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文檔簡介
1、圓補血口服液對D半乳糖和亞硝酸鈉所致癡呆模型小鼠生化指標的影響 【摘要】 目的 研究以何首烏和桂圓肉為原料的烏圓補血口服液對老年癡呆小鼠模型大腦和血液生化指標的影響。方法 用D半乳糖和亞硝酸鈉混合液給小鼠腹腔注射,每天1次,連續(xù)60 d造模。造模30 d后,治療組用烏圓補血口服液灌胃治療,模型組和正常組用等體積蒸餾水灌胃。實驗結束,取血分離血清,處死小鼠,取大腦制備10%腦勻漿,測定血清和腦勻漿生化指標。結果 腦勻漿乙酰膽堿脂酶(TchE)活力,模型組、正常組和治療組分別為(1.709
2、77;0.498)、(1.436±0.313)、(1.182±0.157) U/mg port,模型組明顯高于其他兩組(P0.05和P0.01);丙二醛(MDA)含量分別為(7.935±0.775)、(6.934±1.284)、(6.356±0.799) nmol/mg prot,模型組明顯高于治療組(P0.05);血清谷胱甘肽過氧化物酶(GSHPx)活力分別為(329.760±28.438)、(370.038±25.130)、(311.300±29.952) U/ml,正常組明顯高于模型組和治療組(P0.01);
3、腦(O2)氧自由基清除率(%)分別為(2.346±1.167)、(7.366±3.413)、(8.672±3.519),治療組和正常組明顯高于模型組(P0.01);腦蛋白含量、腦GSHPx、血清丙氨酸氨基轉移酶(ALT)、甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、尿素等,各組間無明顯差異。結論 烏圓補血口服液有明顯改善D半乳糖和亞硝酸鈉聯(lián)合癡呆模型小鼠大腦乙酰膽堿酯酶活性和增強抗氧化功能。 【關鍵詞】 老年癡呆癥模型;烏圓補血口服液;乙酰膽堿脂酶 老年癡呆癥(AD)
4、以認知能力和記憶力迅速減退為主要特征,而認知能力和記憶力目前認為與大腦膽堿能神經(jīng)有關。乙酰膽堿是膽堿能神經(jīng)的神經(jīng)遞質,膽堿乙酰轉移酶和乙酰膽堿酯酶(TchE)活性分別控制乙酰膽堿的生成和分解。因此,膽堿乙酰轉移酶和TchE活性成為測定的重要指標。本研究利用D半乳糖和亞硝酸鈉聯(lián)合造模1,用烏圓補血口服液灌胃治療,測定大腦TchE活性、丙二醛(MDA)和血清生化指標的變化,并與對照組對比分析?,F(xiàn)將實驗結果報道如下。 1 材料與方法 1.1 試劑 D半乳糖、亞硝酸鈉、氯化鈉、過硫酸銨、鹽酸羥胺
5、、對氨基苯磺酸、萘胺、HCl、Tris、TEMED、正丁醇,均為國產(chǎn)分析純。TchE測定試劑盒、MDA測定試劑盒、谷胱甘肽過氧化物酶(GSHPx)測定試劑盒、考馬斯亮蘭試劑盒,均購自南京建成生物工程研究所;甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、尿素、丙氨酸氨基轉移酶(ALT)測定試劑盒、總蛋白測定試劑盒,均購自四川省邁克科技有限責任公司。 1.2 動物 小白鼠45只,鼠齡5個月,健康,雌雄各半,由右江民族醫(yī)學院動物實驗室提供。分成3組,每組15只,即模型組、正常組、治療組。分籠喂養(yǎng),每籠5只。 1.3
6、 動物實驗造模 模型組和治療組造模。用D半乳糖按100 mg/kg體重劑量,亞硝酸鈉按90 mg/kg體重劑量,用生理鹽水溶解稀釋,兩液混合后腹腔注射,每天1次,連續(xù)60 d。 1.4 治療 造模到30 d后,治療組用烏圓補血口服液,按0.05 ml/只劑量,用蒸餾水稀釋至0.3 ml灌胃,每天1次,直至實驗結束。其余兩組用等體積蒸餾水代替。 1.5 中藥 烏圓補血口服液何首烏(制)0.5 g/ml生藥(干),龍眼肉0.3 g/ml生藥(干)。
7、0; 1.6 測定方法 超氧陰離子自由基(O2)清除率用化學比色法測定2;MDA用TBA(硫代巴比妥酸)顯色法測定;GSHPx用其催化H2O2與GSH反應,GSH可與二硫代二硝基苯甲酸作用生成黃色化合物,進行比色測定;TchE測定用TchE催化水解乙酰膽堿生成膽堿和乙酸,膽堿與巰基顯色劑反應生物TNB黃色化合物,進行比色測定。具體操作按各試劑盒說明書。 實驗結束從眼球取血,分離血清待測。處死動物,取大腦,用生理鹽水洗去血液,濾紙吸干多余水分,稱重,在冰浴下用玻璃勻漿器勻漿,用生理鹽水制成10%腦勻漿,在3 50
