國內外沙門氏菌檢測方法

1、1 國內外沙門菌檢測方法介紹中國疾病預防控制中心營養(yǎng)與食品安全所2DANIEL ELMER SALMON, (1850-1914)美國獸醫(yī)微生物和病理學家。是美國授予的第美國獸醫(yī)微生物和病理學家。是美國授予的第一位獸醫(yī)學博士。一位獸醫(yī)學博士。1881884 4年任美國農業(yè)部畜牧局年任美國農業(yè)部畜牧局 首任局長。他首次從病豬中分離出豬霍亂沙門首任局長。他首次從病豬中分離出豬霍亂沙門氏菌。在醫(yī)學微生物中通用的沙門菌一詞，就氏菌。在醫(yī)學微生物中通用的沙門菌一詞，就是為紀念他而以是為紀念他而以 他的名字命名的。他的名字命名的。沙門菌（Salmonella）3沙門菌（Salmonella） 沙門菌屬（S

2、almonella）是一大群寄生于人類和動物腸道內生化反應和抗原構造相似的革蘭氏陰性桿菌統(tǒng)稱為沙門桿菌。4沙門菌（Salmonella） 目前至少有目前至少有6767種種O O抗原和抗原和20002000個以上血清型，所致疾病稱沙門菌病。個以上血清型，所致疾病稱沙門菌病。 腸熱癥：是傷寒病和副傷寒病的總稱，主要由傷寒桿菌和甲、乙、丙型副傷寒桿腸熱癥：是傷寒病和副傷寒病的總稱，主要由傷寒桿菌和甲、乙、丙型副傷寒桿菌引起。菌引起。 急性腸炎急性腸炎( (食物中毒食物中毒):):是最常見的沙門桿菌感染。多由鼠傷寒桿菌、豬霍亂桿菌、是最常見的沙門桿菌感染。多由鼠傷寒桿菌、豬霍亂桿菌、腸炎桿菌等引起。腸

3、炎桿菌等引起。 敗血癥：常由豬霍亂桿菌、丙型副傷寒桿菌、鼠傷寒桿菌、腸炎桿菌等引起。敗血癥：常由豬霍亂桿菌、丙型副傷寒桿菌、鼠傷寒桿菌、腸炎桿菌等引起。 5 大小大小0.60.61.01.02 23um3um，無芽胞，無芽胞，一般有鞭毛一般有鞭毛( (雞沙門菌除外雞沙門菌除外) )，無莢，無莢膜，多數(shù)有菌毛，革蘭氏陰性桿菌，膜，多數(shù)有菌毛，革蘭氏陰性桿菌，需氧或兼性厭氧，最適生長溫度為需氧或兼性厭氧，最適生長溫度為35353737，最適，最適pHpH值為值為6.86.87.87.8。沙門菌生物學性狀6不分解乳糖（亞利桑那菌除外）。分解不分解乳糖（亞利桑那菌除外）。分解葡萄糖產酸產氣（傷寒沙門菌

4、產酸不產葡萄糖產酸產氣（傷寒沙門菌產酸不產氣）。多數(shù)產生氣）。多數(shù)產生H H2 2S S，不產生靛基質，不產生靛基質，不液化明膠，不分解尿素，不產生乙酰不液化明膠，不分解尿素，不產生乙酰甲基甲醇，多數(shù)能利用枸櫞酸鹽，能還甲基甲醇，多數(shù)能利用枸櫞酸鹽，能還原硝酸鹽為亞硝酸鹽，在氰化鉀培養(yǎng)基原硝酸鹽為亞硝酸鹽，在氰化鉀培養(yǎng)基上不生長。上不生長。 沙門菌生物學性狀7沙門菌常用生化試驗三糖鐵（TSI）尿素酶試驗陰性（黃）陽性（紅）8沙門菌常用生化試驗吲哚試驗陰性（液面黃）陽性（液面紅） VP試驗 陽性（紅色）陰性（不變）9沙門菌常用生化試驗賴氨酸脫羧酶試驗對照 陽性（紫） 陰性（黃）丙二酸鹽試驗陽性（

