研究生進(jìn)修課程臨床病理學(xué)復(fù)習(xí)VIP

1、病理復(fù)習(xí)1 .請(qǐng)結(jié)合自己的專業(yè)，簡(jiǎn)單設(shè)計(jì)一個(gè)免疫組織化學(xué)標(biāo)記的方案來(lái)研究一個(gè)課題.（一抗和二抗的名稱和來(lái)源、一抗的定位預(yù)測(cè)；實(shí)驗(yàn)方案、生物學(xué)意義和臨床意義、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)（每個(gè)對(duì)照組的意義）、結(jié)果判斷。一抗：STK15（Aurora-a）多克隆抗體（兔抗人）二抗：二步法抗兔通用型免疫組化檢測(cè)試劑盒一抗的定位預(yù)測(cè)：表達(dá)在細(xì)胞漿中實(shí)驗(yàn)方案：選擇正常卵巢組織、卵巢良性腫瘤、卵巢惡性腫瘤組織三組石蠟標(biāo)本切片。通過(guò)抗體標(biāo)記STK15（Aurora-a）,經(jīng)過(guò)免疫組化染色后根據(jù)染色顆粒的強(qiáng)度與分布來(lái)判定Aurora-a在細(xì)胞漿中的表達(dá)結(jié)果。生物學(xué)意義：Aurora-a在人類多個(gè)腫瘤細(xì)胞系內(nèi)被發(fā)現(xiàn)過(guò)度表達(dá)，是一種

2、與中心體異常密切相關(guān)的基因，其過(guò)度表達(dá)導(dǎo)致中心體過(guò)度復(fù)制，從而引起染色體分離異常，導(dǎo)致細(xì)胞分裂阻滯，形成異倍體，引起抑癌基因的缺失或癌基因的獲得或激活，從而引起細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化，促進(jìn)腫瘤的發(fā)生。臨床意義：Aurora-a的異?？赡芘c惡性腫瘤的病理特點(diǎn)、臨床分期、及預(yù)后有某些相關(guān)性。它在早期腫瘤中均有陽(yáng)性表達(dá)，表明Aurora-a蛋白水平的改變?cè)诼殉舶┲惺浅０l(fā)事件，可能代表了卵巢癌的早期病變，在卵巢癌的發(fā)病中起重要作用。抑制Aurora-a激酶的活性有可能成為一個(gè)治療腫瘤的有效手段。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)：通過(guò)設(shè)立卵巢惡性腫瘤、卵巢良性腫瘤和正常卵巢組織的對(duì)照組，對(duì)比各組所研究Aurora-a在不同組織中表達(dá)的差

3、異，進(jìn)而得出實(shí)驗(yàn)結(jié)論。結(jié)果判斷：采用S-P免疫組化染色后，利用電腦的病理圖文報(bào)告分析系統(tǒng)進(jìn)行結(jié)果判讀，對(duì)染色結(jié)果定量分析，記各組織片內(nèi)腫瘤細(xì)胞Aurora-a蛋白的表達(dá)情況。2 .免疫組化的應(yīng)用范圍：（1）提高病理診斷準(zhǔn)確性（2）對(duì)疾病的預(yù)后和治療的意義（3）癌基因蛋白的應(yīng)用（4）對(duì)腫瘤增生程度的評(píng)價(jià)ki67PCNA（5）微小病灶的發(fā)現(xiàn)微小癌微小病灶（如羊水栓塞）（6）在腫瘤分期上的意義（7）指導(dǎo)腫瘤治療（8）免疫性疾病的輔助診斷（9）病原微生物的檢測(cè)3 .ABC復(fù)合物：ABC法是利用卵白素與生物素特有的高度親和力這一生物學(xué)性質(zhì)，先將生物素與辣根過(guò)氧化物酶（HRP）結(jié)合，形成生物素化HRP然后

