轉染儀原理及用途

1、精選優(yōu)質文檔-傾情為你奉上一、Nucleofector 細胞核轉染技術基本工作原理  Amaxa公司的Nucleofector細胞核轉染技術是非病毒介導的轉染，儀器采用獨特的電轉參數(shù)（包括電流、電壓、電擊時間長短等）以內存的優(yōu)化轉染程序名體現(xiàn)，同時該技術的核心專利是細胞類型特異性的細胞核轉染液，即針對不同的原代細胞和傳代細胞有各自特異的細胞類型特異性轉染液，為外源基因進入細胞核提供友好界面。結合優(yōu)化轉染程序和細胞類型特異性轉染液進行的轉染能確保目的基因轉入細胞核的效率。該技術直接將外源基因送到細胞核內，因此轉染效率不再依賴細胞分裂，可以高效轉染分裂增殖較慢甚至于不分裂的細胞。二、Nu

2、cleofector 細胞核轉染技術的組成 Nucleofector 細胞核轉染技術由兩部分組成：     1.Nucleofector Solution轉染液  轉染過程中，細胞首先懸浮在轉染試劑中，選擇相應的轉染程序，僅需數(shù)秒鐘，轉染結束，將細胞轉移到培養(yǎng)基中培養(yǎng)、觀察。針對不同的轉染細胞都有相應的轉染試劑，配合相應Amaxa轉染儀的程序，使DNA直接轉入細胞核內，轉染效率高，易操作，實驗周期短。     2.Nucleofector Device轉染儀  Nucleofector 轉染儀的原理是基于細胞特異性的細胞核轉染液和電穿

3、孔技術的結合。細胞特異性的細胞核轉染液為外源基因進入細胞核提供友好界面，降低轉染過程對細胞的損傷。Nucleofector 轉染技術有一般的電穿孔無法比擬地優(yōu)點，它具有獨特地電子參數(shù)，每一套電子參數(shù)是作為一種程序去適應不同的細胞類型。由于電子參數(shù)是預先精心設計好的，因此操作者不用進行電子參數(shù)的優(yōu)化、轉染條件的摸索等繁瑣的工作，您只需按動按鈕選用規(guī)定的程序即可。  三、Nucleofector 細胞核轉染技術操作步驟  整個操作過程只需四步，非常簡單、高效。 第1步：處理細胞，精確計數(shù) 第2步：混合DNA、轉染液，重懸細胞，加入轉染杯 第3步：將轉染杯放入轉染儀，按鍵選擇相應

4、程序，按"start"鍵開始轉染，10秒鐘左右 第4步：取出細胞繼續(xù)培養(yǎng) 四、Nucleofector 細胞核轉染技術應用  1、免疫學/血液學：Amaxa公司的細胞轉染儀可以轉染原代T、B細胞、免疫細胞系如，K562，JURKAT或白血病細胞如CLL或AML等細胞及單核細胞、巨噬細胞或郎格罕氏細胞、單核細胞派生或CD34陽性細胞派生的樹突狀細胞的實驗方案也已開發(fā)出來。Amaxa公司現(xiàn)在可以提供以下轉染試劑盒：Human B Cells、Human T Cells、Human CD34 Cells、K562 CellsDMSZ）、JURKAT Cells。 2、心

5、血管研究：借助于Nucleofector技術，可進行成體干細胞、CD34陽性細胞、CD34陽性細胞派生的干細胞和間葉干細胞（MSC）等的轉染。Amaxa公司現(xiàn)在可以提供一下轉染試劑盒：HUVECs（Human Umbilical Vein Endothelial Cell）、HCAECs、Human AoSMCs、Human CD34 Cells。 3、皮膚醫(yī)學和組織工程：Nucleofector? 轉染技術能轉染人的皮膚纖維原細胞或人的表皮黑色素細胞。Amaxa公司現(xiàn)在可以提供一下轉染試劑盒：Human Dermal Fibroblasts（轉染率>70）、NHEMs。 4、腫瘤研究：

6、 Amaxa公司現(xiàn)在可以提供一下轉染試劑盒：HUVECs、NHEms、Human Dendritic Cells、Commonly used cellline（CHO-K1（ATCC）、CHO-K1（DSMZ）、COS-7（DSMZ）、HEK293（ATCC）、293HEK（DSMZ）、HeLa（DSMZ）、HepG2（ATCC）、NIH3T3（DSMZ）等。 5、神經(jīng)生物學：可以轉染原代神經(jīng)細胞和細胞系。目前，神經(jīng)干細胞和星細胞等的實驗方案正在開發(fā)中。Amaxa公司現(xiàn)可以提供一下轉染試劑盒：Mouse neurons Chicken neurons PC-12等。    

7、 五、AMAXA細胞核轉染儀( Nucleofector)技術參數(shù)及物理參數(shù)  1、電轉參數(shù) 電流16 VA/fuse 0.315A 儀器采用獨特的電轉參數(shù)（包括電流、電壓、電擊時間長短等）以內存的優(yōu)化轉染程序名體現(xiàn)。 電壓230VAC+10%/-20%  電擊時間長短根據(jù)選用程序定時間長短 2、核轉染液 針對不同的原代細胞和傳代細胞有各自特異的細胞類型特異性轉染液，為外源基因進入細胞核提供友好界面。 3、工作頻率 50-60Hz結合優(yōu)化轉染程序和細胞類型特異性轉染液進行的轉染，在50-60Hz的工作頻率中，能確保目的基因轉入細胞核的效率。 4、體積重量 30×2

8、3×11cm體積小，且輕便，攜帶方便。 2.5kg 5、轉染方式 直接把外源基因導入細胞核 非病毒介導的轉染 快捷、迅速的轉染，能在數(shù)小時內完成從實驗操作到結果分析全過程 6、轉染效率 高效率的轉染其它方法難以奏效的傳代細胞，在神經(jīng)生物學、腫瘤研究、免疫學、組織工程學及心血管疾病研究領域中倍受青睞 大多數(shù)細胞原代細胞的轉染效率為50-70 某些原代細胞，如人表皮纖維原細胞轉染效率超過90 7、轉染儀突出優(yōu)勢 世界唯一直接把外源基因導入細胞核的革命性轉染技術 世界唯一能高效轉染原代細胞和一般方法難以轉染細胞，如神經(jīng)細胞、血液細胞的非病毒介導的轉染技術 世界唯一能在數(shù)小時內完成從實驗操作到結果結果分析全過程的轉染技術 創(chuàng)新的全球共享細胞優(yōu)化轉染程序數(shù)據(jù)庫 高效轉染質粒DNA，siRNA和Oligo。 8、轉染儀基本技術原理 非病毒介導的轉染技術，儀器采用獨特的電轉參數(shù)（包括電流、電壓、電擊時間長短等）以內存的優(yōu)化轉染程序名體現(xiàn)，同時該技術的核心專利是細胞類型特異性的細胞核轉染液，即針對不同的原代細胞和傳代細胞有