新型傳染性法氏囊病疫苗研究進展.docx

1、新燹俳酷餐騷灸奈嘉巍蜀張文通I,魏鳳2,沈志強（1.山東綠都生物科技有限公司，山東濱州256600；、f2.山東省濱州富牧獸醫(yī)研究院，山東濱卅256600）摘要：傳染性法氏食病（IBD）病毒變異株及超強毒株的頻頗出現(xiàn)使IBD常規(guī)疫苗的免疫失敗不斷發(fā)生。因此，發(fā)展更為有效、安全的新型疫苗己成為迫切需要。本丈就近年來新型傳染性法氏囊病疫苗研究進展作以綜述。關鍵詞：傳染姓法氏食病病毒；新型疫苗中圖分類號:S858.31243文獻標識碼：AIBD（InfectiousBursalDisease,IBD）是目前危害世界養(yǎng)禽業(yè)的三大主要傳染病之一，免疫接種是主要的防治措施，傳統(tǒng)預防措施主要是使用弱毒苗和滅

2、活苗來控制病毒感染。雖然傳統(tǒng)疫苗在控制該病的流行方面發(fā)揮了很大作用，但由于變異毒株和超強毒株的出現(xiàn)，分子結構改變導致病毒致病力的改變以及宿主對疫苗免疫應答的改變，經(jīng)常導致免疫失敗，現(xiàn)有疫苗不能提供保護，這就促使人們研制新型疫苗。本文就對近年來新型傳染性法氏囊病疫苗研究進展作以綜述。1重組亞單位疫苗基因工程亞單位疫苗是用DNA重組技術，將編碼病原微生物保護性抗原的基因導入受體菌或細胞，使其在受體細胞中高效表達.分泌保護性抗原肽鏈。提取保護性抗原肽鏈.加入佐劑即可制成基因工程亞單位疫苗。收槁日期：2014-02-22*項目及名號：山東*現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術像系家禽創(chuàng)新團隊項目.SDAIT-13-01i

3、-09d作者簡介：張文通（1979-）,男，漢族，助理研究員，主要從事噌用生物制品研究，hzndzwt°*通訊作者。文章編號:1673-1085（2014）03-0050-05二I世紀80年代中期至90年代初，澳大利亞科學家克隆了1BDV（InfectiousBursalDiseaseVirus,宿主保護性抗原及前體如何徵白的cDNA片段，并在大腸桿菌中表達，在體外獲得了大量純化的VP2和VP3產(chǎn)物，從而開創(chuàng)了研究IBD基因工程疫苗的先河"'oVakharia等所用桿狀病毒表達了1BDV變異株GLS的大片段VP2/4/3,表達產(chǎn)物可以正確加工產(chǎn)生VP2或VP3,且能

4、與中和單克隆抗體結合，具有正確的構型。Snyder等問將標準毒株D78的中和性抗原決定簇的編碼區(qū)插入到變異株GIS的VP2編碼區(qū)，形成的嵌合基因克隆入桿狀病毒載體，與桿狀病毒重組后，除表達B69外，GIS株VP2和VP3的抗原決定簇均可正常表達。姜平等用pCYTEXPI表達質粒在大腸桿菌表達了南京IBDV野毒株VP2cDNA片段，并證明表達產(chǎn)物可與IBDV陽性血清結合，但對雞的免疫保護性尚待于進一步研究。于漣等m在克隆了IBDVHZ96株VP2基因的基礎上，首次利用家蠶桿狀病毒（BmNPV）表達系統(tǒng)在家蠶細胞和幼蟲中高效表達了VP2蛋白，動物試驗初步證實用含有重組病毒的蠶血淋巴注射或口服可保護

5、IBDV強毒株對非免疫雞的攻擊。WangMY.KuoYY等同在桿狀病扉表達系統(tǒng)中表達VP2區(qū)得到度組VP2（rVP2）蛋白，經(jīng)純化后免疫可使機體獲得抗IBDV的保護性抗體；王笑梅等用酵母表達IBDVVP2免疫SPF雞后.能夠產(chǎn)生特異性抗休，并在一定程度上抵抗超強毒的致死性攻擊，但還不能保護法氏囊組織完全不受侵害和損傷，免疫效果尚不如常規(guī)滅活疫苗；高玉龍等在桿狀病毒表達系統(tǒng)中表達雞IBDVVP2基因,Westernblot顯示獲得正確表達，攻扇試我表明，免疫3周齡SPF雞，初次免疫后14d對IBDV超強毒株的攻擊保護率為75%,2次免疫后14<1對其的攻擊保護率為100%。到目前為止，國內(nèi)

