淺論喉癌PCNA和survivin的表達(dá)與腫瘤化療敏感性的關(guān)系

1、淺論喉癌PCNA和survivin的表達(dá)與腫瘤化療敏感性的關(guān)系         【摘要】  目的 觀察喉癌組織PCNA和survivin的表達(dá)水平與腫瘤化療敏感性的關(guān)系。方法 隨機(jī)選取36例喉癌，給予順鉑、5氟尿嘧啶和平陽(yáng)霉素為方案聯(lián)合化療，取各例在治療前的喉癌活檢組織的石蠟標(biāo)本，用免疫組化檢測(cè)PCNA和survivin的表達(dá)情況，分析其表達(dá)水平與腫瘤化療敏感性的關(guān)系。結(jié)果 喉癌組織中PCNA表達(dá)陽(yáng)性者對(duì)化療的敏感性明顯高于PCNA陰性表達(dá)者(90.0% vs 37.5%，P0.01);survivin表

2、達(dá)陽(yáng)性的喉癌組織與表達(dá)陰性的喉癌組織對(duì)化療的敏感性則差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(65.2% vs 69.2%，P0.05)。結(jié)論 PCNA的表達(dá)可能增強(qiáng)喉癌對(duì)化療的敏感性，而survivin的表達(dá)對(duì)喉癌化療敏感性可能無影響。 【關(guān)鍵詞】  喉癌;化學(xué)治療;PCNA;survivin;化療敏感性Abstract: Objective To observe the relationships between the expression of PCNA and survivin and the chemosensitivity in laryngeal carcinoma. Methods Thi

3、rtysix patients with laryngeal carcinoma received chemotherapy with a regimen of cisplatin, 52 fluorouracil and bleomycin, and their biopsy specimens were collected for detecting PCNA and survivin expression by immunohistochemical method. Results The chemosensitivity was significantly higher in pati

4、ents with PCNA expression than that without expression (90.0% vs 37.5%, P0.01), but there was no significant difference in the chemosensitivity between positive and negative survivin expression (65.2% vs 69.2%, P0.05). Conclusion PCNA overexpression could enhance the chemosensitivity of laryngeal ca

5、rcinoma.Key words: laryngeal carcinoma; chemotherapy; PCNA; surviving喉癌以手術(shù)治療為主，并配合術(shù)前或術(shù)后放、化療來縮小切除范圍，以保全患病器官的功能和擴(kuò)大手術(shù)的可行性1，然而喉癌對(duì)化療的敏感性有所不同。要實(shí)現(xiàn)依據(jù)患者及癌腫對(duì)化療敏感性的不同而制定不同的個(gè)體化治療方案，首先必須找出一種快速、準(zhǔn)確、靈敏的指標(biāo)預(yù)測(cè)不同個(gè)體喉癌患者對(duì)化療的敏感性，才能以此為依據(jù)制定相應(yīng)的個(gè)體治療方案。本研究擬隨機(jī)選取喉癌病例，給予順鉑、5氟尿嘧啶和平陽(yáng)霉素聯(lián)合化療，并取各例在治療前的喉癌活檢組織的石蠟標(biāo)本，用免疫組化檢測(cè)PCNA和survivin的

6、表達(dá)情況，從而探討PCNA和survivin的表達(dá)對(duì)喉癌化療敏感性的影響。1 資料和方法1.1 觀察對(duì)象隨機(jī)選取初診為喉癌的患者36例，組織病理學(xué)證實(shí)均為鱗狀上皮癌，其中高分化2例，低分化29例;男30例，女6例，平均年齡(60.0±8.1)歲。取活檢前全部病例均未接受任何治療。按照國(guó)際抗癌協(xié)會(huì)TNM分期的方案，36例中期6例，期15例，期9例，期6例。1.2 免疫組化染色取喉部腫瘤活檢標(biāo)本，分為2份，其中1份送組織病理學(xué)檢查證實(shí)喉癌的診斷，另1份作免疫組織化學(xué)檢測(cè)(下稱免疫組化)。采用腎癌組織為陽(yáng)性對(duì)照標(biāo)本。將組織作厚度為5 m的切片，經(jīng)脫蠟等常規(guī)處理后，其中1張切片做HE染色，另