8、0 r/min離心10 min,取上清于另一試管內,放冰箱內冷凍待用。 1.7 統(tǒng)計學處理 用上??萍汲霭嫔鏢STP軟件(2.00版)處理數(shù)據(jù)并進行方差分析。 2 結 果 2.1 腦蛋白、TchE和MDA測定結果 見表1。每組腦蛋白無顯著性差異(P0.05);模型組TchE活力明顯高于正常組和治療組(P0.05和P0.01);MDA含量模型組明顯高于治療組(P0.05)。表1 各組腦蛋白、TchE和MDA
9、比較與模型組比較:1)P0.05,2)P0.01;與治療組比較:3)P0.05 2.2 血清、腦組織GSHPx、超氧陰離子自由基(O2)清除率測定結果 見表2。血清GSHPx活力正常組明顯高于模型組和治療組(P0.01);模型組與治療組尚無明顯差異(P0.05);腦GSHPx活力正常組也高于治療組和模型組,但尚無明顯差異;腦O2清除率治療組和正常組均明顯高于模型組(P0.01),治療組和正常組無明顯差異(P0.05);腦O2濃度模型組明顯高于治療組和正常組(P0.01)。 2.3 血清A
10、LT、TG、TC、尿素測定結果 見表3。各組間均無明顯差異(P0.05)。表2 各組血清、腦勻漿GSHPx活力、腦O2清除率和濃度比較與正常組比較:1)P0.01;與模型組比較:2)P0.01表3 各組血清ALT、TG、TC和尿素含量 3 討 論 3.1 模型組腦組織TchE活力明顯升高 本次實驗采用D半乳糖和亞硝酸鈉聯(lián)合造模。D半乳糖注射進入體內后,其代謝產(chǎn)物半乳糖醇不能被進一步代謝而堆積在細胞內,影響滲透壓,導致細胞腫脹,代謝紊亂,體內
11、活性氧水平升高,細胞生物膜脂質受損,腦神經(jīng)元發(fā)生一系列退行性變化,出現(xiàn)AD模型特點。目前也常采用1次性腹腔注射亞硝酸鈉120 mg/kg體重造模小鼠記憶障礙模型,由于亞硝酸鈉進入體內,使血紅蛋白氧化為高鐵血紅蛋白而失去攜帶氧的功能,引起組織缺氧,導致大腦意識和行為上障礙。本次采用90 mg/kg(體重)較小劑量長時間注射,而D半乳糖也采取較小劑量100 mg/kg體重造模。模型組腦TchE活力明顯高于正常組(P0.05)和治療組(P0.01)。文獻研究中,有關AD動物模型腦內TchE活性變化的報道不盡一致,有的降低3,有的升高4,5,主要是因為造模方法不同所致。本文采用文獻1的造模方法,結果腦
12、內TchE活性明顯升高。臨床上由于AD病人中TchE活性升高,對AD病人治療目前最有效的方法是膽堿酯酶抑制劑4,抑制TchE活性而使乙酰膽堿分解減慢,以維持膽堿能神經(jīng)功能而達到治療的目的。近年實驗研究表明,何首烏有效成分二苯乙烯苷對AD治療有明顯效果3,本實驗結果治療組腦內TchE活性明顯低于模型組,而與正常組接近,與文獻報道一致6,從而維持膽堿能神經(jīng)正常功能。 3.2 模型組腦組織抗氧化能力明顯降低。模型組腦組織MDA含量和O2濃度明顯高于治療組和正常組6,而O2清除率卻明顯低于治療組和正常組。血清GSHPx活力正常組明顯高于模型組和治療組,說
13、明模型組抗氧化能力已明顯降低,而治療組已接近正常組,說明藥物對能夠防止AD的發(fā)生或改善AD的癥狀,起到治療作用。 3.3 其他生化指標未見明顯變化 ALT、尿素、TG、TC、腦蛋白等各組未見明顯差異,說明造模未造成肝、腎系統(tǒng)損害,也未造成脂類代謝障礙。 【參考文獻】 1 羅煥敏,陳子晟.一種新的老年癡呆動物模型J.中國老年學雜志,2003;23(3):17982. 2 蕭華山,何文錦,傅文慶,等.一種用分光光度計檢測氧自由基的新方法J.生物化學與生物物理進展,1999;26(2):1802. 3 秦海強,李 亞,田蘇平.淀粉樣蛋白及D半乳糖對大鼠學習記憶和膽堿酯酶活性的影響J.南京醫(yī)科大學學報,2000;20(3):1957. 4 田金洲,楊承芝,楊惠民.復方大黃制劑對老齡小鼠大腦皮質和海馬ChAT、AchE活性及Ach含量
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