HSP27和HSP70mRNA在大腸癌中表達(dá)的臨床意義

1、HSP27和HSP70mRNA在大腸癌中表達(dá)的臨床意義 作者：楊淼 張曉麗 薄愛(ài)華 馬利紅【摘要】 目的：探討HSP27和HSP70mRNA在大腸癌中表達(dá)的臨床意義。方法：取大腸癌標(biāo)本77例，采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)HSP27的表達(dá)狀況，從中選取36例手術(shù)標(biāo)本，采用核酸原位雜交技術(shù)（ISH）檢測(cè)HSP70mRNA的表達(dá)。結(jié)果：HSP27和HSP70mRNA在大腸癌中的陽(yáng)性率分別為40.3%和66.9%，HSP27和HSP70mRNA均與大腸癌的分化程度相關(guān)，與發(fā)生部位、浸潤(rùn)深度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)明顯相關(guān)性。結(jié)論：檢測(cè)HSP27和HSP70mRNA可作為大腸癌患者預(yù)后的一個(gè)重要指標(biāo)。 【關(guān)鍵詞】 腸

2、腫瘤 HSP70熱休克蛋白質(zhì)類(lèi) 熱休克蛋白質(zhì)類(lèi) 免疫組織化學(xué) 【ABSTRACT】 Objective: To investigate the clinical significance of HSP27 and HSP70mRNA expression in large intestine cancer. Methods: The expression of HSP27 was examined by immunochemistry in 77 cases with large intestine cancer. The expression of HSP70mRNA in 36 cases

3、 with large intestine cancer was examined by in situ hybridization. Results: The positive rates of HSP27, HSP70 mRNA in large intestine cancer were 40.3% and 66.7% respectively. They had relationship with tumor differentiation degree, but had nothing to do with the region ，invasion depth and lymph n

4、ode metastasis. Conclusion: HSP27 and HSP70mRNA can serve as markers for prognosis judgment for large intestine cancer. 【KEY WORDS】 Intestinal Neoplasms,HSP70 HeatShock Proteins,HeatShock Proteins,Immunochemistry 熱休克蛋白是細(xì)胞應(yīng)激原特別是環(huán)境高溫誘導(dǎo)下所生成的一組蛋白質(zhì)，具有多種生物學(xué)功能，它與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及腫瘤耐藥性的產(chǎn)生等都有密切關(guān)系13。我們采用免疫組織化學(xué)及核酸原位雜交

5、兩種技術(shù)方法，檢測(cè)HSP27和HSP70mRNA在大腸癌中的表達(dá)，為大腸癌的發(fā)病機(jī)制提供分子生物學(xué)依據(jù)。 1 材料和方法 1.1 一般資料 收集河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院20022004年腸癌標(biāo)本77例，其中腸道內(nèi)窺鏡活檢確診腸癌標(biāo)本18例；男性56例，女性21例；年齡分布3574歲，平均年齡58.12歲。從中選取手術(shù)標(biāo)本36例，男性21例，女性15例;年齡分布3865歲，平均年齡57.51歲。標(biāo)本均經(jīng)10%福爾馬林液固定，石蠟包埋，切片厚度7m，常規(guī)HE染色，另貼于表面涂有多聚賴(lài)氨酸的載玻片上，37溫箱保存。 1.2 試劑 HSP27單克隆抗體及DNA顯色劑購(gòu)自北京中山生物公司，HSP70寡核

6、苷酸探針對(duì)人的HSP70靶基因的mRNA序列為（1）5GCCGC AAGTT CGGCG ACCCG GTGGT GCAGT CGGAC3（2）5ACAGG CTGGT GAACC ACTTC GTGGA GGAGT TCAAG3，此探針及ISH試劑盒均購(gòu)自武漢博士德生物工程公司。 1.3 方法 采用免疫組織化學(xué)SABC法，切片經(jīng)常規(guī)脫蠟、水化后，用3%過(guò)氧化氫去除內(nèi)源性酶，微波爐抗原修復(fù)，滴加第一抗體單克隆抗體HSP27，DAB顯色蘇木素復(fù)染，光鏡觀察。原位雜交操作程序嚴(yán)格按照試劑盒規(guī)定，其中消化時(shí)間為5min，38水浴，預(yù)雜交3h（38），雜交時(shí)間約16h（38），DAB顯色。 1.4 統(tǒng)

7、計(jì)學(xué)處理 采用2檢驗(yàn)，P0.05為有顯著性差異。 2 結(jié)果 HSP27和HSP70mRNA陽(yáng)性物質(zhì)位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，呈棕黃色，核不著色。HSP27在大腸癌中的陽(yáng)性率為40.3%，其在高分化腺癌和中低分化腺癌中陽(yáng)性率分別為48.1%和21.7%，二者比較有顯著性差異（P0.05)，但與浸潤(rùn)深度、發(fā)生部位及有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)明顯相關(guān)性（P0.05)，見(jiàn)表1。表1 HSP27在大腸癌中的表達(dá)情況注：與高分化腺癌組相比*P<0.05 2008年10月楊 淼等：HSP27和HSP70mRNA在大腸癌中表達(dá)的臨床意義第5期2008年10月河北北方學(xué)院學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版）第5期表2 HSP70mRNA在大

