全國生物奧賽輔導課件：氨基酸

1、全國生物奧賽輔導課件：氨基酸一、蛋白質(zhì)的一般特性一、蛋白質(zhì)的一般特性 細胞干重的細胞干重的50% 生物膜約占生物膜約占60-70%（一）蛋白質(zhì)的含量（一）蛋白質(zhì)的含量分布廣：分布廣：所有器官、組織都含有蛋白質(zhì)；細胞的所有器官、組織都含有蛋白質(zhì)；細胞的各個部分都含有蛋白質(zhì)。各個部分都含有蛋白質(zhì)。含量高：含量高：蛋白質(zhì)是細胞內(nèi)最豐富的有機分子，占蛋白質(zhì)是細胞內(nèi)最豐富的有機分子，占人體干重的人體干重的4545，某些組織含量更高，例如脾、肺，某些組織含量更高，例如脾、肺及橫紋肌等高達及橫紋肌等高達8080。（二）蛋白質(zhì)的生物學功能（二）蛋白質(zhì)的生物學功能機體的結(jié)構(gòu)蛋白：頭發(fā)、骨骼、牙齒、肌肉等機體的結(jié)

2、構(gòu)蛋白：頭發(fā)、骨骼、牙齒、肌肉等纖維蛋白纖維蛋白: 膠原蛋白、彈性蛋白、膠原蛋白、彈性蛋白、角蛋白、絲心蛋白等。角蛋白、絲心蛋白等。一、蛋白質(zhì)的一般特性一、蛋白質(zhì)的一般特性參與基因調(diào)控：組蛋白、非組蛋白等參與基因調(diào)控：組蛋白、非組蛋白等參與代謝調(diào)控：如激素或生長因子等參與代謝調(diào)控：如激素或生長因子等（二）蛋白質(zhì)的生物學功能（二）蛋白質(zhì)的生物學功能一、蛋白質(zhì)的一般特性一、蛋白質(zhì)的一般特性（二）蛋白質(zhì)的生物學功能（二）蛋白質(zhì)的生物學功能一、蛋白質(zhì)的一般特性一、蛋白質(zhì)的一般特性（二）蛋白質(zhì)的生物學功能（二）蛋白質(zhì)的生物學功能抗原抗體反應(yīng)抗原抗體反應(yīng)凝血機制凝血機制一、蛋白質(zhì)的一般特性一、蛋白質(zhì)的一般

3、特性肌肉的收縮：肌動蛋白、肌球蛋白等肌肉的收縮：肌動蛋白、肌球蛋白等鞭毛、纖毛擺動：微管蛋白鞭毛、纖毛擺動：微管蛋白胞內(nèi)細胞器運動：動力蛋白、驅(qū)動蛋白等胞內(nèi)細胞器運動：動力蛋白、驅(qū)動蛋白等（二）蛋白質(zhì)的生物學功能（二）蛋白質(zhì)的生物學功能一、蛋白質(zhì)的一般特性一、蛋白質(zhì)的一般特性（二）蛋白質(zhì)的生物學功能（二）蛋白質(zhì)的生物學功能一、蛋白質(zhì)的一般特性一、蛋白質(zhì)的一般特性信號傳導中的受體、信息分子等信號傳導中的受體、信息分子等（二）蛋白質(zhì)的生物學功能（二）蛋白質(zhì)的生物學功能一、蛋白質(zhì)的一般特性一、蛋白質(zhì)的一般特性 （四四）蛋白質(zhì)的元素組成蛋白質(zhì)的元素組成 60006000000或更大或更大（三）蛋白質(zhì)的

4、相對分子質(zhì)量（三）蛋白質(zhì)的相對分子質(zhì)量 有些蛋白質(zhì)還含有少量的有些蛋白質(zhì)還含有少量的P P、FeFe、ZnZn、CuCu、MnMn、MoMo、I I等等。 C 50 55 % H 6 8 %O 20 23 %N 15 18 %S 0 4 %主要元素組成主要元素組成一、蛋白質(zhì)的一般特性一、蛋白質(zhì)的一般特性 各種蛋白質(zhì)的含氮量很接近，平均為各種蛋白質(zhì)的含氮量很接近，平均為1616。 由于體內(nèi)的含氮物質(zhì)以蛋白質(zhì)為主，因此，由于體內(nèi)的含氮物質(zhì)以蛋白質(zhì)為主，因此，只要測定生物樣品中的含氮量，就可以根據(jù)以下只要測定生物樣品中的含氮量，就可以根據(jù)以下公式推算出蛋白質(zhì)的大致含量公式推算出蛋白質(zhì)的大致含量：每克

