《儀器分析》實驗講義

1、儀器分析實驗講義制藥與生命科學學院2008前 言儀器分析是分析科學的重要組成部分，近半個世紀以來，隨著現(xiàn)代物理學、電子學、計算機科學的快速發(fā)展，儀器分析有了突飛猛進的發(fā)展。分析測定的靈敏度、準確性大大提高，分析測定的對象日益擴大，分析測定的自動化程度極大地提高。因此，儀器分析在各個領域的應用越來越多，學好儀器分析，可為將來的科學研究打下良好的基礎。儀器分析課程的教學既要使學生獲得扎實的理論和技能基礎，又要緊跟國內(nèi)外學科發(fā)展的要求。實驗課教學是儀器分析課程的重要組成部分，旨在引導學生將理論了解實際，提高動手能力，培育創(chuàng)新精神。本儀器分析實驗指導中精選了紫外-可見分光光度法、氣相色譜法、高效液相色

2、譜法等分析方法的典型實驗?？?則1、檢驗方法中所采用的名詞及單位制均應符合國家規(guī)定的標準。 2、檢驗方法中所使用的水，在沒有注明其他要求時，系指其純度能滿足分析要求的蒸餾水或去離子水。 3、檢驗方法中所使用的砝碼、滴定管、移液管、容量瓶、刻度吸管及分光光度計等均須按國家有關規(guī)定及規(guī)程進行校正。 4、液體的滴，系指蒸餾水至標準管流下的一滴的量，在20時20滴相當于lmL。 5、化學試劑的等級標志和符號化學試劑在瓶簽上注明的等級、標志、符號及瓶簽顏色都是按國家統(tǒng)一標準規(guī)定的。見下表。我國化學試劑的等級標志級 別一級品二級品三級品純度分類優(yōu)級純(保證試劑)分析純(分析試劑)化學純實驗試劑生物試劑符號

3、G·RA·RC·PL·RR或R瓶簽顏色綠色紅色藍色棕色或其它色黃色或其它色但是，近年來由于化學試劑的品種規(guī)格發(fā)展繁多，其他規(guī)格的試劑包裝顏色各異，主要應根據(jù)文字和符號來識別化學試劑的等級。6、試劑分級標準 "按國家統(tǒng)一標準，規(guī)定了各級化學試劑的純度及雜質(zhì)含量。實驗室最常見的試劑規(guī)格為:基準試劑 是一類用于標定容量分析標準溶液的標準參考物，可精確稱量后直接配制標準溶液。主成分含量一般99.95%100.05%，雜質(zhì)含量略低于一級品或與一級品相當。優(yōu)級純 為一級品，又稱保證試劑，成分高，雜質(zhì)含量低，主要用于精密的科學研究和測定工作。分析純 為二級品

4、，質(zhì)量略低于優(yōu)級純，雜質(zhì)含量略高，主要用于一般的科學研究和重要的測定?；瘜W純 為三級品，質(zhì)量較分析純差，但高于試驗試劑，用于工廠、教學實驗的一般分析工作。實驗試劑 為四級品，雜質(zhì)含量更多，但比工業(yè)品純度高，主要用于普通的實驗或研究?；瘜W試劑除上述四級外，"高純試劑"又可分為超純、特純、高純、光譜純及色譜純或色譜標準物質(zhì)等試劑。這一類化學試劑主成分含量可達四個9(99.99%)到五、六個9不等。光譜純試劑，雜質(zhì)含量用光譜分析法己測不出或低于某一限度;色譜純或色譜標準物質(zhì)，是指用于色譜分析的標準物質(zhì)，其雜質(zhì)含量用色譜分析法測不出或低于某一限度。應根據(jù)對分析結(jié)果的不同要求確定所選

5、用的化學試劑的規(guī)格。純度高、雜質(zhì)含量少的試劑因制造或提純過程復雜，價格較高。 7、配制溶液的要求 7.1 一般試劑及提取用的溶劑可用化學純試劑，如遇試劑空白高或?qū)y定有干擾時，則需采用更純的試劑或經(jīng)純化處理的試劑。 7.2 配制微量物質(zhì)的標準溶液時，所用試劑純度應在分析純以上。7.3 作為標定標準滴定溶液濃度用的試劑純度應為基準級或優(yōu)級純。 7.4 溶液未指明何種溶液配制時，均指水溶液。7.5 一般試劑用硬玻璃瓶存放，堿液和金屬溶液用聚乙烯瓶存放，需避光試劑儲于棕色瓶中。 8、在檢驗方法中，"精密稱取"系指在稱量操作中必須按所列數(shù)值稱取，"精密稱取約"系