4、與卵白素按一定比例混合，形成ABCM合物。卵白素-生物素-過(guò)氧化物酶復(fù)合物。4 .何謂抗原修復(fù)組織在制作過(guò)程中，由于化學(xué)試劑的作用封閉了抗原，又由于熱的作用致使部分抗原的肽鏈發(fā)生扭曲，致使在免疫組化的染色過(guò)程中不能將其顯示出來(lái)，為了解決上述的問(wèn)題，利用化學(xué)試劑和熱的作用將這些抗原重新暴露出來(lái)或修正過(guò)來(lái)的過(guò)程稱為抗原修復(fù)。5 .掌握免疫組化在臨床上應(yīng)用的初步方案。A:已知的特異性抗體或抗原能特異性結(jié)合。B:通過(guò)化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記于結(jié)合后的特異性抗體上的顯示劑，如酶，金屬離子、同位素等，顯示一定的信號(hào)（如：顏色）。C:借助顯微鏡、熒光顯微鏡或電子顯微鏡觀察其顏色變化，從而在抗原抗體結(jié)合部位確定組織、細(xì)

5、胞結(jié)構(gòu)。6 .“套餐式”免疫標(biāo)記：免疫組織化學(xué)技術(shù)以抗原抗體反應(yīng)為其理論基礎(chǔ)，對(duì)腫瘤的診斷和鑒別診斷有重要作用。目前常用抗體分為上皮性、間葉組織、神經(jīng)及神經(jīng)內(nèi)分泌、淋巴細(xì)胞標(biāo)志物等四類。由于腫瘤類型極多，部分腫瘤的診斷和分型又極其困難，因此診斷一些腫瘤的免疫組化方案必須是“套餐式”的，即每一種組織的標(biāo)記物必須用2種以上的抗體，除了能夠陽(yáng)性正面證實(shí)的抗體，還要有能陰性反面證實(shí)的抗體。例如：a.Keratin,Vimentin,LCA,S100四種抗體組合，Keratin陽(yáng)性且其它陰性的結(jié)果可以篩選出可疑癌或生殖細(xì)胞瘤；Vimentin和LCA陽(yáng)性的結(jié)果可以篩選出可疑淋巴瘤；Vimentin和S1

6、00陽(yáng)性的結(jié)果可以篩選出可疑神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤；Vimentin陽(yáng)性的結(jié)果可以篩選出可疑肉瘤。b.在Keratin陽(yáng)性的腫瘤中，CK17和CK18陽(yáng)性的結(jié)果提示移行細(xì)胞癌和某些管狀腺癌；CK17陽(yáng)性和CK18陰性的結(jié)果提示鱗癌、皮膚、鼻咽、食道癌等；CK17陰性和CK18陽(yáng)性的結(jié)果提示腺癌。7 .分子病理學(xué)臨床應(yīng)用的進(jìn)展，舉例說(shuō)明。臨床病理學(xué)的發(fā)展趨向：三段式診斷：形態(tài)學(xué)診斷+免疫學(xué)標(biāo)記+分子診斷。在經(jīng)典病理學(xué)的基礎(chǔ)上，采用現(xiàn)代輔助手段，提高病理診斷率和預(yù)測(cè)（預(yù)后）率。臨床分子病理學(xué)常用方法：免疫組織化學(xué)，基因克隆性重排的檢測(cè)，F(xiàn)ISH及CGH等位基因不平衡分析，雜合性缺失（LOH的檢測(cè)，微衛(wèi)星D

7、NA穩(wěn)定性（MSD的檢測(cè)。I.TUNEL-免疫組化在細(xì)胞凋亡檢測(cè)中的應(yīng)用；2.免疫組化多重標(biāo)記的應(yīng)用，臨床上IgH和TC睦因單克隆檢測(cè)在淋巴瘤的分子診斷中普遍應(yīng)用。當(dāng)前分子病理學(xué)技術(shù)在臨床的實(shí)際應(yīng)用：肺癌的分子病理學(xué)（60%-85%的NSCLCB癌細(xì)胞存在EGF煢變/過(guò)表達(dá)，這部分患者接受腫瘤分子靶向治療（EGFR卬制劑）的臨床療效優(yōu)于常規(guī)化療），胃腸道間質(zhì)瘤（GIST）的分子病理學(xué)（C-kit突變是目前普遍認(rèn)可的確定GIST的特異敏感指標(biāo)），乳腺癌的分子病理學(xué)（30%勺浸潤(rùn)性乳腺癌和70%勺導(dǎo)管原位癌存在Her-2基因過(guò)表達(dá)。Her-2陽(yáng)性同時(shí)預(yù)示著腫瘤對(duì)內(nèi)分泌治療和常規(guī)CMF案相對(duì)耐藥。注

