水套式二氧化碳細胞培養(yǎng)箱使用標準操作流程

1、文件等級：內(nèi)部公開文件文件編號：AJ-XZ-150701Thermo Forma3111/3131水套式細胞培養(yǎng)箱使用標準操作流程1. 目的規(guī)范使用本公司水套式CO2細胞培養(yǎng)箱Thermo Forma3111及水套式CO2、N2細胞培養(yǎng)箱Thermo Forma3131（除特殊注明外，以下簡稱細胞培養(yǎng)箱）操作流程，確保本公司細胞技術(shù)員正確使用細胞培養(yǎng)箱。2. 范圍和職責儀器使用操作人員應遵循本程序操作及使用規(guī)范，適用于使用本公司細胞培養(yǎng)箱的所有工作人員。3. 儀器設(shè)備及試劑Thermo Forma3111水套式CO2細胞培養(yǎng)箱Thermo Forma3131水套式CO2、N2細胞培養(yǎng)箱CO2減

2、壓閥（上海減壓器廠、YQT-731）N2減壓閥（上海減壓器廠、YQD-3）75%酒精84消毒液CO2及N2溫度計4. CO2培養(yǎng)箱安裝及調(diào)試4.1根據(jù)量程購買合適的CO2及N2減壓閥，細胞培養(yǎng)箱位置擺放：應遵循方便使用原理，不得靠近細胞室出入口擺放，應擺放于本公司細胞室相對于更加潔凈的區(qū)域，且必須注意CO2及N2鋼瓶位置、培養(yǎng)箱開門方向和倒置顯微鏡位置，方便查看細胞狀態(tài)及換氣；4.2 CO2/氮鋼瓶擺放：應遵循鋼瓶容易更換，導氣管長度合適原理；4.3 水套式細胞培養(yǎng)箱在使用前必須對箱體進行超純水加注，將隨機提供的橡膠管連接超純水儀和細胞培養(yǎng)箱體左上側(cè)加水口，打開超純水儀閥門，緩慢給水箱加水，最

3、好能先進行超純水滅菌處理，以超純水剛好從最高水位線水溢出為止；4.4細胞室進行第一遍消毒或熏蒸后，紫外照射30分鐘以上；4.5培養(yǎng)箱滅菌：本公司細胞培養(yǎng)箱不能進行自動除菌，必須進行手動除菌，箱體內(nèi)隔板可以進行拆除單獨清洗及高溫高壓滅菌，不能拆除的部件先用75%酒精擦拭一遍，自然晾干，然后用0.15%84消毒液再次擦拭，自然晾干，最后用75%酒精再擦拭最后一遍，敞開培養(yǎng)箱過夜，細胞室進行第二次滅菌操作；4.6第二天滅菌進入細胞室后，關(guān)上艙門，用導氣管一端接入細胞培養(yǎng)箱進氣口，一端連接CO2/N2減壓閥，再通過減壓閥上面的螺紋用扳手將減壓閥連接到鋼瓶上，旋緊至不漏氣為止；4.7培養(yǎng)箱校準（以The

4、rmo Forma 3111CO2培養(yǎng)箱為例）：打開細胞培養(yǎng)箱電源，放入一支經(jīng)過消毒處理后的溫度計，啟動自檢程序，待程序穩(wěn)定后，進入以下設(shè)置；4.7.1按 Mode 鍵使光標移至 Cal模式,，此時顯示屏顯示“Cal CALIBRATE”， 按  鍵使顯示屏顯示“TEMPCAL  XX.X”, 按動和鍵調(diào)整數(shù)字（即溫度計讀數(shù)），并按動Enter鍵加以保存，按動 Mode 鍵使光標移至 Run 模式退出設(shè)置。注意：一般情況下，細胞培養(yǎng)箱的起始溫度不需要校準，若起始溫度與溫度計顯

5、示溫度不符時才需要進行起始溫度校準。4.7.2 按 Mode 鍵使光標移至 Set 模式, 此時顯示屏顯示“SET POINTS”, 按  鍵使顯示屏顯示“TEMP  XX.X”, 再按 和 鍵直至顯示“TEMP 37.0”后按“ENTER”鍵確認，按動 Mode 鍵使光標移至 Run 模式退出設(shè)置。 此時 Heat燈（即加熱燈）會亮,  箱內(nèi)溫度會慢慢升高至37。注意：若環(huán)境溫度低，升