6、指必須稱至0.lmg，但稱取量可接近所列數(shù)值，以上兩種稱量一般用分析天平。"稱取"系指要求稱至0.1g，可用架盤藥物天平 (托盤天乎)稱量。9、配制溶液濃度 9.1 容量百分比溶液 (%，V/V)，系指1OOml溶液中含有該化合物若干毫升。9.2 質(zhì)量容量百分比溶液 (%，M/V)，系指1OOml溶液中含有該化合物若干克，在檢驗方法中，一般百分比濃度即指質(zhì)量百分比濃度。 9.3 溶液的比例濃度，系指液體溶質(zhì)體積與溶劑體積的比。9.4 硫酸、鹽酸、硝酸，系指濃硫酸、濃鹽酸、濃硝酸。 1O、檢驗的有關要求 10.1 數(shù)據(jù)的計算方法和取值應遵循有效數(shù)字法則及數(shù)字修約規(guī)則。 1O.

7、2 檢驗時必須做平行試驗。10.3 檢驗結(jié)果的表示方法有以下幾種表示形式:毫克百分含量: 每百克 (或每百毫升)樣品中所含被測物質(zhì)的毫克數(shù)。百分含量 (%): 每百克(或每百毫升)樣品中所含被測物質(zhì)的克數(shù)。千分含量 (): 每公斤 (或每升)樣品中所含被測物質(zhì)的克數(shù)。百萬分含量(ppm):每公斤(或每升)樣品中所含被測物質(zhì)的毫克數(shù)，或每克 (或每毫升)樣品中所含被測物質(zhì)的微克數(shù)。十億分含量 (ppb):每公斤 (或每升)樣品中所含被測物質(zhì)的微克數(shù)，或每克(或每毫升)樣品中所含被測物質(zhì)的納克數(shù)。 實驗一 分光光度法測定樣品中的總鐵一、實驗目的與要求1、 了解鄰二氮菲比色法測定鐵的基本原理；2、

8、熟悉分光光度計的使用；3、 掌握分光光度法分析條件選擇的方法。二、實驗原理紫外可見分光光度法（ultraviolet-visible molecular absorption spectrometry）是根據(jù)溶液中物質(zhì)的分子或離子對紫外和可見光譜區(qū)輻射能（200800nm）的吸收來研究物質(zhì)的組成含量和結(jié)構(gòu)的方法。它廣泛用于無機和有機物的定性和定量測定，是常用的分析方法。朗伯比爾定律是吸收光度法的基本定律，是說明物質(zhì)對單色光吸收的強弱與吸光物質(zhì)的濃度及厚度間關系的定律。A=abc即在一定條件下吸光度與吸收層厚度和吸光物質(zhì)的濃度成正比。鄰二氮菲是測定鐵的較好顯色劑，在pH39的介質(zhì)中，它與Fe()

9、形成紅橙色絡合物（lgK穩(wěn)21.3，最大吸收波長508nm，1.1×104），在一定濃度范圍內(nèi)，F(xiàn)e()的濃度與吸光度遵守吸收定律。樣品中若有Fe()，可用還原劑（如鹽酸羥胺）將其還原成Fe()，則本方法可測出總鐵含量。4Fe3+2NH2OH4Fe2+N2O+4H+H2O用可見分光光度法分析時，為了得到最佳的測量靈敏度、準確度及重現(xiàn)性，在含量測定前應進行條件實驗，選擇最佳分析條件。方法的選擇性很高，相當于鐵含量40倍的Sn2+、Al3+、Ca2+、Mg2+、Zn2+、SiO32-，20倍的Cr3+、Mn2+、V5+、PO43-，5倍的Co2+、Cu2+等均不干擾測定。三、實驗儀器1、