8、射用曲妥珠單抗（Herceptin）是第一個(gè)用于治療Her-2FISH陽(yáng)性乳腺癌患者的分子靶向藥物。），結(jié)直腸癌的分子病理學(xué)（對(duì)K-ras基因第二、三外顯子（包括12號(hào)、13號(hào)、61號(hào)密碼子）突變位點(diǎn)進(jìn)行檢測(cè)，為結(jié)直腸癌患者提供準(zhǔn)確可靠的用藥指導(dǎo)。），惡性淋巴瘤的分子病理學(xué)（許多淋巴瘤治療相關(guān)的靶點(diǎn)、通路，也相應(yīng)地研制出了許多針對(duì)相應(yīng)靶點(diǎn)和通路的藥物。）8 .生物信息學(xué)隨著人類基因組計(jì)劃的實(shí)施，通過(guò)基因組測(cè)序、蛋白質(zhì)序列和結(jié)構(gòu)解析等實(shí)驗(yàn)，分子生物學(xué)家提供了大量的有關(guān)生物分子的原始數(shù)據(jù)，需要利用現(xiàn)代計(jì)算技術(shù)對(duì)這些原始數(shù)據(jù)進(jìn)行收集、整理、管理以便檢索使用，因而出現(xiàn)了生物信息學(xué)。生物信息學(xué)是多學(xué)科的

9、交叉產(chǎn)物，涉及生物、數(shù)學(xué)、物理、計(jì)算機(jī)科學(xué)、信息科學(xué)等多個(gè)領(lǐng)域。狹義的講，生物信息學(xué)是對(duì)生物信息的獲取、存儲(chǔ)、分析和解釋；計(jì)算生物學(xué)則是指為實(shí)現(xiàn)上述目的而進(jìn)行的相應(yīng)算法和計(jì)算機(jī)應(yīng)用程序的開(kāi)發(fā)。這兩門學(xué)科之間沒(méi)有嚴(yán)格的分界線，統(tǒng)稱為生物信息學(xué)。9 .結(jié)合自己專業(yè),利用生物信息學(xué)，查找XX（疾病+基因）在國(guó)內(nèi)外的研究現(xiàn)狀。寫出結(jié)論。有關(guān)子宮頸腺癌與鱗狀細(xì)胞癌中TP53基因突變的系統(tǒng)回顧在多種人類癌癥中可以見(jiàn)到月中瘤抑癌基因TP53突變。這項(xiàng)研究可提供不同地理區(qū)域的子宮頸鱗狀細(xì)胞癌和腺癌患者中TP53突變的詳細(xì)分析。這一分析顯示TP53基因在子宮頸腺癌（32/241;13.3%）中有更高的突變率，鱗

10、狀細(xì)胞癌（39/657;5.9%;P=0.0003）較腺癌突變率略低，有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在北美，腺癌的TP53突變比例為4%亞洲為19%TP53基因的六個(gè)熱點(diǎn)密碼子易發(fā)生突變，其中三個(gè)密碼子（175、248和273）在兩種類型的宮頸癌中均為常見(jiàn)突變，密碼子（249）主要在鱗狀細(xì)胞癌中可見(jiàn)突變，密碼子（282）只有在腺癌中可見(jiàn)突變。最常見(jiàn)的突變類型為G與A的轉(zhuǎn)換及C與T的轉(zhuǎn)換，在鱗狀細(xì)胞癌中占48.7%,腺癌中占53.5%。在腺癌中25%勺轉(zhuǎn)換發(fā)生于C與A之間。鱗狀細(xì)胞癌中14.6%的轉(zhuǎn)換發(fā)生于G與T之間。從這個(gè)系統(tǒng)回顧中可見(jiàn)看出，亞洲的子宮頸腺癌患者中可以見(jiàn)到TP53的高頻率突變。需要進(jìn)一步研

