形成鋅錫齊， 使氫氣的生成連續(xù)均勻。醋酸鉛棉花：吸收H2S酸堿度檢查法溶液顏色檢查法 第一法：目視比色法:標(biāo)準(zhǔn)比色液進(jìn)行比較的方法第二法：分光光度法:規(guī)定波長處吸收度值第三法：色差計法 易炭化物檢查法澄清度檢查法 與濁度標(biāo)準(zhǔn)液比濁的進(jìn)行檢查 熾灼殘渣檢查法 目的:控制有機藥物和揮發(fā)性無機藥物中存在的非揮發(fā)性無機雜質(zhì)。干燥失重測定法 概念:藥品在規(guī)定條件

8、下,經(jīng)干燥后所減失的量,以百分率表示；熱分析法殘留溶劑測定法4，特殊雜質(zhì)的檢查方法原理: 利用藥物和雜質(zhì)在物理和化學(xué)性質(zhì)上的差異10，巴比妥類藥物的分析環(huán)狀結(jié)構(gòu)不開環(huán)水解開環(huán)堿液酸、氧化劑、還原劑 有本類藥物的結(jié)構(gòu)知其具有：弱酸性（1，3位等）、水解反應(yīng)（堿）、與重金屬離子的反應(yīng)（含有丙二酰脲或酰亞胺結(jié)構(gòu)；與銀鹽的反應(yīng)可用于本類藥物的鑒別和含量測定）、與香草醛（Vanillin）的反應(yīng)（丙二酰脲基團中氫比較活潑）、紫外吸收、色譜行為、晶型11，巴比妥類藥物鑒別試驗丙二酰脲類鑒別反應(yīng)、測定熔點、利用特殊取代基或元素（利用不飽和取代基的鑒別試驗；藥典收載的有司可巴比妥鈉與高錳酸鉀反應(yīng)，堿性溶液；利

9、用芳環(huán)取代基的鑒別試驗；硫元素的鑒別試驗-區(qū)別硫代巴比妥類藥物與巴比妥類藥物，藥典2005對注射用硫噴妥鈉的鑒別采用了此法）12，巴比妥類藥物（特殊）雜質(zhì)檢查（一） 苯巴比妥1） 酸度控制副產(chǎn)物苯基丙二酰脲量2） 溶液的澄清度控制乙醇不溶性雜質(zhì)，副反應(yīng)產(chǎn)物苯巴比妥酸雜質(zhì)的含量（二） 司可巴比妥鈉 溶液的澄清度：司可巴比妥鈉極易溶于水，溶液應(yīng)澄清，否則藥物中含有水不溶性雜質(zhì)13，巴比妥類藥物含量測定 銀量法（與銀離子定量成鹽）、溴量法（不飽和鍵） 14，芳酸及其酯類藥物的分析14-1 結(jié)構(gòu)性質(zhì) 重點：阿司匹林（aspirin）14-2 鑒別試驗 1）與鐵鹽的反應(yīng) 紫色配合物1-1）水楊酸及其鹽6

10、+ 4 FeCl3 + 12 HCl1-2）氯貝丁酯 生成羥肟酸鐵配位化合物；該反應(yīng)多用于羧酸及其酯類的鑒別NH2OH×HClKOHH+Fe3+氯貝丁酯3） 重氮化-偶合反應(yīng)具有芳伯氨基（或潛在；貝諾酯），加酸水解后產(chǎn)生游離的芳伯胺基，在酸性溶液中，與亞硝酸鈉試液進(jìn)行重氮化反應(yīng)，生成重氮鹽，再與堿性-萘酚偶合生成橘紅色沉淀。4)水解反應(yīng)14-3特殊雜質(zhì)檢查1-1）阿司匹林中特殊雜質(zhì)檢查可能雜質(zhì)：合成過程中：未反應(yīng)完的酚類，生成的副產(chǎn)物苯酚、醋酸苯酯、水楊酸苯酯、乙酰水楊酸苯酯，乙?；蝗a(chǎn)生的水楊酸；等貯藏中阿司匹林水解產(chǎn)生的水楊酸1-2）檢查a.溶液的澄清度 阿司匹林溶于碳酸鈉溶液