5、樣品中蛋白質(zhì)的含量每克樣品中蛋白質(zhì)的含量 (g)(g)= = 每克樣品含氮克數(shù)每克樣品含氮克數(shù)1/16% 蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)元素組成特點：元素組成特點：凱氏定氮法：凱氏定氮法：（四四）蛋白質(zhì)的元素組成蛋白質(zhì)的元素組成一、蛋白質(zhì)的一般特性一、蛋白質(zhì)的一般特性1克氮相當于克蛋白質(zhì)，為測定樣品中蛋白質(zhì)含量的依據(jù)克氮相當于克蛋白質(zhì)，為測定樣品中蛋白質(zhì)含量的依據(jù)二、氨基酸二、氨基酸（一）氨基酸的結(jié)構(gòu)和類型（一）氨基酸的結(jié)構(gòu)和類型1.1.結(jié)構(gòu)及旋光性結(jié)構(gòu)及旋光性L- -氨基酸氨基酸-氨基酸有兩種構(gòu)型氨基酸有兩種構(gòu)型: D構(gòu)型和構(gòu)型和L構(gòu)型構(gòu)型 它們是與甘油醛相比較它們是與甘油醛相比較而決定的。凡是與而決定的。凡

6、是與L甘甘油醛構(gòu)型相同的，就定義油醛構(gòu)型相同的，就定義為為L氨基酸，反之為氨基酸，反之為D氨基酸。氨基酸。二、氨基酸二、氨基酸（一）氨基酸的結(jié)構(gòu)和類型（一）氨基酸的結(jié)構(gòu)和類型1.1.結(jié)構(gòu)及旋光性結(jié)構(gòu)及旋光性L-甘油醛甘油醛D-甘油醛甘油醛L-丙氨酸丙氨酸D-丙氨酸丙氨酸1.1.基本氨基酸中，除基本氨基酸中，除脯氨酸脯氨酸外外其余均屬于其余均屬于L-L-氨基酸。氨基酸。2.2.除除甘氨酸甘氨酸外，氨基酸都具有外，氨基酸都具有旋光性。旋光性。左旋（左旋（- -）或右旋（）或右旋（+ +） COOH H2N C H R Pro Pro 亞氨基酸亞氨基酸Gly Gly 沒有手性沒有手性二、氨基酸二、氨

7、基酸（一）氨基酸的結(jié)構(gòu)和類型（一）氨基酸的結(jié)構(gòu)和類型1.1.結(jié)構(gòu)及旋光性結(jié)構(gòu)及旋光性二、氨基酸二、氨基酸（一）氨基酸的結(jié)構(gòu)和類型（一）氨基酸的結(jié)構(gòu)和類型2.2.分類分類存在自然界中的氨基酸有存在自然界中的氨基酸有300300余種，但余種，但組成人體蛋白質(zhì)的基本氨基酸僅有組成人體蛋白質(zhì)的基本氨基酸僅有2020種。種。非極性非極性R R基氨基酸（疏水性）基氨基酸（疏水性）不帶電荷的極性不帶電荷的極性R R基氨基酸基氨基酸帶正電荷的帶正電荷的R R基氨基酸（堿性）基氨基酸（堿性）帶負電荷的帶負電荷的R R基氨基酸（酸性）基氨基酸（酸性）分類依據(jù)分類依據(jù) ：R R基團的結(jié)構(gòu)不同基團的結(jié)構(gòu)不同分類依據(jù)分