10、 可見分光光度計；2、 分析天平等。四、實驗試劑所用試劑均為分析純（AR級），水為蒸餾水。1、 硫酸亞鐵銨2、 鄰二氮菲3、 濃鹽酸4、 鹽酸羥胺5、 醋酸鈉6、 pH試紙（1-14）五、實驗步驟（一）試劑的配制1、鐵標準溶液：準確稱取硫酸亞鐵銨0.3500 g，加熱溶解，移入50 mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻。此溶液濃度為1 mg/mL，使用時配制成濃度為100 g/mL標準應用液。2、鄰二氮菲溶液：0.1水溶液，需加熱溶解。臨用時配制。3、鹽酸羥胺溶液：10水溶液，臨用時配制。4、鹽酸溶液：10（V/V）水溶液。5、醋酸緩沖溶液（pH=4.6）：將68g醋酸鈉溶于約500mL蒸餾水中

11、，加入29mL冰醋酸，稀釋定容至1L。（二）實驗條件的選取1、繪制吸收曲線 取兩個50mL容量瓶，其中一個加入0.6mL鐵標準應用液，然后在兩個容量瓶中各加入1.0mL鹽酸羥胺溶液，搖勻，放置約2min。各加入5.0mL醋酸緩沖溶液和2.0mL0.1鄰二氮菲溶液，用水稀釋至刻度，搖勻，得溶液（含鐵標準液）和溶液（不含鐵標準液）。(1)用水作參比溶液，分別繪制上述兩種溶液的吸收曲線 (2)用溶液作參比溶液，繪制有色配合物的吸收光譜 比較上述三種吸收光譜，選取合適的測定波長。2、顯色劑用量的選擇 取6個50mL容量瓶，各加入100g/mL鐵標準應用液1.0mL，加10鹽酸溶液1mL，10鹽酸羥胺溶

12、液1mL，醋酸緩沖溶液5ml，搖勻，再加入0.00、0.25、0.50、1.00、2.00、3.00 mL0.1鄰二氮菲溶液，定容，搖勻。在選定波長處，用未加顯色劑溶液管作參比，測量溶液吸光度值。以顯色劑體積為橫坐標，吸光度為縱坐標，繪制吸光度顯色劑用量曲線，確定最佳顯色劑用量。（三）水樣中鐵含量的測定1、標準曲線的繪制 準確吸取100 g/mL鐵標準應用液0.0、0.20、0.40、0.60、0.80、1.0mL于50mL容量瓶中，加入10鹽酸溶液1mL，10鹽酸羥胺溶液1mL，醋酸緩沖溶液5mL及鄰二氮菲溶液適量，用水稀釋至50mL，搖勻，測定溶液的吸光度。2、水樣中鐵含量的測定 準確吸取

13、上述處理好的樣品溶液2.0mL于50mL容量瓶中，以下操作按照標準曲線整理的步驟進行，測定樣品的吸光度。（四）數(shù)據(jù)處理1、繪制吸收曲線實驗數(shù)據(jù) 水做參比波長(nm)492496500504508512516520524530溶液A波長(nm)492496500504508512516520524530溶液A溶液做參比波長(nm)492496500504508512516520524530溶液A適宜的檢測波長 以波長為橫坐標，對應的吸光度為縱坐標，將測得值逐個描繪在坐標紙上，并連成光滑曲線，即得吸收光譜。從曲線上查得溶液的最大吸收波長(nm)，得測量鐵的測量波長（又稱工作波長）。（2）顯色劑用量

14、的選擇實驗數(shù)據(jù)鄰二氮菲溶液（mL）0.000.250.501.002.003.00吸光度A適宜的顯色劑用量以顯色劑鄰二氮菲溶液的加入量（mL）為橫坐標，相應的吸光度為縱坐標，繪制吸光度顯色劑用量曲線。從中找出適宜的顯色劑用量。（3）標準曲線繪制（終體積50mL）實驗點123456加入鐵標準液量（mL）0.00.200.400.600.801.0鐵含量（g）鐵濃度（mg/L）吸光度值以鐵標準的濃度為橫坐標，相應的吸光度為縱坐標，繪制吸光度鐵濃度的標準曲線。(4)水樣測定六、思考題1、醋酸鈉、鄰二氮菲、鹽酸羥胺在試驗中各起什么作用？2、什么是吸收曲線？什么是標準曲線？標準曲線和吸收曲線有何區(qū)別？3

