致病性阿米巴原蟲疫苗研究進(jìn)展.docx

1、文章編號(hào):16732995(2019)050351_04致病性阿米巴原蟲疫苗研究進(jìn)展王寧寧化府韓漫漫制曲壽月位府姜曉明3®時(shí)文艷2®馮憲敏2.®金丹件（1.延邊大學(xué)醫(yī)學(xué)院j吉林延吉133002!2.吉林醫(yī)藥學(xué)院:吉林吉林13201313.北華大學(xué)檢驗(yàn)學(xué)院:'吉林吉林132013）摘要：阿米巴原蟲在自然界廣泛分布祐可通過糞一口途徑、黏膜直接接觸等多途徑進(jìn)行傳播的可產(chǎn)生特殊的酶類侵入并寄生在人體M由于早期診斷不及時(shí)、缺乏有效抗阿米巴感染的藥物、難以阻斷傳播途徑府所以預(yù)防至關(guān)重要用因此研發(fā)抗阿米巴原蟲感染的疫苗對(duì)疾病的預(yù)防與傳播具有重要意義用關(guān)鍵詞：溶組織阿米巴

2、。棘阿米巴§疫苗研究中圖分類號(hào)：R53文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A1溶組織內(nèi)阿米巴原蟲疫苗溶組織內(nèi)阿米巴是腸道寄生蟲n通過受污染的水和食物擴(kuò)散h感染人體并導(dǎo)致阿米巴病甘溶組織阿米巴病常見于衛(wèi)生條件差、缺乏潔凈水和營養(yǎng)不良的發(fā)展中國家口i成為主要的腹瀉疾病之一i也是發(fā)展中國家兒童死亡的主要原因：約90%的感染無明顯癥狀A(yù)其余10%表現(xiàn)為急性腹瀉、痢疾、阿米巴結(jié)腸炎和阿米巴肝膿腫（ALA）等疾?。慌R床上常規(guī)應(yīng)用硝基咪哇類衍生物治療溶組織內(nèi)阿米巴感染取得一定療效月但在發(fā)展中國家和地區(qū)。由于藥物昂貴、不良反應(yīng)多且不易獲得K使感染不能得到及時(shí)控制I丐因此開發(fā)溶組織內(nèi)阿米巴疫苗至關(guān)重要Jl.l半乳糖凝集素疫苗

3、候選物溶組織內(nèi)內(nèi)阿米巴具有獨(dú)特的毒力特性彳使其能夠適應(yīng)腸道內(nèi)不斷變化的環(huán)境并操縱宿主免疫監(jiān)視系統(tǒng)#其感染發(fā)生的關(guān)鍵在于原蟲與結(jié)腸黏液層的黏附結(jié)合J機(jī)體結(jié)腸的黏液層由MUC2黏蛋白組成i形成宿主機(jī)體防御的第一道屏障!這一過程足由原蟲表面半乳糖卞一乙?；鵳-半乳糖胺凝集素（galactoseNacetylDgalactosamineinhibitablelectirrGallectin）介導(dǎo)的i結(jié)合黏蛋白的半乳糖和N_乙酰半乳糖胺殘基高親和力結(jié)合N研究發(fā)現(xiàn)有幾種不同的溶組織內(nèi)阿米巴蛋白可作為潛在的疫苗H包括Gal/基金項(xiàng)目：吉林省科技廳國際合作項(xiàng)目（20160414050GH）j吉林省教育廳“十三

4、五”科學(xué)技術(shù)項(xiàng)目（JJKH20180823KJ）!吉林省大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)項(xiàng)目（201740）.作者簡介：王寧寧（1993-）-女（漢族）i碩士研究生.通信作者：馮憲敏（1976）；女（漢族）-教授博士.通信作者：金丹（1972-）1女漢族X教授i博士.GalNAc特異性凝集素和富含絲氨酸的蛋白質(zhì)#以及富含29kDa半胱氨酸的抗原目溶組織內(nèi)阿米巴疫苗研究最廣泛的抗原是GaFlectinfGaClectin是260kDa異源二聚體蛋白it具有較高的免疫原性I)由一個(gè)重亞基(170kDa(HgL)和一個(gè)輕亞基(31/35kDa-LgL)組成:'二者通過二硫鍵i分別與150kDa中間亞基非共價(jià)結(jié)

