對(duì)氨基苯甲酸酯和酰苯胺類局麻藥物的分析

1、對(duì)氨基苯甲酸酯和酰苯胺類局麻藥物的分析對(duì)氨基苯甲酸酯和酰苯胺類局麻藥物的分析第八章第八章局麻藥物局麻藥物 在用藥部位局部可逆性地阻斷感受神經(jīng)沖動(dòng)發(fā)在用藥部位局部可逆性地阻斷感受神經(jīng)沖動(dòng)發(fā)生與傳導(dǎo)的藥物生與傳導(dǎo)的藥物化學(xué)結(jié)構(gòu)化學(xué)結(jié)構(gòu) 親脂性芳香環(huán)親脂性芳香環(huán) 中間連接功能基中間連接功能基 親水性胺基親水性胺基主要內(nèi)容主要內(nèi)容第一節(jié)：結(jié)構(gòu)與性質(zhì)第一節(jié)：結(jié)構(gòu)與性質(zhì)第二節(jié)：鑒別試驗(yàn)第二節(jié)：鑒別試驗(yàn)第三節(jié)：特殊雜質(zhì)檢查法第三節(jié)：特殊雜質(zhì)檢查法第四節(jié)：含量測(cè)定第四節(jié)：含量測(cè)定第五節(jié)：體內(nèi)藥物分析第五節(jié)：體內(nèi)藥物分析第一節(jié)第一節(jié) 結(jié)構(gòu)與性質(zhì)結(jié)構(gòu)與性質(zhì)一一.結(jié)構(gòu)分析結(jié)構(gòu)分析 芳伯氨基被取代芳伯氨基被取代芳胺類

2、藥物分為兩類芳胺類藥物分為兩類 芳伯氨基被?；疾被货；?.對(duì)氨基苯甲酸酯的母體對(duì)氨基苯甲酸酯的母體常見對(duì)氨基苯甲酸酯局麻藥物常見對(duì)氨基苯甲酸酯局麻藥物 苯佐卡因苯佐卡因 鹽酸普魯卡因鹽酸普魯卡因 鹽酸氯普魯卡因鹽酸氯普魯卡因 鹽酸丁卡因鹽酸丁卡因由于抗心律失常藥鹽酸普魯卡因胺與鹽酸普魯由于抗心律失常藥鹽酸普魯卡因胺與鹽酸普魯卡因的化學(xué)結(jié)構(gòu)僅存在羧酸酯與酰胺的差異，化卡因的化學(xué)結(jié)構(gòu)僅存在羧酸酯與酰胺的差異，化學(xué)性質(zhì)與本類藥物很相似，故在此一并列入討論。學(xué)性質(zhì)與本類藥物很相似，故在此一并列入討論。 鹽酸普魯卡因鹽酸普魯卡因 鹽酸普魯卡因胺鹽酸普魯卡因胺2.酰苯胺類酰苯胺類（為苯胺類的酰基衍生

3、物為苯胺類的酰基衍生物）結(jié)構(gòu)共性：芳酰胺基結(jié)構(gòu)共性：芳酰胺基結(jié)構(gòu)通式：結(jié)構(gòu)通式：常見酰苯胺類局麻藥物常見酰苯胺類局麻藥物鹽酸利多卡因鹽酸利多卡因鹽酸布比卡因鹽酸布比卡因鹽酸羅哌卡因鹽酸羅哌卡因二二. 性質(zhì)性質(zhì)（一）物理性質(zhì)（一）物理性質(zhì)其游離堿多為堿性油狀液體或低熔點(diǎn)固體，難其游離堿多為堿性油狀液體或低熔點(diǎn)固體，難溶于水，可溶于有機(jī)溶劑；其鹽酸鹽均系白色結(jié)溶于水，可溶于有機(jī)溶劑；其鹽酸鹽均系白色結(jié)晶性粉末，具有一定的熔點(diǎn)，易溶于水和乙醇，晶性粉末，具有一定的熔點(diǎn)，易溶于水和乙醇，難溶于有機(jī)溶劑。難溶于有機(jī)溶劑。（1）對(duì)氨基苯甲酸酯類）對(duì)氨基苯甲酸酯類（二）化學(xué)性質(zhì)（二）化學(xué)性質(zhì)1.芳伯氨基特性