8、類依據(jù) ：R R基團的極性不同基團的極性不同脂肪族氨基酸脂肪族氨基酸芳香族氨基酸芳香族氨基酸雜環(huán)族氨基酸雜環(huán)族氨基酸n此類氨基酸有丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、此類氨基酸有丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、甲硫氨酸和脯氨酸，或稱為疏水性氨基酸甲硫氨酸和脯氨酸，或稱為疏水性氨基酸n此類氨基酸在水溶液中溶解度小。此類氨基酸在水溶液中溶解度小。（1）側(cè)鏈含烴鏈的氨基酸的非極性脂肪族氨基酸）側(cè)鏈含烴鏈的氨基酸的非極性脂肪族氨基酸二、氨基酸二、氨基酸（一）氨基酸的結(jié)構(gòu)和類型（一）氨基酸的結(jié)構(gòu)和類型2.2.分類分類（2）側(cè)鏈含芳香基團的氨基酸的非極性芳香族氨基酸）側(cè)鏈含芳香基團的氨基酸的非極性芳香族氨

9、基酸n此類氨基酸有苯丙氨酸和色氨酸；此類氨基酸有苯丙氨酸和色氨酸；n其側(cè)鏈分別由苯基和吲哚基；其側(cè)鏈分別由苯基和吲哚基；n苯基的疏水較強；吲哚基在一定的條件下可解離。苯基的疏水較強；吲哚基在一定的條件下可解離。（非）脯丙纈（非）脯丙纈 甲亮色異苯甲亮色異苯（3）側(cè)鏈有極性但不帶電荷的氨基酸是極性中性氨基酸側(cè)鏈有極性但不帶電荷的氨基酸是極性中性氨基酸n此類氨基酸有甘氨酸、絲氨酸、半胱氨酸、蘇氨酸、此類氨基酸有甘氨酸、絲氨酸、半胱氨酸、蘇氨酸、酪氨酸、天冬氨酸和谷氨酰胺；酪氨酸、天冬氨酸和谷氨酰胺；n此類氨基酸易溶于水。此類氨基酸易溶于水。n半胱氨酸的巰基和酪氨酸的酚羥基，失去質(zhì)子的傾向半胱氨酸的

10、巰基和酪氨酸的酚羥基，失去質(zhì)子的傾向較此類其他氨基酸為大，極性最強。較此類其他氨基酸為大，極性最強。（極）絲蘇半甘酪谷天（極）絲蘇半甘酪谷天（4）側(cè)鏈含負性解離基團的氨基酸是酸性氨基酸）側(cè)鏈含負性解離基團的氨基酸是酸性氨基酸n此類氨基酸有谷氨酸、天冬氨酸；此類氨基酸有谷氨酸、天冬氨酸；n其側(cè)鏈都含有羧基，均可解離而帶負電荷；其側(cè)鏈都含有羧基，均可解離而帶負電荷；( (酸酸) )谷天谷天（Asp， D）（Glu，E）（5）側(cè)鏈含正性解離基團的氨基酸屬于堿性氨基酸）側(cè)鏈含正性解離基團的氨基酸屬于堿性氨基酸n此類氨基酸有賴氨酸、精氨酸和組氨酸；此類氨基酸有賴氨酸、精氨酸和組氨酸；n其側(cè)鏈分別含有氨基

11、、胍基、和咪唑基，均可發(fā)其側(cè)鏈分別含有氨基、胍基、和咪唑基，均可發(fā)生質(zhì)子化，使之帶正電荷。生質(zhì)子化，使之帶正電荷。( (堿堿) )賴組精賴組精賴氨酸賴氨酸（lysine,Lys， K）精氨酸精氨酸（arginine,Arg，R）組氨酸組氨酸（histidine, His，H）1.1.必需氨基酸必需氨基酸 ：人和動物體內(nèi)需要而又不能自身合：人和動物體內(nèi)需要而又不能自身合成，必須由食物供應(yīng)的氨基酸。成，必須由食物供應(yīng)的氨基酸。2.2.半必需氨基酸半必需氨基酸 ：盡管自身可以合成，但合成量不能：盡管自身可以合成，但合成量不能滿足需要，尤其是嬰幼兒，不能自身合成的氨基酸。滿足需要，尤其是嬰幼兒，不能自

