熒光定量PCR儀參數(shù)比照表

1、熒光定量PCR儀參數(shù)比照表品牌QIAGENRocheBio-RadABI比較參數(shù)Rotor-GeneQ5-plex+HRM480CFX96/IQ5ABI7300(32000)激發(fā)光源LED（發(fā)光二極管）每個(gè)通道配備獨(dú)立的LED光源，HRM為獨(dú)立的通道氤燈LED/1個(gè)鹵素?zé)酐u鴇燈：光強(qiáng)逐漸衰減，壽命短，每2-3個(gè)月需要更次。獨(dú)立光源和濾光片獨(dú)立光源和濾光片，每個(gè)通道均得到特異，均一的激發(fā)；最小的光譜重疊，6個(gè)LED獨(dú)立激發(fā)，無需預(yù)熱，使用方便，即開即用，自動開關(guān)光源，即使過夜，也不用擔(dān)心光源會燒壞棱鏡折射，光譜重疊及相互的干擾，需要預(yù)熱，實(shí)驗(yàn)結(jié)束必須關(guān)機(jī)；氤燈使用壽命僅1000-2000小時(shí)，一

2、兩年必需更換，曲川更換成本更高達(dá)幾千美金；且它們的光強(qiáng)會不斷衰減，影響結(jié)果穩(wěn)定性96個(gè)光纖檢測，移動檢測，穩(wěn)定性差，需要預(yù)熱，實(shí)驗(yàn)結(jié)束必須關(guān)機(jī)；光路需要復(fù)雜調(diào)校，儀器搬動后也需要專業(yè)調(diào)校棱鏡折射，光譜重疊及相互的干擾，需要預(yù)熱，實(shí)驗(yàn)結(jié)束必須關(guān)機(jī)；鹵鴇燈使用壽命僅1000-2000小時(shí)，一兩年必需更換，曲川更換成本更局達(dá)兒干美金；且它們的光強(qiáng)會不斷衰減，影響結(jié)果穩(wěn)定性激發(fā)光范圍365-670nm450nm,483nm,523nm,588nm,615nm400-700nm/450-730nm500-660nm熒光檢測器PMT（光電倍增管）：靈敏度局CCDCCD/二級管低溫CCD:靈敏度低，檢測線性

3、范圍較窄升降溫速率升溫15C/秒；降溫20C/秒。升溫4.8C/sec降溫2.5C/sec升溫5C/sec降溫3.3C/sec基座的平均升降溫速度3.5C/秒，樣品實(shí)際平均溫度變化速度為1C/秒溫度均一性3.01C由2ci0.5C10.5C溫度分辨率3.02C士0.1C士0.2C士0.25C線性范圍與區(qū)分度10個(gè)數(shù)量級（1-1010）能清晰區(qū)分單個(gè)拷貝10個(gè)數(shù)量級9個(gè)數(shù)量級9個(gè)數(shù)量級溫度范圍室溫-99C4-99C4-99C4-99C反應(yīng)體系最低可以做5微升體系，節(jié)省試劑5-100ul體系10-50ul體系只能做到10微升體系內(nèi)參溫度均一性好，沒有光程差，不需要加ROX內(nèi)參96孔板有光程差，必須

4、加ROX內(nèi)參96孔板有光程差，必須加ROX內(nèi)參溫度均一性不夠好，96孔板有光程差，必須加ROX內(nèi)參，增加了成本HRM分析技術(shù)上專用的HRM分析工具，可自動分類/型，突變檢測等需要增加軟件的功能，/、同的軟件，HRM功能表現(xiàn)不好，無義就支持HRM功能表現(xiàn)不好，無義獻(xiàn)支持耗材耗材開發(fā)專用耗材，頂部無法標(biāo)記專用耗材，頂部無法標(biāo)記專用耗材，頂部無法標(biāo)記SNP河堿基艾化典型的Tm變化稀有性（人類）1C/T和G/A較大0.5C很小0.2C64%2C/A和G/T20%3C/G9%4A/T7%這個(gè)表格反映的是堿基的不同，帶來的Tm值的變化，可以看出A/T之間的突變，需要溫度分辨率小于0.2C才能區(qū)分開，而象A

