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1、精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上專心-專注-專業(yè)1 總論1.1 研究工作的目的、依據(jù)和范圍超氧化物歧化酶( Superoxide Dismfitase, 簡(jiǎn)稱SOD) 是生物細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生的一類特殊的酶,它可以催化超氧陰離子的歧化反應(yīng)并產(chǎn)生分子氧和過(guò)氧化氫。超氧陰離子是一種活性氧自由基,它對(duì)細(xì)胞有毒害作用,而SOD 能專一地清除氧,使生物體免受傷害。因此,SOD作為種重要的氧自由基清除劑,已引起人們的極大關(guān)注。它可以預(yù)防和治療一些疾病,如慢性炎癥、某些自身免疫病、肺氣腫和氧中毒等,還有抗衰老、防輻射和防腫瘤等作用。目前,SOD 已應(yīng)用于醫(yī)藥和化妝品生產(chǎn),而且隨著研究的深入,它的應(yīng)用范圍還在不斷擴(kuò)大。SO
2、D 廣泛分布于動(dòng)、植物和微生物體內(nèi) 。崔景朝介紹說(shuō),1969年,McCord和Fridovich從牛紅細(xì)胞中首次發(fā)現(xiàn)并提取了SOD,很快被國(guó)際醫(yī)學(xué)界證實(shí)為能清除體內(nèi)自由基的藥用酶,可以有效清除體內(nèi)的大量多余自由基,從根本上提高人體細(xì)胞的活力,進(jìn)而達(dá)到延緩衰老、提高免疫力的效果,得到醫(yī)學(xué)界的廣泛認(rèn)可。 近年來(lái),利用SOD的O2的自由基功能,人們相繼開(kāi)發(fā)了一系列富含SOD的制品,如SOD系列化妝品,SOD啤酒、飲料和其他SOD食品。SOD已成為眾多制藥廠、日化廠和食品加工廠的重要原料。目前,SOD的商用價(jià)值已高度體現(xiàn)在醫(yī)藥、食品及化妝品等領(lǐng)域。具有非常大的開(kāi)發(fā)前途與較大的利潤(rùn)空間?,F(xiàn)將SOD在醫(yī)藥
3、、食品、化妝品領(lǐng)域的應(yīng)用列表說(shuō)明,如表11所示。表11 SOD在醫(yī)藥、食品和化妝品領(lǐng)域的應(yīng)用領(lǐng)域產(chǎn)品或應(yīng)用醫(yī)藥Orgoten、Ormetein、Outsein、Palasein、HX-18、Paroxinorn食品含有SOD的保健飲料、保健食品和功能性食品化妝品大寶SOD蜜系列、蛇油SOD蜜等1.2項(xiàng)目提出的背景、投資的必要性和經(jīng)濟(jì)意義隨著生物技術(shù)在發(fā)酵行業(yè)的大力應(yīng)用開(kāi)發(fā),許多發(fā)酵產(chǎn)品得到了蓬勃發(fā)展。根據(jù)發(fā)酵目的,采用現(xiàn)代發(fā)酵設(shè)備,進(jìn)行放大培養(yǎng)和控制性發(fā)酵,獲得預(yù)定的產(chǎn)品,在是發(fā)酵工程和生物技術(shù)的完美結(jié)合。我過(guò)目前的SOD主要從人血和動(dòng)物血液中提取得到,多從豬血紅細(xì)胞中取得,而國(guó)外不少添加SO
