分離分析新技術(shù)綜述

1、Tel:(O) E-mail: 蜂膠的SFE純化流程優(yōu)于溶劑法一些代表性的大孔吸附樹脂大致操作步驟：樹脂預(yù)處理樹脂上柱藥液上柱樹脂的解吸 樹脂的清洗、再生樹脂預(yù)處理：加甲醇或丙酮浸泡24小時(shí)，加熱回流洗脫裝柱：蒸餾水濕法裝柱，乙醇流動(dòng)清洗，大量蒸餾水清洗藥液的上柱吸附：（1）泄漏曲線與吸附容量的考察（2）藥液上柱前的預(yù)處理（3）上柱工藝條件的選擇 樹脂自身特性、樣品濃度、pH值、吸附柱徑高比、上樣流速（4）樹脂的解吸 樹脂的清洗、再生： 無(wú)水乙醇或95乙醇洗至無(wú)色，大量水洗去醇在天然藥物有效成分的提取、純化領(lǐng)域大有用途：1.許多提取成功的單味中草藥，奠定良好的基礎(chǔ)2

2、.不斷有新型的吸附樹脂問世到目前為止,已成功用于黃酮類、皂苷類、生物堿類、酯類、萜類等成分的分離實(shí)例：銀杏葉提取物 （GBE） 主要有效成分 黃酮苷 萜內(nèi)酯 溶劑萃取法 24 6 樹脂吸附法 Amberlite XAD-7 30 未達(dá)標(biāo) Duolite-761 達(dá)標(biāo) 達(dá)標(biāo) ADS-F8 6065 2530 其他中草藥：毛冬青根、山楂、葛根、黃芩根、苦蕎麥、沙棘等實(shí)例：絞股藍(lán)皂苷 研制出強(qiáng)極性吸附樹脂ADS-7、S-038 S-038，吸附量達(dá)65.5 mg/ml，70乙醇洗脫 人參皂苷 吸附和脫色雙重作用 ADS-7 ，70乙醇洗脫，粗品（棕色） 白色或微黃色實(shí)例：絞股藍(lán)皂苷 絞股藍(lán)：葫蘆科植

3、物絞股藍(lán)的根狀莖或全草，多年生草質(zhì)藤本植物 功效：鎮(zhèn)咳、清熱解毒有效成分：皂苷、黃酮類、多糖類 “綠色的金子” “第二人參” “人參寶草”提取工藝：絞股藍(lán)干莖葉 熱水浸提 浸提除雜 樹脂吸附乙醇解吸 脫色 濃縮干燥 粉碎 絞股藍(lán)皂苷粉末7-8倍熱水浸提三次調(diào)節(jié)酸堿性靜置除雜DA大孔樹脂水洗除雜50%乙醇70%乙醇DB樹脂真空干燥80-100目實(shí)例：喜樹堿 弱堿 AB-8 pH 8，鹽濃度(1-2.5)mol/L, 吸附量達(dá)160 mg/g 小檗堿 堿性大 水溶性大 10%H2SO4, 10%NaOH, 非極性吸附樹脂 小檗堿含量為原生藥含量的97%色譜技術(shù)： 有效成分的定性與定量工作 開發(fā)出療

4、效好、質(zhì)量指標(biāo)明確的中藥新藥按照分離過(guò)程的原理不同分為： 吸附色譜 分配色譜 離子交換色譜 凝膠色譜1. 親和色譜1.薄層色譜 操作簡(jiǎn)單、費(fèi)用低廉、應(yīng)用廣泛新型薄層色譜法 離心制備薄層色譜 （PCLC）旋轉(zhuǎn)離心、連續(xù)洗脫的圓形色譜技術(shù)，分離效果優(yōu)于常規(guī)的制備薄層色譜和柱色譜獨(dú)特的優(yōu)點(diǎn)：u 對(duì)固定相不會(huì)造成損壞u 裝填容量、分離速度和分離效能得到極大提高實(shí)例：龍膽屬植物 Sstrictiffora 甲醇提取物 bellidifolin 和 desmethylbellidifolin 離心薄層色譜法 聚酰胺開口柱色譜 30 min. 12hr.2.柱色譜特殊的柱色譜：（1）干柱色譜干法裝填上樣洗脫