5、B等其它公司的分辨率是土0.25C,所有它是區(qū)別不開第四類的SNP變化的，HRM技術(shù)的發(fā)明者，曾發(fā)表過一篇文章，用市場上所有能做HRM機(jī)器的定量，做了一次比較，結(jié)果顯示QIAGENRotor-GeneQ是能做的最好的一個(gè)公司；文章全文可見以下鏈接：Herrmannetal2007ClinicalChemistry53,/cgi/content/abstract/clinchem.2007.088120v1ExpandedInstrumentComparisonofAmpliconDNAMeltingAnalysisforMutationScannin

6、gandGenotypingFig1（detail）Normalizedmeltingcurvesofa110bp0-globinamplicon（triplicateHRMdata）以下是一些關(guān)于定量PCRHRM（HighResolutionMelt中文：高分辨率熔解曲線）一些介紹！（QIAGEN）有2個(gè)最顯著特點(diǎn)：1）是溫控精度非常高（溫度均一性：40.01C,溫度分辨率：卻.02）及升降溫速度非?？欤ㄉ郎乜蛇_(dá)15C/秒，降溫可達(dá)20C/秒）2）是區(qū)別與其它的公司定量PCR的是它的HRM功能，這個(gè)是其它廠家都無法能做到的（比如ABI7500Fast及其它公司這種板式加熱系統(tǒng)，因?yàn)樗臏囟确?/p>

7、辨率達(dá)不到）QIAGEN是一個(gè)集遺傳分析和定量完美結(jié)合的一款機(jī)器；現(xiàn)階段，大家檢測SNP時(shí)都用一貫的檢測方法，包括測序，探針還有DHPLC等等，而甲基化大多用MSP.至于HRM技術(shù)并不為大家所熟知，有兩個(gè)原因：1）適合做HRM技術(shù)的儀器在國內(nèi)的普及程度不高，具我了解能真正能夠做HRM的只有QIAGENRoter-GeneQ+HRM系列和IdahoLightScanncer.Roche;其中QIAGEN在其溫度控制及軟件分析上是做的最好的.（其它的比如ABI7500Fast及伯樂也對外宣傳它的HRM功能，但由于它的溫控精度，決定了它做HRM功能是做不好的，可見也是一個(gè)趕時(shí)髦的功能，也只能通過軟件

8、的模擬來處理）2）HRM的實(shí)驗(yàn)靈敏度太高，影響實(shí)驗(yàn)因素過多，很多人都做了，但是就是做不出來.因此就放棄，就換用其他比較成熟的方法.殊不知,HRM技術(shù)的檢測方法有其他技術(shù)難以比擬的優(yōu)勢，不僅能實(shí)現(xiàn)高通量和高精度的同時(shí),PCR和熒光定量在同一管內(nèi)進(jìn)行，能夠有效避免假陽性.（QIAGEN上海有個(gè)用的非常好的用戶，是交通大學(xué)華山醫(yī)院的關(guān)明主任，用這個(gè)機(jī)器發(fā)表了一篇非常好的文章，如果老師有興趣，可過去看看）作為新一代的遺傳掃描工具，HRM具有"簡，效，快，廉”等其他技術(shù)難以比擬的優(yōu)勢：簡：無需序列特異性探針，不受堿基位點(diǎn)局限，同時(shí)檢出已知或未知突變、SNP和甲基化位點(diǎn)：閉管操作，避免交叉污染。效：最低檢測0.1%-0,01%的突變或異常甲基化，檢測SNP靈敏度和特異性均為100%。快：1次同時(shí)檢測幾十個(gè)樣本，在一個(gè)小時(shí)左右就完了成檢測。廉：簡化操作步驟、降低人工和試劑成本，費(fèi)用遠(yuǎn)少于測序、Taqman探針等方法。價(jià)格就幾毛錢（2毛人民幣）；其它用定量PCR來做SNP研究的方法，都只能對已知SNP進(jìn)行分析，而且基本都需要合成序列特異性探針，局限性和費(fèi)用都比較大，一來只能做已知的SNP,二來需要合成序列特異性探針。而HRM則不受這些條件的限制，既可做已知位點(diǎn)又可做未知位點(diǎn)，且無需序列特異性探針，費(fèi)用大大降低，應(yīng)用的靈活性也大大提高。HRM技術(shù)特