高效液相色譜儀操作方法-

1、一、開機(jī)1、開機(jī)前準(zhǔn)備:流動(dòng)相使用前必須過(guò)0.45um的濾膜(有機(jī)相的流動(dòng)相必須為色譜純;水相必須用新鮮注射用水,不能使用超過(guò)3天的注射用水,以防止長(zhǎng)菌或長(zhǎng)藻類;把流動(dòng)相放入溶劑瓶中。A瓶:為水相B瓶:為有機(jī)相。2、打開電腦,選Win 2000,進(jìn)入Win 2000界面。3、雙擊CAG Boodp server圖標(biāo),放大CAG Boodp server小圖標(biāo),出現(xiàn)窗口,5min內(nèi)打開液相各部件電源開關(guān),等待1100廣播信息后,表示通訊成功連接,關(guān)閉CAG Boodp serve 窗口。4、雙擊online圖標(biāo),儀器自檢,進(jìn)入工作站。該頁(yè)面主要由以下幾部分組成:最上方為命令欄,依次為File,R

2、un Control,Instrumen等;命令欄下方為快捷操作圖標(biāo),如多個(gè)樣品連續(xù)進(jìn)行分析、單個(gè)樣品進(jìn)樣分析、調(diào)用文件保存文件等;中部為工作站各部件的工作流程示意圖;依次為進(jìn)樣器-輸液泵-柱溫箱-檢測(cè)器-數(shù)據(jù)處理-報(bào)告;中下部為動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)信號(hào);右下部為色譜工作參數(shù):進(jìn)樣體積、流速、分析停止時(shí)間、流動(dòng)相比例、柱溫、檢測(cè)波長(zhǎng)等。4、從“View”菜單中選擇“Method and control”畫面。二、編輯參數(shù)及方法1、開始編輯完整方法:從“Method”菜單中選擇“New method”,出現(xiàn)DEF-LC.M,從“Method”菜單中選擇“Edit entire method”,選擇方法信息、

3、儀器參數(shù)及收集參數(shù)、數(shù)據(jù)分析參數(shù)和運(yùn)行時(shí)間表等各項(xiàng),單擊OK,進(jìn)入下一畫面。2、方法信息:在“Method Comments”中加入方法的信息,如方法的用途等。單擊OK,進(jìn)入下一畫面。3、泵參數(shù)設(shè)定:進(jìn)入“Setup pump”畫面,在“Flow”處輸入流量,如1ml/min;在“Solvent B”處輸入有機(jī)相的比例如70.0,(A=100-B,也可在Insert 一行“Timetable”,編輯梯度;輸入保留時(shí)間;在“Pressure Limits Max”處輸入柱子的最大耐高壓,以保護(hù)柱子。單擊OK,進(jìn)入下一畫面。4、DAD檢測(cè)器參數(shù)設(shè)定:進(jìn)入“DAD signals”畫面,輸入樣品波長(zhǎng)

4、及其帶寬、參比波長(zhǎng)及其帶寬(參比波長(zhǎng)帶寬默認(rèn)值為100nm;選擇Stoptime:as Pupm;在“Spectrum”中輸入采集光譜方式“store”:選All;如只進(jìn)行正常檢測(cè),則可選None;范圍Range:可選范圍為190950nm;步長(zhǎng)Step可選2.0nm;閥值:選擇需要的燈;Peak width(Response time即響應(yīng)值應(yīng)盡可能接近要測(cè)的窄峰峰寬,可選“2s”或4s; Slit-:狹窄縫,光譜分辨率高;寬時(shí),噪音低?？蛇x4nm單擊OK,進(jìn)入下一畫面。5、進(jìn)入“Signal Details”畫面,單擊OK,進(jìn)入下一畫面。6、進(jìn)入“Edit Integration Even

5、ts”(編輯積分結(jié)果畫面,單擊OK,進(jìn)入下一畫面。7、進(jìn)入“Specify report”(積分參數(shù)畫面,單擊OK,進(jìn)入下一畫面。8、進(jìn)入“Instrument curves”畫面,單擊OK,進(jìn)入下一畫面。9、進(jìn)入“Run Time checklist”(運(yùn)行時(shí)間表畫面,選擇“Date Acquistition”和“Standard Date Analsis”,單擊OK,完成參數(shù)設(shè)定,回到工作站畫面。10、單擊“Method”菜單,選中“Save method as”,輸入文件名,單擊OK。(路徑: eHPCHEM1methods*注:如果調(diào)用一個(gè)方法,則在“Method”菜單,選中“Load