5、推出、切割譜帶溶劑萃取特點(diǎn)：溶劑消耗很少，操作迅速（1530min）（2）真空液相色譜 (VLC)抽真空裝柱低極性溶劑沖柱上樣洗脫收集餾分、抽干特點(diǎn)：操作簡(jiǎn)便、處理量大（一次可達(dá)30g）3.壓力液相色譜 (PLC)閃蒸色譜 (約0.2 MPa) 價(jià)格低廉、操作方便低壓液相色譜 ( 2.0 MPa) 分離效率高、應(yīng)用范圍廣實(shí)例：銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B、白果內(nèi)酯的分離純化硅膠H柱 (10-40 m) 流動(dòng)相：乙酸乙酯石油醚（8：2）(5) 超臨界流體色譜 介于液相色譜和氣相色譜之間的色譜方法特點(diǎn)：分離速度快、產(chǎn)品易回收、應(yīng)用范圍廣、有可能替代正相HPLC4.離子交換色譜固定相：離子交換樹脂 可再生

6、性和重復(fù)使用性交換功能基團(tuán)：陽(yáng)離子和陰離子形態(tài)：凝膠型（水溶脹）和大孔型（永久性微孔）特點(diǎn)：使用方便、成本低廉、重復(fù)使用性好、分離速度快應(yīng)用范圍：生物堿、糖類、氨基酸、蛋白質(zhì)以及核酸實(shí)例：總生物堿制備生藥粗粉0.1%HCl滲漉強(qiáng)酸性陽(yáng)離子交換樹脂蒸餾水洗樹脂倒出晾干10%NaOH堿化樹脂氯仿回流干燥重結(jié)晶 5.逆流色譜 (CCC)以液相物質(zhì)為固定相的液液色譜離心逆流色譜 (CCCC)：（1）分離物質(zhì)的極性范圍很寬（2）沒有拖尾現(xiàn)象（3）樣品定量回收實(shí)例：銀杏葉中的黃酮糖苷 固定相：水，流動(dòng)相：乙酸乙酯乙酸乙酯（異丁醇）乙酸乙酯/異丁醇 (6:4)高速逆流色譜 (HSCCC)6.其他形式色譜體積

7、排阻色譜 分子篩機(jī)理凝膠過(guò)濾色譜凝膠滲透色譜優(yōu)點(diǎn)：操作簡(jiǎn)單、快捷、流動(dòng)相選擇寬泛(2)親和色譜 大多被利用來(lái)分離純化生物大分子載體：瓊脂糖凝膠、交聯(lián)葡聚糖凝膠、聚丙烯酰胺凝膠(3)疏水作用色譜 主要分離對(duì)象為蛋白質(zhì)特點(diǎn)：分離條件溫和，易于保持生物蛋白質(zhì)的活性7.多種色譜方法的聯(lián)用最初分離步驟：如閃蒸色譜、逆流色譜或凝膠過(guò)濾色譜等最后的純化過(guò)程：如HPLC實(shí)例：生物堿 液相色譜法排阻色譜法實(shí)例：水飛薊黃酮的提取 水飛薊：也叫乳薊，菊科植物，一年或兩年生草本 功效：抗肝臟中毒和保護(hù)肝細(xì)胞有效成分：水飛薊素提取工藝：水飛薊種子 去油種子餅 去油種子渣 過(guò)濾 提取液 濃縮 總黃酮油液 總黃酮 溶解 上柱 洗脫 濃縮干燥 水飛薊素機(jī)械榨油粉碎提取4次每次4h分離植物油丙酮硅膠柱黃酮類、酚酸類 乙腈水酸系統(tǒng)皂苷類 乙腈水系統(tǒng)生物堿類 乙腈三乙胺系統(tǒng)danshensuprotocatechuic acidprotocatechuic aldehydr