規(guī)模豬場(chǎng)豬瘟免疫失敗調(diào)查及免疫程序優(yōu)化

1、規(guī)模豬場(chǎng)豬瘟免疫失敗調(diào)查及免疫程序優(yōu)化 原霖基金項(xiàng)目：北京市生豬產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)（GWZJ-2009-05）作者簡(jiǎn)介：原霖（1982-），男，碩士，主要從事動(dòng)物傳染病診斷的研究，E-mail：通訊作者：顧小雪，E-mail： 顧小雪 張碩 汪葆玥 胡冬梅 李曉霞 遇秀玲 翟新驗(yàn) 田克恭 （中國動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，北京，100125）摘要：本研究主要是調(diào)查規(guī)模豬場(chǎng)豬瘟的免疫效果，選取北京市3個(gè)規(guī)模豬場(chǎng)，每場(chǎng)隨機(jī)抽取10頭仔豬分別在25、60和90日齡采血分離血清，檢測(cè)豬瘟抗體。A、B、C三個(gè)豬場(chǎng)的母源抗體陽性率分別為100%、50%、0%；二次免疫后抗體陽性率分別為10%、90%、90%。

2、由于豬場(chǎng)A豬瘟免疫失敗，對(duì)其免疫程序進(jìn)行了優(yōu)化，將首免時(shí)間推遲至50日齡。優(yōu)化免疫程序后二次免疫后抗體陽性率達(dá)到70%。結(jié)果表明，母源抗體陽性率直接影響豬瘟疫苗對(duì)仔豬的免疫效果，仔豬母源抗體降至50%左右進(jìn)行豬瘟免疫可取得比較理想的結(jié)果。本研究為規(guī)模豬場(chǎng)結(jié)合仔豬母源抗體水平制定合理豬瘟免疫方案提供了較好的參考。關(guān)鍵詞：規(guī)模豬場(chǎng)；豬瘟；免疫失?。幻庖叱绦騍urvey of immune failure of classical swine fever in pigs on large-scale pig farms and optimization of immunity procedureYU

3、AN Lin，GU Xiao-xue，ZHANG Shuo，WANG Bao-yue，HU Dong-mei，LI Xiao-xia，YU Xiu-ling，ZHAI Xin-yan，TIAN Ke-gong（China Animal Disease Control Centre，Beijing，100125）Abstract：The objective of this study is to investigate immune status of classical swine fever( CSF) in large-scale pig farms. 3 large-scale pig

4、farms in Beijing were chosen. Blood samples were collected from 10 piglets for each farm on 25、60 and 90-day-old individually, following to be tested antibody titers to CSFV. The positive rates of maternal antibodies to CSFV in 3 pig farms（A、B、C）were 100%，50%，0%. The positive rates of antibodies to

5、CSFV after the second vaccination in 3 pig farms（A、B、C）reached 10%，90%，90%。In light of immune failure in pig farm A, optimization of the immunity procedure was conducted. The date of initial administration was postponed to 50-day-old. The positive rates of antibodies to CSFV after the second immuniz

6、ation were 70%. The results showed that the maternal antibody level directly influenced immune efficiency of CSF. The available result is to be obtained when piglets are vaccinated with a drop of 50% in positive rate of maternal antibody to CSFV. This study provides valuable references for the formu

7、lation of optimized immunity procedure.Keywords: large-scale pig farm；classical swine fever；immune failure；immunity procedure豬瘟（classical swine fever，CSF）是由豬瘟病毒（CSFV）引起的一種以高熱、出血為主要特征的烈性、高度接觸性傳染病，是危害我國養(yǎng)豬業(yè)最嚴(yán)重的疫病之一。OIE將其列為必須報(bào)告的疫病1，我國將其列為一類動(dòng)物疫病。由于我國實(shí)行了豬瘟強(qiáng)制免疫政策，豬瘟疫情總體上得到了控制。但是近年來由于非典型豬瘟、溫和性豬瘟造成的持續(xù)隱性感染，以及

