畢業(yè)論文外文資料翻譯胡亞樓

1、畢業(yè)論文外文資料翻譯學(xué) 院：生物科學(xué)與工程學(xué)院 專 業(yè)：食品科學(xué)與工程 姓 名：胡亞樓 學(xué) 號(hào)： 070301109 外文出處：Journal of Chromatography A, 764(1997)177182 (用外文寫(xiě))附 件：外文資料原文 指導(dǎo)教師評(píng)語(yǔ)： 簽名： 年 月 日高效液相色譜-電化學(xué)檢測(cè)法在檢測(cè)油脂中高級(jí)脂肪酸的應(yīng)用摘要本文提出了一種利用高效液相色譜-電化學(xué)檢測(cè)方法分離并檢測(cè)高級(jí)脂肪酸的系統(tǒng)。一種結(jié)構(gòu)性柱（ODS柱）作為固定相，乙醇-乙腈(10:90) 混合物作為流動(dòng)相。通過(guò)由6mm2-甲基-1,4-萘醌和76mm高氯酸鋰組成的混合柱后，乙醇-乙腈(10:90)的流出液混

2、入了醌。峰高為4的高級(jí)脂肪酸量在-415 mV出測(cè)得（相對(duì)于飽和甘汞電極），測(cè)得值與脂肪酸數(shù)量在20到1200pmol間有線性關(guān)系。這種方法可檢測(cè)到不同油樣中的游離脂肪酸，不僅敏感度高、重現(xiàn)性好，也是一種用于分離,測(cè)定油脂中游離脂肪酸的簡(jiǎn)便方法。關(guān)鍵詞:電化學(xué)檢測(cè);脂肪酸1介紹利用氣相色譜法（GC）和高效液相色譜法(HPLC)分離和測(cè)定脂肪酸，人們已經(jīng)有過(guò)很多次嘗試。在氣相色譜分析已經(jīng)廣泛應(yīng)用的今天，通常是將游離脂肪酸先甲酯化，然后注入到毛細(xì)管色譜柱。甲基化水平和氣相色譜儀器，如程序升溫、注射、毛細(xì)柱的類型、載氣、探測(cè)器，都是影響結(jié)果精確度的重要因素。高效液相色譜-熒光探測(cè)法(HPLC-FL)

3、測(cè)定脂肪酸的主要優(yōu)點(diǎn)就是靈敏度高。但由于有吸收較弱和熒光性脂肪酸干擾, 在柱分離時(shí)應(yīng)有一種具有較強(qiáng)發(fā)色或者熒光基團(tuán)的衍生物，以保證高效液相色譜檢測(cè)的高靈敏度。為此已經(jīng)有許多種這樣的脂肪酸衍生物開(kāi)發(fā)出來(lái)了。這種脂肪酸衍生物在某些情況下,由于羧基基團(tuán)活性較差，需要催化劑才能完成反應(yīng)。由于這種脂肪酸衍生物和催化劑的特殊性,試劑用量、反應(yīng)溫度和反應(yīng)時(shí)間對(duì)于較高反應(yīng)活性至關(guān)重要，避免產(chǎn)生較多的副產(chǎn)品。通常水是一個(gè)與脂肪酸衍生物不相容的環(huán)境。為了解決這個(gè)問(wèn)題，需要對(duì)親水性膠改善衍生物與水的相容性效果進(jìn)行檢驗(yàn)。雖然熒光檢測(cè)敏感度高,但熒光強(qiáng)度變化受復(fù)雜樣品中熒光物質(zhì)雜質(zhì)的影響，除非在實(shí)驗(yàn)之前有相應(yīng)的除雜步驟

