甲醛滴定法測定溶液中的氨基酸含量

1、 甲醛滴定法測定氨基酸含量一、目的 掌握甲醛滴定法測定氨基酸含量的原理和操作要點二、原理水溶液中的氨基酸為兼性離子，因而不能直接用堿滴定氨基酸的羧基。甲醛可與氨基酸上的N+H3結(jié)合，形成NHCH2OH、N(CH2OH)2 等羥甲基衍生物，使N+H3上的H+游離出來，這樣就可以用堿滴定N+H3放出H+，測出氨基氮，從而計算氨基酸的含量。若樣品中只含有單一的已知氨基酸，則可由此法滴定的結(jié)果算出氨基酸的含量。若樣品中含有多種氨基酸（如蛋白質(zhì)水解液），測不能由此法算出氨基酸的含量。脯氨酸與甲醛作用后，生成的化合物不穩(wěn)定，導致滴定后結(jié)果偏低；酪氨酸含酚基結(jié)構(gòu)，導致滴定結(jié)果偏高。三、材料、試劑與器具（一）

2、試劑1、1%酚酞酒精溶液稱1g酚酞溶于100ml 95%酒精中。2、0.5%溴麝香草酚藍溶液取0.5溴麝香草酚藍溶于100ml 20%乙醇溶液中。3、氨基酸溶液4、標準0.100mol/L 氫氧化鈉溶液5、中性甲醛溶液取甲醛溶液50ml，加1%酚酞指示劑2滴，滴加0.1mol/L NaOH溶液，使溶液呈微粉紅色，臨用前中和。（二）實驗器具 1、錐形瓶 2、堿式滴定管3、移液管洗耳球 4、天平5、容量瓶 6、試劑瓶7、量筒 8、玻棒與燒杯四、操作步驟1、取3只50ml錐形瓶，按下表加入試劑。 錐形瓶編號試劑樣品1樣品2空白氨基酸溶液或樣品（ml）1.01.0蒸餾水（ml）5.05.06.0中性甲

3、醛溶液（ml）5.05.05.00.05%溴麝香草酚藍溶液（滴）2221%酚酞乙醇溶液（滴）2222、混勻后用標準0.100mol/L氫氧化鈉溶液滴定至紫色（pH8.79.0）3、結(jié)果計算氨基酸溶液中含氨基酸的百分比濃度為 C=（V1-V2）×C0×氨基酸分子量/（10×V樣）式中： C：總酸含量（g/100ml） V1為滴定樣品消耗標準氫氧化鈉的體積（ml）； V2為滴空白消耗氫氧化鈉的體積（ml）； C0：標準氫氧化鈉準確濃度(mol/L) V樣：樣品體積(ml)4 、氫氧化鈉標準溶液的標定五、注意事項（1）利用甲醛滴淀法可以用來測定蛋白質(zhì)的水解程度。隨著蛋白質(zhì)水解度的增加，滴定值也增加，當?shù)鞍踪|(zhì)水解完成后，滴定值不再增加。（2）氨與甲醛反應方程銨根與甲醛反應生成六次甲基四胺鹽及強酸：（氨的部分電離產(chǎn)生少量銨根，但由第二個反應大量消耗銨根后，氨電離方程就強烈地偏向右邊了）反應生成的六次甲基四胺鹽及3個氫離子都可以跟堿反應，而溶液中正好有還未反應的氨水，因而第二個反應，中和反應發(fā)生(CH2)6N4H+ + NH3 = (CH2)6N4 + NH4+ H+NH3= NH4+這第二組反應就是一個釋放出中和熱的過程，所以溶液就熱起來。這里生成的銨鹽又重復