6、外市場上經(jīng)銷著兩種商業(yè)化重組亞單位疫苗。以色列雅貝克（Abie）公司現(xiàn)在經(jīng)銷一種滅活的夏合疫苗（NDV+IBDV）,其中含有酵母表達的vvlBDVVP2蛋白質；中國青島易邦生物工程有限公司也在經(jīng)銷一種傳染性法氏囊病油乳劑亞氓位疫苗，疫苗含有大腸桿菌表達的IBDVVP2蛋白質。2重組活載體疫苗基因工程重組活載體疫苗是用基因工程技術將保護性抗原基因（目的基因）轉移到載體中使之表達的活疫苗，具有亞單位疫苗的安全性和減毒活疫苗的高效性c將1BDV相關抗原基因更組到其它禽病毒中，所構建的重組活載體病毒可以誘導抗載體與1BDV雙重免疫應答。BoyleDB等叩用禽痘病毒（FPV）與IBDVVP2構成重組體的

7、rFPV-VP2,接種雞對澳大利亞分離株002/73有保護作用，俱這種保護性與免疫劑垃和途徑有關0Darteil等商曾以重組火雞瘡疹病毒（HVT）為表達系統(tǒng)表IB0V的宿主保護性抗原VP2,對vvlBDV（veryvirulentInfectiousBursalDiseaseVirus,vvlBDV）起到60%的保護作用。Tsukamoto等網(wǎng)構建了表達VP2的重:組馬立克氏活病毒（MDV）,構建二聯(lián)苗，對同種vvMDV和vvlBDV攻擊的SPF雞的保護率分別為100%和55%。Tsukamoto等網(wǎng)還以重組馬立克氏病毒（rMDV）和重組雞痘病毒（rFPV）作為雙載體系統(tǒng)制成1BI）重組活載體

8、疫苗對雞群進行免疫，結果表明雙載體系統(tǒng)重組疫苗更加穩(wěn)定有效，可誘導對超強毒株的攻擊保護。ShawI等網(wǎng)以禽痘病毒為表達系統(tǒng)表IBDV的宿主保護性抗原VP2,并進行保護實驗，實驗結果提示其保護作用很訶能是由于細胞介導的免疫作用所致，而旦保護作用與品種有關。劉小軍等用間接免疫熒光證明重組雞痘病毒町以再感染的雞胚成纖維細胞中表達VP2蛋白；金寧一等網(wǎng)在重組雞痘病毒中表達IBDVVP2與VP2/4/3基因，實騎證明構建的兩個重組質粒在雞胚成纖維細胞（CEF）中得到高效表達，但重組疫茁的保護率低于常規(guī)疫苗；Sheppanl等四在禽腺病毒（FAV-10）表達IBDVVP2基因，重組疫苗免疫SPF雞，可以誘

9、導產(chǎn)生抗VP2抗體，并可抵抗IBDV的攻擊；Phenix等問以西門利克森林病毒（SFV）為表達系統(tǒng)表達IBDV的VP2和多聚蛋白VP0,免疫后可誘導產(chǎn)生特異性抗體，但在部分雞只中產(chǎn)生中和性抗體；程太平等構建了以禽多殺性巴氏桿菌弱準株G190E40載體表達1BDVVP2基因的活載體疫苗，攻毒試驗表明該疫苗對IBDV標準強毒BC6/85攻擊免疫保護率為75%；總金英等閔構建了以新城疫病毒載體表達IBDV超強毒株VP2基因的活載體疫苗，攻毒試驗表明該疫苗對IBDV超強毒株攻擊免疫保護率達90%以上。3基因缺失疫苗基因缺失疫苗是用基因工程技術將強毒株毒力相關基因切除構建的活疫苗.該疫苗安全性好、不易返

10、祖，尤其適于局部接種.誘導產(chǎn)生粘膜免疫力，其免疫力堅實，免疫期長。德國的Mundt等«2"己研制生產(chǎn)出不再表達VP5病毒蛋白的IBDV毒株°這些基因工程IBDV毒株是有活性的，但是作為活疫苗使用目前尚存在一定的局限性，因為VP5基因的缺失，毒株的生產(chǎn)速度嚴重減慢，這就意味著這些毒株已高度致弱，即使使用非常大的劑量也僅能保護SPF雞抵御致死性感染。4病毒樣顆粒（VLPs）Ecmandez-Arias等1221用痘苗病毒載體表達VP2/VP4/VP3時，首次發(fā)現(xiàn)表達產(chǎn)物町自動的切并裝配為VLPs,這種VLPs不僅為IBDV抗體特異識別，與天然IBDV粒子也非常相象。R