11、，雜質(zhì)不溶b.游離水楊酸 水楊酸氧化生成的一系列醌類有色雜質(zhì)對人體有害；水楊酸可在弱酸性溶液中與高鐵鹽反應(yīng)而成紫堇色，而阿斯匹林（無游離酚羥基）不發(fā)生該反應(yīng)。c.易碳化物 檢查易被硫酸碳化顯色的低分子有機雜質(zhì)2-1）對氨基水楊酸鈉中特殊雜質(zhì)檢查間氨基酚 2-2）檢查方法2-2-1 雙相滴定法 藥典2005利用間氨基酚易溶于乙醚，而對氨基水楊酸鈉不溶于乙醚的特性，用乙醚提取分離雜質(zhì)后，乙醚提取液中加入適量水和指示劑，用鹽酸滴定，以消耗一定量鹽酸滴定液來控制其限量。該法為雙相滴定法，所生成的鹽酸鹽在乙醚中不溶，而轉(zhuǎn)溶入水相中。2-2-2 HPLC3-1）氯貝丁酯中特殊雜質(zhì)檢查 對氯酚14-4含量測

12、定一、酸堿滴定法 直接滴定法、水解后剩余滴定法、兩步滴定法二、亞硝酸鈉滴定法 芳伯氨基或水解后生成芳伯氨基的藥物在酸性水溶液中與亞硝酸鈉定量發(fā)生重氮化反應(yīng)，生成重氮鹽，可用永停滴定法指示反應(yīng)終點。三、雙相滴定法 四、高效液相色譜法15，胺類藥物的分析芳胺類藥物鹽酸普魯卡因注射液撲熱息痛鹽酸普魯卡因胺因其分子結(jié)構(gòu)中具有芳酰胺結(jié)構(gòu)，可被濃過氧化氫氧化成羥肟酸，再與三氯化鐵形成配位化合物羥肟酸鐵。 提取酸堿滴定法 本法是依據(jù)本類藥物的鹽酸鹽或硫酸鹽可溶于水，而藥物本身為游離堿不溶于水，可以溶于有機溶劑的一般通性進(jìn)行的。常用的方法是，將供試品溶于水或礦酸中，加入適量的堿性試劑使藥物游離后，用適當(dāng)?shù)挠袡C

13、溶劑提取。提取液蒸干，殘渣加中性乙醇溶解，用標(biāo)準(zhǔn)酸滴定液直接滴定；或在提取液中加過量的標(biāo)準(zhǔn)酸滴定液，蒸去有機溶劑后，再用標(biāo)準(zhǔn)堿滴定液回滴。（關(guān)鍵詞：溶解性差異，堿化，提取，滴定）氨基醚衍生物類藥物（鹽酸苯海拉明和茶苯海明）15，雜環(huán)類藥物的分析異煙肼(isoniazid)尼可剎米(nikethamide)§3. 苯駢二氮雜卓類藥物（鎮(zhèn)靜劑） 地西泮（安定）(diazepam)酸性染料比色法酸性染料比色法是利用堿性藥物，在一定的PH條件下，可與某些酸性染料結(jié)合顯色，而進(jìn)行分光光度法測定藥物含量的方法。（P229）16，生物堿類藥物的分析17，維生素類藥物的分析VB1（水溶性）硝酸鉛反應(yīng)