6、 method”,選方法名,單擊OK。11、從菜單“View”中選擇“Online signal”,選中Window 1 ,然后單擊Change鈕,將所要繪圖的信號(hào)移到右邊的框中,點(diǎn)OK。(如同時(shí)檢測(cè)二個(gè)信號(hào),則重復(fù)11,選中Window 2。三、運(yùn)行樣品1、單擊泵(Pump圖標(biāo)下面的小瓶圖標(biāo),輸入溶劑的實(shí)際體積和瓶體積,并且選停泵體積。單擊OK。2、手動(dòng)打開Purge閥:逆時(shí)針轉(zhuǎn)23圈。3、單擊泵(Pump圖標(biāo),出現(xiàn)參數(shù)設(shè)定菜單,單擊Setup pump選項(xiàng),進(jìn)入泵編輯畫面。設(shè)Flow:5ml/min,單擊OK。4、開泵:直接點(diǎn)Pump圖標(biāo)下面的泵開關(guān)小圖標(biāo),或單擊Pump圖標(biāo),出現(xiàn)參數(shù)設(shè)定

7、菜單,單擊Pump contrlo選項(xiàng),選中On,單擊OK。5、系統(tǒng)開始排液(Purge,直到管線內(nèi)(由溶劑瓶到泵入口無(wú)氣泡為止,切換通道繼續(xù)排液,直到所有通道無(wú)氣泡為止。(每個(gè)管線內(nèi)液體約20ml,在5ml/min的流速下,均需45min才能排完6、單擊泵(Pump圖標(biāo),出現(xiàn)參數(shù)設(shè)定菜單,單擊Setup pump選項(xiàng),進(jìn)入泵編輯畫面。把Flow改為0.51.0ml/min,單擊OK。7、等待流速降下來(lái)后,關(guān)閉排液閥。8、待壓力穩(wěn)定后,從“Instrument”菜單中選擇“System on”或單擊GUI圖標(biāo)的On圖標(biāo)啟動(dòng)系統(tǒng)。開始走基線,并可選擇觀察信號(hào)。注:儀器運(yùn)行過(guò)程,畫面顏色由灰色轉(zhuǎn)變

8、成黃色或綠色,當(dāng)各部件都達(dá)到所設(shè)參數(shù)時(shí),畫面均變?yōu)榫G色,左上角紅色的“not ready”變?yōu)榫G色“ready”,表明可以進(jìn)行分析。(此時(shí)如果要終止儀器的運(yùn)行,可單擊流程圖右下角的“off”,再單擊“Yes”,關(guān)閉輸液泵和檢測(cè)器氘燈。9、單擊最大化按鈕,將online Plot窗口放大。待基線平穩(wěn)后,點(diǎn)信號(hào)窗口的“Banlance”,調(diào)至零點(diǎn)。10、等儀器Ready ,從“Runcontrol”菜單中選擇F5或“Run method”。11、編輯樣品信息:從“Run control”菜單中選擇“Sample into”選項(xiàng),選擇“Sample Info.”,即打開了樣品信息頁(yè)面,輸入操作者(O

9、perator Name、數(shù)據(jù)存貯通道(Subdirectory、樣品名(Sample Name、進(jìn)樣瓶號(hào)(Vial、濃縮因子(Multipline、稀釋因子(Dilution、,“Data file”中選擇“Prefix”,在Prefix框中輸入批號(hào)或日期等,在Counter框中輸入計(jì)算器的起始位,儀器會(huì)自動(dòng)命名。(樣品量(Sample Amount、內(nèi)標(biāo)量(ISID Amount可不選,Location只對(duì)自動(dòng)進(jìn)樣器有用,不填則走空白,檢查干擾峰的來(lái)源。單擊OK。12、進(jìn)樣分析:進(jìn)樣閥扳到Load位置,插入注射器,注樣品,進(jìn)樣后扳動(dòng)閥至Inject位置。13、進(jìn)樣分析結(jié)束,點(diǎn)Close鍵退

10、出樣品分析。(注意:檢測(cè)完盡量要關(guān)DAD的燈,以保持燈的壽命。單擊DAD圖標(biāo),出現(xiàn)參數(shù)設(shè)定菜單,單擊control ,選擇關(guān)燈。四、數(shù)據(jù)分析方法編輯(可在offline下操作1、從“View”菜單中選“Date analysis”進(jìn)入數(shù)據(jù)分析畫面。該頁(yè)面最上方為命令欄,依次為File ,Graphics,Integration等。命令欄下為快捷操作圖標(biāo),如積分、校正、色譜圖、單一色譜圖調(diào)用、多色譜圖調(diào)用、調(diào)用方法、保存等。2、從“File”菜單中選“Load signal”,或單擊快捷操作的“單一色譜圖調(diào)用”圖標(biāo),選擇色譜圖文件名,單擊“OK”,畫面中即出現(xiàn)所調(diào)用的色譜圖。3、做圖譜優(yōu)化,從“