12、身合成的氨基酸。 3.3.非必需氨基酸非必需氨基酸 ：其他可已在體內(nèi)合成以滿足需要的：其他可已在體內(nèi)合成以滿足需要的氨基酸。氨基酸。二、氨基酸二、氨基酸（一）氨基酸的結(jié)構(gòu)和類型（一）氨基酸的結(jié)構(gòu)和類型2.2.分類分類分類依據(jù)分類依據(jù) ：按營養(yǎng)狀況分：按營養(yǎng)狀況分甲硫氨酸甲硫氨酸(Met)、蘇氨酸、蘇氨酸(Thr)、色氨酸、色氨酸(Trp)、纈氨酸纈氨酸(Val)、賴氨酸、賴氨酸(Lys) 、苯丙氨酸、苯丙氨酸(Phe)、異亮氨酸異亮氨酸(Ile)、亮氨酸、亮氨酸(Leu)甲纈賴異苯亮色蘇甲纈賴異苯亮色蘇組氨酸（組氨酸（His），精氨酸（），精氨酸（Arg）1.1.脯氨酸脯氨酸- -含有環(huán)狀二級

13、氨基（亞氨基酸）含有環(huán)狀二級氨基（亞氨基酸）CH2CHCOO-NH2+CH2CH2CH2CHCOO-NH2+CH2CH2特殊氨基酸特殊氨基酸二、氨基酸二、氨基酸（一）氨基酸的結(jié)構(gòu)和類型（一）氨基酸的結(jié)構(gòu)和類型2.2.蛋白質(zhì)中的很多氨基酸是經(jīng)過加工修飾的蛋白質(zhì)中的很多氨基酸是經(jīng)過加工修飾的修修飾氨基酸，具有新的結(jié)構(gòu)和功能飾氨基酸，具有新的結(jié)構(gòu)和功能 如：脯氨酸、賴氨酸羥基化如：脯氨酸、賴氨酸羥基化二、氨基酸二、氨基酸（一）氨基酸的結(jié)構(gòu)和類型（一）氨基酸的結(jié)構(gòu)和類型特殊氨基酸特殊氨基酸NHHOCOOH4-羥基脯氨酸H2NCH2CHCH2CH2CHCOOHOHNH25-羥基賴氨酸NH2CH3NHCH

14、2CHCH2CH2CHCOOH6-N-甲基賴氨酸HOIICH2CHCOOHNH23,5-二碘酪氨酸 膠原中出現(xiàn)的羥基氨基酸殘基是形成堅韌的膠原纖維的必要條件；膠原中出現(xiàn)的羥基氨基酸殘基是形成堅韌的膠原纖維的必要條件；甲狀腺球蛋白中帶有甲狀腺素等碘化酪氨酸殘基。甲狀腺球蛋白中帶有甲狀腺素等碘化酪氨酸殘基。3.3.半胱氨酸常以胱氨酸的形式存在，有穩(wěn)定蛋白質(zhì)半胱氨酸常以胱氨酸的形式存在，有穩(wěn)定蛋白質(zhì)分子構(gòu)象和使蛋白質(zhì)折疊起來的作用。分子構(gòu)象和使蛋白質(zhì)折疊起來的作用。二、氨基酸二、氨基酸（一）氨基酸的結(jié)構(gòu)和類型（一）氨基酸的結(jié)構(gòu)和類型特殊氨基酸特殊氨基酸胱氨酸胱氨酸半胱氨酸半胱氨酸 二硫鍵二硫鍵4.4

15、.自然界中還存在一些并不是蛋白質(zhì)組分的非蛋白氨自然界中還存在一些并不是蛋白質(zhì)組分的非蛋白氨基酸，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)有基酸，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)有200200余種，具有不同的功能。余種，具有不同的功能。5.5.細菌中含有多種細菌中含有多種-氨基酸：細菌細胞壁丙氨基酸：細菌細胞壁丙氨酸、短桿菌肽和多粘菌肽中氨酸、短桿菌肽和多粘菌肽中D-D-亮氨酸亮氨酸二、氨基酸二、氨基酸（一）氨基酸的結(jié)構(gòu)和類型（一）氨基酸的結(jié)構(gòu)和類型特殊氨基酸特殊氨基酸n從結(jié)構(gòu)上看，氨基酸分子中含有羧基（從結(jié)構(gòu)上看，氨基酸分子中含有羧基（-COOH)和氨基和氨基（-NH2）n從物理化學性質(zhì)上看，氨基酸具有鹽的某些屬性：白從物理化學性質(zhì)上看，氨基酸具有

