蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)測定與沉淀實(shí)驗(yàn)

1、試驗(yàn)項(xiàng)目一、蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)測定及沉淀反應(yīng)姓 名： 指導(dǎo)老師： 試驗(yàn)室： 組員： 成果： 第三部分：試驗(yàn)記錄與分析試驗(yàn)現(xiàn)象記錄及分析：（一）蛋白質(zhì)等電點(diǎn)測定管號pH值混濁度 解釋現(xiàn)象1 5.9 - 未達(dá)到蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)，蛋白質(zhì)顆粒上正負(fù)電荷過少。2 5.5 + 接近蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)，蛋白質(zhì)顆粒上正電荷不多，沉淀削減。3 4.7 + 達(dá)到蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)，蛋白質(zhì)顆粒上正負(fù)電荷的數(shù)目相等蛋白質(zhì)顆粒因失去電荷和脫水而沉淀。43.5  + 大于蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)，蛋白質(zhì)顆粒上正電荷大于負(fù)電荷，

2、產(chǎn)生較少沉淀。（二）蛋白質(zhì)的鹽析 1蛋白質(zhì)的鹽析  現(xiàn) 象 解 釋蛋白質(zhì)溶液中加硫酸銨溶液 有沉淀產(chǎn)生 無機(jī)鹽（硫酸銨、硫酸鈉、氯化鈉等）的濃溶液能析出蛋白質(zhì)。鹽的濃度不同，析出的蛋白質(zhì)也不同。沉淀中加水 沉淀溶解 由鹽析獲得的蛋白質(zhì)沉淀，當(dāng)降低其鹽類濃度時(shí)，又能再溶解，蛋白質(zhì)的鹽析作用是可逆的。上清液中加硫酸銨粉末 有沉淀產(chǎn)生 硫酸銨粉末是強(qiáng)電解質(zhì)，引起蛋白質(zhì)膠體的分散沉淀。沉淀中加水 沉淀不溶解 此時(shí)蛋白質(zhì)分子內(nèi)部結(jié)構(gòu)發(fā)生重大轉(zhuǎn)變，蛋白質(zhì)常變性而沉淀，不再溶于水。2重金屬離子沉淀蛋白質(zhì)  現(xiàn)

3、 象 解 釋蛋白質(zhì)溶液中加硝酸銀 有沉淀產(chǎn)生 重金屬離子與蛋白質(zhì)結(jié)合成不溶于水的復(fù)合物。沉淀中加水 沉淀不溶解 此時(shí)蛋白質(zhì)分子內(nèi)部結(jié)構(gòu)發(fā)生重大轉(zhuǎn)變，蛋白質(zhì)常變性而沉淀，不再溶于水。3有機(jī)酸沉淀蛋白質(zhì)  現(xiàn) 象 解 釋蛋白質(zhì)溶液中加三氯乙酸 有沉淀產(chǎn)生 有機(jī)酸使蛋白質(zhì)變性而沉淀。沉淀中加水 沉淀不溶解 此時(shí)蛋白質(zhì)分子內(nèi)部結(jié)構(gòu)發(fā)生重大轉(zhuǎn)變，蛋白質(zhì)常變性而沉淀，不再溶于水。4有機(jī)溶劑沉淀蛋白質(zhì) 現(xiàn) 象 解 釋 有沉淀產(chǎn)生 此時(shí)蛋白質(zhì)分子內(nèi)部結(jié)構(gòu)發(fā)生重大轉(zhuǎn)變，蛋白質(zhì)常變性而沉淀。5乙醇引起的變

4、性與沉淀管 號操作現(xiàn) 象解 釋1振蕩混勻 有沉淀產(chǎn)生 乙醇能析出蛋白質(zhì)。加數(shù)滴鹽酸 沉淀溶解 此時(shí)蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)尚未發(fā)生顯著變化，除去引起沉淀的因素后，蛋白質(zhì)仍能溶解于水，并保持其自然性質(zhì)而不變性。2振蕩混勻 沒有明顯現(xiàn)象 溶液呈堿性，偏離等電點(diǎn)。醋酸中和 有沉淀產(chǎn)生，溶液變?yōu)辄S色 醋酸與氫氧化鈉反應(yīng)，生成醋酸鈉，達(dá)到等電點(diǎn)，甲基紅使溶液呈黃色加數(shù)滴鹽酸 沉淀溶解，溶液顏色變淺 鹽酸中和氫氧化鈉，使溶液呈中性。3振蕩混勻 沒有明顯現(xiàn)象 溶液呈酸性，未達(dá)到等電點(diǎn)。碳酸鈉中和&

5、#160;有沉淀產(chǎn)生，溶液變?yōu)榧t色 蛋白質(zhì)與溶液中的離子反應(yīng)產(chǎn)生沉淀，溶液呈酸性所以顯紅色。加數(shù)滴鹽酸 沉淀溶解，溶液顏色變淺 未達(dá)到蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)，沉淀溶解。第四部分：課后研討題1.通過本次合作試驗(yàn)后，有否對該項(xiàng)目改進(jìn)的合理建議。適當(dāng)增加對比組和空白組，使試驗(yàn)數(shù)據(jù)更加科學(xué)可信。2.雞蛋清為何可做鉛、汞中毒的解素劑？鉛、汞是重金屬離子，與蛋白質(zhì)結(jié)合能使蛋白質(zhì)分子內(nèi)部結(jié)構(gòu)發(fā)生重大轉(zhuǎn)變，發(fā)生變性而沉淀，不再溶于原來的溶劑中。3.氯化汞為何能做為殺菌劑？細(xì)菌由蛋白質(zhì)構(gòu)成，氧化汞是重金屬鹽，與蛋白質(zhì)結(jié)合能使蛋白質(zhì)分子內(nèi)部結(jié)構(gòu)發(fā)生重大轉(zhuǎn)變，發(fā)生變性而沉淀，不再溶于原來的溶劑中。4.在等電點(diǎn)時(shí)，蛋白質(zhì)溶液為什么簡潔發(fā)生沉淀 ？蛋白質(zhì)顆粒上正負(fù)電荷的數(shù)目相等，在水溶液中的蛋白質(zhì)分子由于表面生產(chǎn)水化層和雙電層而成為穩(wěn)定的親水膠體顆粒，在肯定的理化因素影響下，蛋白質(zhì)顆?？梢蚴ル姾珊兔撍恋?。5.將本試驗(yàn)中所涉及到的幾種蛋白質(zhì)沉淀方法各舉一應(yīng)用實(shí)例加以說明。（1）鹽析：硫酸銨的濃溶液能析出蛋白質(zhì)。（2）乙醇引起的變性與沉淀：低溫下用乙醇或丙酮短時(shí)間作用于蛋白質(zhì)，用于提純蛋白質(zhì)。（3）重金屬離子沉淀蛋白質(zhì)：取一支離心管，加入2ml的蛋白質(zhì)溶液，再加入3%硝酸銀溶液1-2滴，振蕩試管，觀看現(xiàn)象。（4）某些有機(jī)酸沉淀蛋白質(zhì)：取一支離心管，加入2ml