4、。因此設(shè)計(jì)一種不需要除雜的簡(jiǎn)便快速的分離檢驗(yàn)方法十分有必要。作者開(kāi)發(fā)了一種測(cè)定油脂中游離脂肪酸含量的新方法，基于質(zhì)子化醌的還原量：含有2-甲基-1,4-萘醌(維生素K3,即VK3) 的脂肪酸乙醇溶液產(chǎn)生的伏安圖還原峰比VK3自身的還原電位更明顯,峰的高度與脂肪酸濃度成正比。該方法應(yīng)用于流動(dòng)注射分析的電化學(xué)檢測(cè)法（ECD法），使各種脂肪和油樣中游離脂肪酸的測(cè)定更加簡(jiǎn)便快捷。因?yàn)橹舅岷靠梢杂蓽y(cè)量流動(dòng)信號(hào)峰高和面積得出,該方法也適用于液相色譜-電化學(xué)檢測(cè)法測(cè)定脂肪酸含量。高效液相色譜-電化學(xué)檢測(cè)法被認(rèn)定為一種不用衍生物檢測(cè)高級(jí)脂肪酸的簡(jiǎn)便方法。2實(shí)驗(yàn)2.1試劑棕櫚酸(99.5 %)、硬脂酸(99

5、.5 %)、油酸(99 %)、亞油酸(99 %)，均購(gòu)自和光試劑公司 (日本大阪)。標(biāo)準(zhǔn)酸溶液都用乙醇-乙腈(10:90)混合溶液溶解。以下油樣都是從市場(chǎng)上購(gòu)得：山茶油(資生堂牌，日本東京)、玉米油和油菜籽油(林時(shí)計(jì)化工，日本東京)、橄欖油(宮澤醫(yī)藥，日本東京)，大豆油(關(guān)東化學(xué)，日本東京)。乙醇-乙腈(10:90)混合溶液和一個(gè)裝有6mm維生素K3+ 76mm高氯酸鋰的柱子分別作為流動(dòng)相和醌溶液。電解液中的高氯酸鋰可以減少電化學(xué)電池的電阻。圖1 高效液相系統(tǒng)：流動(dòng)相是乙醇-乙腈混合溶劑，醌溶液為6mm維生素K+76mm高氯酸鋰的乙醇-乙腈溶液，DG是除氣裝置，P1、P2是泵，S是樣品注射器（

6、20l），分離柱（色譜柱100 RP-18,250 mm*4mm,5微米）；MC是混合柱線圈（50厘米），D是電化學(xué)檢測(cè)器、電化學(xué)電池和電位儀，R是記錄儀。2.2 儀器高效液相色譜-電化學(xué)檢測(cè)系統(tǒng)如圖1所示,包括除氣器 (分光公司DG-980-50型，日本東京)、泵P1和P2(分光PU-980型)、樣品注射器(羅丹尼7125型,美國(guó)加利福尼亞)、結(jié)構(gòu)性柱（ODS柱)(色譜柱100 RP-18,250 mm-34mm-5mm,Cica-Merck公司，日本東京)、電化學(xué)電池(分光EC-840型),電位儀(皇氏電化學(xué)系統(tǒng)311B型，日本川崎)、記錄儀(分光807-IT型)。電化學(xué)電池由玻碳工作電極

7、、飽和甘汞電極(SCE) 、參比電極和不銹鋼輔助電極組成。流管由蒙著鋁箔避光的不銹鋼導(dǎo)管(0.5mm)和聚四氟乙烯導(dǎo)管(0.5mm)組成。2.3 實(shí)驗(yàn)步驟為了注射進(jìn)分離柱，準(zhǔn)備的樣品溶液應(yīng)與適當(dāng)?shù)囊掖?乙腈(10:90)混合物混合均勻。如果油樣沒(méi)有被乙醇-乙腈 (10:90)混合物充分溶解，混合液將離心分層，上清液被誤認(rèn)作為樣本溶液。環(huán)境溫度保持在室溫，將20ml的小分樣品和標(biāo)準(zhǔn)酸溶液被注入結(jié)構(gòu)性O(shè)DS柱。脫氧下的流動(dòng)相和醌溶液在1.1ml/min流量下由P1和P2流入。檢測(cè)游離脂肪酸的電壓維持在-415mV(相對(duì)于飽和甘汞電極)。樣品溶液中每種脂肪酸含量可以根據(jù)信號(hào)峰高測(cè)得。3. 結(jié)果與討論