5、蘭） 陰性（不變）10ONPG試驗陽性（黃） 空白沙門菌常用生化試驗11國內外沙門菌檢測方法（傳統(tǒng)方法）國內外沙門菌檢測方法（傳統(tǒng)方法） 國家標準國家標準行業(yè)標準行業(yè)標準FDA （Food & Drug Administration） AOAC (Association of Official Analytical Chemists) FSIS （FOOD SAFETY AND INSPECTION SERVICE） ISO加拿大官方食品微生物分析方法加拿大官方食品微生物分析方法 12凍肉、蛋品、乳品及其他加工食品凍肉、蛋品、乳品及其他加工食品鮮肉、鮮蛋、鮮乳或其他未經加工的食品鮮肉、鮮蛋、鮮

6、乳或其他未經加工的食品前增菌法前增菌法25gBPW225mL36 1 一般4h，干蛋品18h24h10mLMM（或（或TTB）100mL10mLSC100mL直接增菌法直接增菌法25g滅菌生理鹽水滅菌生理鹽水25mL檢樣勻液檢樣勻液25mL MM（或（或TTB）100mL檢樣勻液檢樣勻液25mL SC100mLBSDHL（或（或HE、WS、SS）TSI（排除排除A/A H2S結果結果 ），靛基質，尿素，靛基質，尿素，KCN，賴氨酸，賴氨酸沙門氏菌血清學試驗沙門氏菌血清學試驗甘露醇 山梨醇H2S 靛靛 尿尿KCN 賴賴H2S 靛靛 尿尿KCN 賴賴/非如左述的各種反應結果非如左述的各種反應結果沙

7、門氏菌血清學試驗沙門氏菌血清學試驗 ONPG 沙門氏菌沙門氏菌非沙門氏菌非沙門氏菌42 18h24h36 1 18h24h42 18h24h36 1 18h24h36 1 40h48h36 1 18h24h 微生物學檢驗微生物學檢驗 沙門氏菌檢驗沙門氏菌檢驗中華人民共和國國家標準中華人民共和國國家標準GB/T 4789.4-200313 出口食品沙門氏菌屬（包括亞利桑那菌）檢驗方法出口食品沙門氏菌屬（包括亞利桑那菌）檢驗方法 肉類、蛋品肉類、蛋品緩沖胨水（緩沖胨水（BPW）四硫磺酸鹽煌綠（四硫磺酸鹽煌綠（TTB）亞硒酸鹽胱氨酸（亞硒酸鹽胱氨酸（SC）37 4h or 2024h直接選擇性增菌亞

8、硒酸鹽胱氨酸（亞硒酸鹽胱氨酸（SC） 四硫磺酸鹽煌綠（四硫磺酸鹽煌綠（TTB）37 24 2h BS & DHL (亞利桑那菌瓊脂亞利桑那菌瓊脂) 前增菌37 2448h TSI & 賴氨酸脫羧酶賴氨酸脫羧酶TSI & 尿素酶尿素酶 37 2448h生化試驗生化試驗血清學試驗（血清學試驗（“O”抗原，抗原，“Vi”抗原）抗原） 42 20 2h 37 2448h結果判定結果判定檢驗檢疫行業(yè)標準檢驗檢疫行業(yè)標準SN 01709214樣品（樣品（20類）類）25g225mL 乳糖肉湯（乳糖肉湯（LB）or 胰酪胨大豆肉湯（胰酪胨大豆肉湯（ TSB）or 煌綠溶液煌綠溶液 （BG）or通用前增菌肉湯