11、究TP53在宮頸癌中的定位以了解對(duì)癌癥預(yù)后和結(jié)局突變的影響。TorneselloML,BuonaguroL,BuonaguroFM.GynecolOncol.?2013?Review.PubMed-indexedforMEDLINETP53在OMI健因定位于17P13.110 .簡(jiǎn)述淋巴細(xì)胞克隆性重排的概念及其應(yīng)用。通常情況下，淋巴結(jié)、血液和骨髓中每一個(gè)淋巴細(xì)胞基因型是不一樣的。如果來(lái)自某一分化階段的單個(gè)淋巴細(xì)胞發(fā)生變異，同時(shí)失去正常的免疫監(jiān)視，形成單克隆性增生，克隆性擴(kuò)張的細(xì)胞基因型是一致的，這就是淋巴瘤形成的遺傳學(xué)基礎(chǔ)，也是淋巴瘤分子病理學(xué)診斷的理論基礎(chǔ)。當(dāng)前對(duì)腫瘤分子本質(zhì)的共識(shí)：惡性腫瘤

12、細(xì)胞克隆性增生。因此，檢測(cè)腫瘤細(xì)胞的克隆性存在，即可判斷惡性腫瘤?？寺⌒灾嘏艡z測(cè)臨床上IgH和TCR基因單克隆檢測(cè)在淋巴瘤的分子診斷中普遍應(yīng)用。作為淋巴細(xì)胞源性腫瘤的分子生物學(xué)標(biāo)記，是淋巴瘤早期診斷和療效評(píng)價(jià)的基本方法。盲點(diǎn)：主要應(yīng)用與淋巴細(xì)胞源性腫瘤的檢測(cè)，其它應(yīng)用尚少，存在假陽(yáng)性。11. 大腸癌分子分型的臨床意義A:分子醫(yī)學(xué)視野下的結(jié)直腸癌：1.近端遠(yuǎn)端結(jié)腸癌各有遺傳通道，2.遠(yuǎn)端結(jié)腸癌染色體5q,17q和18q等位基因缺失頻率是近端結(jié)腸癌的2倍，3.近端結(jié)腸癌MSI頻率是遠(yuǎn)端結(jié)腸癌的10倍，4.結(jié)腸癌兩大家族：FAP和HNPCC?者好發(fā)于遠(yuǎn)端,與CIN有關(guān);后者好發(fā)于近端,與MSI有關(guān).

13、，5.直腸癌基因突變多于結(jié)腸癌，6.上端,中下端直腸癌預(yù)后不一。B：新發(fā)現(xiàn)導(dǎo)致了新的治療模式的差異：如：表皮生長(zhǎng)因子受體（EGFR）靶向治療，K-RAS的靶向治療。表皮生長(zhǎng)因子受體（EGFR）M原癌基因C-erbB-1的表達(dá)產(chǎn)物，EGFR勺過(guò)表達(dá)/突變?cè)诙喾N腫瘤的生長(zhǎng)、發(fā)展及預(yù)后中起關(guān)鍵作用，包括結(jié)直腸癌、頭頸部鱗狀細(xì)胞癌及非小細(xì)胞肺癌等?？笶GFR勺靶向藥物西妥昔單抗（愛(ài)必妥）已成為治療轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌的一線用藥。K-ras基因是細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)通路中重要的“開(kāi)關(guān)”，從而影響腫瘤的生長(zhǎng)和擴(kuò)散。K-ras基因可以是正常狀態(tài)（野生型）或異常狀態(tài)（突變型），約有35%結(jié)直腸癌患者為K-ras突變型。K