4、芳伯氨基特性具芳伯氨基（除鹽酸丁卡因外），具芳伯氨基（除鹽酸丁卡因外）， 故顯重氮化故顯重氮化-偶合反應(yīng)偶合反應(yīng)與芳醛縮合成與芳醛縮合成Schiff堿反應(yīng)堿反應(yīng)易氧化變色易氧化變色（2）酰苯胺類）酰苯胺類:具芳酰氨基在具芳酰氨基在酸性酸性溶液中溶液中可水解為芳伯氨基化可水解為芳伯氨基化 合物，合物，而顯芳伯氨基特性反應(yīng)而顯芳伯氨基特性反應(yīng)2.水解特性水解特性對(duì)氨基苯甲酸酯鍵對(duì)氨基苯甲酸酯鍵 酯鍵酯鍵 水解水解影響藥物水解反應(yīng)快慢的因素：光、熱或堿性條影響藥物水解反應(yīng)快慢的因素：光、熱或堿性條件件例：例：苯佐卡因、鹽酸普魯卡因苯佐卡因、鹽酸普魯卡因 對(duì)氨基苯甲酸（雜質(zhì)）對(duì)氨基苯甲酸（雜質(zhì)）鹽酸氯

5、普魯卡因鹽酸氯普魯卡因 4-氨基氨基-2-氯苯甲酸（雜質(zhì)）氯苯甲酸（雜質(zhì)）鹽酸利多卡因鹽酸利多卡因 2,6-二甲基苯胺（雜質(zhì)）二甲基苯胺（雜質(zhì)）鹽酸丁卡因鹽酸丁卡因 對(duì)丁氨基苯甲酸對(duì)丁氨基苯甲酸3.弱堿性弱堿性p脂烴胺側(cè)鏈為叔胺氮原子（除苯佐卡因外），具有一定脂烴胺側(cè)鏈為叔胺氮原子（除苯佐卡因外），具有一定堿性，可以成鹽堿性，可以成鹽p能與生物堿沉淀劑發(fā)生沉淀反應(yīng)能與生物堿沉淀劑發(fā)生沉淀反應(yīng)p只能在非水溶劑體系滴定只能在非水溶劑體系滴定4.與重金屬離子反應(yīng)特性與重金屬離子反應(yīng)特性 酰氨基酰氨基上的上的氮氮可在水中與可在水中與銅離子銅離子或或鈷離子鈷離子絡(luò)合，生成有絡(luò)合，生成有色的配位化合物沉淀

6、，此沉淀可溶于氯仿有機(jī)溶劑而呈色的配位化合物沉淀，此沉淀可溶于氯仿有機(jī)溶劑而呈色。色。5.UI6.IR第二節(jié)第二節(jié) 鑒別試驗(yàn)鑒別試驗(yàn)一、重氮化一、重氮化-偶合反應(yīng)偶合反應(yīng) 分子結(jié)構(gòu)中具有芳伯氨基或潛在芳伯氨基的分子結(jié)構(gòu)中具有芳伯氨基或潛在芳伯氨基的藥物，均可發(fā)生重氮化反應(yīng)，生成的重氮鹽可藥物，均可發(fā)生重氮化反應(yīng)，生成的重氮鹽可與堿性與堿性-萘酚偶合生成有色的偶氮染料。萘酚偶合生成有色的偶氮染料。二、與金屬離子反應(yīng)二、與金屬離子反應(yīng)1、鹽酸利多卡因的鑒別方法、鹽酸利多卡因的鑒別方法 反應(yīng)原理：（反應(yīng)原理：（1）分子結(jié)構(gòu)中具有芳香胺和脂肪胺）分子結(jié)構(gòu)中具有芳香胺和脂肪胺的鹽酸利多卡因在碳酸鈉試液中