11、Graphics”菜單中選擇“Signal options”選項(xiàng)。從Ranges中選擇Auao scale及合適的顯示時(shí)間,單擊OK,或選擇“Use Ranges”調(diào)整。反復(fù)進(jìn)行,直到圖的比例合適為止。4、積分(1先調(diào)用所要分析的色譜圖,從“Integration”中選擇“Auto integrate”,從“Integration”中選擇“Integration Results”,此時(shí)儀器將內(nèi)置的積分參數(shù)給出積分結(jié)果。如積分結(jié)果不理想,再?gòu)摹癐ntegration”菜單中選擇“Integration Events”選項(xiàng),或單擊快捷操作的“編輯/設(shè)定積分表”圖標(biāo),此時(shí),在屏幕下方左側(cè)出現(xiàn)積分參數(shù)

12、表,右側(cè)為積分結(jié)果,在積分參數(shù)表中按實(shí)際的要求輸入修改的參數(shù),如斜率(Slope sensitivity、峰寬(Peak width、最小峰面積(Area reject、最低峰高(Height reject等。(2從“Integration”中選擇“Integrate”選項(xiàng)或單擊快捷操作的“對(duì)現(xiàn)有色譜圖積分”圖標(biāo),儀器即按照新設(shè)定的積分參數(shù)重新積分。(3若積分結(jié)果不理想,則修改相應(yīng)的積分參數(shù),直到滿意為止。(4完成后,單擊左邊的“”圖標(biāo),將積分參數(shù)存入方法。5、打印報(bào)告:(1從“Report”菜單中選擇“Specify report”選項(xiàng),或單擊最右側(cè)快捷操作的“定義報(bào)告及打印格式”(右下角帶

13、叉的報(bào)告畫面圖標(biāo),進(jìn)入打印畫面。(2根據(jù)實(shí)際要求選擇報(bào)告的格式和輸出形式等?？稍凇癈alculate”右則的黑三角中選“Percent”(面積百分比,其它項(xiàng)不變。(如“Destination”項(xiàng)下選擇“Screen”;“Based On”選“Area”;“Sorted By”選“Signal”;“Repirt Style”選“Short”;選擇“Add chromatogram Output(打印色譜圖”;選擇“With Calibrated Peaks”;選擇“Portrait”;可根據(jù)需要選擇“Size”。(3單擊OK。(4選擇快捷操作的“報(bào)告預(yù)覽”圖標(biāo),可預(yù)覽報(bào)告的全貌。從“Report

14、”菜單中,選擇“Print Report”,則報(bào)告打印到屏幕上,如想輸出到打字機(jī)上,則單擊“Print”,即可進(jìn)行報(bào)告的打印。最后,單擊“close”退出此操作頁(yè)面。6、定量分析如果需要進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)曲線制備,可按此項(xiàng)進(jìn)行操作。(1一級(jí)校正表的建立:在“Data Analysis”界面下,調(diào)用最低濃度的色譜圖,在“欄“Calibration”下,選擇“New Calibration Table”,選擇“Automatic Setup Level”,并設(shè)校正級(jí)數(shù)為“1”,單擊“OK”。在畫下方左側(cè)出現(xiàn)校正表,右側(cè)為校正圖。在畫面左下側(cè)的校正表中選擇所要的色譜峰,輸入校正級(jí)數(shù)、化學(xué)物名稱及濃度,如果采用

15、內(nèi)標(biāo)法,需對(duì)內(nèi)標(biāo)峰進(jìn)行標(biāo)記。單擊OK,工作站提示是否刪除0濃度行,單擊Yes 。(2二級(jí)校正表的建立:調(diào)用第二個(gè)色譜圖,在命令欄“Calibration”下,選擇“Add Level”,設(shè)為“2”,單擊“OK”,在畫面左下側(cè)的校正表中輸入校正級(jí)數(shù)、化學(xué)物名稱及樣品濃度。(如需對(duì)校正表中的某些數(shù)據(jù)進(jìn)行重新修正,可調(diào)用新的圖譜,在命令欄“Calibration”下,選擇“Recalibration”,并在校正表中輸入校正級(jí)數(shù),樣品濃度。此時(shí),校正表右側(cè)自動(dòng)繪制各組分的標(biāo)準(zhǔn)曲線,并進(jìn)行線性回歸。單擊校正表中的“Print”,可進(jìn)行打印。五、關(guān)機(jī)1、關(guān)機(jī)前,用過(guò)緩沖鹽溶液必須先用100%的水沖洗系統(tǒng)(打開排液閥,調(diào)流速為5ml/min,沖洗約5 min,然后調(diào)流速為1ml/min,待流速降下來(lái)后,關(guān)閉排液閥,再?zèng)_洗沖洗約20 min;然后用甲醇同法清洗20min,然后關(guān)泵。注意:此方法適用于反相色譜柱,而正相色譜柱應(yīng)用