9、（通用前增菌肉湯（UPB）or營養(yǎng)肉湯（營養(yǎng)肉湯（NB）or 再造脫脂奶粉再造脫脂奶粉 or 四硫酸鹽煌綠（四硫酸鹽煌綠（TT）pH6.80.2 242 h 35RVTT 430.2 or 352.0 242h 242h 420.2BS & XLD & HE 242h 35TSI & LIA非沙門菌非沙門菌沙門菌沙門菌非沙門菌非沙門菌LIA+LIA TSI K/ALIA TSI A/A &尿素酶，尿素酶，H抗原（多價抗原（多價H抗血清或抗血清或Spicer-Edwards flagellar (H) test ），賴氨酸脫羧酶，），賴氨酸脫羧酶，酚紅衛(wèi)矛醇肉湯，色氨酸肉湯（酚紅衛(wèi)矛醇肉湯，色氨

10、酸肉湯（KCN，丙二酸鹽，吲哚），丙二酸鹽，吲哚），O抗原抗原酚紅乳糖肉湯，酚紅蔗糖肉湯，酚紅乳糖肉湯，酚紅蔗糖肉湯，MRVP,西蒙氏檸檬酸鹽西蒙氏檸檬酸鹽5種商業(yè)生化鑒定系統(tǒng)（API 20E, Enterotube II, Enterobacteriaceae II,MICRO-ID, or Vitek GNI）&O抗原&H抗原細菌學分析手冊（細菌學分析手冊（FDA/BAM）第五章第五章 沙門菌屬沙門菌屬15肉、禽和蛋品中沙門菌的分離和鑒定肉、禽和蛋品中沙門菌的分離和鑒定USDA/FSIS MLG 4.02樣品樣品BPW or BPW（含結晶紫）含結晶紫）351 20-24hBGS & DM

11、LIA or XLT442 0.5 2224h0.5 0.05mL10mL TT0.1 0.1 0.02 0.02mLmL10mL mRV10mL mRV42 0.5 2224h35 1 1824h & 48hTSI & LIA血清學試驗血清學試驗商業(yè)生化試劑盒或自動鑒定系統(tǒng)商業(yè)生化試劑盒或自動鑒定系統(tǒng) or傳統(tǒng)生化鑒定（傳統(tǒng)生化鑒定（AOAC Official Method 967.27 or Edwards and Ewings Identification of Enterobacteriaceae）報告結果報告結果16 肉制品中沙門菌的分離和鑒定肉制品中沙門菌的分離和鑒定 FDA&US

12、DA/FSIS乳糖肉湯緩沖蛋白胨水TTB肉湯RV肉湯TTB肉湯RV肉湯BSXLDHEXLT42倍改良LIABGS生化篩選 （LIA,TSI） 鑒定及確證試驗 葡萄糖 脲酶試驗 衛(wèi)矛醇 動力試驗 吲哚 MR-VP測試 氰化鉀 粉紅酒石酸鹽瓊脂 乳糖 水楊苷 賴氨酸脫羧酶 西蒙氏枸櫞酸鹽 丙二酸 蔗糖血清學試驗17AOAC沙門菌檢測方法沙門菌檢測方法AOAC Official Method 967.25Salmonella in FoodsPreparation of Culture Media and ReagentsAOAC Official Method 967.26Salmonella i

13、n Processed FoodsDetectionAOAC Official Method 967.27Salmonella in FoodsIdentificationAOAC Official Method 967.28Salmonella in FoodsSerological Tests18食品中的沙門菌檢測方法食品中的沙門菌檢測方法AOAC 967.25967.28處理樣品處理樣品1mL+10mLSC1mL+10mLTT35 242hXLD & HE & BS35 242h（BS 24h&48h）35 242hTSI & LIA35 242h純培養(yǎng)物純培養(yǎng)物不純培養(yǎng)物不純培養(yǎng)物純培