7、與硫酸銅生成藍(lán)的鹽酸利多卡因在碳酸鈉試液中與硫酸銅生成藍(lán)紫色配位化合物，該有色物質(zhì)溶入氯仿顯黃色。紫色配位化合物，該有色物質(zhì)溶入氯仿顯黃色。 注：注： 苯佐卡因、鹽酸普魯卡因、鹽酸氯普魯卡因和鹽苯佐卡因、鹽酸普魯卡因、鹽酸氯普魯卡因和鹽酸丁卡因等，在同樣條件下不發(fā)生此反應(yīng)。酸丁卡因等，在同樣條件下不發(fā)生此反應(yīng)。(2)鹽酸利多卡因在酸性溶液中與氯化鈷試液反應(yīng)，鹽酸利多卡因在酸性溶液中與氯化鈷試液反應(yīng)，生成亮綠色細(xì)小鈷鹽沉淀。生成亮綠色細(xì)小鈷鹽沉淀。 注：注： 鹽酸利多卡因的水溶液加硝酸酸化后，加硝酸鹽酸利多卡因的水溶液加硝酸酸化后，加硝酸汞試液煮沸顯黃色；對(duì)氨基苯甲酸酯類藥物顯紅汞試液煮沸顯黃色

8、；對(duì)氨基苯甲酸酯類藥物顯紅色或橙黃色，可與之區(qū)別色或橙黃色，可與之區(qū)別2、鹽酸普魯卡因胺的鑒別方法、鹽酸普魯卡因胺的鑒別方法反應(yīng)原理：芳酰胺結(jié)構(gòu)可被濃過氧化氫氧化成羥反應(yīng)原理：芳酰胺結(jié)構(gòu)可被濃過氧化氫氧化成羥肟酸，再與三氯化鐵作用生成配位化合物羥肟酸肟酸，再與三氯化鐵作用生成配位化合物羥肟酸鐵。鐵。三、水解產(chǎn)物反應(yīng)三、水解產(chǎn)物反應(yīng)2、苯佐卡因的鑒別、苯佐卡因的鑒別 取本品約取本品約0.1g，加氫氧化鈉試液，加氫氧化鈉試液5ml，煮沸，煮沸，即有乙醇生成，加碘試液，加熱，即生成黃色即有乙醇生成，加碘試液，加熱，即生成黃色沉淀，并發(fā)生碘仿的臭氣。沉淀，并發(fā)生碘仿的臭氣。四、制備衍生物測(cè)定熔點(diǎn)四、制

9、備衍生物測(cè)定熔點(diǎn) 制備衍生物測(cè)熔點(diǎn)是國內(nèi)外藥典常用的鑒別方制備衍生物測(cè)熔點(diǎn)是國內(nèi)外藥典常用的鑒別方法之一。法之一。 鹽酸丁卡因的鑒別：取本品鹽酸丁卡因的鑒別：取本品0.1g，加，加5%的醋的醋酸鈉溶液酸鈉溶液10ml溶解后，加溶解后，加25%硫氰酸銨溶液硫氰酸銨溶液1ml,即析出的白色晶體；濾過，結(jié)晶水用水洗滌，在即析出的白色晶體；濾過，結(jié)晶水用水洗滌，在80干燥后，熔點(diǎn)約為干燥后，熔點(diǎn)約為131. 五、紫外特征吸收光譜法五、紫外特征吸收光譜法1、紫外吸收光譜、紫外吸收光譜例：在例：在max 處測(cè)定供試液的吸光度。處測(cè)定供試液的吸光度。例如：鹽酸布比卡因在例如：鹽酸布比卡因在0.01mol/L

