流式細胞儀基本原理和臨床應(yīng)用

1、流式細胞儀基本原理和臨床應(yīng)用流式細胞儀基本原理和臨床應(yīng)用2 流式細胞儀就是進行流式細胞分析的儀器，它集電子技術(shù)、計算機技術(shù)、激光技術(shù)、流體理論于一體，是一種非常先進的檢測儀器。流式細胞儀基本原理和臨床應(yīng)用3流式細胞儀基本原理和臨床應(yīng)用4流式細胞儀的原理流式細胞儀的應(yīng)用流式細胞儀的數(shù)據(jù)處理流式細胞儀基本原理和臨床應(yīng)用5流式細胞儀的工作原理流式細胞儀基本原理和臨床應(yīng)用6工作原理工作原理流式細胞儀基本原理和臨床應(yīng)用7流式細胞儀基本原理和臨床應(yīng)用8Injector TipSheath fluid流式細胞儀基本原理和臨床應(yīng)用9 細胞被戴上特殊的標記。所用的標記細細胞被戴上特殊的標記。所用的標記細胞的探針

2、是能夠同待分選細胞表面特征性胞的探針是能夠同待分選細胞表面特征性蛋白蛋白(抗原抗原)結(jié)合的抗體，而這種抗體又能結(jié)合的抗體，而這種抗體又能夠同某種熒光染料結(jié)合。被結(jié)合的細胞帶夠同某種熒光染料結(jié)合。被結(jié)合的細胞帶上了熒光標記。當稀釋的細胞進入超聲波上了熒光標記。當稀釋的細胞進入超聲波振蕩器時，極稀的細胞懸浮液形成很小的振蕩器時，極稀的細胞懸浮液形成很小的液滴，一個液滴中只含有一個細胞。液滴液滴，一個液滴中只含有一個細胞。液滴一旦形成并通過激光束時，激光束激發(fā)結(jié)一旦形成并通過激光束時，激光束激發(fā)結(jié)合在細胞表面抗體分子。合在細胞表面抗體分子。流式細胞儀基本原理和臨床應(yīng)用10流式細胞儀基本原理和臨床應(yīng)用

3、11流式細胞儀基本原理和臨床應(yīng)用12流式細胞儀基本原理和臨床應(yīng)用13流式細胞儀基本原理和臨床應(yīng)用14流式細胞儀基本原理和臨床應(yīng)用15流式細胞儀基本原理和臨床應(yīng)用16FALS SensorLaser流式細胞儀基本原理和臨床應(yīng)用17FALS Sensor90LS SensorLaser流式細胞儀基本原理和臨床應(yīng)用18Dichroic Filter/MirrorFilter placed at 45oReflected lightTransmitted LightLight Source流式細胞儀基本原理和臨床應(yīng)用19LaserFreqFluorescenceFALS SensorFluoresce

4、nce detector(PMT3, PMT4 etc.)Purdue University Cytometry Laboratories流式細胞儀基本原理和臨床應(yīng)用20流式細胞儀基本原理和臨床應(yīng)用21 流式細胞儀通常以激光作為發(fā)光源。經(jīng)過流式細胞儀通常以激光作為發(fā)光源。經(jīng)過聚焦整形后的光束，垂直照射在樣品流上，聚焦整形后的光束，垂直照射在樣品流上，被熒光染色的細胞在激光束的照射下，產(chǎn)生被熒光染色的細胞在激光束的照射下，產(chǎn)生散射光和激發(fā)熒光。這兩種信號同時被前向散射光和激發(fā)熒光。這兩種信號同時被前向光電二極管和光電二極管和90方向的光電倍增管接收。方向的光電倍增管接收。光散射信號在前向小角度進

5、行檢測，這種信光散射信號在前向小角度進行檢測，這種信號基本上反映了細胞體積的大??；熒光信號號基本上反映了細胞體積的大??；熒光信號的接受方向與激光束垂直，經(jīng)過一系列雙色的接受方向與激光束垂直，經(jīng)過一系列雙色性反射鏡和帶通濾光片的分離，形成多個不性反射鏡和帶通濾光片的分離，形成多個不同波長的熒光信號。同波長的熒光信號。流式細胞儀基本原理和臨床應(yīng)用22流式細胞儀基本原理和臨床應(yīng)用23流式細胞儀基本原理和臨床應(yīng)用24流式細胞儀基本原理和臨床應(yīng)用25流式細胞儀基本原理和臨床應(yīng)用26 當含細胞的液滴逐個通過激光束時，當含細胞的液滴逐個通過激光束時，受到兩種檢測器的檢測受到兩種檢測器的檢測:如果液滴中含有如