16、鹽的某些屬性：白色晶體、熔點很高（色晶體、熔點很高（200以上分解），不同程度溶于以上分解），不同程度溶于水而不溶于有機溶劑（不同一般的羧酸和胺）。水而不溶于有機溶劑（不同一般的羧酸和胺）。n氨基酸在結(jié)晶形態(tài)或水溶液中，并不是以游離的羧基氨基酸在結(jié)晶形態(tài)或水溶液中，并不是以游離的羧基或氨基形式存在；而是解離成或氨基形式存在；而是解離成兩性離子兩性離子，氨基以，氨基以-NH3+形式存在，羧基以形式存在，羧基以-COO-存在存在二、氨基酸二、氨基酸（二）氨基酸的酸堿性質(zhì)和等電點（二）氨基酸的酸堿性質(zhì)和等電點1 1. .酸堿性質(zhì)酸堿性質(zhì)二、氨基酸二、氨基酸（二）氨基酸的酸堿性質(zhì)和等電點（二）氨基酸的

17、酸堿性質(zhì)和等電點1 1. .酸堿性質(zhì)酸堿性質(zhì)CHNH2COOHR CHNH2COOHRCHNH3+COO-R CHNH3+COO-R中性分子形式中性分子形式兩性離子形式兩性離子形式氨基酸分子在水溶液中或氨基酸分子在水溶液中或在晶體狀態(tài)時都以離子形式存在晶體狀態(tài)時都以離子形式存在，而且是以在，而且是以兩性離子兩性離子的形式的形式存在。存在。在同一個氨基酸分子上帶在同一個氨基酸分子上帶有能放出質(zhì)子的有能放出質(zhì)子的NHNH3 3+ +正離子正離子和能接受質(zhì)子的和能接受質(zhì)子的COOCOO- -負離子負離子，為，為兩性電解質(zhì)兩性電解質(zhì)。很少會以不很少會以不解離的中性分子形式存在。解離的中性分子形式存在。

18、氨基酸是兩性電解質(zhì)，其解離程度取決于所氨基酸是兩性電解質(zhì)，其解離程度取決于所處溶液的處溶液的pHpH值。值。+OH-+H+OH-+H+CHNH2COOHR CHNH2COOHRCHNH3+COO-R CHNH3+COO-RCHNH2COO-R CHNH2COO-RCH COOHRNH3+CH COOHRNH3+pHpI陰離子陰離子二、氨基酸二、氨基酸（二）氨基酸的酸堿性質(zhì)和等電點（二）氨基酸的酸堿性質(zhì)和等電點1 1. .酸堿性質(zhì)酸堿性質(zhì)在酸性溶液中的氨基酸在酸性溶液中的氨基酸在晶體或水溶液中的氨基酸在晶體或水溶液中的氨基酸在堿性溶液中的氨基酸在堿性溶液中的氨基酸 在某一特定在某一特定pHpH的

19、溶液中，氨基酸分子上的的溶液中，氨基酸分子上的-NH-NH3 3+ +基基和和-COO-COO- -基的解離程度完全相等，以兩性離子形式存在基的解離程度完全相等，以兩性離子形式存在，即氨基酸所帶凈電荷為零，即氨基酸所帶凈電荷為零（即正負電荷數(shù)相等）（即正負電荷數(shù)相等），在電場中既不向陽極也不向陰極移動，呈電中性。此在電場中既不向陽極也不向陰極移動，呈電中性。此時溶液的時溶液的pHpH值稱為該氨基酸的值稱為該氨基酸的等電點等電點。二、氨基酸二、氨基酸（二）氨基酸的酸堿性質(zhì)和等電點（二）氨基酸的酸堿性質(zhì)和等電點2 2. .等電點（等電點（pI）二、氨基酸二、氨基酸（二）氨基酸的酸堿性質(zhì)和等電點（二