10、%鹽酸中鹽酸中于于max =263nm和和max=271nm測(cè)定最測(cè)定最大吸收，其吸光度分別為大吸收，其吸光度分別為0.530.58與與0.430.48。2、紅外吸收光譜、紅外吸收光譜 鹽酸普魯卡因鹽酸普魯卡因鹽酸普魯卡因胺鹽酸普魯卡因胺鑒別反應(yīng)小結(jié)鑒別反應(yīng)小結(jié)第三節(jié)第三節(jié) 特殊雜質(zhì)及其檢查法特殊雜質(zhì)及其檢查法一、鹽酸普魯卡因中對(duì)氨基苯甲酸的檢查一、鹽酸普魯卡因中對(duì)氨基苯甲酸的檢查【雜質(zhì)來源】【雜質(zhì)來源】水解產(chǎn)生對(duì)氨基苯甲酸和二乙氨基乙醇水解產(chǎn)生對(duì)氨基苯甲酸和二乙氨基乙醇結(jié)果導(dǎo)致注射液變黃、療效下降、毒性增加結(jié)果導(dǎo)致注射液變黃、療效下降、毒性增加【檢查方法】【檢查方法】HPLC 雜質(zhì)對(duì)照品法雜

11、質(zhì)對(duì)照品法固定相固定相 ：十八烷基硅烷鍵合硅膠：十八烷基硅烷鍵合硅膠 流動(dòng)相流動(dòng)相 ：0.1%庚烷磺酸鈉的庚烷磺酸鈉的0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液用磷酸二氫鉀溶液用（磷酸調(diào)節(jié)（磷酸調(diào)節(jié)pH至至3.0）-甲醇（甲醇（68 32）檢測(cè)波長：檢測(cè)波長：279 nm 二、鹽酸氯普魯卡因注射液中有關(guān)物質(zhì)和光解產(chǎn)二、鹽酸氯普魯卡因注射液中有關(guān)物質(zhì)和光解產(chǎn) 物（物（4-氨基氨基-2-氯苯甲酸）的檢查氯苯甲酸）的檢查【雜質(zhì)來源】【雜質(zhì)來源】水解生成水解生成4-氨基氨基-2-氯苯甲酸降解產(chǎn)物氯苯甲酸降解產(chǎn)物【檢查方法】【檢查方法】LC/MS三、鹽酸利多卡因注射液中三、鹽酸利多卡因注射液中2,6-二甲基苯胺及

12、其二甲基苯胺及其他雜質(zhì)的檢查他雜質(zhì)的檢查【雜質(zhì)來源】【雜質(zhì)來源】水解生成水解生成2,6-二甲基苯胺等雜質(zhì)二甲基苯胺等雜質(zhì)【檢查方法】【檢查方法】HPLC 雜質(zhì)對(duì)照品法雜質(zhì)對(duì)照品法固定相固定相 ：十八烷基硅烷鍵合硅膠：十八烷基硅烷鍵合硅膠 流動(dòng)相流動(dòng)相 ：以磷酸鹽緩沖液用（磷酸調(diào)節(jié)：以磷酸鹽緩沖液用（磷酸調(diào)節(jié)pH至至8.0）-乙腈（乙腈（50 50）檢測(cè)波長：檢測(cè)波長：254 nm 四、鹽酸羅哌卡因的光學(xué)純度檢查（四、鹽酸羅哌卡因的光學(xué)純度檢查（S型有效，型有效，R型有毒）型有毒）【雜質(zhì)來源】【雜質(zhì)來源】水解生成水解生成2,6-二甲基苯胺等雜質(zhì)二甲基苯胺等雜質(zhì)【檢查方法】【檢查方法】毛細(xì)管電泳方