6、溫至37是一個比較漫長的過程，且必須要等溫度升至37才能設(shè)置起始CO2濃度。4.7.3按 Mode 鍵使光標移至 Cal模式，此時顯示屏顯示“Cal CALIBRATE”，按動和鍵使顯示屏顯示“CO2 CAL   XX.X”，按動和鍵直至CO2 CAL 0%，并按動Enter鍵加以保存，按動 Mode 鍵使光標移至 Run 模式退出設(shè)置。4.7.4 按 Mode 鍵使光標移至Set模式，  此時顯示屏顯示“SET  POINT

7、S”，按動和鍵使顯示屏顯示“TEMP   XX.X ”，設(shè)置溫度，按動和鍵可以選擇所需的數(shù)字（一般細胞培養(yǎng)用溫度為37），并按動Enter鍵加以保存。按動和鍵使顯示屏顯示“OTEMP  XX.X ”，設(shè)置超溫報警溫度，比設(shè)定高0.5-1即可，并按動Enter鍵加以保存。按動和鍵使顯示屏顯示“CO2  XX.X %”設(shè)定CO2濃度（細胞培養(yǎng)用CO2濃度一般為5%），并按動Enter鍵加以保存，按動 Mode 鍵使光標移至 Run 模式退出設(shè)置。4.7.5待溫度達到設(shè)定值后。將CO2鋼瓶開

8、啟，開啟前應先關(guān)閉減壓閥，防止減壓閥輸出壓力過高導致輸氣橡皮管暴裂，減壓閥上進氣壓力表指示鋼瓶內(nèi)CO2壓力，然后緩慢地順時針擰減壓閥旋扭。使減壓閥輸出壓力指示為0.05Mpa左右，指針處于刻度線中間。待溫度和CO2濃度達到設(shè)定值后，放入水盤，使?jié)穸确弦蟆?.7.6 待一切準備就緒即可進行細胞培養(yǎng)，可先用一兩株細胞試用培養(yǎng)箱，確定無菌后即可進行大規(guī)模培養(yǎng)。5. 儀器操作及故障報警顯示說明5.1.1-Mode為模式鍵，按動Mode鍵，光標會在Run、Set、Cal、Config四種模式中移動。5.1.2Run模式：Run為運行模式：正常運行時顯示“CLASS  100”或者

9、“SYSTEM  OK”，有故障時會顯示各種報警信息。5.1.3Set模式：“SET  POINTS”為設(shè)定模式，按動和鍵可以選擇里面的設(shè)定功能，按動和鍵可以選擇所需的數(shù)字，并按動Enter鍵加以保存。（1）TEMP   XX.X 為設(shè)定溫度功能； （2）OTEMP  XX.X 為設(shè)定超溫報警功能，比設(shè)定溫度高0.5-1即可；（3）CO2  XX.X %為設(shè)定CO2濃度功能。5.1.4Cal模式：“Cal CALIBRATE”為校準模式，按動和鍵可以選擇里面的設(shè)定功能，按動和鍵可以選擇

10、所需的數(shù)字，并按動Enter鍵加以保存。（1）TEMPCAL   XX.X為校準溫度功能；（2）CO2 CAL   XX.X為CO2濃度調(diào)零功能5.1.5Config模式：“SYS  CONFIG”為系統(tǒng)配置模式，按動和鍵可以選擇里面的設(shè)定功能，按動和鍵可以選擇所需的數(shù)字，并按動Enter鍵加以保存。（1）AUDIBLE  ON/OFF 為聲響報警功能（按動和鍵可以選擇開啟/關(guān)閉）；（2）NEW  HEPA  XXX 為更換HEPA過濾

11、器的剩余天數(shù)功能（按動Enter鍵重新安排天數(shù) ）；（3）REPL  HEPA  XX  為設(shè)定更換HEPA過濾器的剩余月數(shù)功能（最高月數(shù)為12）（4）ACC CODE XXX為設(shè)定操作鎖定模式功能，000為取消密碼鎖定；（5）TEMP LO XX.X為設(shè)定溫度的低限報警功能；（6）TEMP  HI   XX.X為設(shè)定溫度的高限報警功能；（7）TMP  RLY  ON/OFF為附加裝置功能，與標準配置無關(guān)；（8）CO