14、、氯化物反應(yīng)VC（水溶性）維生素C（vitamin C），又稱抗壞血酸，在化學(xué)結(jié)構(gòu)上和糖類十分相似，有四種光學(xué)異構(gòu)體（兩個手性碳C4/C5），其中以L構(gòu)型右旋體的生物活性最強。中國藥典及美、英、日、等國藥典收載的均為L-抗壞血酸（L-ascorbic acid）。 酸性：分子結(jié)構(gòu)中二烯醇基，尤其是C3-OH，受共軛效應(yīng)的影響，酸性較強（pK1=4.17）； C2-OH的酸性極弱（ pK2=11.57 ），故維生素C 一般表現(xiàn)為一元酸，能與碳酸氫鈉作用生成鈉鹽。（注：如圖，-不飽和酮結(jié)構(gòu)，在電荷的分布上，表現(xiàn)為氧負(fù)-吸電子效應(yīng)，1正，2負(fù)，3正，電荷正負(fù)交替，因此3位帶正電荷，表現(xiàn)出強的吸電子性

15、，故呈現(xiàn)酸性，2位反之） 還原性：分子結(jié)構(gòu)中的二烯醇基具極強的還原性，易被氧化為二酮基而成為去氫維生素C ，加氫又可還原為維生素C 。在堿性或強酸性溶液中進(jìn)一步水解為2,3-二酮古洛糖酸而失去活性（內(nèi)酯環(huán)開環(huán)水解）。維生素C 與碳酸鈉可生成單鈉鹽，與氫氧化鈉作用，內(nèi)酯環(huán)水解生成酮酸鹽。鑒別試驗 硝酸銀反應(yīng)、2，6-二氯靛酚鈉反應(yīng)-利用了VC的還原性含量測定-維生素C 具有較強的還原性碘量法2,6-二氯吲哚酚法 VA（水不溶） 維生素A1（視黃醇，retinol），中國藥典收載的維生素A為全反式維生素A醋酸酯的精制植物油溶液。鑒別試驗三氯化銻反應(yīng)（Carr-Price反應(yīng)）-維生素A 和親電試劑

16、氯化高銻（V）作用形成不穩(wěn)定的正碳離子,顯藍(lán)色。反應(yīng)在無水、無醇條件下進(jìn)行。紫外吸收光譜薄層色譜VE（水不溶） 維生素E（vitamin E）：-生育酚（tocopherol）及其各種酯類。 中國藥典收載的維生素E為消旋-生育酚醋酸酯（ dl tocopheryl），收載的制劑有粉劑、片劑、注射劑、膠丸。 維生素E（vitamin E）：苯并二氫吡喃(色滿醇)衍生物, 苯環(huán)上有一個乙酰化的酚羥基結(jié)構(gòu)決定性質(zhì)：1）長的烷基鏈決定其水不溶性 2）苯環(huán)決定其紫外吸收性 3）乙?；姆恿u基水解后體現(xiàn)出酚類易被氧化的性質(zhì)鑒別試驗硝酸反應(yīng) 酸性水解再氧化 酚羥基三氯化鐵反應(yīng) 堿性水解再絡(luò)合 酚羥基紫外光譜

17、 0.01%無水乙醇液在波長284nm處有最大吸收, 在波長254nm處有最小吸收.薄層色譜法 薄層板: 硅膠G薄層板 展開劑: 環(huán)己烷-乙醚(4:1) 顯色劑: 硫酸 結(jié)果: 生育酚、生育酚醋酸酯、生育醌的Rf值分別為0.5、0.7、0.9。HPLCIR雜質(zhì)檢查 酸度（制備過程中引入的游離醋酸）生育酚（乙?；煌耆?中國藥典采用硫酸鈰滴定法檢查維生素E中的游離生育酚，限量為2.15%。原理： 游離生育酚具強還原性，可被硫酸鈰定量氧化，用消耗硫酸鈰滴定液的體積控制游離生育酚的限量。顯色劑：二苯胺（此反應(yīng)可用于含量測定）正己烷（殘留溶劑：GC-FID、HP-5、外標(biāo)法）含量測定利用水解產(chǎn)物游離