13、法毛細(xì)管電泳方法毛細(xì)管電泳法毛細(xì)管電泳法1. 分離通道毛細(xì)管；分離通道毛細(xì)管；2. 分離驅(qū)動(dòng)力高壓直流電源；分離驅(qū)動(dòng)力高壓直流電源；3. 毛細(xì)管控溫裝置；毛細(xì)管控溫裝置； 4. 檢測(cè)器及工作站檢測(cè)器及工作站毛細(xì)管電泳分離原理毛細(xì)管電泳分離原理 對(duì)于帶同類電荷的分離對(duì)象，因其具有不同荷質(zhì)比對(duì)于帶同類電荷的分離對(duì)象，因其具有不同荷質(zhì)比而被分離?？梢杂孟聢D進(jìn)行說明（電滲流反向的動(dòng)態(tài)而被分離。可以用下圖進(jìn)行說明（電滲流反向的動(dòng)態(tài)圖）：圖）：采用了手性固定性采用了手性固定性在本藥品中因?yàn)樽笮陀倚诒舅幤分幸驗(yàn)樽笮陀倚倪w移時(shí)間不一樣而被分離的遷移時(shí)間不一樣而被分離第四節(jié)第四節(jié) 含量測(cè)定含量測(cè)定對(duì)氨基

14、苯甲酸對(duì)氨基苯甲酸酯酯和酰苯胺類藥和酰苯胺類藥物物亞硝酸鈉滴定法亞硝酸鈉滴定法-芳伯胺基芳伯胺基非水溶液滴定法非水溶液滴定法-鹽酸布比卡因鹽酸布比卡因紫外分光光度法紫外分光光度法-鹽酸丁卡因鹽酸丁卡因高效液相色譜法高效液相色譜法-鹽酸利多卡因鹽酸利多卡因一、亞硝酸鈉滴定法一、亞硝酸鈉滴定法【適用范圍】具芳伯氨基或潛在芳伯氨基的藥物?！具m用范圍】具芳伯氨基或潛在芳伯氨基的藥物。Ch.P2010中的苯佐卡因、鹽酸普魯卡因和鹽酸中的苯佐卡因、鹽酸普魯卡因和鹽酸普魯卡因胺及其制劑可直接采用本法；醋氨苯普魯卡因胺及其制劑可直接采用本法；醋氨苯砜及注射液水解后用本法。砜及注射液水解后用本法。【基本原理】芳

15、伯氨基或水解后生成芳伯氨基的【基本原理】芳伯氨基或水解后生成芳伯氨基的藥物在酸性溶液中與亞硝酸鈉定量發(fā)生重氮化藥物在酸性溶液中與亞硝酸鈉定量發(fā)生重氮化反應(yīng)，生成重氮鹽，可用永停滴定法指示反應(yīng)反應(yīng)，生成重氮鹽，可用永停滴定法指示反應(yīng)終點(diǎn)。終點(diǎn)。2、【測(cè)定條件】、【測(cè)定條件】（1）加入適量）加入適量KBr加速反應(yīng)（加速反應(yīng)（KBr為催化劑）在為催化劑）在鹽酸存在下，重氮化反應(yīng)的機(jī)理為：鹽酸存在下，重氮化反應(yīng)的機(jī)理為：反應(yīng)速度與芳伯氨基游離程度和反應(yīng)速度與芳伯氨基游離程度和NO+濃度有關(guān)濃度有關(guān)溴化鉀與鹽酸生成溴化氫，再發(fā)生以下反應(yīng)：溴化鉀與鹽酸生成溴化氫，再發(fā)生以下反應(yīng)： 加入加入KBr，可增大被