6、果液滴中含有細胞就會激活干涉檢測器細胞就會激活干涉檢測器(interference detector)，只有帶有熒光標記細胞的液滴，只有帶有熒光標記細胞的液滴才會激活熒光檢測器才會激活熒光檢測器(fluorescence detector)。當帶有熒光標記的液滴通過激。當帶有熒光標記的液滴通過激光束時，將兩種檢測器同時激活，引起液光束時，將兩種檢測器同時激活，引起液滴充電信號使鞘液帶上負電荷。由于液滴滴充電信號使鞘液帶上負電荷。由于液滴帶有負電荷，移動時就會向正極移動，進帶有負電荷，移動時就會向正極移動，進入到熒光標記細胞收集器中。入到熒光標記細胞收集器中。細胞分選的原理流式細胞儀基本原理和臨

7、床應(yīng)用27488 nm laser+-Charged PlatesSingle cells sortedinto test tubesFALS SensorFluorescence detector流式細胞儀基本原理和臨床應(yīng)用28流式細胞儀基本原理和臨床應(yīng)用29流式細胞儀基本原理和臨床應(yīng)用30流式細胞儀基本原理和臨床應(yīng)用31+Antigen (cytokines)Fluorescence Detector antibodyCapture beads Capture antibodyBeads流式細胞儀基本原理和臨床應(yīng)用32Shades of a colorAntibody coupled be

8、ads, emitting at distinct FL3 intensitiesVarious analytesAntibody coupled PE label, emitting at FL2 intensity proportional to analyte conc.流式細胞儀基本原理和臨床應(yīng)用33Multiple sizesBeads provide an expandable assay platform for use with a flow cytometerDifferent intensitiesDifferent colors with different intens

9、ities流式細胞儀基本原理和臨床應(yīng)用34IL-8IL-1bIL-6IL-10TNFIL-12Capture BeadsLysate or SupernatantSampleDetector AntibodiesWashAnalyze on flow cytometer流式細胞儀基本原理和臨床應(yīng)用35CBA Standard curves流式細胞儀基本原理和臨床應(yīng)用36流式細胞儀基本原理和臨床應(yīng)用37流式細胞儀的數(shù)據(jù)處理流式細胞儀基本原理和臨床應(yīng)用38數(shù)據(jù)處理 檢測數(shù)據(jù)的顯示視測量參數(shù)的不同檢測數(shù)據(jù)的顯示視測量參數(shù)的不同由多種形式可供選擇。單參數(shù)數(shù)據(jù)以由多種形式可供選擇。單參數(shù)數(shù)據(jù)以直方圖的形

10、式表達，其直方圖的形式表達，其X軸為測量強軸為測量強度，度，Y軸為細胞數(shù)目。對于雙參數(shù)或軸為細胞數(shù)目。對于雙參數(shù)或多參數(shù)數(shù)據(jù)，既可以單獨顯示每個參多參數(shù)數(shù)據(jù)，既可以單獨顯示每個參數(shù)的直方圖，也可以選擇二維的三點數(shù)的直方圖，也可以選擇二維的三點圖、等高線圖、灰度圖或三維立體視圖、等高線圖、灰度圖或三維立體視圖。圖。流式細胞儀基本原理和臨床應(yīng)用39流式細胞儀基本原理和臨床應(yīng)用40流式細胞儀基本原理和臨床應(yīng)用41流式細胞儀基本原理和臨床應(yīng)用42Gating流式細胞儀基本原理和臨床應(yīng)用43Compensation流式細胞儀基本原理和臨床應(yīng)用44compensation流式細胞儀基本原理和臨床應(yīng)用45流式細胞儀基本原理和臨床應(yīng)用46G0-G1SG2-MFluorescence Intensity# of EventsA typical DNA Histogram of cell proliferation流式細胞儀基本原理和臨床應(yīng)用47流式細胞儀基本原理和臨床應(yīng)用481 熒光信號的面積：對熒光光通量進行積分 2 DNA指數(shù)(DI)：相對DNA含量3異倍體：非二倍體，包括近二倍體，四