油紅染色具體操作方法

1、脂肪和類脂(磷脂、糖脂、固醇脂等)統(tǒng)稱為脂類。它是構(gòu)成人體組織的正常成分，不溶于水而易溶于酒精、乙醴、氯仿等脂溶劑中。在化學(xué)組成上，脂類屬于脂肪酸的酯或與這些酯有關(guān)的物質(zhì)。脂類的主要功能是氧化供能。脂肪主要存積于脂肪組織中，并以油滴狀的微粒存在脂肪細(xì)胞漿內(nèi)。在病理檢驗(yàn)中，脂類染色法最常用以證明脂肪變性，脂肪栓子以及月中瘤的鑒別。脂類染色使用最廣泛的染料是蘇丹染料，最常用的有蘇丹田，蘇丹IV,蘇丹黑及油紅。等。脂肪被染色，實(shí)際上是蘇丹染料被脂肪溶解吸附而呈現(xiàn)染料的顏色。經(jīng)研究認(rèn)為組織中脂質(zhì)在液態(tài)或半液態(tài)時(shí)，對(duì)蘇丹染料著色效果最好。根據(jù)這一原理，適當(dāng)提高溫度(37C-60C)對(duì)組織切片染色效果是有

2、好處的。脂類染色，用冰凍或石蠟切片，以水溶性封固劑封固，如甘油明膠和阿拉伯糖膠等。一、蘇丹田(Sudan田)染色法：操作方法：(1)固定于10刈醛的組織。(2)水洗后采用冰凍或石蠟切片。(3)經(jīng)蒸儲(chǔ)水后，浸染于Harris蘇木素或明磯蘇木素中淡染1-2分鐘。(4)自來水沖洗。(5)水洗后，移入70%酉精5秒鐘。(6)投入蘇丹田染液中約30分鐘或更長(zhǎng)時(shí)間，置于56c溫箱中。(7)在70%H精中洗滌5-10秒鐘。(8)洗于蒸儲(chǔ)水中，然后將切片移于載玻片上。(9)切片移于玻片上，將切片周圍的水分小心擦掉。(10) 甘油明膠封固。結(jié)果：脂肪呈橙紅色或鮮紅色或黑色，膽脂素呈淡紅色，脂肪酸不著色，細(xì)胞核呈

3、藍(lán)色。試劑配制：1 .蘇丹田染液配法：將0.15克蘇丹田溶解于100m170%H精或純丙酮和70%酉精混合7中(各50ml),臨用時(shí)過濾，所得濾液即為飽和濃度。注：浸染時(shí)，容器必須蓋好，否則酒精或丙酮揮發(fā)，染料沉淀。2 .甘油明膠配制：明膠40g蒸儲(chǔ)水210ml甘油250ml石碳酸結(jié)晶5ml先將明膠浸入蒸儲(chǔ)水中2小時(shí)或更長(zhǎng)時(shí)間，然后加甘油和石碳酸，加熱15分鐘，搖攪直至混合液均勻?yàn)橹?。二、蘇丹IV(SudanIV)染色法：蘇丹IV又名猩紅，是蘇丹田的衍生物，作為脂肪染劑，經(jīng)各地實(shí)驗(yàn)證明，其結(jié)果優(yōu)于蘇丹田。其染色步驟與蘇丹田染法完全相同，從略。試劑配制：將1-2克猩紅染劑加純酒精70ml,10%

4、C氧化鈉20ml,蒸儲(chǔ)水10ml,制成混合液，以微火加熱，置37c溫箱中1小時(shí)，取出冷卻后過濾，12小時(shí)后即可使用。注：此液5天內(nèi)失效，如此看來，浪費(fèi)較大，建議配制70%酉精飽和液，或純丙酮和70%酉精飽和液，它們使用方便，且不易失效。結(jié)果：脂肪呈猩紅色，比蘇丹田更為清晰。三、油紅染色法：油紅作為脂肪染色劑，具染色步驟簡(jiǎn)便，染色結(jié)果肯定，并且優(yōu)于蘇丹IV。試劑配制：油紅O0.5g異丙醇(含量98%100ml此為油紅飽和液，可長(zhǎng)期保存?zhèn)溆谩Ｈ旧襟E：(1)凍切片(2)蒸儲(chǔ)水充分洗滌。(3)油紅稀釋液染10-15分鐘，避光、密封。油紅稀釋液的配制：(4)取油紅飽和液6毫升，加蒸儲(chǔ)水4毫升，靜置5-10分鐘后過濾后使用。(5)60%乙醇鏡下分化至間質(zhì)清晰。(6)水洗。(7)Marry氏蘇木素復(fù)染核。(8)水洗。甘油或甘油明膠封片。結(jié)果：脂肪呈鮮紅色，細(xì)胞核呈藍(lán)色，間質(zhì)無色。