20、）氨基酸的酸堿性質(zhì)和等電點2 2. .等電點（等電點（pI）等電點時氨基酸的特點：等電點時氨基酸的特點：1.1.凈電荷數(shù)等于零，在電場中不移動；凈電荷數(shù)等于零，在電場中不移動；2.2.此時氨基酸的溶解度最小，容易沉淀。此時氨基酸的溶解度最小，容易沉淀。3.3.由于羧基解離度大于氨基的解離度，所以含一個由于羧基解離度大于氨基的解離度，所以含一個氨基和一個羧基的氨基和一個羧基的中性氨基酸的等電點都在左右中性氨基酸的等電點都在左右。堿性氨基酸（二氨基一羧基）的等電點較大，酸性堿性氨基酸（二氨基一羧基）的等電點較大，酸性氨基酸（一氨基二羧基）的等電點較小。氨基酸（一氨基二羧基）的等電點較小。等電點的測

21、定：等電點的測定：二、氨基酸二、氨基酸（二）氨基酸的酸堿性質(zhì)和等電點（二）氨基酸的酸堿性質(zhì)和等電點2 2. .等電點（等電點（pI）1.1.用酸堿滴定方法測定；用酸堿滴定方法測定；pKpK值計算值計算 pKpK值：解離常數(shù)值：解離常數(shù)(K)(K)的負對數(shù)，數(shù)值等于該解離基團的負對數(shù)，數(shù)值等于該解離基團有一半被解離時的有一半被解離時的pHpH值。值。 pK pK的編號通常以酸性最強的的編號通常以酸性最強的基團的解離開始?；鶊F的解離開始。 等電點相當于該氨基酸的兩性離子狀態(tài)兩側(cè)的基團等電點相當于該氨基酸的兩性離子狀態(tài)兩側(cè)的基團p pK K值之和的一半。值之和的一半。pI=(pK1+pK2)/21.

22、1.混合氨基酸的分離或制備；混合氨基酸的分離或制備；2.2.判斷在某一判斷在某一pHpH值下氨基酸的帶電性。值下氨基酸的帶電性。 pH pI時，氨基酸帶凈負電荷，在電場中將向正極移動；時，氨基酸帶凈負電荷，在電場中將向正極移動；pH pI時，氨基酸帶凈正電荷，在電場中將向負極移動；時，氨基酸帶凈正電荷，在電場中將向負極移動；pH = pI時，氨基酸所帶凈電荷為零，在電場中在原點不動。時，氨基酸所帶凈電荷為零，在電場中在原點不動。氨基酸等電點特征的應(yīng)用氨基酸等電點特征的應(yīng)用二、氨基酸二、氨基酸（二）氨基酸的酸堿性質(zhì)和等電點（二）氨基酸的酸堿性質(zhì)和等電點2 2. .等電點（等電點（pI） 紫外吸收

23、光譜：紫外吸收光譜：在遠紫外光區(qū)有光吸收，在近紫外光區(qū)有色氨酸最大吸收在遠紫外光區(qū)有光吸收，在近紫外光區(qū)有色氨酸最大吸收波長為波長為279nm，酪氨酸最大吸收波長，酪氨酸最大吸收波長278nm，苯丙氨酸，苯丙氨酸最大吸收波長為最大吸收波長為259nm。重要的化學反應(yīng)：重要的化學反應(yīng)：a-氨基能與茚三酮反應(yīng)產(chǎn)生藍紫色沉淀（脯氨酸和羥脯氨氨基能與茚三酮反應(yīng)產(chǎn)生藍紫色沉淀（脯氨酸和羥脯氨酸則產(chǎn)生黃色沉淀）；酸則產(chǎn)生黃色沉淀）；a-氨基可與亞硝酸反應(yīng)產(chǎn)生氮氣，計算出氨基酸的量；氨基可與亞硝酸反應(yīng)產(chǎn)生氮氣，計算出氨基酸的量；一些氨基酸的一些氨基酸的R基團能與特殊的試劑發(fā)生呈色反應(yīng)。基團能與特殊的試劑發(fā)生