8、3.1VK3中脂肪酸的存在導(dǎo)致伏安降低電極表面的醌質(zhì)子化反應(yīng)在其電子轉(zhuǎn)移之前出現(xiàn)。質(zhì)子化的醌在某一電勢(shì)下的伏安圖上呈現(xiàn)新峰的可能性比醌大。高級(jí)脂肪酸,如在含有VK3和高氯酸鋰的酒精溶液中的棕櫚酸,以前被人為在質(zhì)子化的VK3的伏安圖上還原峰比VK3本身導(dǎo)致的還原峰更明顯；VK3本身在-720mV（相對(duì)于飽和甘汞電極）處給出明顯的還原峰，并且溶液中加入棕櫚酸后質(zhì)子化的VK3在-320mV處記錄了新的峰。此峰的高度與加入脂肪酸的量成正比。質(zhì)子化的VK3伏安峰半個(gè)峰高伴隨著加入的脂肪酸pKa增大而負(fù)電位明顯增大。然而，不同的高級(jí)脂肪酸半個(gè)峰高的電位在本質(zhì)上是一樣的，因?yàn)橹舅岬脑鰪?qiáng)度相差不大。每種脂肪

9、酸可以在那個(gè)電位下被檢測(cè)到，這將共同減少質(zhì)子化醌電流。質(zhì)子化醌的電位減少比溶解氧產(chǎn)生的電位減少要小。第一個(gè)含有38mm高氯酸鋰的乙醇溶解氧的減少峰半峰為-730 mV（相對(duì)于飽和甘汞電極）。然而，可能有溶解氧引起的背景電流,因?yàn)檠鯗p少的電位比-300 mV（相對(duì)于飽和甘汞電極）更低。保留時(shí)間/min乙腈（%）乙醇（%）乙腈（%）乙醇（%）峰高/nA保留時(shí)間圖2 A、B兩圖分別為保留時(shí)間和峰高與流動(dòng)相溶劑比的關(guān)系。a、b、c、d分別為亞油酸、油酸、棕櫚酸和硬脂酸，脂肪酸的量均為200pmol。高效液相色譜條件：醌溶液，6mmVK3+176mm高氯酸鋰在乙醇-乙腈的混合溶劑中，采樣體積20ml，分

10、離柱為色譜柱100 RP-18（250 mm*4mm，5微米），柱溫為室溫，流量為1.1ml/min，采用的電位差為-415mV（相對(duì)于飽和甘汞電極）。3.2高效液相色譜-電化學(xué)法考慮到以上因素,高效液相色譜-電化學(xué)法檢測(cè)脂肪酸產(chǎn)生了。用一個(gè)結(jié)構(gòu)性O(shè)DS和乙醇-乙腈混合溶液作為流動(dòng)相完成高級(jí)脂肪酸的反相分離?；旌先芤汉王芤褐械娜芙庋跤膳艢庋b置除去。20ml含有脂肪酸的小份溶液注射到ODS柱中；流出液混入了醌溶液，脂肪酸被電化學(xué)檢測(cè)器檢測(cè)到?；旌先芤褐幸掖?乙腈的比例對(duì)脂肪酸分離和檢測(cè)靈敏度的影響已作出探究。圖2中，200 pmol的棕櫚酸、油酸、亞油酸和硬脂酸下，保留時(shí)間(A)和峰高(B)的

11、信號(hào)分別與兩種溶劑比例的關(guān)系如曲線所示。乙腈含量的比例越大，脂肪酸峰分離越明顯。乙腈含量90%時(shí)，檢測(cè)的所有脂肪酸峰值達(dá)到最大。乙醇-乙腈含量比為10:90被定作是最適合的流動(dòng)相。圖3為200pmol棕櫚酸、油酸、亞油酸和硬脂酸在目前的實(shí)驗(yàn)條件下的流體伏安圖。在此基礎(chǔ)上,脂肪酸的電位檢測(cè)條件被確定為-415 mV （相對(duì)于飽和甘汞電極）。圖4A是一個(gè)典型的標(biāo)準(zhǔn)棕櫚酸、油酸、亞油酸和硬脂酸混合樣的色譜圖。這些脂肪酸在15min內(nèi)已很好的分離。峰高與注入的脂肪酸量在20-1200pmol范圍內(nèi)呈線性關(guān)系（表1）。200pmol的棕櫚酸、油酸、亞油酸和硬脂酸檢測(cè)十次的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差（.）分別為1.3 %