5、合iGallectin在寄生蟲黏附MUC2黏蛋白和靶向細(xì)胞中發(fā)揮主要作用彳導(dǎo)致接觸依賴性殺傷和吞噬作用°"因而成為重要的疫苗候選分子JGaFlectin可誘導(dǎo)樹突狀細(xì)胞成熟并促進(jìn)Th1細(xì)胞釋放白細(xì)胞介素一12和廠干擾素81!Petri等采用純化的天然Gallectin作為抗原i在沙鼠模型4*引發(fā)了86%的抗ALA保護(hù)作用H盡管取得一定陽性數(shù)據(jù)彳但分離純化出天然抗原仍是一個(gè)復(fù)雜性的難題鑒于此iSoong等口。1采用170kDa亞基富含半胱氨酸區(qū)域的重組形式aa758_1134-'作為抗溶組織內(nèi)阿米巳的亞單位疫苗被證明是有效的i并命名為LC3H研究發(fā)現(xiàn)ALA患者血清中I

6、gA抗體與LC3區(qū)域具有高親和力i可抑制寄生蟲對(duì)倉鼠卵巢細(xì)胞的黏附作用K證明抗體可通過阻止溶組織內(nèi)阿米巴對(duì)腸上皮細(xì)胞的黏附而起作用jGuo等口門利用GalGalNAc凝集素衍生的疫苗免疫小鼠r通過過繼轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)證明n這種凝集素疫苗保護(hù)是由t細(xì)胞介導(dǎo)的R而了一干擾素是機(jī)體抵抗阿米巴感染的因素LecA是位于重鏈亞基的富含半胱氨酸區(qū)域內(nèi)的第5781154個(gè)氨基酸片段它是黏附阻斷抗體的主要靶標(biāo)J鑒于此，'Gu。等口2】用從溶組織內(nèi)阿米巴分離的天然Gal/GalNAc凝集素和重組亞基“LecA”分別進(jìn)行免疫接種#免疫2周后。用滋養(yǎng)體對(duì)小鼠進(jìn)行腦內(nèi)攻擊f結(jié)果表明二者均具有免疫保護(hù)性寸使用天然凝集素對(duì)

7、小鼠腸道感染和腦感染的保護(hù)性分別為84%和100%ifLecA試驗(yàn)中分別為91%和34%月并在接受免疫接種的小鼠糞便中可檢測到抗凝集素IgA：'Barroso等口們開發(fā)了一種純化方法A通過優(yōu)化密碼子的方法制備高度純化的未標(biāo)記的LecAf以其免疫CBA小鼠N可有效阻斷溶組織內(nèi)阿米巴對(duì)盲腸的侵襲沖1.2溶組織內(nèi)阿米巴多絲氨酸蛋白溶組織內(nèi)阿米巴多絲氨酸蛋白（serinerichentamoebahistolyticaprotein-SREHP）由大量的絲氨酸殘基、8肽和12肽等多個(gè)保守序列組成實(shí)驗(yàn)證明SREHP可作為黏附素成為溶組織內(nèi)阿米巴滋養(yǎng)體的化學(xué)引誘物J分別用重組SREHP/麥芽糖融合

8、蛋白（組1）、重組麥芽糖融合蛋白/磷酸鹽緩沖鹽水（MBPPBS）（組2）免疫沙鼠！組1沙鼠產(chǎn)生針對(duì)天然SHEHP的抗體并且對(duì)重組SREHP產(chǎn)生了遲發(fā)型超敏反應(yīng)f對(duì)腹腔內(nèi)注入滋養(yǎng)體的沙鼠產(chǎn)生了64%和100%抗ALA保護(hù)j但是在MBPPBS免疫對(duì)照中未觀察到保護(hù)作用，證明了SREHP分子具有作為預(yù)防阿米巴感染的疫苗的潛力購11.3溶組織內(nèi)阿米巴29kDa抗原除GaClectin和SREHP外i溶組織內(nèi)阿米巴29kDa抗原（Eh29）也被認(rèn)為是抗溶組織內(nèi)阿米巴疫苗的主要靶蛋白FEH29是一種烷基氫過氧化物還原酶H參與由微生物或免疫細(xì)胞分泌的活性氧的解毒#研究表明:接種針對(duì)EH29的疫苗,54%的倉