12、2  LO  X.X  % 為設(shè)定CO2濃度的低限報警功能；（9）CO2  HI   X.X  % 為設(shè)定CO2濃度的高限報警功能；（10）CO2  RLY  ON/OFF為附加裝置功能，與標準配置無關(guān)；（11）T/C  ZR#  -XXXX為確認新CO2熱導探頭功能，此為ZERO數(shù)字確認；（12）T/C  SP#  -XXXX

13、為確認新CO2熱導探頭功能，此為SPAN數(shù)字確認；（13）RS   485  XX  為附加裝置功能，與標準配置無關(guān)。5.1.6 -加熱和CO2進氣顯示：（1）Temp顯示屏為溫度顯示。（2）Heat為加熱燈，燈亮表示正在加熱，燈滅表示停止加熱。（3）% CO2顯示屏為CO2濃度顯示。（4）Inject為CO2進氣燈，燈亮表示正在進氣，燈滅表示停止進氣。5.1.7 故障報警顯示：Silence鍵功能為故障報警消聲，報警時有紅燈閃爍，同時有嘀嘀聲響，按動此鍵可以將報警聲音暫停，如果故障在15分鐘內(nèi)

14、不能解決，報警聲響會再次響起：（1）SYS  IN  OTEMP 為超溫報警，即時報警； （2）CO2  SNSR  ERR 為CO2探頭故障，即時報警；（3）REPLACE  HEPA   為更換HEPA過濾器，即時報警；（4）ADD  WATER為缺水報警，即時報警； （5）DOOR  OPEN 為玻璃內(nèi)門報警，延時15分鐘報警； （6）CO2 

15、0;IS  HIGH  為CO2濃度的高限報警，延時15分鐘報警；（7）CO2  IS  LOW為CO2濃度的低限報警，延時15分鐘報警； （8）TEMP  IS  HIGH  為溫度的高限報警，延時15分鐘報警；（9）TEMP  IS  LOW為溫度的低限報警，延時15分鐘報警。6. 操作步驟1、 進入細胞室前必須進行衣服更換，穿上白大褂，換好拖鞋或鞋套，進入細胞室后即戴上無粉乳膠手套，用75%酒精對手套

16、進行消毒處理。2、 細胞培養(yǎng)箱的門分為外門和玻璃內(nèi)門，外門采用的是密封條技術(shù)，內(nèi)門是玻璃門，有門卡卡住。 開啟箱門前，請先對箱體外門位置噴灑75%酒精，然后一手抓住外門的邊，一手內(nèi)門外延，然后稍微用力即可打開外門，切勿用力過猛，打開最大角度為90°。隨后向上旋轉(zhuǎn)門卡即可打開玻璃內(nèi)門，雙手將細胞培養(yǎng)瓶（皿）端出，將細胞培養(yǎng)瓶（皿）放在超凈工作臺上，隨后關(guān)閉箱門。然后將細胞放在在倒置顯微鏡上觀察細胞狀態(tài)，以確定是否進行傳代等操作。3、 日常維護：從培養(yǎng)箱取放物品前，用酒精清潔雙手（或手套），盡量縮短開門時間和減少開門次數(shù)。 經(jīng)常檢查水套水位，假如水位低就要進行超純水加

17、注；-培養(yǎng)箱中的空氣是經(jīng)過過濾的潔凈空氣。長時間敞開或頻繁開關(guān)培養(yǎng)箱，容易造成污染。 定期檢查二氧化碳鋼瓶氣體氣壓情況，在即將用完前進行換氣操作；HEPA過濾器一般使用時間一般為半年，可手動調(diào)節(jié)到12個月，到期后，細胞培養(yǎng)箱顯示屏會顯示“REPLACE  HEPA ”，此時必須更換HEPA過濾器。培養(yǎng)箱需要每隔一段時間（一般為三個月或半年）進行一次箱體除菌和校正CO2濃度及溫度，每次開關(guān)培養(yǎng)箱電源后必須進行CO2濃度及溫度的重新校正。培養(yǎng)瓶皿放入培養(yǎng)箱前，用酒精消毒表面，并稍等至酒精揮發(fā)后再放入，以免培養(yǎng)箱內(nèi)滯留過多乙醇蒸氣。用肥皂、清水和實驗室常使用的消毒劑來清洗增濕盤。用蒸餾和濃度為70的酒精沖洗增濕盤。增濕盤可進行高壓滅菌。頻繁將細胞拿出觀察，容易給培養(yǎng)箱造成污染，同時也會影響細胞生長條件的恒定。 一旦發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)箱出現(xiàn)報警或其他異常情況，請及時按照操作說明進行處理