4、D的抗衰老保健品,均是從人血和動(dòng)物血液中提取,但這就不可避免會(huì)發(fā)生交叉感染。若利用發(fā)酵工程從酵母菌中提取SOD,不僅可以避免上述問(wèn)題,還可降低成本,實(shí)現(xiàn)資源的合理利用,達(dá)到更好的經(jīng)濟(jì)效益。由于SOD用于防止癌細(xì)胞擴(kuò)散和作為抗衰老的藥物已廣泛引起醫(yī)藥界人士的關(guān)注,國(guó)內(nèi)外已有不少添加SOD的抗衰老保健品和化妝品,因此市場(chǎng)前景十分廣闊。1.3研究工作概況及結(jié)論對(duì)SOD的發(fā)酵研究,主要是對(duì)產(chǎn)品的市場(chǎng)需求做必要的預(yù)測(cè),并對(duì)生產(chǎn)工藝做詳細(xì)的說(shuō)明。生產(chǎn)出的產(chǎn)品,要符合市場(chǎng)的口味,并比其他人走得更好更遠(yuǎn),在詳細(xì)的SOD酶的工業(yè)生產(chǎn)中,做好把握市場(chǎng)的透視 、對(duì)生產(chǎn)工藝考察最新的科學(xué)研究,并用于實(shí)際生產(chǎn)中。經(jīng)研究
5、表明,SOD的生產(chǎn)有著非常良好的前途,年產(chǎn)5 噸的工廠,可以設(shè)計(jì)小些,但由于SOD的市場(chǎng)價(jià)格昂貴,帶來(lái)的經(jīng)濟(jì)效益不可忽視。2市場(chǎng)需求預(yù)測(cè)和建設(shè)規(guī)模隨著社會(huì)的發(fā)展,人們生活水平的不斷提高,人類對(duì)身體健康的關(guān)注越來(lái)越重視。由于歐盟從1997年1月起禁止使用動(dòng)物SOD,發(fā)酵法提取SOD酶就成為新的課題,而這個(gè)項(xiàng)目必然呈現(xiàn)美好的前景。SOD是具有抗氧化、抗腫瘤、抗病毒、抗輻射、抑制腫瘤和癌癥等預(yù)防和治療多種疾病的藥理功能,尤其是對(duì)心腦血管疾病、高血壓、糖尿病等具有獨(dú)特的效果。SOD作為藥物輔酶制劑,具有廣闊的醫(yī)用價(jià)值及臨床應(yīng)用前景。SOD因?qū)Π┌Y、艾滋病和其他疑難雜癥的預(yù)防和治療有較好的效果,在歐美等
6、許多國(guó)家備受青睞。SOD還是美容化妝品和食品最好的添加劑。SOD還廣泛應(yīng)用于軍工醫(yī)學(xué)、保健食品和農(nóng)業(yè)生產(chǎn)等領(lǐng)域,并取得一系列成效和成果,具有廣泛的發(fā)展前景。據(jù)相關(guān)資料介紹,西方經(jīng)濟(jì)發(fā)達(dá)國(guó)家,每年SOD的需求量已達(dá)150萬(wàn)億單位,其中日本、東南亞等國(guó)SOD干粉需求量缺口達(dá)1.8萬(wàn)億單位。今年來(lái),國(guó)際市場(chǎng)對(duì)SOD需求量每年以15%左右的速度增長(zhǎng)。在我國(guó),2005年的SOD年產(chǎn)量在547790公斤之間,有關(guān)專家預(yù)測(cè),中國(guó)SOD的年產(chǎn)量以10%左右的速度增長(zhǎng),而中國(guó)SOD市場(chǎng)的需求每年 以13%的速度增長(zhǎng),潛在缺口很大。3原材料、燃料及資源情況 攀枝花鄰近云南,距離昆明市較近,依靠成昆鐵路可以保證原料
7、的快捷運(yùn)送,發(fā)酵法制備SOD,所需酵母從昆明到達(dá)攀枝花只需要4小時(shí)左右,是理想的生產(chǎn)基地。攀枝花市水資源十分豐富,不僅擁有過(guò)境金沙江和雅礱江兩大水系以及過(guò)境支流安寧河、惠民河、新莊河,而且市境內(nèi)還有流域面積50平方公里的1級(jí)支流50條,550平方公里的一級(jí)支流45條。全市徑流總量達(dá)1144.21億立方米,自產(chǎn)水資源量42.18億立方米,占徑流總量的3.69%。人平擁有水資源量4349.35立方米,平均每畝耕地?fù)碛兴Y源量9002.86立方米。過(guò)境水量1102.03億立方米,占徑流總量的96.31%。攀枝花市水能資源,理論蘊(yùn)藏量達(dá)492.9萬(wàn)千瓦。全市可開(kāi)發(fā)量占理論蘊(yùn)藏量的83.2%,可開(kāi)發(fā)量達(dá)