9、鼠免受ALAC15；隨后使用與CTB偶聯(lián)的Eh29可刺激機(jī)體產(chǎn)生抗EH29特異性IgA和IgG抗體尤其對(duì)內(nèi)膜阿米巴病具有顯著的保護(hù)作用口6斗1.4溶組織內(nèi)阿米巴硫酸肝素結(jié)合蛋白和30kDa膠原結(jié)合蛋白疫苗最近新發(fā)現(xiàn)用于溶組織內(nèi)阿米巴疫苗設(shè)計(jì)的蛋白質(zhì)靶標(biāo)包括硫酸肝素結(jié)合蛋白（HSBP）和一個(gè)30kDa膠原結(jié)合蛋白（CBP30）：Kaur等口門從溶組織內(nèi)阿米巴中分離出與宿主肝素硫酸鹽蛋白結(jié)合的HSBPsi具有良好的免疫原性K初次接種就可刺激豚鼠產(chǎn)生抗HSBPsIgG和IgA的抗體B特別是分泌型IgA抗體）1在隨后的攻擊感染實(shí)驗(yàn)中抗體達(dá)到峰值N表明建立了免疫記憶N另有研究者使用與克氏錐蟲熱休克蛋白7

10、0kDa部分融合的重組CBP30免疫倉鼠#與未接種組相比A單獨(dú)接種重組CBP30或CBP30融合蛋白的倉鼠ALA形成減少70%1.5溶組織內(nèi)阿米巴DNA疫苗DNA疫苗的研發(fā)迅猛發(fā)展月將編碼特定目的抗原的DNA序列導(dǎo)入細(xì)菌質(zhì)粒中B并轉(zhuǎn)化至宿主細(xì)胞S目的基因表達(dá)并產(chǎn)生相應(yīng)的蛋白質(zhì)K而后被宿主細(xì)胞識(shí)別刺激機(jī)體產(chǎn)生相應(yīng)抗體口9；DNA疫苗己被證明可誘導(dǎo)強(qiáng)烈的體液免疫和細(xì)胞免疫彳并且在許多動(dòng)物模型中對(duì)病原體賦予了保護(hù)作用$一些優(yōu)化策略也可用于改進(jìn)DNA疫苗K刺激機(jī)體產(chǎn)生強(qiáng)烈的免疫應(yīng)答并抵抗寄生蟲感染2?！縥Gaucher等舊門以溶組織內(nèi)阿米巴GaClectin重亞基為靶點(diǎn)f并對(duì)其編碼基因的密碼子進(jìn)行優(yōu)化

11、彳構(gòu)建了新型的抗溶組織內(nèi)阿米巳的DNA疫苗N該DNA疫苗在小鼠體內(nèi)刺激產(chǎn)生了Th1型Ga凝集素特異性細(xì)胞免疫應(yīng)答i并可有效抑制滋養(yǎng)體在體外對(duì)靶細(xì)胞的黏附作用孑2棘阿米巴疫苗棘阿米巴是一種機(jī)會(huì)致病性阿米巴原蟲t其生活史簡單。包括包囊和滋養(yǎng)體兩個(gè)階段月棘阿米巴主要感染抵抗力低下的人群*通過破損的皮膚、損傷的眼結(jié)膜、泌尿生殖道等侵入并寄生在人體用主耍侵犯眼部和腦部組織B引起致盲性角膜炎和棘阿米巴腦炎N棘阿米巴性角膜炎己成為人類嚴(yán)重的致盲性角膜病之一用病情頑固、治療棘手且預(yù)后不良#發(fā)生本病的危險(xiǎn)因素主要有配戴角膜接觸鏡、眼部外傷、接觸污水及機(jī)體免疫力低下等匚曰I由于病變?cè)缙跓o明顯臨床癥狀N診斷困難導(dǎo)致

12、誤診并加劇病情惡化M最終只能通過手術(shù)摘除眼內(nèi)容物來治療嚴(yán)重影響病人的預(yù)后#因此預(yù)防棘阿米巴感染就尤為重要月棘阿米巴滋養(yǎng)體對(duì)角膜上皮的黏附是由廿露糖結(jié)合凝集素（mannosebindinglectinMBL）介導(dǎo)的無Garate等"們?cè)O(shè)計(jì)了一組對(duì)照實(shí)驗(yàn)f分別用MBP聯(lián)合載體B以及僅用載體免疫接種倉鼠用可有效抑制滋養(yǎng)體對(duì)角膜上皮細(xì)胞的黏附#從而提供對(duì)棘阿米巴感染的保護(hù)#此外彳有研究表明適應(yīng)性免疫應(yīng)答的補(bǔ)體固定抗體。不能破壞棘阿米巴滋養(yǎng)體或包囊寸而經(jīng)黏膜免疫刺激產(chǎn)生的分泌性IgA抗體巾具有殺死滋養(yǎng)體并能阻止其黏附到眼表面的作用沖但當(dāng)滋養(yǎng)體與角膜上皮黏附結(jié)合后再免疫接種E則無法發(fā)揮抗感染作用