15、、參比溶液的作用？4、如需測定樣品中Fe3+的含量，如何操作？如測定一般鐵鹽的總鐵量是否要加鹽酸羥胺？5、 實驗的各項測定中，哪種試劑加入量的體積要比較準確，而其它試劑則可不必，為什么？6、根據(jù)自己的實驗數(shù)據(jù)，計算在最大吸收波長下鄰二氮菲鐵絡合物的摩爾吸收光系數(shù)。實驗二 雙波長分光光度法測定復方新諾明片中磺胺甲基異噁唑及甲氧芐氨嘧啶的含量一、實驗目的要求1、掌握雙波長分光光度法的基本原理，混合組分不經(jīng)分離直接測定各組分含量的方法。2、熟悉用單波長型分光光度計進行雙波長法測定。二、基本原理1、雙波長分光光度計法消除干擾吸收的基本原理在干擾組分的吸收光譜上吸收系數(shù)相同的兩個波長處，若被測組分的吸收

16、系數(shù)有顯著差異，則可用于消除干擾吸收，即直接測定混合物在此兩波長處的吸收度之差值，該差值與待測定物濃度成正比，而與干擾物濃度無關。用數(shù)學表達式如下：若b為干擾物，所選波長處的Eb相等，所以則與待測物濃度成正比，與干擾物濃度無關。2、雙波長法測定復方新諾明片中磺胺甲基異噁唑（SMZ）含量的基本原理復方新諾明片是含磺胺甲基異噁唑（SMZ）和甲氧芐氨嘧啶（TMP）的復方片劑。在0.1mol/L的氫氧化鈉溶液中，SMZ在257nm波長處有一最大吸收峰，TMP在257nm和304nm波長處為等吸收點，而SMZ在這兩波長處的吸收度差異大，所以測得樣品在257nm和304nm波長處的吸收度差值 與SMZ濃度

17、成正比，與TMP濃度無關。SMZ的標準曲線及回歸方程繪制r=0.9999,線性范圍015 g/mL3、TMP含量測定原理以TMP的max=287nm為測定波長，利用光吸收具有加和性測得吸收值，計算TMP的含量。SMZ 、TMP在287nm處的吸收系數(shù):； 三、實驗儀器1、 可見分光光度計2、分析天平等四、實驗試劑1、方新諾明片2、0.1mol/L的氫氧化鈉溶液3、95乙醇五、實驗步驟精密稱取粉末約 0.140 0 g，置于250mL容量瓶中，加入95乙醇50mL振搖10min溶解，以0.1mol/LNaOH溶液稀釋至刻度。用干燥濾紙過濾，棄去初濾液，取10mL濾液置100mL容量瓶中，以0.1

18、mol/LNaOH溶液稀釋至刻度得液。精密吸取液25mL置另一100mL容量瓶中，以0.1mol/LNaOH溶液稀釋至刻度得溶液液。測定液在287nm處的吸收度，測定 液在257nm和304nm波長處的吸收度差值，按工作曲線或回歸方程吸收系數(shù)計算二組分的含量。（由于處方中SMZ為0.4g/片，TMP為0.08g/片，即SMZ為TMP的5倍。如果采用同一濃度的濃溶液，則SMZ的吸收度大大超過測定值范圍（吸收值在0.30.7之間），致使測定讀數(shù)不準。如果采用稀溶液，由于TMP吸收度太小而使實驗誤差增大。為此采用濃稀兩溶液使SMZ、TMP均有合適的測定范圍）。六、數(shù)據(jù)處理測定波長(nm)吸收值A溶液

19、287溶液257304SMZ含量的計算 參考回歸方程TMP含量的計算 （Cs CT：g/100ml），得TMP 的濃度CT實驗三 色譜參數(shù)的測試及計算一、實驗目的1、通過本實驗基本色譜參數(shù)的測定與計算，了解各色譜參數(shù)的意義及其相互關系。2、通過本實驗進一步掌握柱效、柱選擇性、分離能力、保留值等性質(zhì)，使之能選擇出最佳色譜操作條件，得到可靠的定性、定量結(jié)果。二、實驗原理（一） 氣相色譜法以氣體作為流動相的色譜法稱為氣相色譜法。氣相色譜法適用于分離有一定揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性的化合物。目前已廣泛用于化工、醫(yī)藥衛(wèi)生、環(huán)境及食品監(jiān)測等方面。1、流程17 / 23氣相色譜法是采用氣體作為流動相的一種色譜法。在此