8、到410.1萬(wàn)千瓦,年發(fā)電量可達(dá)271.5億千瓦時(shí);每平方公里占有年均發(fā)電量365.19萬(wàn)千瓦時(shí),為中國(guó)的17.7倍,四川省的4.0倍,攀西地區(qū)的1.27倍。攀枝花地區(qū)水能資源分布集中,主要分布在過(guò)境的金沙江、雅礱江以及過(guò)境支流安寧河、惠民河、新莊河。到2000年底,全市已建成地方小水電站228處,裝機(jī)266臺(tái),容量58749千瓦,年發(fā)電量達(dá)到了1.44億千瓦時(shí)。煤炭是攀枝花市主要礦產(chǎn)資源之一,探明產(chǎn)煤地3處、22個(gè)井田。1997年底,累計(jì)探明煤炭?jī)?chǔ)量6.64億噸,保有儲(chǔ)量6.17億噸。其中煙煤探明儲(chǔ)量5.39億噸,無(wú)煙煤探明儲(chǔ)量1.25億噸,是理想的燃料供應(yīng)地。4建廠條件和廠址方案4.1廠址
9、地理自然條件和社會(huì)經(jīng)濟(jì)現(xiàn)狀4.1.1攀枝花地理自然條件攀枝花市位于四川西南邊陲、雅礱江與金沙江匯合處,是四川一座新興的鋼鐵工業(yè)城市。1965年為開(kāi)發(fā)攀枝花鐵礦資源,著手組建城市,初名為攀枝花特區(qū),后正式建市時(shí)定名為渡口市,以后又改名攀枝花市。攀枝花市西跨橫斷山脈,東臨大涼山山脈,北接大雪山,南抵金沙江。地勢(shì)西北高,東南低。攀枝花市東部為小相嶺螺髻山魯南山系,中部為牦牛山龍肘山系,西部為錦屏山柏林山系,山脈走向近于南北。境內(nèi)最高點(diǎn)為西北部鹽邊縣境內(nèi)的百靈山穿洞子,海拔4195.5米;最低點(diǎn)是東南部仁和區(qū)平地鎮(zhèn)的師莊,海拔937米。城市區(qū)海拔在10001200米之間, 主要農(nóng)業(yè)區(qū)海拔在100018
10、00米之間。金沙江、雅礱江、安寧河、大河、三源河及其支流深嵌在山地之間,形成雄偉的川西南峽谷區(qū)。攀枝花市地貌類型復(fù)雜多樣,可分為平壩、臺(tái)地、高丘陵、低中山、中山和山原6類,以低中山和中山為主,占全市幅員面積的88.38%。4.1.2攀枝花社會(huì)經(jīng)濟(jì)現(xiàn)狀攀枝花市的工業(yè)已形成一個(gè)以冶金、能源、原材料工業(yè)為主體,建材、采礦、化工、機(jī)械、輕紡、食品等34個(gè)行業(yè)為輔助產(chǎn)業(yè)的工業(yè)體系,在全國(guó)500家最大企業(yè)中,攀枝花市占4戶;在四川省500強(qiáng)企業(yè)中攀枝花占12戶,在全市國(guó)民經(jīng)濟(jì)中占有舉足輕重的地位。攀枝花境內(nèi)有大小河流90余條,金沙江、雅礱江于境內(nèi)交匯,可開(kāi)發(fā)的水能資源達(dá)3324萬(wàn)千瓦,年發(fā)電量可達(dá)1928
11、億千瓦時(shí)?,F(xiàn)有能源部主要為已建成發(fā)電的總裝機(jī)容量330萬(wàn)千瓦的二灘水電站,以及河門口、新莊、攀枝花發(fā)電廠以及攀鋼、礦務(wù)局自備火力發(fā)電廠。攀枝花已與60多個(gè)國(guó)家和地區(qū)建立了合作關(guān)系,出口產(chǎn)品主要是鋼鐵、釩、鈦制品、農(nóng)副產(chǎn)品等;市內(nèi)舉世矚目的二灘水電站從世界36個(gè)國(guó)家引進(jìn)了各類技術(shù)人員600余人,施工力量強(qiáng)。成功引進(jìn)了合資、合作、獨(dú)資企業(yè)33家。攀枝花海關(guān)、商檢、衛(wèi)檢及攀枝花車站為二級(jí)口岸。涉外機(jī)構(gòu)的設(shè)立,報(bào)關(guān)、檢驗(yàn)方便,促進(jìn)了進(jìn)出口貿(mào)易發(fā)展,為攀枝花對(duì)外開(kāi)放創(chuàng)造了良好的氛圍。4.2攀枝花交通概況及發(fā)展攀枝花是四川通往華南、東南亞沿邊、沿??诎兜淖罱c(diǎn),是四川與云南交界處重要的區(qū)域性樞紐城市,具有