13、C25l因此i'適應(yīng)性免疫應(yīng)答可以阻止感染過程中的第一步巾但棘阿米巴原蟲一旦進(jìn)入伯膜就不會(huì)起作用iAlizadeh等ms和研究發(fā)現(xiàn)甘露糖誘導(dǎo)的細(xì)胞病變蛋白（MIP133蛋白）對(duì)角膜上皮細(xì)胞具有細(xì)胞病變效應(yīng)并且在體外降解膠原蛋白#是引發(fā)角膜疾病所必需的沖并且它可能在棘阿米巴角膜炎的致病級(jí)聯(lián)反應(yīng)的后續(xù)步驟中發(fā)揮重要作用用因此成為重要的疫苗候選分子？研究表明'用MIP'133對(duì)倉鼠進(jìn)行黏膜免疫3艮淚中產(chǎn)生抗_MIP_133SIgA抗體i可有效阻斷中國倉鼠角膜的酶降解mij上述研究為抗阿米巴感染的疫苗帶來了希望J盡管這些研究提出了疫苗研發(fā)的靶蛋白彳但還需要進(jìn)一步的研究來闡明這些

14、蛋白在疾病中的發(fā)病機(jī)理和/或寄生蟲代謝中的作用H此外i尚需要更多的免疫試驗(yàn)來尋找適合動(dòng)物模型的最佳疫苗方案f參考文獻(xiàn)：1MONDALDi'HAQUER:SACKRB(etal.Attributionofmalnutritiontocausespecificdiarrhealillness:evidencefromaprospectivestudyofpreschoolchildreninMirpurfDhakaBangladeshJ.AmJTropMedHyg-2009-80(5) :824"826.E2HIENBT;，TRANGT-SCHEUTZFetal.Diarrhoe

15、agenicEscherichiacoliandothercausesofchildhooddiarrhoea:acasecontrolstudyinchildrenlivinginawastewateruseareainHanoiVietnamJ.JMedMicrobiol2007,56(8):1086、096.3 HAQUERMONDALD;KIRKPATRICKBD;etal.EpidemiologicandclinicalcharacteristicsofacutediarrheawithemphasisonEntamoebahistolyticainfectionsinprescho

16、olchildreninanurbanslumofDhakaiBangladeshJ.AmJTropMedHyg-2003-69(4):398405.4 BANSALD-MALLAN：MAHAJANRC.DrugresistanceinamoebiasistJ.IndianJMedRes；2006;，123(2):115_118.5 MORTIMERLCHADEEK.TheimmunopathogenesisofEntamoebahistolyticaJ.ExpParasitoH2010-126(3):366_380.6 DHARMANI9SRIVASTAVAViKISSOON_SINGHV(

17、etal.RoleofintestinalmucinsininnatehostdefensemechanismsagainstpathogensJ.JInnateImmun-200911(2):123、35.7 HUSTONCD；BOETTNERDRMILLERSIMSV:etal.ApoptotickillingandphagocytosisofhostcellsbytheparasiteEntamoebahistolyticaJ1InfectImmun-2003-71(2):964_972.8 IVORYCP-CHADEEK.ActivationofdendriticcellsbytheG

18、allectinofEntamoebahistolyticadrivesTh1responsesinvitroandinvivoJ.EurJImmunol12007'37(2):385_394.9 PETRIWAJrfRAVDINJI.ProtectionofgerbilsfromamebicliverabscessbyimmunizationwiththegalactosespecificadherencelectinofEntamoebahistolyticaJ.InfectImmuni1991-59(1):97101.10 SOONGCJ-KAINKC-ABD_ALLAM-eta

19、l.ArecombnantcysteinerichsectionoftheEntamoebahistolyticagaIactoseinhibitablelectinisefficaciousasasubunitvaccineinthegerbilmodelofamebicliverabscessLJ.InfectDisil995-171(3):645651.11 HOUPTE-BARROSOL(LOCKHARTL-etal.PreventionofintestinalamebiasisbyvaccinationwiththeEntamoebahistolyticaGalGalNaclecti