12、，1.2 %，0.96 %和0.79 %。各脂肪酸的檢測(cè)限(信噪比=2）為20 pmol。電位值/伏特（相對(duì)于飽和甘汞電極）峰高/nA圖3是脂肪酸標(biāo)準(zhǔn)樣的流體伏安圖。a、b、c、d分別是亞油酸、油酸、棕櫚酸和硬脂酸。脂肪酸的量均為200pmol。高效液相色譜條件：流動(dòng)相為乙醇-乙腈（10:90）混合溶劑，醌溶液，6mmVK3+176mm高氯酸鋰在乙醇-乙腈（10:90）的混合溶劑中，其他條件同圖2所述。時(shí)間/min峰高圖4是典型的色譜圖：A是包含a亞油酸、b油酸、c棕櫚酸、d硬脂酸各200pmol的標(biāo)準(zhǔn)脂肪酸混合溶液色譜圖，B是玉米油的色譜圖。色譜條件為：所用電位是-415mV（相對(duì)于飽和甘汞

13、電極），其他條件同圖3所述。表1標(biāo)準(zhǔn)液中高級(jí)脂肪酸的線性回歸分析相關(guān)系數(shù)（r）含量范圍（pmol）棕櫚酸硬脂酸油酸亞油酸回歸線化合物3.3油脂中高級(jí)脂肪酸的檢測(cè)橄欖油、山茶油、玉米油、菜籽油和豆油實(shí)際樣品的分析是為了評(píng)價(jià)這種方法的有效性。簡(jiǎn)單的脂肪酸溶液注入后色譜圖很容易獲得。圖4B是一個(gè)典型的玉米油色譜圖。各游離脂肪酸的峰高度比為：棕櫚酸:硬脂酸:油酸:亞油酸=5:1:13:25，這和文獻(xiàn)中玉米油脂肪酸組成比是相同的。測(cè)得的油脂中游離高級(jí)脂肪酸數(shù)據(jù)在表2中列出。相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差從0.8%到2.8%。表2 植物油中脂肪酸含量和添加的脂肪酸標(biāo)準(zhǔn)物回收率分析回收率（%）棕櫚酸硬脂酸油酸亞油酸添加濃度(m

14、ol/g）測(cè)得平均值(mol/g）回收率n=5相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差（%）含量n=5油 脂肪酸油菜籽油山茶油大豆油玉米油橄欖油表3 高效液相色譜-電化學(xué)檢測(cè)法與熒光檢測(cè)法a測(cè)定游離脂肪酸的比較分析方法熒光檢測(cè)法校準(zhǔn)曲線線性范圍分析時(shí)間山茶油中的游離脂肪酸電化學(xué)檢測(cè)法a高效液相色譜-熒光法使用亞當(dāng)試劑作為熒光試劑。b需要的時(shí)間包括準(zhǔn)備時(shí)間和高效液相色譜檢測(cè)時(shí)間?；厥章史治?，向每一個(gè)油樣（橄欖油、山茶油、玉米油、油菜籽油和大豆油）中加入標(biāo)準(zhǔn)的高級(jí)脂肪酸混合物，然后用這種方法分析檢測(cè)。如表2所示，得到理想的脂肪酸回收率數(shù)據(jù)。高效液相色譜-熒光法（HPLC-FL）對(duì)照檢測(cè)的數(shù)據(jù)表明，這種高效液相色譜-電化學(xué)檢測(cè)法使得快速、簡(jiǎn)便地檢測(cè)油脂中高級(jí)脂肪酸成為可能。使用內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)時(shí)熒光檢測(cè)法的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差小于5%，而這種電化學(xué)檢測(cè)法檢測(cè)油樣時(shí)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于3%（如表3所示）。重現(xiàn)性良好的原因是預(yù)處理簡(jiǎn)單，沒(méi)有使用脂肪酸衍生物。當(dāng)油樣中含有高度非極性組分時(shí)，這種成分不溶于乙醇-乙腈（10:90）混合溶劑，因而注入色譜柱的只是油樣-乙醇-乙腈的混合物。使用當(dāng)前方法，高度非極性成分幾乎沒(méi)有接觸工作電極和結(jié)構(gòu)性O(shè)DS色譜柱。每天使用高效液相色譜-電化學(xué)檢測(cè)法檢測(cè)十多個(gè)樣品，三個(gè)月后玻碳工作電極表面依然保持穩(wěn)定。使用負(fù)電位監(jiān)測(cè)脂肪酸是為了不引起