24、呈色反應(yīng)。二、氨基酸二、氨基酸（二）氨基酸的分離和分析鑒定（二）氨基酸的分離和分析鑒定1.1.根據(jù)氨基酸溶解度不同為原理根據(jù)氨基酸溶解度不同為原理層析技術(shù)層析技術(shù) 是利用混合物中各組分的物理化學性質(zhì)是利用混合物中各組分的物理化學性質(zhì)的差別，使各組分以不同程度分布在兩相中，其中的差別，使各組分以不同程度分布在兩相中，其中一相為一相為，另一，另一相流過此相的稱作相流過此相的稱作，并，并使各組分以不同速度移動，從而達到分離的目的。使各組分以不同速度移動，從而達到分離的目的?？煞蛛x物質(zhì)可分離物質(zhì) 糖類、有機酸、氨基酸、核苷等糖類、有機酸、氨基酸、核苷等固定相固定相 在層析過程中在層析過程中的物質(zhì)。如紙

25、層析中固定相是濾紙纖維中結(jié)合的水。的物質(zhì)。如紙層析中固定相是濾紙纖維中結(jié)合的水。固定相被看成是樣品移動的阻力。固定相被看成是樣品移動的阻力。流動相流動相 在層析過程中因其本身流動而在層析過程中因其本身流動而的的物質(zhì)。如紙層析中流動相是有機溶劑。物質(zhì)。如紙層析中流動相是有機溶劑。二、氨基酸二、氨基酸（二）氨基酸的分離和分析鑒定（二）氨基酸的分離和分析鑒定1.1.根據(jù)氨基酸溶解度不同為原理根據(jù)氨基酸溶解度不同為原理名稱名稱操作方式操作方式固定相固定相流動相流動相分離依據(jù)分離依據(jù) 分配層析分配層析 紙層析紙層析 薄層層析薄層層析液體液體液體液體 溶解度溶解度 離子交換層析離子交換層析 離子交換柱層析

26、離子交換柱層析固體固體液體液體 帶電性帶電性 靜電引力靜電引力 吸附層析吸附層析 吸附薄層層析吸附薄層層析 氣體吸附層析氣體吸附層析固體固體液體液體氣體氣體 吸附力吸附力 親和層析親和層析 酶與底物酶與底物 抗原與抗體抗原與抗體固體固體液體液體 配體專一性配體專一性 凝膠層析凝膠層析 凝膠過濾凝膠過濾固體固體液體液體 分子大小分子大小層析的分類層析的分類 是分離鑒定蛋白質(zhì)的氨基酸組成的重要方法。是分離鑒定蛋白質(zhì)的氨基酸組成的重要方法。 紙纖維上的紙纖維上的 OHOH 基具有親水性，所以能基具有親水性，所以能一一層層，而通常把，而通常把作為作為。流動相流經(jīng)支持物時與固定相間連續(xù)抽提，使物質(zhì)流動相

27、流經(jīng)支持物時與固定相間連續(xù)抽提，使物質(zhì)在兩相間不斷地分配而得到分離。在兩相間不斷地分配而得到分離。二、氨基酸二、氨基酸（二）氨基酸的分離和分析鑒定（二）氨基酸的分離和分析鑒定1.1.根據(jù)氨基酸溶解度不同為原理根據(jù)氨基酸溶解度不同為原理（1 1）紙層析法紙層析法具體操作：具體操作：紙色譜小實驗動畫演示紙色譜小實驗動畫演示1845 通常指以支持劑為固定相的一種液相色譜法。通常指以支持劑為固定相的一種液相色譜法。即將固定相在玻璃、金屬或塑料等光潔的表面上均即將固定相在玻璃、金屬或塑料等光潔的表面上均勻地鋪成薄層，試樣點在薄層的一端，流動相借毛勻地鋪成薄層，試樣點在薄層的一端，流動相借毛細作用流經(jīng)固定