16、測(cè)溶液中，可增大被測(cè)溶液中NO+的濃度，所以的濃度，所以能加快重氮化反應(yīng)速度。能加快重氮化反應(yīng)速度。（2）加過量鹽酸加速反應(yīng)）加過量鹽酸加速反應(yīng)胺類藥物的鹽酸鹽較其硫酸鹽的溶解度大，反應(yīng)胺類藥物的鹽酸鹽較其硫酸鹽的溶解度大，反應(yīng)速度也較快，所以多采用鹽酸。反應(yīng)方程式如速度也較快，所以多采用鹽酸。反應(yīng)方程式如下：下：（3）反應(yīng)溫度）反應(yīng)溫度重氮化反應(yīng)的速度與溫度成正比，但是生成重氮化反應(yīng)的速度與溫度成正比，但是生成的重氮鹽又隨溫度升高而加速分解。的重氮鹽又隨溫度升高而加速分解。所以滴定一般在低溫下進(jìn)行。由于低溫時(shí)反所以滴定一般在低溫下進(jìn)行。由于低溫時(shí)反應(yīng)太慢，經(jīng)試驗(yàn)，可在室溫（應(yīng)太慢，經(jīng)試驗(yàn)，可

17、在室溫（1030）下進(jìn)行，其中下進(jìn)行，其中15以下結(jié)果較準(zhǔn)確。以下結(jié)果較準(zhǔn)確。（4）滴定速度）滴定速度 反應(yīng)速度相對(duì)較慢，所以滴定速度應(yīng)不反應(yīng)速度相對(duì)較慢，所以滴定速度應(yīng)不宜太快。宜太快。 為了防止亞硝酸的揮發(fā)和分解，滴定時(shí)為了防止亞硝酸的揮發(fā)和分解，滴定時(shí)應(yīng)注意：應(yīng)注意： 滴定時(shí)滴定管的尖端插入液面下約滴定時(shí)滴定管的尖端插入液面下約2/3 一次將大部分硝酸鈉滴定液迅速加入并一次將大部分硝酸鈉滴定液迅速加入并攪拌，使其盡快反應(yīng)攪拌，使其盡快反應(yīng) 將滴定管的尖端提出液面，用少量水淋將滴定管的尖端提出液面，用少量水淋洗，再緩慢滴定洗，再緩慢滴定 至終點(diǎn)時(shí)，須在最后一滴加入后，攪拌至終點(diǎn)時(shí)，須在最后

18、一滴加入后，攪拌1-5分鐘，以確定終點(diǎn)是否真正達(dá)到分鐘，以確定終點(diǎn)是否真正達(dá)到3、指示終點(diǎn)的方法（1）永停滴定法永停滴定法ChP（2010）p終點(diǎn)前，溶液中無亞硝酸，終點(diǎn)前，溶液中無亞硝酸，線路無電流通過，電流計(jì)指針線路無電流通過，電流計(jì)指針指零；指零；p終點(diǎn)時(shí)，溶液中有微量亞硝終點(diǎn)時(shí)，溶液中有微量亞硝酸存在，電極即起氧化還原反酸存在，電極即起氧化還原反應(yīng)，線路中遂有電流通過，此應(yīng)，線路中遂有電流通過，此時(shí)電流計(jì)指針突然偏轉(zhuǎn)，并不時(shí)電流計(jì)指針突然偏轉(zhuǎn)，并不再回復(fù)，即為滴定終點(diǎn)再回復(fù)，即為滴定終點(diǎn)。二、非水溶液滴定法二、非水溶液滴定法 【反應(yīng)原理】基于鹽酸丁卡因、鹽酸利多卡因【反應(yīng)原理】基于鹽酸

19、丁卡因、鹽酸利多卡因和鹽酸布比卡因側(cè)鏈?zhǔn)灏返哂腥鯄A性，因此采和鹽酸布比卡因側(cè)鏈?zhǔn)灏返哂腥鯄A性，因此采用非水溶液滴定法測(cè)含量。用非水溶液滴定法測(cè)含量。 【應(yīng)用示例】鹽酸布比卡因注射液的含量測(cè)定【應(yīng)用示例】鹽酸布比卡因注射液的含量測(cè)定在滴定鹽酸布比卡因時(shí)，因其在冰醋酸中堿性弱在滴定鹽酸布比卡因時(shí)，因其在冰醋酸中堿性弱可加入醋酐，醋酐合乙酰氧離子比醋酐合質(zhì)子的可加入醋酐，醋酐合乙酰氧離子比醋酐合質(zhì)子的酸性強(qiáng)，可增加其堿性。酸性強(qiáng)，可增加其堿性。（2）電位法電位法USP（3）外指示劑法外指示劑法 KI-淀粉糊劑或試紙淀粉糊劑或試紙（4）內(nèi)指示劑法內(nèi)指示劑法 中性紅中性紅-不可逆指示劑不可逆指示劑三