12、對(duì)內(nèi)對(duì)外的區(qū)位優(yōu)勢(shì),成昆鐵路貫通全境,境內(nèi)還有國(guó)道108線,省道214、216、310線,市內(nèi)的各條公路干線通暢便捷,交通條件正在改善,能起降波音737大型客機(jī)的機(jī)場(chǎng)已在2003年年底通航,西攀高速公路現(xiàn)已開(kāi)工建設(shè),已經(jīng)于2007年完工。攀枝花火車站是攀枝花市對(duì)外交流的重要口岸和門戶。攀枝花位于成昆線上,可直達(dá)成都、重慶、昆明、北京等地。攀枝花市境內(nèi)水運(yùn)航道是兩江一河,即金沙江、雅礱江、安寧河,總通航里程為368公里。4.3廠址選擇意見(jiàn) 廠址的選擇,重在考慮地理環(huán)境和資源情況??紤]到成昆鐵路通過(guò)攀枝花,在離火車站較近的地方建設(shè)廠房比較合適,不僅原料可以很方便運(yùn)進(jìn),而且產(chǎn)品也可以盡最快的速度運(yùn)入
13、成都或昆明,經(jīng)成都運(yùn)往華東地區(qū),經(jīng)昆明運(yùn)往廣州,通往國(guó)際市場(chǎng)。而且從攀枝花有直通北京的火車,運(yùn)送到北方等大城市更加方便。 發(fā)酵生產(chǎn)所在地,必然需要的燃料等物質(zhì)可以從攀枝花就近獲取,節(jié)省運(yùn)費(fèi),由于離二灘水電站比較近,電力情況可以無(wú)需考慮。 經(jīng)對(duì)比,攀枝花各個(gè)區(qū)縣地理情況,分析得知,在仁和區(qū)建設(shè)SOD發(fā)酵工廠比較容易實(shí)現(xiàn),這里環(huán)境污染較輕,土地平坦,易于修建廠房,離市區(qū)較近,離金江火車站一個(gè)小時(shí)車程,不僅比市區(qū)土地便宜,而且也可減少市區(qū)的污染。 廠房占地面積可盡量考慮小些,發(fā)酵生產(chǎn)以2500m2 以內(nèi)為佳。5設(shè)計(jì)方案5.1工藝路線的選擇5.1.1工藝路線 發(fā)酵法生產(chǎn)SOD的工藝流程如圖511。斜面
14、種子 種子擴(kuò)大培養(yǎng) 水、基質(zhì)、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì) 發(fā)酵罐培養(yǎng) 培養(yǎng)液分離 水解 分離 提純 干燥 成品511 發(fā)酵法生產(chǎn)SOD的工藝流程5.1.2菌種 不同酵母菌SOD的含量不同,應(yīng)挑選含SOD較多的酵母菌作為菌株進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng),現(xiàn)對(duì)不同酵母菌的SOD含量及對(duì)氧的抗性作出比較,如表512。表512 不同酵母菌的SOD含量及對(duì)氧的抗性菌株酶含量(u/g)相對(duì)存活率(%)BY2773.284.3NY5545.743.03453706.365.6RY568.050.7AY633.1ND*根據(jù)上表列出的酵母 SOD含量,選擇BY2作為菌株。5.1.3培養(yǎng)基蔗糖,6%;玉米漿,2%;(NH4)2SO4,0.4%;C