18、生育酚易被氧化的性質(zhì) 鈰量法將鐵(III)還原為鐵(II)后，與不同試劑生成配位化合物進(jìn)行比色測定。硝酸氧化、鄰苯二胺縮合測定熒光。高效液相色譜法 日本藥局方 色譜柱：id 4mm，長1530cm的不銹鋼柱。固定相：ODS流動相：甲醇-水（49:1）檢測器：紫外檢測波長：292nm分離度：應(yīng)大于2.6(生育酚與其醋酸酯)精密度：峰高的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)小于0.8%(n=3)氣相色譜法：簡便快速、專屬性強。各國藥典多采用，適于VE尤其制劑測定。載氣：氮氣固定相：硅酮（OV-17）柱溫：265°C檢測器：FID18，甾體激素類藥物（steroid hormone drugs）的分析 是指分子

19、結(jié)構(gòu)中含有甾體母核的激素類藥物。分子結(jié)構(gòu)中均具有環(huán)戊烷并多氫菲母核，是臨床上較為重要的一類藥物。環(huán)戊烷并多氫菲母核分類 腎上腺皮質(zhì)激素（皮質(zhì)酮的衍生物）皮質(zhì)酮 雄性激素與蛋白同化激素 睪酮（睪丸素）衍生物 可供分析主要結(jié)構(gòu)特征：A環(huán)的4-3-酮結(jié)構(gòu)睪丸素 雌激素 孕激素鑒別試驗與強酸的呈色反應(yīng) 甾體母核反應(yīng) 機理：4-3-酮 濃硫酸 質(zhì)子化 正碳離子（共軛體系） 顯色官能團的反應(yīng)酮基的反應(yīng)-羰基試劑C17-醇酮基的反應(yīng)-醇酮基（還原性） 甲酮基或活潑亞甲基的反應(yīng)-與羰基相連的碳上有活潑氫酚羥基的反應(yīng)-酚羥基臨位活潑易被取代氟元素的反應(yīng)乙炔基的反應(yīng)-端基炔的重金屬反應(yīng)測定衍生物熔點酯類的反應(yīng)紫外

20、分光光度法紅外分光光度法：各國藥典收載的甾體激素類藥物，幾乎都采用紅外光譜作為鑒別方法之一。薄層色譜法高效液相色譜法-中國藥典采用HPLC鑒別醋酸氟輕松軟膏（字寫得不對？氫？）等十余個品種。特殊雜質(zhì)檢查 其他甾體閱讀材料pdf：甾體總結(jié)19，抗生素類藥物的分析-內(nèi)酰胺類抗生素氨基糖苷類抗生素（Aminoglycosides antibiotics）四環(huán)素類20，藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制訂（閱讀）21，中藥制劑分析概論（閱讀）1）中藥制劑分析特點 化學(xué)成分多而復(fù)雜 質(zhì)量受多種因素影響 易吸潮、染菌、有效成分常不穩(wěn)定 有效成分含量一般較低2）22氮測定法及其應(yīng)用凱氏定氮法23，藥物制劑分析 注意：做含量均

21、勻度檢查的藥物，不再做重量差異檢查注意：做溶出度/釋放度檢查，不再做崩解時限（？）ppt計算題（閱讀）24，藥物現(xiàn)代儀器分析法25，供試品前處理與測定方法效能指標(biāo)（閱讀）-對最后大題的思路有一些啟示26，糖類及苷類藥物的分析鑒別實驗1） 灼燒實驗2） Molish反應(yīng)3） Fehling和Benedict 反應(yīng)4） 三氮唑衍生物試驗5） Barfoed 反應(yīng)6） Saliwanoff 反應(yīng)7） 比旋度法8） TLC法27，生化藥物和基因工程藥物分析簡介（自己掌握）28，大題的想法（僅供參考）1） 第一種大題（即需選一種方法，但要深入）解決策略以通法為主，首先是分析方法的選擇，需對幾個特別通用的方法進(jìn)行深入學(xué)習(xí)，舉例：H