氯霉素眼藥水的高效液相色譜分析

1、氯霉素眼藥水的高效液相色譜分析氯霉素眼藥水的高效液相色譜分析藥物分析實(shí)驗(yàn)十藥物分析實(shí)驗(yàn)十眼藥水中的氯霉素的測(cè)定眼藥水中的氯霉素的測(cè)定 氯霉素滴眼液其主要成份氯霉素滴眼液其主要成份氯霉素氯霉素，輔料為硼酸、硼砂、氯化鈉、防腐劑輔料為硼酸、硼砂、氯化鈉、防腐劑等，為無色或幾乎無色的澄明液體。等，為無色或幾乎無色的澄明液體。 測(cè)定氯霉素滴眼液中氯霉素的含測(cè)定氯霉素滴眼液中氯霉素的含量，由于滴眼液中存在的輔料的干擾，量，由于滴眼液中存在的輔料的干擾，首先要分離得到氯霉素的純樣品。因首先要分離得到氯霉素的純樣品。因此，采用此，采用高效液相色譜法高效液相色譜法來進(jìn)行測(cè)試，來進(jìn)行測(cè)試，用用外標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線法外標(biāo)

2、標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量。定量。氯霉素氯霉素成份成份 A成份成份 A峰面積峰面積A樣品樣品峰面積峰面積A對(duì)照對(duì)照外標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線法外標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線法色譜定量：色譜定量：峰面積與樣品濃度峰面積與樣品濃度成正比。成正比。一系列已一系列已知濃度的知濃度的氯霉素溶氯霉素溶液液眼藥水稀眼藥水稀釋液釋液CAi濃度：濃度： C1，C2，C3，C4，C5峰面積：峰面積：A1，A2，A3，A4，A5液相液相色譜的基本流程圖色譜的基本流程圖流動(dòng)相流動(dòng)相 高壓高壓泵泵色譜柱色譜柱檢測(cè)器檢測(cè)器 泵泵輸輸液液分離分離 檢測(cè)檢測(cè) 計(jì)算機(jī)計(jì)算機(jī)AEGBCDF進(jìn)樣閥進(jìn)樣閥進(jìn)樣進(jìn)樣預(yù)備柱預(yù)備柱氯霉素含量的測(cè)定氯霉素含量的測(cè)定 精密吸取眼藥水精密

3、吸取眼藥水0.5mL于于50mL容量瓶中，用甲醇稀釋至容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度。刻度。1、對(duì)照品溶液配制、對(duì)照品溶液配制2、眼藥水樣品配制、眼藥水樣品配制 精密稱取精密稱取5.0mg氯霉素樣品于氯霉素樣品于10mL容量瓶中，用甲醇溶容量瓶中，用甲醇溶解定容，配成解定容，配成0.1mg/mL母液。分別移取母液。分別移取1mL，2mL，3mL，4mL，5mL母液于母液于10mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，配成容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，配成0.01，0.02，0.03，0.04，0.05mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。的標(biāo)準(zhǔn)溶液。色譜操作步驟：色譜操作步驟：1、依次打開檢測(cè)器、泵的開關(guān)、依次打開檢測(cè)器、泵

4、的開關(guān)2、打開電腦主機(jī)，打開操作界面、打開電腦主機(jī)，打開操作界面3、排氣泡、排氣泡4、設(shè)置色譜條件，打開泵開關(guān)、設(shè)置色譜條件，打開泵開關(guān)5、讓流動(dòng)相沖洗色譜系統(tǒng)，至色譜基線水平，約半小時(shí)、讓流動(dòng)相沖洗色譜系統(tǒng)，至色譜基線水平，約半小時(shí)6、基線調(diào)零，填寫數(shù)據(jù)文件名及信息、基線調(diào)零，填寫數(shù)據(jù)文件名及信息7、進(jìn)樣并記錄數(shù)據(jù)、進(jìn)樣并記錄數(shù)據(jù)8、數(shù)據(jù)處理及打印報(bào)告、數(shù)據(jù)處理及打印報(bào)告9、沖洗色譜系統(tǒng)約半小時(shí)，關(guān)機(jī)。、沖洗色譜系統(tǒng)約半小時(shí)，關(guān)機(jī)。色譜條件：色譜條件：色譜儀色譜儀 島津島津LC-15C高效液相色譜高效液相色譜色譜柱色譜柱 C18柱（柱（5m，1504.6mm或或2504.6mm）柱溫柱溫 室

5、溫室溫流動(dòng)相流動(dòng)相 甲醇甲醇 水（水（60 40）（）（150短柱）短柱） 甲醇甲醇 水（水（80 20）（）（250長(zhǎng)柱）長(zhǎng)柱）流速流速 1.000ml/min波長(zhǎng)波長(zhǎng) 272nm泵泵柱柱進(jìn)樣進(jìn)樣排放排放泵泵排放排放柱柱進(jìn)樣進(jìn)樣定量環(huán)定量環(huán)六通閥六通閥Inject：插入針頭：插入針頭Load：打入樣品：打入樣品Inject：樣品進(jìn)入色譜：樣品進(jìn)入色譜3、色譜測(cè)試、色譜測(cè)試 用清洗溶劑清洗用清洗溶劑清洗微量進(jìn)樣針三次，用微量進(jìn)樣針三次，用待測(cè)溶液潤(rùn)洗三次，待測(cè)溶液潤(rùn)洗三次，吸取待測(cè)溶液吸取待測(cè)溶液25L，進(jìn)樣，得色譜圖。進(jìn)樣，得色譜圖。數(shù)據(jù)記錄數(shù)據(jù)記錄標(biāo)準(zhǔn)曲線標(biāo)準(zhǔn)曲線：隔兩分鐘進(jìn)樣一：隔兩分鐘進(jìn)樣一次，濃度從低到高，記錄在次，濃度從低到高，記