20、nJ.Vaccine2004f22(56):6H_617.12 GUOXVBARROSOL?BECKERSM-etal.ProtectionagainstintestinalamebiasisbyarecombinantvaccineistransferablebyTcellsandmediatedbygammainterferonJ.InfectImmun;2009;77(9):3909_3918.13 BARROSOLiABHYANKARMiNOORZietal.Expressionpurification-andevaluationofrecombinantLecAasacandidat

21、eforanamebiccolitisvaccineJ.Vaccine，201432(10):1218'1224.14 ZHANGCIESLAKPR-STANLEYSL-Jr.ProtectionofgerbilsfromamebicliverabscessbyimmunizationwitharecombinantEntamoebahistolyticaantigenJ.InfectImmun-1994f62(4):1166_1170.15 SOONGCJ；TORIANBE-ABDALLAMDietal.Protectionofgerbilsfromamebicliverabsces

22、sbyimmunizationwithrecombinantEntamoebahistolytica29kilodaltonantigenJ.InfectImmun-1995*63(2):472477.16 CARREROJCfCONTRERAS_ROJASA：SANCHEZ-HERNANDEZB-etal.Protectionagainstmurineintestinalamoebiasisinducedbyoralimmunizationwiththe29kDaantigenofEntamoebahistolyticaandcholeratoxinJ.ExpParasitoL2010M26

23、(3):359365.17 KAURU-KHURANASAIKIAUNietal.ImmunogenicityandprotectiveefficacyofheparansulphatebindingproteinsofEntamoebahistolyticainaguineapigmodelofintestinalamoebiasisJ.ExpParasitol-2013*135(3):486"496.18 GONZALEZVAZQUEZMC;CARABARIN_LIMAA(BAYL6NPACHECOLetal.Obtainingofthreerecombinantantigens

24、ofEntamoebahistolyticaandevaluationoftheirimmunogenicabilitywithoutadjuvantinahamstermodelofimmunoprotectionJ.ActaTrop2012122(2):169、76.19 DONNELLYJJiWAHRENB<LIUMA.DNAvaccines:progressandchallengesJ.JImmunol-2005(175(2):633'639.20 IVORYCiCHADEEK.DNAvaccines:designingstrate第40卷第測吉林醫(yī)藥學(xué)院學(xué)報(bào)Vol.40

25、No.53542019年10月JournalofJilinMedicalUniversityOct.2019giesagainstparasiticinfectionsJ.GenetVaccinesTher-2004,2(1):17.21 GAUCHERD-CHADEEK.ConstructionandimmunogenicityofacodonoptimizedEntamoebahistolyticaGallectin"basedDNAvaccineJ.Vaccine-2002：20(27I28):32443253.22 GRAFFIS;PERETZAlJABALYH-etal.A

26、canthamoebakeratitisEJ.IsrMedAssocJ'2013i15(4)82185.23 JAISONPL;CAOZJiPANJWANIN.BindingofAcan'thamoebatocorrectedmannoseglycoproteinsofcornealepithelium:effectofinjuryJ.CurrEyeRes;1998-17(8):770_776.24 GARATEM"ALIZADEHHfNEELAMS：etal.OralimmunizationwithAcanthamoebacastellaniimannosebind

27、ingproteinamelioratesamoebickeratitisJ.InfectImmunf2006-74(12):7032_7034.25 CLARKEDWNIEDERKORNJY.TheimmunobiologyofAcanthamoebakeratitisJ.MicrobesInfectf2006-8(5):14OO'14O5.26 HURTM-NIEDERKORNJ#ALIZADEHH.EffectsofmannoseonAcanthamoebacastellaniiproliferationandcytolyticabilitytocornealepithelial

28、cellsJ.InvestOphthalmolVisSci-2003144(8):34243431.27 HURTMiNEELAMS-NIEDERKORNJ；etal.PathogenicAcanthamoebasppsecreteamannoseinducedcytolyticproteinthatcorrelateswiththeabilitytocausediseaseJ.InfectImmun-2003；71(11):62436255.28 ALIZADEHH；NEELAMS，NIEDERKORNJY.EffectofimmunizationwiththemannoseinducedAcanthamoebaproteinandAcanthamoebaplasminogenactivatorinmitigatingAcanthamoebakeratitisJ.InvestOphthalmolVisSci;2007-48(12):55975604.(收稿日期：2019_01_17)文章編號(hào)