7、1張做免疫組化用。簡(jiǎn)單的免疫組化的操作步驟對(duì)切片加入1%H2O2甲醇溶液，抑制內(nèi)源性過氧化物酶;在磷酸緩沖液( PBS)中洗5 min，共3次;滴加3%的非免疫馬血清，在37保溫20 min，阻斷非特異性免疫結(jié)合反應(yīng);在PBS中洗滌，方法同前;滴加抗PCNA或survivin單克隆抗體(Santa Cruz產(chǎn)品)，稀釋度為150 溶液，37溫育60 min后放在4冰箱中過夜;次日按前法用PBS 洗滌，再滴加生物素化羊抗鼠IgG單克隆抗體(北京中山生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品，150 稀釋)，在37中保溫40 min;按前法PBS洗滌后滴加ABC復(fù)合物(北京中山生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品，150稀釋)，37保

8、溫40 min;按前法用PBS洗滌，滴加新鮮配制的酶底物二氨基聯(lián)苯二胺鹽酸鹽顯色，最后用蘇木素輕度復(fù)染。陽(yáng)性對(duì)照標(biāo)本，按上述步驟染色。陰性對(duì)照標(biāo)本除以PBS代替第一抗體外，其它步驟與被測(cè)標(biāo)本相同。結(jié)果判斷：光鏡下觀察到細(xì)胞核或胞漿內(nèi)出現(xiàn)紅棕色顆粒為陽(yáng)性(PCNA在胞核，survivin在胞漿和胞核)，不染色為陰性。在切片四角和中央各選一高倍視野，各計(jì)數(shù)200個(gè)細(xì)胞。陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)10%者界定為陽(yáng)性病例，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)10%者為界定陰性病例。1.3 化學(xué)治療順鉑2025 mg/m2，靜脈滴注，每天1次，共3 d;甲酰四氫葉酸鈣100 mg，靜脈滴注，每天1次，共5 d;5氟尿嘧啶500750 mg/m2

9、，靜脈滴注，每天1次，共5 d;平陽(yáng)霉素8 mg溶于20 mL生理鹽水內(nèi)，靜脈推注，每天1次，共4 d。每月循環(huán)1次，共3個(gè)月?；颊叩幕煰熜О碦ECIST評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)。完全緩解(CR)：所有目標(biāo)病灶消失，無新病灶出現(xiàn)，腫瘤標(biāo)記下降至正常，并維持4周;部分緩解(PR)：所有(一個(gè)或多個(gè))基線目標(biāo)病灶最長(zhǎng)徑總和減少30%，并維持4周;疾病穩(wěn)定(SD)：所有基線目標(biāo)病灶最長(zhǎng)徑總和縮小但未達(dá)PR，或增大但未達(dá)PD;疾病進(jìn)展(PD)：較已記錄到得最小目標(biāo)最長(zhǎng)徑總和增大20%，或出現(xiàn)一個(gè)或多個(gè)新病灶。本研究將CR及PR視為對(duì)化療敏感，SD及PD視為對(duì)化療不敏感。1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用確切概率法。 

10、        2 結(jié)果2.1 化療效果36例喉癌，經(jīng)順鉑、5氟尿嘧啶和平陽(yáng)霉素聯(lián)合化療方案治療后，對(duì)化療敏感者有24例，占66.6%;對(duì)化療不敏感者有12例，占33.3%。2.2 PCNA在喉癌中的表達(dá)及其與喉癌組織化療敏感性的關(guān)系PCNA陽(yáng)性表達(dá)信號(hào)位于細(xì)胞核，36例喉癌中，陽(yáng)性表達(dá)者20例，占55.6%;陰性表達(dá)者16例，占44.4%。PCNA陽(yáng)性組的化療敏感性(90.0%)明顯高于PCNA陰性組(37.5%)(P<0.01)，見表1。2.3 survivin在喉癌中的表達(dá)及其與喉癌組織化療敏感性的關(guān)系survi

