熒光定量PCR技術(shù)講座：理論基礎(chǔ)、引物及探針設(shè)計(jì)、體系優(yōu)化、實(shí)驗(yàn)方案、數(shù)據(jù)分析、污染防控_第1頁(yè)
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熒光定量PCR技術(shù)講座：理論基礎(chǔ)、引物及探針設(shè)計(jì)、體系優(yōu)化、實(shí)驗(yàn)方案、數(shù)據(jù)分析、污染防控?zé)晒舛縋CR技術(shù)講座：理論基礎(chǔ)、引物及探針設(shè)計(jì)、體系優(yōu)化、實(shí)驗(yàn)方案、數(shù)據(jù)分析、污染防控 CT LogX0與循環(huán)數(shù)呈線性關(guān)系，通過(guò)已知起始拷貝數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)品可作出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)未知樣品Ct值，就可以在標(biāo)準(zhǔn)曲線上計(jì)算出未知樣品初始模板量。 該方法的前提條件是目的基因和內(nèi)參基因的擴(kuò)增效率相同且都為1，在試驗(yàn)開(kāi)始前必須分別對(duì)目的基因和內(nèi)參基因作標(biāo)準(zhǔn)曲線，看兩者擴(kuò)增效率的差別，假如兩者擴(kuò)增效率之間的差異小于，就可以用該方法分析。而且在接下來(lái)的實(shí)驗(yàn)中，無(wú)需再做標(biāo)準(zhǔn)品。 該方法要求嚴(yán)格的重復(fù)，因?yàn)镃T值的差異只要有很小的變化，測(cè)得的結(jié)果就會(huì)有很大的差別。 該方法特別適合于樣品量不大，但是檢測(cè)的基因種類(lèi)很多的情況。 探針中GC含量的差異對(duì)定量PCR反應(yīng)效率的影響定量PCR反應(yīng)體系普通PCR結(jié)果電泳圖添加熒光基團(tuán)后PCR結(jié)果電泳圖優(yōu)化后的Taqman探針體系實(shí)驗(yàn)結(jié)果，定量PCR實(shí)驗(yàn)方案熒光染料法Taqman探針?lè)p標(biāo)準(zhǔn)曲線法雙標(biāo)準(zhǔn)曲線法同一cDNA樣品的三個(gè)重復(fù)通過(guò)定量PCR檢測(cè)，測(cè)得該陰性樣品中含有227個(gè)初始模板。假如這個(gè)污染屬于是頑固的未知污染，可以用正

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