20、、紫外分光光度法三、紫外分光光度法【應(yīng)用示例】鹽酸丁卡因注射液的含量測(cè)定【應(yīng)用示例】鹽酸丁卡因注射液的含量測(cè)定供試品供試品W供供 250 100ml 310nm測(cè)定測(cè)定四、高效液相色譜法四、高效液相色譜法【應(yīng)用示例】鹽酸利多卡因注射液的含量測(cè)定【應(yīng)用示例】鹽酸利多卡因注射液的含量測(cè)定色譜柱：色譜柱：ODS柱柱流動(dòng)相：已乙腈流動(dòng)相：已乙腈磷酸緩沖液（磷酸緩沖液（50:50，pH=8）檢測(cè)波長：檢測(cè)波長：254nm定量方法：外標(biāo)法定量方法：外標(biāo)法3.0mlHCl+磷酸緩沖液第五節(jié)、體內(nèi)藥物分析第五節(jié)、體內(nèi)藥物分析（一）（一）HPLC測(cè)定人血漿中普魯卡因、利測(cè)定人血漿中普魯卡因、利多卡因、丁卡因和布

21、比卡因多卡因、丁卡因和布比卡因（二）（二）HPLC法同時(shí)檢測(cè)人血漿利多卡因法同時(shí)檢測(cè)人血漿利多卡因和羅哌卡因和羅哌卡因（一）（一）HPLC測(cè)定人血漿中普魯卡因、利多測(cè)定人血漿中普魯卡因、利多 卡因、丁卡因和布比卡因卡因、丁卡因和布比卡因電泳分離條件：電泳分離條件：40mmol/L的的H3PO4-Tris緩沖體系緩沖體系（pH=5.0）；石英毛細(xì)管）；石英毛細(xì)管59.0cm（有效長度（有效長度50.8cm）x 70g（id），柱溫），柱溫18，壓力進(jìn)樣，壓力進(jìn)樣3kPax 5秒，工作電壓秒，工作電壓20.0V，檢測(cè)波長，檢測(cè)波長220nm樣品處理與測(cè)定：樣品處理與測(cè)定：精密吸取含藥血漿精密吸取含

22、藥血漿0.2ml具塞刻度離心管具塞刻度離心管中，加入中，加入1mol/LNaOH 0.05ml，渦旋振蕩，渦旋振蕩1分鐘，加乙醚分鐘，加乙醚-二氯甲烷（二氯甲烷（3:7）混合溶劑）混合溶劑1.2ml，振搖，振搖2分鐘，以分鐘，以3500r/min 離心離心10分鐘，分取有機(jī)層，置分鐘，分取有機(jī)層，置2ml離心管中，離心管中，30水浴氮?dú)饬飨麓蹈?，殘留物加運(yùn)行緩沖液溶解，進(jìn)行水浴氮?dú)饬飨麓蹈?，殘留物加運(yùn)行緩沖液溶解，進(jìn)行毛細(xì)管電泳分析。（圖見書毛細(xì)管電泳分析。（圖見書P252 圖圖8-6）結(jié)果表明：結(jié)果表明：本法分離四種藥物的平均理論塔本法分離四種藥物的平均理論塔板數(shù)為板數(shù)為3.6 x 105/