15、uSO4,50mol/L;ZnSO4,25mol/L;PH 7.0,28 0C,20h。5.1.4主要生產(chǎn)參數(shù)在發(fā)酵中,微生物的數(shù)量不斷增加,發(fā)酵營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)不斷減小,發(fā)酵產(chǎn)物增加,這些環(huán)境因素的變化,影響正常發(fā)酵的進(jìn)行。通過(guò)對(duì)發(fā)酵條件的檢測(cè)與調(diào)控,維持特定的發(fā)酵環(huán)境條件,可以保證正常生產(chǎn)的正常進(jìn)行。發(fā)酵過(guò)程要控制的參數(shù)包括狀態(tài)參數(shù)和間接參數(shù)。狀態(tài)參數(shù)可通過(guò)傳感器等測(cè)量?jī)x器直接測(cè)得,又包括物理參數(shù)(表513)和化學(xué)參數(shù)(表514),如PH、溶氧、溶解二氧化碳、黏度、菌體濃度等。表513 發(fā)酵過(guò)程中微生物需要檢測(cè)的物理參數(shù)參數(shù)名稱單位檢測(cè)方法溫度0C、K溫度計(jì)、傳感器罐壓Pa、KPa、MPa壓力計(jì)、
16、傳感器空氣流量L/(L.min)、m3/min流量計(jì)、傳感器各種物質(zhì)的添加速度Kg/h、m3/h流量計(jì)、傳感器攪拌轉(zhuǎn)速r/min傳感器攪拌功率kW、kW/m3傳感器裝流量M3、L壓力計(jì)、傳感器泡沫傳感器黏度Pa.s黏度計(jì)密度Kg/ m3、g/ml密度計(jì)、傳感器濁度透光度%光度計(jì)、傳感器表514 化學(xué)參數(shù)測(cè)試情況參數(shù)名稱單位測(cè)試情況細(xì)胞濃度g/L取樣分析細(xì)胞中主要物質(zhì)含量mg/g取樣分析溶氧濃度mg/L傳感器排氣中氧氧濃度%,mol/m3熱磁氧分析儀、傳感器溶解二氧化碳%傳感器排氣中二氧化碳%,mol/m3紅外線吸收儀、傳感器H+濃度PHPH計(jì)、傳感器氧化還原電位mv傳感器各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)濃度g/L
17、,mg/L取樣分析中間體濃度g/L取樣分析各種代謝產(chǎn)物濃度g/L取樣分析間接參數(shù)是指那些不能直接測(cè)得,需要根據(jù)基本參數(shù)通過(guò)計(jì)算求得的參數(shù),如攝取量(OUR)、二氧化碳釋放速率(CRR),體積溶氧系數(shù)KLa,呼吸熵(RQ)等。表515 發(fā)酵過(guò)程中的綜合參數(shù)及計(jì)算公式參數(shù)名稱單位有關(guān)計(jì)算公式體積溶氧系數(shù)1/hKLa=r/(c*-c)=Na/(c*-c)耗氧速率g/(h.L)R=Qo2 x溶氧速率g/(h.L)Na= KLa(c*-c)呼吸強(qiáng)度go2/(gcell.h)Qo2 =r/x呼吸熵molCO2/ molO2RQ=CER/OUR生長(zhǎng)得率g/gYX/S=x/(-s)產(chǎn)物得率g/gYp/s=p/
18、(-s)氧得率系數(shù)g/g,g/ molO2Yx/o=(dx/dt)/r底物消耗速率g/(h.L)-ds/dt=(dx/dt)/ YX/S生長(zhǎng)速率g/(h.L)(dx/dt)=x比生長(zhǎng)速率1/h=(dx/dt)/x生長(zhǎng)速度g/(h.L)dp/dt=(-ds/dt) Yp/s細(xì)胞濃度g/Lx=x0+(s0-s) YX/S5.1.5提純SOD的最新研究甲苯破壁提純酵母菌中的SOD,此法提純SOD的含量分別為氯仿乙醇法、酶裂解法和細(xì)胞自溶法的1.29、1.08.2.01倍。根據(jù)馮清平教授研究的提純SOD的方法,應(yīng)用于實(shí)際生產(chǎn)中,將大大提高SOD的提純效率,有效地將資源利用,明顯地在降低成本的前提下增加
19、經(jīng)濟(jì)效益。具體提純方法:每克酵母加入0.8mol甲苯,35 0C破壁45min,以磷酸緩沖液(PH7.8,含0.1m mol/L EDTA)提取5 h,4000 r/min離心5 min,分離出水相,10000 r/min離心15 min,收集上清液,此即為SOD粗提液。 表515 碳源對(duì)BY2菌株生物量和酶含量的影響碳源菌體濕重酶含量乳酸鈉0.38532.0葡萄糖1.33555.5蔗糖1.60678.7琥珀酸鈉0.65821.1松三糖0.97841.5熊果苷1.01687.0淀粉0.80766.8蜜二糖0.89750.5麥芽糖1.31713.3松三糖+0.2%蔗糖1.021085.2琥珀酸鈉