8、免疫程序不合理等因素的影響常常導(dǎo)致豬瘟疫苗免疫失敗，給各豬場(chǎng)帶來極大的風(fēng)險(xiǎn)。本研究對(duì)北京3個(gè)規(guī)模豬場(chǎng)20110日齡商品豬豬瘟疫苗免疫后的抗體水平進(jìn)行了連續(xù)監(jiān)測(cè)。根據(jù)監(jiān)測(cè)結(jié)果，分析了豬瘟疫苗免疫失敗的原因，優(yōu)化了免疫程序，為規(guī)模豬場(chǎng)制定符合本場(chǎng)情況的免疫方案提供了參考依據(jù)。1 材料與方法1.1 試驗(yàn)材料 試驗(yàn)豬場(chǎng)（A、B、C）為北京市3個(gè)規(guī)模豬場(chǎng)，試驗(yàn)豬為20110日齡，采用常規(guī)方法采血并分離血清。豬瘟疫苗采用某公司生產(chǎn)的豬瘟脾淋苗。豬瘟抗體檢測(cè)試劑為美國IDEXX豬瘟抗體阻斷ELISA檢測(cè)試劑盒，批號(hào)：V731，購自北京愛德士元亨生物科技有限公司。酶標(biāo)儀為TECAN公司的SUNRISE酶標(biāo)儀，

9、購自東勝創(chuàng)新公司。1.2 豬場(chǎng)原免疫程序 仔豬25日齡左右進(jìn)行首免，60日齡左右進(jìn)行二免；母豬配種前免疫，每次免疫劑量為1頭份。1.3 原免疫程序下的豬瘟抗體檢測(cè)從3個(gè)規(guī)模豬場(chǎng)不同產(chǎn)房隨機(jī)抽取10頭仔豬，記錄耳標(biāo)號(hào)分別于約25日齡（一免前）、約60日齡（一免后30天）、約90日齡（二免后30天）分別采血分離血清，采血后第二天進(jìn)行免疫。用豬瘟抗體阻斷ELISA檢測(cè)試劑盒進(jìn)行豬瘟抗體檢測(cè)，結(jié)果以抗體阻斷率表示。1.4 優(yōu)化免疫程序后的豬瘟抗體檢測(cè) 根據(jù)3個(gè)規(guī)模場(chǎng)免疫后檢測(cè)的抗體水平，對(duì)豬瘟疫苗二免后抗體陽性率低于70%的場(chǎng)所用免疫程序進(jìn)行調(diào)整。按照調(diào)整后免疫程序進(jìn)行采血分離血清，用豬瘟抗體阻斷EL

10、ISA檢測(cè)試劑盒進(jìn)行豬瘟抗體水平檢測(cè)，結(jié)果以抗體阻斷率表示。1.5 ELISA試劑盒結(jié)果判定 抗體檢測(cè)程序按照試劑盒說明書進(jìn)行。結(jié)果以阻斷率（blocking%）計(jì)算。Blocking%= （陰性對(duì)照平均OD450值-樣品的OD450值）/陰性對(duì)照平均OD450值。Blocking%40%判為陽性，30%判為陰性，之間為可疑。2 結(jié)果2.1 原免疫程序下的豬瘟抗體檢測(cè)結(jié)果 豬場(chǎng)A仔豬，一免前抗體陽性率為100%（10/10），一免后30天抗體陽性率下降至30%（3/10），二免后30天抗體陽性率下降至10%（1/10），詳見表1。豬場(chǎng)B仔豬，一免前抗體陽性率為50%（5/10），一免后30天抗

11、體陽性率上升至60%（6/10），二免后30天抗體陽性率上升至90%（9/10），詳見表2。豬場(chǎng)C仔豬，一免前抗體陽性率為0%（0/10），一免后30天抗體陽性率上升至80%（8/10），二免后30天抗體陽性率上升至90%（9/10），詳見表3。免疫前母源抗體陽性率最高的A場(chǎng)，二免后抗體陽性率最低；相反免疫前母源抗體陽性率最低的C場(chǎng)，一免后抗體陽性率即達(dá)到80%；B場(chǎng)母源抗體陽性率居中，抗體穩(wěn)步上升，二免后上升至90%，詳見圖1。表1 A豬場(chǎng)豬瘟抗體阻斷率結(jié)果編號(hào)采血時(shí)間25日齡（一免前）60日齡（一免后30天）90日齡（二免后30天）191.55%56.59%34.57%±291.