23、m，進(jìn)樣一次進(jìn)，進(jìn)樣一次進(jìn)8.5nl，9分鐘內(nèi)實(shí)現(xiàn)藥物基本分離。普魯卡因、利分鐘內(nèi)實(shí)現(xiàn)藥物基本分離。普魯卡因、利多卡因、丁卡因和布比卡因定量分析的平多卡因、丁卡因和布比卡因定量分析的平均回收率分別是均回收率分別是98%+ 2.4%、103%+ 3.7%、102%+ 2.5%和和97%+ 3.7%，線性，線性范圍范圍19mg/L（r0.999）,檢出限分別為檢出限分別為2.0pg、3.4pg、2.5pg和和4.7pg，可用于，可用于局麻藥物的藥代學(xué)研究和臨床研究。局麻藥物的藥代學(xué)研究和臨床研究。（二）（二）HPLC法同時(shí)檢測(cè)人血漿利多卡因和法同時(shí)檢測(cè)人血漿利多卡因和羅哌卡因羅哌卡因色譜條件：色譜

24、條件：ZORBAX Eclipse XDB-C18(4.6nmX150nm,5m)色譜柱，乙腈色譜柱，乙腈-0.02mol/LKH2PO4溶液（溶液（pH4.0）流動(dòng)相）流動(dòng)相（16:84：v/v），流速），流速1ml/min，檢測(cè)波長，檢測(cè)波長210nm，參比波長，參比波長380nm，柱溫，柱溫35血漿樣品的處理：血漿樣品的處理：準(zhǔn)確吸取待測(cè)血漿樣品準(zhǔn)確吸取待測(cè)血漿樣品1.0ml，置置10ml具塞試管中，加入具塞試管中，加入50mg/L布比卡因內(nèi)標(biāo)工布比卡因內(nèi)標(biāo)工作液作液30l，混勻后加入，混勻后加入5mol/LNaOH溶液溶液40l。再。再加入乙酸乙酯加入乙酸乙酯4.0ml，渦旋混勻，渦旋

25、混勻1分鐘，分鐘，2500r/min離心離心10分鐘。轉(zhuǎn)移上層有機(jī)相與另一離心管中，分鐘。轉(zhuǎn)移上層有機(jī)相與另一離心管中，37水浴條件下氮?dú)饬飨麓蹈?，殘留物用水浴條件下氮?dú)饬飨麓蹈?，殘留物?.15ml流動(dòng)相復(fù)溶，離心取上清液流動(dòng)相復(fù)溶，離心取上清液20l，進(jìn)樣，進(jìn)樣HPLC檢測(cè)。檢測(cè)。圖見書圖見書P252圖圖8-7方法學(xué)考察：方法學(xué)考察：利多卡因與羅哌卡因在血藥濃利多卡因與羅哌卡因在血藥濃度度0.0510g/ml范圍內(nèi)均呈良好的線性范圍內(nèi)均呈良好的線性關(guān)系；日內(nèi)、日間精密度關(guān)系；日內(nèi)、日間精密度RSD均小于均小于5%；相對(duì)回收率在相對(duì)回收率在100%附近，絕對(duì)回收率大附近，絕對(duì)回收率大于于65%；定量專屬性高。臨床用藥安定、；定量專屬性高。臨床用藥安定、芬太尼、咪達(dá)唑侖、阿托品、麻黃堿、曲芬太尼、咪達(dá)唑侖、阿托品、麻黃堿、曲馬多、維庫溴銨、異丙酚和肝素鈉均不干馬多、維庫溴銨、異丙酚和肝素鈉均不干擾測(cè)定擾測(cè)定血藥濃度圖血藥濃度圖（見書（見書P253圖圖8-8）習(xí)題：簡答：亞硝酸鈉滴定法測(cè)定芳胺類藥物的原理是什么？在簡答：亞硝酸鈉滴定法測(cè)定芳胺類藥物的原理是什么？在測(cè)定中應(yīng)注意哪些反應(yīng)條件？測(cè)