20、+0.2%蔗糖1.08785.35.1.6 SOD的質(zhì)量檢測(cè)指標(biāo) 提純后的SOD,要經(jīng)過(guò)質(zhì)量檢測(cè)后才能投入市場(chǎng)銷售,對(duì)SOD的質(zhì)量檢測(cè)可以通過(guò)一下幾個(gè)方面。從外觀看,SOD的顏色呈淺綠色,為粉狀,干燥失重小于5%,并且要減小雜菌的個(gè)數(shù),以每克SOD含雜菌100個(gè)以下為佳,酶活力應(yīng)大于3000 u/mg蛋白質(zhì),致病菌為陰性。 5.2生產(chǎn)設(shè)備SOD發(fā)酵需要的設(shè)備預(yù)計(jì)高達(dá)30萬(wàn)元,主要設(shè)備的價(jià)格如表521。表521 SOD發(fā)酵需要的設(shè)備及估計(jì)價(jià)格主要設(shè)備價(jià)格(元)種子罐及輔助裝備4500機(jī)械攪拌通風(fēng)發(fā)酵罐及其輔助設(shè)備60000壓濾機(jī)18750真空濃縮設(shè)備56000干燥機(jī)及其輔助裝備50000CIP清
21、洗設(shè)備2000分離設(shè)備60000其他輔助裝備45750總計(jì)6環(huán)保及其他問(wèn)題6.1環(huán)境情況攀枝花污染比較嚴(yán)重,曾位居全國(guó)十大污染城市之一,在為國(guó)家增加財(cái)政,為自己增加財(cái)富的時(shí)候,應(yīng)該想到污染的嚴(yán)重性。污染對(duì)環(huán)境的影響,需要經(jīng)過(guò)幾年、幾十年、甚至上百年的時(shí)間才能恢復(fù),和短時(shí)間財(cái)富的積累相比,這樣的損失就實(shí)在太大了,我們應(yīng)該想到污染對(duì)自己及子孫的影響,想到污染后的環(huán)境對(duì)生命的扼殺。SOD酶的發(fā)酵生產(chǎn),主要是種子罐、發(fā)酵罐等設(shè)備的清洗所耗費(fèi)的水的處理,發(fā)酵后的物質(zhì)經(jīng)提純后,從上清液中除去的廢水,還有在精制中留下的廢水,這些廢水在工業(yè)中需要用處理微生物廢水的方法,達(dá)到國(guó)家排放水標(biāo)準(zhǔn)。為了減少污水,工廠的建設(shè)及運(yùn)行時(shí),應(yīng)該在以下幾個(gè)方面著重注意:引進(jìn)先進(jìn)的生產(chǎn)工藝;提高SOD產(chǎn)品收率;加強(qiáng)物料回收,加強(qiáng)綜合利用;提高循環(huán)冷卻水利用率。 圖61 SOD發(fā)酵主要廢水前期制備 種子罐 發(fā)酵 提取 精制 包裝入庫(kù) 種子罐沖洗水 發(fā)酵罐沖洗水 提取后的上清液 精制廢水6.2主體工程和配套工程投資估算及利潤(rùn)估算發(fā)酵所需設(shè)備、 建設(shè)工廠等屬于固定資產(chǎn)投資,主要包括以下幾個(gè)方面:設(shè)備費(fèi)、土地費(fèi)、土建費(fèi)、設(shè)備運(yùn)輸費(fèi)、安裝調(diào)試費(fèi)、建筑期利息及不可預(yù)見(jiàn)費(fèi),共計(jì)約51.63萬(wàn)元。按照工廠的規(guī)模確定資金的來(lái)源,向銀行貸款是比較好的辦法。根據(jù)每克SOD120元計(jì)算,年產(chǎn)5噸SOD,向市場(chǎng)回收資金6億元。按照年利率7.2
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