11、vin陽(yáng)性表達(dá)信號(hào)位于細(xì)胞漿和細(xì)胞核，36例喉癌中，陽(yáng)性表達(dá)者23例，占63.8%;陰性表達(dá)者13例，占36.2%。survivin陽(yáng)性組的化療敏感性(90.0%)與survivin陰性組的敏感性差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(65.2% vs 69.2%, P>0.05)，見表2。表1 喉癌組織PCNA陽(yáng)性組與陰性組對(duì)化療敏感性的比較表2 喉癌組織survivin陽(yáng)性組與陰性組對(duì)化療敏感性的比較 例(%)兩組比較：P=1.000(確切概率法)。3 討論化療在惡性腫瘤的治療中具有重要作用。化療效果取決于腫瘤細(xì)胞對(duì)抗癌藥物的敏感性。導(dǎo)致化療失敗的原因很復(fù)雜，存在著多種機(jī)制，例如腫瘤多藥耐藥性(MDR)是

12、腫瘤細(xì)胞對(duì)抗癌藥物表現(xiàn)出耐藥性的作用機(jī)制之一，某些影響細(xì)胞的生長(zhǎng)繁殖、凋亡的基因分子也影響腫瘤細(xì)胞對(duì)抗癌藥物的敏感性。PCNA是一種分子質(zhì)量為36 000非組蛋白細(xì)胞核多肽，是DNA復(fù)制時(shí)聚合酶6的輔助成分，在細(xì)胞增殖中起著重要作用，其表達(dá)在G1期開始增高，s期達(dá)到高峰，G2期和M期明顯下降。腫瘤細(xì)胞中PCNA含量反映了腫瘤增生能力的高低。有研究發(fā)現(xiàn)，晚期卵巢癌、腺癌、軟組織肉瘤、骨腫瘤及宮頸癌等中的高PCNA表達(dá)病例的化療效果較好，因而提出腫瘤細(xì)胞的PCNA表達(dá)水平可以預(yù)測(cè)某些腫瘤對(duì)化療的敏感性。survivin作為凋亡抑制蛋白家族(IAPs)中結(jié)構(gòu)獨(dú)特的新成員，其分子量最小，但具有強(qiáng)大抗凋

13、亡作用。survivin特異性表達(dá)于胚胎和胎兒組織及絕大多數(shù)腫瘤組織，但在終末分化的成人組織(除胸腺、生殖腺外)中不表達(dá)。多方面的研究提示，它與腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)，且其表達(dá)往往與腫瘤的惡性程度、預(yù)后不良呈正向關(guān)系。反義survivin核酸降低survivin表達(dá)后，增強(qiáng)胃癌細(xì)胞對(duì)化療藥物多西他賽的敏感性。PCNA和survivin的異常表達(dá)在喉癌的發(fā)生發(fā)展過程中起著重要作用，并且與喉癌的組織分化程度、臨床分型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，可作為喉癌的病理診斷及判斷預(yù)后的參考指標(biāo)。PCNA和survivin的異常表達(dá)可作為喉癌的病理診斷及判斷預(yù)后的參考指標(biāo)，那么，能否作為化療敏感性的指標(biāo)呢?在本實(shí)驗(yàn)中，

14、我們發(fā)現(xiàn)PCNA表達(dá)陽(yáng)性的喉癌組織對(duì)化療敏感性明顯高于PCNA陰性組(90.0% vs 37.5%, P<0.01), 說明PCNA在喉癌中表達(dá)可以增強(qiáng)腫瘤對(duì)化療的敏感性。而survivin陽(yáng)性病例與survivin陰性病例相比較, 喉癌對(duì)化療的敏感性差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，說明survivin的表達(dá)對(duì)喉癌化療敏感性的影響不大。我們的研究結(jié)果提示, PCNA高表達(dá)可作為預(yù)測(cè)喉癌對(duì)化療敏感的指標(biāo)之一，而survivin的異常表達(dá)似不宜作為預(yù)測(cè)喉癌對(duì)化療敏感的指標(biāo)。但由于本實(shí)驗(yàn)所研究的病例數(shù)尚較少，需要增加病例做進(jìn)一步研究。【參考文獻(xiàn)】  1 劉世喜.喉癌治療的現(xiàn)狀J. 四川醫(yī)學(xué)，2005，26(l2)：13511352. Therasse P, Arbuck S G, Eisenhauer E A, et al. New guidelines to evaluate the response to treatment in solid tumors J. J Natl Cancer Inst, 2000, 92