8、腸癌中的表達(dá)情況 注：與高分化腺癌組相比*P<0.05 HSP70mRNA在大腸癌中的陽(yáng)性率為66.9%，在高分化腺癌中為70.8%，在中低分化腺癌中為33.3%，二者比較有顯著相關(guān)性（P0.05)，與浸潤(rùn)深度、發(fā)生部位及有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)明顯差異（P0.05)，見(jiàn)表2。 3 討論 腫瘤的發(fā)生是一個(gè)多因素、多步驟的發(fā)展過(guò)程，涉及多種基因突變的積累，HSP作為“分子伴侶”在此過(guò)程中起調(diào)節(jié)和穩(wěn)定的作用。腫瘤的形成與細(xì)胞的過(guò)度增殖和凋亡有密切相關(guān)，HSP通過(guò)調(diào)控細(xì)胞周期所必需的蛋白構(gòu)象與細(xì)胞的增殖、死亡過(guò)程。以HSP為家族的基因家族，廣泛分布在細(xì)胞的亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)中，可與突變型P53蛋白形成

9、復(fù)合體，將突變型P53作為一種特異性抗原，提呈給宿主免疫系統(tǒng)，協(xié)助P53跨膜，延長(zhǎng)其半衰期，提高P53的水平，從而增強(qiáng)P53抑制細(xì)胞凋亡的能力，促使腫瘤形成1。HSP70還可通過(guò)調(diào)節(jié)Cfos、Cmyc、Rb等抑癌基因、癌基因的產(chǎn)物相互作用，參與細(xì)胞的增殖調(diào)控，HSP27可以促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)、分化及定向轉(zhuǎn)移，并與熱耐受和多藥耐藥有關(guān)2。 近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，HSP27在胃癌、食管癌、膀胱癌35等腫瘤中有較高表達(dá)，在本研究中HSP27在高分化腺癌中陽(yáng)性率明顯高于中低分化腺癌，說(shuō)明HSP27與大腸癌的分化程度相關(guān)，可作為大腸癌患者預(yù)后的一個(gè)重要指標(biāo)，本研究結(jié)果與蔡永清等6的一致。另外，HSP27在腫瘤耐藥中

10、具有一定作用，在對(duì)HSP27結(jié)構(gòu)和功能的分子機(jī)制研究中發(fā)現(xiàn)HSP27可形成大量分子聚合體并具有抗凋亡活性，這可能是參與腫瘤細(xì)胞耐藥的內(nèi)在機(jī)制。 HSP70家族是細(xì)胞內(nèi)含量最多的HSPs，它在多肽的折疊、解離、轉(zhuǎn)運(yùn)和在蛋白復(fù)合物的裝配和分解過(guò)程中起著重要作用。近年來(lái)研究表明HSP70也參與了細(xì)胞凋亡的過(guò)程，它通過(guò)抑制細(xì)胞色素C的釋放阻止一氧化氮誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞凋亡，也可通過(guò)增加多形核白細(xì)胞的氧化活性抑制細(xì)胞凋亡，因此HSP70作為一種重要的基因產(chǎn)物參與了惡性腫瘤細(xì)胞增殖的轉(zhuǎn)錄調(diào)控過(guò)程，在多種腫瘤中有異常表達(dá)79。本研究結(jié)果顯示隨腫瘤分化程度的降低HSP70mRNA的陽(yáng)性表達(dá)率明顯下降，說(shuō)明HSP7

11、0mRNA與大腸癌的分化程度相關(guān)，與部位、侵犯深度及有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)明顯相關(guān)性。 綜上所述，HSP27和HSP70mRNA與大腸癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，檢測(cè)它們?cè)诖竽c癌的表達(dá)有助于其惡性程度和預(yù)后的判定?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】 1 Chan Yc，Lin SY，Liu JK.Involuencut of heatshock protein 70 and P53 proteins in a attenuation of UVCinduced apoptosis by thermal stress in hepatocellular careinoma J. Photochem Photobiol,1999

12、，70（1）：78862 羅亞莉，劉會(huì)珍，高云荷.熱休克蛋白與宮頸癌J.醫(yī)學(xué)綜述，2002，8（3）：1361373 薄愛(ài)華，左東升，張曉麗,等.HSP27和Topo在胃癌中的表達(dá)J.癌癥，2003，22（8）：8848854 薛軍，支學(xué)軍，張振忠,等. 胃癌、食管癌腫瘤耐藥標(biāo)志物Pgp、HSP表達(dá)的研究J.中國(guó)腫瘤臨床與康復(fù)，2002，9（1）：42435 李向東，薄愛(ài)華，張曉麗,等. 膀胱移行細(xì)胞癌HSP27和ToPo表達(dá)的研究J.山東醫(yī)藥，2004，44（5）：17186 蔡永清，張躍偉，趙魯笳,等.HSP在大腸癌及癌旁組織中的表達(dá)及其意義J.臨床腫瘤學(xué)雜志，2004，9（5）：4864897 Elpek GO, Karaveli S, Simsek T, et al. Expression of heatshock proteins hsp27, hsp70 and hsp90 in malignant epithelial tumour of the ovariesJ.APMIS, 2003,111(4):5235308 Thanner F, Sutterlin MW, Kapp