20、法中：載氣（不與被測物作用，用來載送試樣的惰性氣體，如氫氣、氮氣等）載著待分離的試樣通過色譜柱中的固定相，使試樣中各組分分離，然后分別檢測。其簡單流程如圖1所示。載氣由高壓鋼瓶1供給，經(jīng)減壓閥2減壓后，進入載氣凈化干燥管3以除去載氣中的水分。由針形閥4控制載氣的壓力和流量。流量計5和壓力表6用以指示載氣的柱前流量和壓力。再經(jīng)過進樣口（包括氣化室）7，試樣就在進樣口注入（如為液體試樣，經(jīng)氣化室瞬間氣化為氣體）。由載氣攜帶進入色譜柱8，將各組分分離后依次進入檢測器9后放空。檢測器信號由記錄儀10記錄，就可得到色譜圖。氣相色譜儀組成：從色譜流程圖可知道，氣相色譜儀一般由五部分組成：（1） 載氣系統(tǒng)，

21、包括氣源、氣體凈化、氣體流速控制和測量。（2） 進樣系統(tǒng)，包括進樣口、氣化室。（3） 色譜柱和柱溫箱，包括恒溫控制裝置。（4） 檢測系統(tǒng)，包括檢測器及控溫裝置。（5） 記錄系統(tǒng)，包括放大器、記錄儀，有的儀器還有數(shù)據(jù)處理裝置。2、氣相色譜法特點：（1） 分離分析連貫性強，方法簡便。（2） 分離效能高，選擇性好。（3） 分析速度快。（4） 靈敏度高。（5） 應用范圍廣。 在規(guī)定的色譜條件下，測定惰性組分的死時間（tM）及被測組分的保留時間（tR）、半高峰寬（W1/2）、及峰高（H）等參數(shù)，便可計算出基本色譜參數(shù)值。 三、儀器與試劑1、儀器：氣相色譜儀一套；DNP柱 1m×3mm；TCD檢

22、測器；微量注射器（5-10L） 2、試劑：純樣：苯、甲苯、二甲苯 混合樣： 苯、甲苯、二甲苯的混合洋四、實驗步驟1、 色譜條件：溫度控制：柱溫120； 檢測器溫度：100；氣化器溫度120 載氣：氮氣 流速:40ml/min 進樣量：空氣:50L，苯、甲苯、二甲苯混合樣1L；信號衰減視靈敏度而定。 2、測試：待儀器開啟運行至基線平穩(wěn)后，進樣進混合樣，每次1L，重復三次 進純樣，每種純樣進一次，每次進0.4L進空氣，用微量注射器進50L空氣，測tM，重復三次3、記錄數(shù)據(jù) 五、數(shù)據(jù)處理 1、 記錄數(shù)據(jù)純 樣組分空氣苯甲苯二甲苯tR（min）混合樣空氣苯甲苯二甲苯tR（min）（1）tR（min）（

23、2）tR（min）（3）平均值（min）偏差空氣tR（min）（1）tR（min）（2）tR（min）（3）平均值（min）2、各基本參數(shù)計算： 調(diào)整保留時間： 相對保留值： 容量因子： 理論塔板數(shù)： 有效塔板數(shù)： 有效塔板高度： 3、數(shù)據(jù)處理 調(diào)整保留時間相對保留值容量因子理論塔板數(shù)有效塔板數(shù)有效塔板高度苯甲苯二甲苯六、問題討論 1.兩種方法測定的tM 何者準確？為什么？ 2.色譜基本參數(shù)測量與計算的關鍵問題是什么？ 氣相色譜儀操作規(guī)程一、載氣鋼瓶的使用規(guī)程 1、鋼瓶必須分類保管，直立因定，遠離熱源，避免暴曬及強烈震動，氫氣室內(nèi)存放量不得超過二瓶。 2、氧氣瓶及專用工具嚴禁與油類接觸。 3、