14、-ras基因編碼異常的蛋白，刺激促進(jìn)惡性腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和擴(kuò)散，并且不受上游EGFR勺信號(hào)影響，所以對(duì)愛(ài)必妥治療效果差。晚期結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移患者的治療顯示，K-ras野生型轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌患者一線接受西妥昔單抗+化療治療，客觀有效率達(dá)59%，腫瘤進(jìn)展風(fēng)險(xiǎn)下降32%，疾病控制率在90%左右，患者中位生存時(shí)間達(dá)到25個(gè)月；而K-ras突變型患者無(wú)論采用標(biāo)準(zhǔn)劑量還是劑量遞增方案治療均無(wú)效。進(jìn)行K-ras基因檢測(cè)不僅可以深入了解癌基因的情況，更重要的是篩選出針對(duì)抗EGFR向治療藥物有效的結(jié)直腸癌患者，幫助醫(yī)生選擇對(duì)腫瘤病人最有效的治療方法，從而真正實(shí)現(xiàn)腫瘤病人的個(gè)體化治療，還能大幅減少相關(guān)治療費(fèi)用和毒副作用

15、。12. 現(xiàn)代腫瘤分子病理發(fā)病機(jī)制a.細(xì)胞癌基因在正常細(xì)胞中未激活，又稱為原癌基因。原癌基因由于結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，而被激活成為癌基因。原癌基因可發(fā)生結(jié)構(gòu)改變（突變）而變?yōu)榘┗颍灰部梢允怯捎谡{(diào)節(jié)原癌基因表達(dá)的基因發(fā)生改變使原癌基因過(guò)度表達(dá)，進(jìn)而導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)刺激信號(hào)的過(guò)度或持續(xù)出現(xiàn)，使細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)化。原癌基因的結(jié)構(gòu)改變包括點(diǎn)突變（如90的胰腺癌有ras基因的點(diǎn)突變）、染色體易位（如伯基特淋巴瘤的t（8：14），慢性粒細(xì)胞白血病的Phl染色體）、插入誘變、基因缺失和基因擴(kuò)增（如神經(jīng)母細(xì)胞瘤的Nl-myc原癌基因可復(fù)制成多達(dá)幾百個(gè)拷貝，在細(xì)胞遺傳學(xué)上表現(xiàn)為染色體出現(xiàn)雙微小體和均染區(qū)）。癌基因編碼的蛋白質(zhì)（

16、癌蛋白）與原癌基因的正常產(chǎn)物有質(zhì)或量的不同。癌蛋白調(diào)節(jié)其靶細(xì)胞的代謝、促使該細(xì)胞逐步轉(zhuǎn)化，成為腫瘤細(xì)胞。b.與原癌基因編碼的蛋白質(zhì)促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)相反，正常情況下細(xì)胞內(nèi)的腫瘤抑制基因的產(chǎn)物能抑制細(xì)胞的生長(zhǎng)。若其功能喪失則可能促進(jìn)細(xì)胞的腫瘤性轉(zhuǎn)化。目前了解最多的兩種腫瘤抑制基因是Rb基因和P53基因。它們的產(chǎn)物都是以轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子的方式控制細(xì)胞生長(zhǎng)的核蛋白。腫瘤的發(fā)生可能是癌基因的激活與腫瘤抑制基因的失活共同作用的結(jié)果。c.惡性腫瘤的發(fā)生是一個(gè)長(zhǎng)期的、多因素造成的分階段的過(guò)程，這已由流行病學(xué)、遺傳學(xué)和化學(xué)致癌的動(dòng)物模式所證明。單個(gè)基因的改變不能造成細(xì)胞的完全惡性轉(zhuǎn)化，而是需要多基因的改變。癌基因以及腫瘤抑制基因的喪失或突變，這些階段梯性積累起來(lái)的不同基因分子水平的改變，最終導(dǎo)致腫瘤發(fā)生。13. GIST胃腸道間質(zhì)腫瘤。胃腸道間質(zhì)腫瘤已作為一種獨(dú)立的腫瘤，以區(qū)別原診斷的平滑肌或神經(jīng)源性腫瘤，多數(shù)來(lái)源胃腸道Cajal間質(zhì)細(xì)胞，命名為“胃腸道間