11、ogel等將IBDVA片段置于大腸桿菌表達載體中.WesternblotW檢測到所表達的病*蛋白，免疫電鏡可以觀測到vlp,純化的蛋白可誘導機體產(chǎn)生抗體，并m抵抗IBDVGep5毒株的攻擊。Kibenge與Hu兇等也分別用桿狀病毒表達了IBDVA片段cDNA全長，表達產(chǎn)物同樣可以fl動裝配為VLPs,并有免疫反應性。Hu等進一步使VLPs上的VP2換成另一毒株的VP2從而產(chǎn)生嵌合VLPs,嵌合VLPs上的VP2C端還連上5個His使之通過固定金屬離子親和層析(IMAC)而被純化。如前所述，理論上VLPs的免疫原性更佳，但作為疫苗的效果有待驗證。Lee等同用桿狀病毒表達的VP2蛋白可以自發(fā)形成V

12、LP,經(jīng)過硫酸鉉鹽析、親和層析等方法獲得結晶體。5高壓力失活疫苗田少敏等網(wǎng)研究了IBDV在高壓力下的感染力和免疫原性.在溫度不變F(0r),lBDV感染性隨壓力升高和壓力作用時間增加而下降,180MPa作用3h、240MPa作用2h可使1BDV完全喪失感染力。經(jīng)高壓力處理過的IBDV免疫雞，攻毒后無一發(fā)病，而非免疫對照蛆全部發(fā)病，顯示處理的失活IBDV具有很強的免疫原性。熒光學研究顯示隨壓力升高IBDV內(nèi)源熒光光譜的峰位發(fā)生紅移，而內(nèi)源熒光偏振和散射光則下降，最可能的解釋是發(fā)生了蛋白質亞基的解離。電鏡觀察高壓力處理前后1BDV形態(tài)發(fā)生了明顯變化.病毒粒子破裂、變形。6DNA疫苗DNA疫苗主要通

13、過在體外直接注射(或用基因槍表擊)含抗原基因的特定質粒使機體產(chǎn)生高效體液和細胞免疫應答，其興起稱為“第三次疫苗革命”。DNA疫苗的出現(xiàn)，開拓了IBD疫苗研究的新紀元。DNA疫苗能同時誘導體液免疫和細胞免疫，對不同血清亞型毒株具有交叉保護，還具有嵌合免疫、多重免疫及聯(lián)合免疫等優(yōu)點網(wǎng)。匈牙利學者Fodor等回首次構建了IBDV-D78株和GP40株的VP2基因及D78株的VP2/VP4/VP3真核表達質粒，裸質粒直接以肌肉和腹腔兩條途徑接種SPF雞，2周后加強免疫，結果發(fā)現(xiàn)含VP2基因的質粒DNA免疫組未能檢測到特異性的中和抗體，攻毒不產(chǎn)生保護力；但編碼VP2/VP4/VP3質粒能誘導產(chǎn)生免疫反應

14、，僅有55%的免疫雞產(chǎn)生中和抗體，而攻擊強毒的保護率僅達36%,而且需要大劑世的DNA疫苗(800ug/H)維持免疫反應。劉毅等團構建的以VP2和VP2/VP4/VP3為目的基因的DNA疫苗保護率低于常規(guī)的中強毒二價活苗，且被免疫雞的法氏囊組織存在IBDV；步志高等1311以D78株制備的DNA疫苗免疫SPF雞，結果表明該疫苗可誘導SPF雞產(chǎn)生中和抗體，并形成對IBDV超強毒株致死的免疫保護，并有可能減緩法氏囊病理損傷程度；姜平等國構建的2種以VP2、VP3為目的基因的DNA疫苗對雞產(chǎn)生的保護率為90%和10%；陳創(chuàng)夫等閔制備以VP2目的基因DNA疫苗免疫雛雞，20d后在體內(nèi)苗檢測到特異性抗體

15、。王小泉兇將以VP2目的基因DNA疫苗及弱岸苗免疫雞，結果顯示兩種疫苗聯(lián)合免疫明顯較用一種DNA疫苗高；2001年，李建榮等閔制備ZJ2000和JDI株的8種DNA疫苗，得出了使用ZJ2000株的以VP2/VP4/VP3制備的DNA疫苗免疫效果最好；于漣等閏研究表明灼IL-2質粒能增強IBDV多聚蛋白DNA疫苗誘導的病毒血清中和抗體效價；Hulse等印似STC株的VP2基因制備DNA疫苗免疫2周齡錐焰，結果顯示肌肉組織中表達了VP2蛋白及胸腺、脾臟和法氏囊中能擴增到VP2基因。參考文獻：1 AzadAA,MckemNM,macreadieIG,etal.Physicochemicalandim

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