12、95%64.53%31.38%±341.83%10.18%38.51%±490.06%36.68%±40.74%591.00%44.17%6.77%692.50%33.29%±9.59%792.34%62.87%12.04%891.24%28.21%6.77%992.82%34.57%±-12.42%1072.22%-3.65%-11.82%注：采血后1天進(jìn)行豬瘟疫苗免疫?！啊保宏栃?，“±”：可疑，“”：陰性。 表2 B豬場(chǎng)豬瘟抗體阻斷率結(jié)果編號(hào)采血時(shí)間25日齡（一免前）60日齡（一免后30天）90日齡（二免后30天）121.78%5

13、6.21%78.02%269.69%40.78%51.34%380.74%56.21%68.11%468.98%36.68%±51.24%522.34%20.42%22.31%632.52%±42.51%58.16%726.56%34.57%±81.21%876.72%40.78%50.09%973.64%62.04%57.35%103.30%12.61%63.23%注：采血后1天進(jìn)行豬瘟疫苗免疫?！啊保宏栃?，“±”：可疑，“”：陰性。表3 C豬瘟抗體阻斷率結(jié)果編號(hào)采血時(shí)間25日齡（一免前）60日齡（一免后30天）90日齡（二免后30天）1-7.04%5

14、1.66%76.97%2-9.67%25.86%79.04%3-11.10%50.70%70.31%4-19.83%57.23%80.90%5-15.24%68.37%81.64%6-5.08%59.35%81.12%7-0.56%70.74%78.60%83.05%64.98%78.01%92.52%62.23%80.82%102.90%11.65%17.51%注：采血后1天進(jìn)行豬瘟疫苗免疫。“”：陽性，“±”：可疑，“”：陰性。圖1 A、B、C三豬場(chǎng)豬瘟抗體陽性率2.2 免疫程序優(yōu)化后的豬場(chǎng)A豬瘟抗體檢測(cè)結(jié)果 由于豬場(chǎng)A二免后豬瘟抗體陽性率下降至10%，豬瘟疫苗免疫失敗，所以對(duì)豬

15、場(chǎng)A的免疫程序進(jìn)行了調(diào)整，將免疫時(shí)間推遲約20天，即50日齡左右進(jìn)行首免、80日齡左右進(jìn)行二免。分別于50日齡，80日齡（一免后30天），110日齡（二免后30天）采血分離血清。檢測(cè)結(jié)果表明，一免前抗體陽性率為30%（3/10），一免后30天抗體陽性率上升至50%（5/10），二免后30天抗體陽性率上升至70%（7/10），達(dá)到國家規(guī)定的70%群體免疫合格率。詳見表4。表4 免疫程序進(jìn)行優(yōu)化后A豬場(chǎng)豬瘟抗體阻斷率結(jié)果編號(hào)采血時(shí)間50日齡（一免前）80日齡（一免后30天）110日齡（二免后30天）121.78%20.98%31.54%±259.69%24.35%70.52%310.74

16、%67.70%72.35%468.08%0.35%34.63%±520.24%40.32%65.89%611.52%71.39%78.76%726.76%50.71%66.01%876.72%13.73%30.74%±913.24%70.64%74.17%103.00%20.98%71.00%注：采血后1天進(jìn)行豬瘟疫苗免疫?！啊保宏栃?，“±”：可疑，“”：陰性。3 結(jié)論與討論3.1不同豬場(chǎng)豬瘟免疫情況分析 從本試驗(yàn)選取的3個(gè)規(guī)模豬場(chǎng)仔豬豬瘟抗體水平發(fā)現(xiàn)：盡管A、B、C 3個(gè)豬場(chǎng)采用相同的疫苗和免疫程序，但是由于一免以前抗體（母源抗體）水平不同導(dǎo)致豬瘟疫苗免疫后抗體

