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1、生長調(diào)節(jié)物質(zhì)NAA對碧桃幼嫩莖段愈傷組織誘導(dǎo)的影響一、 選題依據(jù)及基本內(nèi)容碧桃 ( Prunus persica Batsch. var. duplex Rehd ),別名: 粉紅碧桃、千葉桃花、花桃科屬:薔薇科(Rosaceae),李屬。落葉小喬木,高可達(dá)8米,一般整形后控制在3-4米,小枝紅褐色,無毛;葉橢圓狀披針形,長7-15厘米,先端漸尖?;▎紊騼啥渖谌~腋,重瓣,粉紅色。其它變種有白色、深紅、灑金(雜色)等。為保持優(yōu)良品質(zhì),必須使用無性繁殖的方法,故本實驗通過生長調(diào)節(jié)物質(zhì)NAA對幼莖愈傷組織誘導(dǎo)的研究,來初步確定愈傷組織誘導(dǎo)的培養(yǎng)基激素成分。二、步驟、方法及措
2、施 1、以陜西師范大學(xué)長安校區(qū)格物樓門前碧桃為試材。2、外植體的采集與消毒:幼莖用自來水流水沖洗小時 , 無菌水漂洗 次,75% 酒精滅菌30s, 0. 1 %升汞滅菌 min , 無菌水漂洗3 次;3、愈傷組織的誘導(dǎo): 莖段截取長1 cm左右。所有外植體分別接種于愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基(以MS為基本誘導(dǎo)培養(yǎng)基,附加定量的2,4-D 1.0mg/L,6-BA 0.1mg/L和不同濃度的NAA,pH5.8,高壓滅菌。NAA的不同濃度分別為:0.1mg/L、0.3 mg/L、0.5 mg/L、1.0 mg/L、2.0 mg/L、3.0 mg/L。)培養(yǎng)室溫度為(25±2)。每天光照時間101
3、2h,光強20003000Lx。培養(yǎng)過程中對其生長情況每天進(jìn)行觀察,若有污染要及時處理。4、15d后統(tǒng)計誘導(dǎo)出愈傷組織數(shù)量并計算誘導(dǎo)率,同時記錄愈傷組織的質(zhì)地,顏色及生長情況。愈傷組織按以下公式計算: 誘導(dǎo)率=(長出愈傷組織的外植體數(shù)/總接種外植體的塊數(shù))×1003三、實驗用品1、材料:陜西師范大學(xué)長安校區(qū)格物樓門前碧桃2、藥品及試劑:(1)HgCl2、75%酒精等(2)MS培養(yǎng)基母液、激素母液用以前配制的3、器材:培養(yǎng)瓶40個,玻璃棒,電爐,天平,搪瓷杯,燒杯,皮筋,牛皮紙,pH試紙,稱量紙,藥匙,容量瓶,燒杯,廣口瓶,量筒,移液管,超凈工作臺及其操作用具,無菌水等四、污染預(yù)防及其
4、處理污染是細(xì)胞培養(yǎng)的大敵。預(yù)防和避免污染是細(xì)胞培養(yǎng)成功的關(guān)鍵之一。 一開始就要十分重視,防止污染,否則會前功盡棄,不僅浪費時間,而且浪費人力、物力,甚至造成無法彌補的損失。造成污染的原因很多,從時間角度可以將污染發(fā)生原因歸納為3 個階段: 前期準(zhǔn)備階段。包括培養(yǎng)基滅菌不徹底、器皿的滅菌不完全,外植體的選擇不當(dāng)與消毒不徹底; 無菌操作階段。包括無菌操作室滅菌和超凈工作臺有問題,操作不規(guī)范,操作工具的消毒不徹底等; 培養(yǎng)階段。培養(yǎng)環(huán)境不清潔和培養(yǎng)體系意外開放等。污染處理:1、通過實驗室的合理設(shè)計及建立規(guī)范的操作規(guī)程,可以減少環(huán)境中物理因素對細(xì)胞的影響。2、若發(fā)現(xiàn)污染情況,應(yīng)及時將同一瓶中未污染的材料接入新的培養(yǎng)瓶中。五、工作進(jìn)度 序號時間內(nèi)容備注12天藥品的準(zhǔn)備、培養(yǎng)基的配制及滅菌王嬋媛:藥品的準(zhǔn)備,稱取及培養(yǎng)基的配制劉 潔:洗培養(yǎng)瓶,分裝,滅菌21天接種每人接種一半3每天培養(yǎng)及觀察每天觀察一次,可同時去也可兩人輪流觀察,遇到污染情況應(yīng)及時處理415天后統(tǒng)計計算六、參
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