24、鋼瓶上的氧氣表要專用，安裝時螺扣要上緊。 4、操作時嚴禁敲打，發(fā)現(xiàn)漏氣須立即修好。 5、用后氣瓶的剩余殘壓不應少于980 kPa。 6、氫氣壓力表系反螺紋，安裝拆卸時應注意防止損壞螺紋。 二、減壓閥的使用及注意事項1、在氣相色譜分析中，鋼瓶供氣壓力在9.814.7 MPa。 2、減壓閥與鋼瓶配套使用，不同氣體鋼瓶所用的減壓閥是不同的。氫氣減壓閥接頭為反向螺紋，安裝時需小心。使用時需緩慢調(diào)節(jié)手輪，使用后必須旋松調(diào)節(jié)手輪和關閉鋼瓶閥門。 3、關閉氣源時，先關閉減壓閥，后關閉鋼瓶閥門，再開啟減壓閥，排出減壓閥內(nèi)氣體，最后松開調(diào)節(jié)螺桿。 三、微量注射器的使用及注意事項 1、微量注射器是易碎器械，使用時

25、應多加小心，不用時要洗凈放入盒內(nèi)，不要隨便玩弄，來回空抽，否則會嚴重磨損，損壞氣密性，降低準確度。 2、微量注射器在使用前后都須用丙酮等溶劑清洗。 3、對10100微升的注射器，如遇針尖堵塞，宜用直徑為0.1 mm的細鋼絲耐心穿通,不能用火燒的方法。 4、硅橡膠墊在幾十次進樣后，容易漏氣，需及時更換。 5、用微量注射器取液體試樣，應先用少量試樣洗滌多次，再慢慢抽入試樣，并稍多于需要量。如針管內(nèi)有氣泡則將針頭朝上，使氣泡上升排出，再將過量的試樣排出，用濾紙吸去針尖外所沾試樣。注意切勿使針頭內(nèi)的試樣流失。 6、取好樣后應立即進樣，進樣時，注射器應與進樣口垂直，針尖刺穿硅橡膠墊圈，插到底后迅速注入試

26、樣，完成后立即拔出注射器，整個動作應進行得穩(wěn)當，連貫，迅速。注意：針尖在硅橡膠墊圈上的位置、插入速度、停留時間和拔出速度等都會影響進樣的重復性，操作時應注意。 四、熱導池檢測器的使用及注意事項 1、開啟熱導池檢測器電源前，必須先通載氣，實驗結(jié)束時，把橋電流調(diào)到最小值，再關閉熱導池檢測器電源，最后關閉載氣。 2、穩(wěn)壓閥、針形閥的調(diào)節(jié)須緩慢進行。穩(wěn)壓閥不工作時，必須放松調(diào)節(jié)手柄。針形閥不工作時，應將閥門處于“開”的狀態(tài)。 3、各室升溫要緩慢，防止超溫。 4、更換汽化室密封墊片時，應將熱導電源關閉。若流量計浮子突然下落到底，也應首先關閉該電源。 5、橋電流不得超過允許值。 五、氫火焰檢測器的使用及注

27、意事項 1、通氫氣后，待管道中殘余氣體排出后，應及時點火，并保證火焰是點著的。 2、使用FID時，離子室外罩須罩住，以保證良好的屏蔽和防止空氣侵入。如果離子室積木，可將端蓋取下，待離子室溫度較高時再蓋上。工作狀態(tài)下，取下檢測器罩蓋，不能觸及極化極，以防觸電。 3、離子室溫度應大于100度，待層析室溫度穩(wěn)定后，再點火，否則離子室易積水，影響電極絕緣而使基線不穩(wěn)。實驗四 高效液相色譜的定性定量方法一、實驗目的1、了解并熟悉高效液相色譜儀的流程。2、掌握液相色譜定性及外標定量方法。3、了解液相色譜檢測器及色譜柱的分類。二、實驗原理（一）高效液相色譜高效液相色譜儀的主要部件：貯液器、高壓泵、梯度洗提裝