17、水平存在很大差異。豬場(chǎng)A因在母源抗體水平很高的情況下進(jìn)行豬瘟疫苗免疫導(dǎo)致免疫失敗，而優(yōu)化免疫程序推遲首免時(shí)間至母源抗體水平下降后，二免后抗體陽性率可達(dá)群體免疫保護(hù)水平。豬場(chǎng)B一免前母源抗體水平在50%，一免后達(dá)到60%，二免后達(dá)到了90%抗體水平。豬場(chǎng)C一免前母源抗體陽性率為0%，一免后即可達(dá)到80%，二免后達(dá)到90%。其中，B場(chǎng)是臨床上比較普遍的情況，采取常規(guī)免疫程序可取得很好的免疫保護(hù)效果。A場(chǎng)和C場(chǎng)的情況在規(guī)模豬場(chǎng)比較少見。經(jīng)進(jìn)一步調(diào)查發(fā)現(xiàn)豬場(chǎng)A在1年前暴發(fā)過豬瘟疫情，母豬均為當(dāng)時(shí)發(fā)病后耐過的豬，一旦出現(xiàn)A場(chǎng)的情況，免疫后仔豬抗體水平低于群體免疫保護(hù)水平，豬場(chǎng)隨時(shí)面臨大規(guī)模暴發(fā)豬瘟的危險(xiǎn)

18、，應(yīng)篩查淘汰帶毒母豬并及時(shí)調(diào)整免疫程序。豬場(chǎng)C的母豬在產(chǎn)前進(jìn)行過豬瘟免疫，出現(xiàn)上述狀況可能是由于疫苗失效或其他原因引起，如果出現(xiàn)C場(chǎng)的情況，母豬和初生仔豬存在均無豬瘟抗體保護(hù)的“空窗期”，豬場(chǎng)也面臨巨大風(fēng)險(xiǎn)，應(yīng)對(duì)母豬及時(shí)補(bǔ)免，對(duì)仔豬進(jìn)行超前免疫。3.2 仔豬母源抗體對(duì)豬瘟疫苗免疫的影響 本試驗(yàn)所用的豬瘟抗體ELISA試劑盒（IDEXX）檢測(cè)的抗體效價(jià)與豬瘟中和抗體呈一定的相關(guān)性2-3。母源抗體較高時(shí)接種疫苗會(huì)致使一部分疫苗毒被母源抗體中和因而常造成免疫效果不佳。檢測(cè)結(jié)果表明仔豬母源抗體在50%左右進(jìn)行免疫可取得比較理想的免疫效果。羅勇等2010年用ELISA（IDEXX）監(jiān)測(cè)了仔豬豬瘟母源抗體

19、消退過程：仔豬在7日齡時(shí)豬瘟母源抗體水平最高為67.0%，21日齡抗體下降至51.5%，28日齡為43.9%，35日齡為38.5%4。李儒曙等2007年同樣用ELISA（IDEXX）法探究仔豬豬瘟母源抗體消長(zhǎng)規(guī)律5，他們所獲得的結(jié)果與本研究所得結(jié)果基本相符。馬強(qiáng)等 6，吳家強(qiáng)等7，蔡葵蒸等8，采用不同檢測(cè)方法對(duì)豬瘟母源抗體消長(zhǎng)情況進(jìn)行了檢測(cè)，結(jié)果與本試驗(yàn)存在一定差異，可能是由于檢測(cè)方法不同或豬場(chǎng)實(shí)際情況存在差異導(dǎo)致。3.3 豬瘟免疫程序的確定 近年來各地均有豬瘟免疫失敗的報(bào)道，很多豬場(chǎng)技術(shù)人員和研究者在研究和論證最佳的豬瘟首免日齡和免疫程序。本試驗(yàn)的結(jié)果表明，臨床大部分豬場(chǎng)均符合B場(chǎng)的情況采取20、50日齡或30、60日齡進(jìn)行兩次豬瘟疫苗免疫即可取得很好的免疫保護(hù)效果。但是所有豬場(chǎng)都“一刀切”式采用相同的豬瘟免疫程序可能導(dǎo)致個(gè)別養(yǎng)殖場(chǎng)的豬瘟免疫失敗。各養(yǎng)殖場(chǎng)應(yīng)定期進(jìn)行豬群抗體監(jiān)測(cè)，結(jié)合仔豬母源抗體和免疫后抗體消長(zhǎng)情況評(píng)估免疫效果，及時(shí)調(diào)整免疫方案，最終確定適合自身情況的免疫程序。參考文獻(xiàn)1 OIE .Manual of Diagnos