28、相細作用流經(jīng)固定相, ,使被分離的物質(zhì)展開。使被分離的物質(zhì)展開。二、氨基酸二、氨基酸（二）氨基酸的分離和分析鑒定（二）氨基酸的分離和分析鑒定1.1.根據(jù)氨基酸溶解度不同為原理根據(jù)氨基酸溶解度不同為原理（2 2）薄層層析法薄層層析法優(yōu)點：快速優(yōu)點：快速( (數(shù)十秒數(shù)十秒數(shù)十分鐘數(shù)十分鐘) ) 、分辨率高、分辨率高、 所需樣品量微和操作簡便。所需樣品量微和操作簡便。 用專門的涂布器把漿狀的支持劑（纖維素、硅用專門的涂布器把漿狀的支持劑（纖維素、硅膠、氧化鋁、聚酰胺等）均勻地涂在薄層板（玻璃膠、氧化鋁、聚酰胺等）均勻地涂在薄層板（玻璃板、金屬板或彈性塑料板）上，干燥（板、金屬板或彈性塑料板）上，干燥

29、（110110活化）活化）后即可使用。后即可使用。薄層板的制作薄層板的制作展開方式展開方式(1)近水平展開：將點樣后的薄層板下端浸入展開劑，近水平展開：將點樣后的薄層板下端浸入展開劑，薄層上端墊高使薄層與水平成薄層上端墊高使薄層與水平成5-10的角。的角。(2)上行展開：將點樣后的薄層放在盛有展開劑的直立上行展開：將點樣后的薄層放在盛有展開劑的直立型的展開槽中，展開劑由薄層下端借毛細管作用上型的展開槽中，展開劑由薄層下端借毛細管作用上升至前沿。升至前沿。(3)下行展開下行展開 (4)雙向展開雙向展開薄薄層層板板玻璃板上涂吸附劑玻璃板上涂吸附劑上行法上行法薄層板薄層板層層析析缸缸展開劑展開劑展開

30、劑展開劑濾紙條濾紙條下行法下行法薄層板薄層板層層析析缸缸二、氨基酸二、氨基酸（二）氨基酸的分離和分析鑒定（二）氨基酸的分離和分析鑒定1.1.根據(jù)氨基酸等電點不同為原理根據(jù)氨基酸等電點不同為原理 指用離子交換劑（具有離子交換性能的物質(zhì)）作指用離子交換劑（具有離子交換性能的物質(zhì)）作固定相，利用它與流動相中的離子能進行可逆的交換固定相，利用它與流動相中的離子能進行可逆的交換性質(zhì)來分離離子型化合物的層析方法。性質(zhì)來分離離子型化合物的層析方法。 是以離子間相互作用為基礎(chǔ)的氨基酸分離方法。是以離子間相互作用為基礎(chǔ)的氨基酸分離方法。其基本原理是利用離子交換劑對不同氨基酸吸附能力其基本原理是利用離子交換劑對不

31、同氨基酸吸附能力的差異進行的分離?？梢詫崿F(xiàn)對氨基酸分組或?qū)崿F(xiàn)單的差異進行的分離?？梢詫崿F(xiàn)對氨基酸分組或?qū)崿F(xiàn)單一的成分分離。一的成分分離。（1 1）離子交換柱層析法離子交換柱層析法 基質(zhì)：具有網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的高分子聚合物。穩(wěn)定，不溶于水基質(zhì)：具有網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的高分子聚合物。穩(wěn)定，不溶于水，不溶于酸、堿和一般有機溶劑。如：聚苯乙烯、纖維，不溶于酸、堿和一般有機溶劑。如：聚苯乙烯、纖維素、葡聚糖、瓊脂糖。素、葡聚糖、瓊脂糖。 電荷基團（活性基團）：與高分子聚合物共價結(jié)合，形電荷基團（活性基團）：與高分子聚合物共價結(jié)合，形成一個帶電的活性基團。成一個帶電的活性基團。 平衡離子（反離子）：是結(jié)合于電荷基團上的相反離子平衡離子（反離子）：是結(jié)合于電荷基團上的相反離子，它能與溶液中其它的離子基團發(fā)生可逆的交換反應(yīng)。，它能與溶液中其它的離子基團發(fā)生可逆的交換反應(yīng)。離子交換劑（固定相）離子交換劑（固定相）二、氨基酸二、氨基酸（二）氨基酸的分離和分析鑒定（二）氨基酸的分離和分析鑒定1.1.根據(jù)氨基酸等電點不同為原理根據(jù)氨基酸等電點不同為原理（1 1）離子交換柱層析法離子交換柱層析法 陽離子交換劑陽離子交換劑平衡離子：陽離子平衡離子：陽離子與正電