28、置、進樣器、色譜柱、檢測器、恒溫器、數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)等。儀器流程：貯液器中貯存的載液（常需除氣）經(jīng)過過濾后由高壓泵輸送到色譜柱入口。當采用梯度洗提時一般需用雙泵系統(tǒng)來完成輸送。樣品由進樣器注入載液系統(tǒng)，而后送到色譜柱進行分離。分離后的組分由檢測器檢測，輸出信號供給記錄儀或數(shù)據(jù)處理裝置。如果需收集餾分作進一步分析，則在色譜柱一側(cè)出口將樣品餾分收集起來。各部分功能：1、高壓泵： 往復式柱塞泵：是一種恒流泵，這種泵的特點是不受整個色譜體系中其余部分阻力稍有變化的影響，連續(xù)供給恒定體積的流動相；更換溶劑方便，很適用于梯度洗提；不足之處是輸出有脈沖波動，會干擾某些檢測器（如差示折光檢測器），但對紫外檢測器的

29、影響不大。2、進樣裝置： 高壓定量進樣閥：這是通過進樣閥（常用六通閥）直接向壓力系統(tǒng)內(nèi)進樣而不必停止流動相流動的一種進樣裝置。3、色譜柱：目前液相色譜法常用的標準柱型是內(nèi)徑為4.6mm，長度為25cm的直形不銹鋼柱。填料顆粒度510m，色譜柱的填料種類主要有-C18、-C8、-NH2、-CN、-SO3-、-COOH 等等。4、檢測器： 紫外光度檢測器：紫外光度檢測器是液相色譜法廣泛使用的檢測器，它的作用原理是基于被分析樣品組分對特定波長紫外光的選擇性吸收，組分濃度與吸光度的關系遵守比耳定律。紫外光度檢測器有固定波長（單波長和多波長）、可變波長（紫外分光和紫外可見分光）和二極管陣列檢測器。這種檢

30、測器的特點：靈敏度高；最小檢測濃度可達10-9g/mL；對溫度和流速不敏感，可用于梯度洗提；結(jié)構(gòu)簡單；缺點是不適用于對紫外光完全不吸收的試樣。 示差檢測器是通過對物質(zhì)的物理常數(shù)折光指數(shù)的測量來進行檢測的，它是一種通用型檢測器，但是，它的缺點是對溫度變化非常敏感，不能用于梯度洗脫。 熒光檢測器是通過檢測被測物在一定波長紫外光激發(fā)下發(fā)出的熒光量來對被測物進行定量的，但并不是所有有機物都能發(fā)出熒光，在紫外光照射下會產(chǎn)生熒光的有機物，絕大多數(shù)為環(huán)狀化合物，像某些代謝物、食品、藥物、氨基酸、多肽、胺類。維生素、石油高沸點餾分、生物堿、膽堿和甾族化合物等。（二）分離原理苯、萘、聯(lián)苯、菲分別屬于單環(huán)，多環(huán)及

31、稠環(huán)芳烴，且極性強度和分子量均有差別，因此，它們在強極性的流動相與非極性固定相之間的分配系數(shù)K就不同，保留時間也就不相同，混合樣品因此而得以在色譜體系中被分離開。 由于苯、萘、聯(lián)苯、菲都對紫外波長有吸收，因此選用紫外檢測器進行檢測。在反相色譜系統(tǒng)里,固定相是非極性的,流動相是極性的。在化學鍵合相色譜中，固定相的配合基常是鏈長2-18碳原子的烷基。流動相一般為極性有機溶劑和水的混合溶液。以溶質(zhì)極性減弱的次序洗脫。隨著移動相極性的增強。保留值亦隨之增大。 反相色譜的分離是以溶質(zhì)的疏水結(jié)構(gòu)的差異為基礎的，溶質(zhì)極性越大，保留值越小，對于同系物，其保留值隨碳數(shù)的增加而增大。 溶劑的組成對樣品的保留有非常深刻的影響，溶質(zhì)保留值的大小是隨洗脫液的極性的降低而下降的，當流動相組成一定時,樣品在較長烷基配合基的固定相上的保留值較大。 在高效液相色譜中,定性方法有已知標準物定性，保留值經(jīng)驗定性、用不同色譜體系定性、離析色譜峰后用其他方法定性等。本次實驗采用已知標準物根據(jù)保留值定性的方法。 定量方法有歸一化法、內(nèi)標法、外標法等。本次實驗采用外標法定量。 標準曲線法即外標法是配制已知濃度欲定量組分的標準溶液，測量各組分的峰高或峰面積，