14、養(yǎng)物純培養(yǎng)物MAC or XLD or HE尿素酶尿素酶尿素酶尿素酶非沙門菌非沙門菌H抗原，抗原，LIA，酚紅衛(wèi)矛醇肉湯，色氨酸肉湯酚紅衛(wèi)矛醇肉湯，色氨酸肉湯（KCN，丙二酸鹽，吲哚），丙二酸鹽，吲哚），O抗原抗原吲哚 & H血清KCN & LIA非沙門菌非沙門菌非沙門菌非沙門菌補充生化試驗酚紅乳糖肉湯，酚紅蔗糖肉湯，酚紅乳糖肉湯，酚紅蔗糖肉湯，MRVP,西蒙氏檸檬酸鹽西蒙氏檸檬酸鹽非沙門菌非沙門菌沙門菌沙門菌1925g樣品樣品225mL BPW35 or 37 1620 h0.1mL+10mL RV10mL+100mL SC42 24h35 or 37 24h&48h酚紅煌綠瓊脂酚紅煌綠瓊脂

15、 （亮綠瓊脂）（亮綠瓊脂） & 第二種選擇性平板第二種選擇性平板35 or 37 2024h無典型菌落再培養(yǎng)無典型菌落再培養(yǎng)1824h典型菌落（典型菌落（pink red）營養(yǎng)瓊脂純化可疑菌落營養(yǎng)瓊脂純化可疑菌落每個平板選5個菌落35 or 37 1824hTSI，尿素酶，賴氨酸脫羧酶，尿素酶，賴氨酸脫羧酶，ONPG，VP，吲哚吲哚血清學試驗血清學試驗（O抗原，抗原，Vi抗原，抗原，H抗原）抗原）報告結果報告結果送參考實驗室分型送參考實驗室分型ISO 6579:1993(E) 微生物沙門菌檢測的通用方法微生物沙門菌檢測的通用方法2025g樣品樣品營養(yǎng)肉湯營養(yǎng)肉湯or緩沖胨水緩沖胨水or煌綠煌綠

16、 水溶液水溶液or胰蛋白酶大豆肉湯胰蛋白酶大豆肉湯35 1824 h1mL+9mL SC1mL+9mL TBG35 242h42.5 242hBS & BGS35 242h & 48 2h純培養(yǎng)物純培養(yǎng)物不純培養(yǎng)物不純培養(yǎng)物純培養(yǎng)物純培養(yǎng)物MACTSI &LIA&尿素瓊脂尿素瓊脂O多價血清，多價血清，H多價血清多價血清食品中沙門菌的分離和鑒定食品中沙門菌的分離和鑒定加拿大加拿大HPB方法方法商業(yè)生化試劑盒或自動鑒定系統(tǒng)商業(yè)生化試劑盒或自動鑒定系統(tǒng)報告報告MFHPB-2021沙門菌儀器檢測法沙門菌儀器檢測法vVIDAS（生物梅里埃公司） vBAX （杜邦公司） 22沙門菌儀器檢測法沙門菌儀器檢測

17、法vVIDAS 應用酶聯(lián)免疫技術制造的全自動免疫分析儀 ，用熒光分析技術通過固相吸附器，用已知抗體來捕捉目標生物體，然后以帶熒光的酶聯(lián)抗體再次結合，經充分沖洗，通過激發(fā)光源檢測，即能自動讀出發(fā)光的陽性標本，其優(yōu)點是檢測靈敏度高，速度快，可以在48小時的時間內快速鑒定沙門氏菌、大腸桿菌O157：H7、單核李斯特菌，空腸彎曲桿菌和葡萄球菌腸毒素等。23VIDAS 24沙門菌儀器檢測法沙門菌儀器檢測法vDUPONT Qualicon BAX System 應用DNA分子核酸探針或基因探針技術制造的全自動PCR分析儀。將已知核苷酸序列DNA片段用同位素或其他方法標記，加入已變性的被檢DNA樣品中，在一定條件下即可與該樣品中有同源序列的DNA區(qū)段形成雜交雙鏈，從而達到鑒定樣品中DNA的目的。25DUPONT Qualicon BAX System 26商品化生化鑒定系統(tǒng)商品化生化鑒定系統(tǒng)VITEK GNI+ 應用一系列小的多孔的聚苯乙烯卡片進行測試，卡片含有干燥的抗菌藥物和生化基質。先制備一定濃度的欲鑒定菌株的菌懸液，然后