實驗二培養(yǎng)基的制備與高壓鍋的使用

1、實驗二實驗二 培養(yǎng)基的制備培養(yǎng)基的制備一、目的與要求一、目的與要求 1、掌握一般培養(yǎng)基制備的原則和要求、掌握一般培養(yǎng)基制備的原則和要求 2、了解培養(yǎng)基的配制原理，掌握制備、了解培養(yǎng)基的配制原理，掌握制備培養(yǎng)基的過程培養(yǎng)基的過程 3、學(xué)習(xí)高壓蒸汽滅菌鍋操作技術(shù)、學(xué)習(xí)高壓蒸汽滅菌鍋操作技術(shù)二、原理二、原理 不同的微生物生長繁殖都需要提供一定的營養(yǎng)條件，在實不同的微生物生長繁殖都需要提供一定的營養(yǎng)條件，在實驗室中，微生物的營養(yǎng)由培養(yǎng)基來提供。驗室中，微生物的營養(yǎng)由培養(yǎng)基來提供。 培養(yǎng)基：是按照微生物生長繁殖所需要的營養(yǎng)物質(zhì)，用人工方培養(yǎng)基：是按照微生物生長繁殖所需要的營養(yǎng)物質(zhì)，用人工方法配制而成的營

2、養(yǎng)基質(zhì)。法配制而成的營養(yǎng)基質(zhì)。 除營養(yǎng)條件以外，微生物必須在最適酸堿度范圍內(nèi)才表現(xiàn)除營養(yǎng)條件以外，微生物必須在最適酸堿度范圍內(nèi)才表現(xiàn)出最大生命力，因此，應(yīng)針對不同的微生物將培養(yǎng)基的出最大生命力，因此，應(yīng)針對不同的微生物將培養(yǎng)基的pH值值調(diào)節(jié)到適當(dāng)范圍。調(diào)節(jié)到適當(dāng)范圍。培養(yǎng)基的分類培養(yǎng)基的分類 （1）根據(jù)培養(yǎng)基原料來源不同：）根據(jù)培養(yǎng)基原料來源不同：天然培養(yǎng)基、天然培養(yǎng)基、合成培養(yǎng)基、半合成培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基、半合成培養(yǎng)基 （2）根據(jù)物理性狀分為：）根據(jù)物理性狀分為：液體培養(yǎng)基、固體培液體培養(yǎng)基、固體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基 （3）根據(jù)培養(yǎng)目的不同：）根據(jù)培養(yǎng)目的不同：鑒別培養(yǎng)基、分

3、離培鑒別培養(yǎng)基、分離培養(yǎng)基、選擇培養(yǎng)基養(yǎng)基、選擇培養(yǎng)基 三、操作步驟示意圖三、操作步驟示意圖按培養(yǎng)基按培養(yǎng)基配方稱量配方稱量加水加加水加熱熔化熱熔化調(diào)節(jié)調(diào)節(jié)pH值值分裝分裝包裝包裝滅菌滅菌檢查滅菌檢查滅菌徹底與否徹底與否四、培養(yǎng)基的配制四、培養(yǎng)基的配制 （1）稱量）稱量 按培養(yǎng)基配方稱量。按培養(yǎng)基配方稱量。 （2）溶化）溶化 用燒杯先裝少許水用燒杯先裝少許水, 將培養(yǎng)基倒入燒杯中，加足水，將培養(yǎng)基倒入燒杯中，加足水，然后在電爐上加熱溶化。然后在電爐上加熱溶化。 （3）PH值值 用用PH測量儀測定，并用測量儀測定，并用1%氧化鈉或氧化鈉或5%鹽酸調(diào)節(jié)到鹽酸調(diào)節(jié)到所需的所需的PH值。值。 （4）分

4、裝）分裝 根據(jù)不同需要，立即趁熱裝入試管或培養(yǎng)皿中。根據(jù)不同需要，立即趁熱裝入試管或培養(yǎng)皿中。注意事項注意事項： （1）不要使培養(yǎng)基沾在管口，如沾上，需用干凈的紗布擦）不要使培養(yǎng)基沾在管口，如沾上，需用干凈的紗布擦干凈。干凈。 （2）液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基：分裝高度以試管的：分裝高度以試管的1/4左右為宜。左右為宜。 固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基：分裝試管，其裝量為管高的：分裝試管，其裝量為管高的 1/61/5滅菌后制成斜面。分裝培養(yǎng)皿，普通培養(yǎng)皿容量以滅菌后制成斜面。分裝培養(yǎng)皿，普通培養(yǎng)皿容量以15ml為為宜。宜。 半固體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基：分裝試管一般以試管高度的：分裝試管一般以試管高度的1/3為宜

5、，為宜，滅菌后，垂直待凝成半固體深層瓊脂。滅菌后，垂直待凝成半固體深層瓊脂。 （3）裝好培養(yǎng)基的試管都要加上試管塞，這樣既可過濾空）裝好培養(yǎng)基的試管都要加上試管塞，這樣既可過濾空氣，避免雜菌侵入，又可減緩培養(yǎng)基水分的蒸發(fā)。氣，避免雜菌侵入，又可減緩培養(yǎng)基水分的蒸發(fā)。 （4）包裝：試管口部分，用報紙包扎。方式：）包裝：試管口部分，用報紙包扎。方式：五、高壓蒸汽滅菌五、高壓蒸汽滅菌 高壓蒸汽滅菌鍋是一個耐高壓又密閉的金屬高壓蒸汽滅菌鍋是一個耐高壓又密閉的金屬鍋。它是利用在密閉條件下產(chǎn)生高壓蒸汽來達鍋。它是利用在密閉條件下產(chǎn)生高壓蒸汽來達到滅菌的效果。其溫度在到滅菌的效果。其溫度在121左右，有強大

6、左右，有強大的殺菌能力。因此它是一種用途廣泛，效率高的殺菌能力。因此它是一種用途廣泛，效率高的滅菌工具。的滅菌工具。具體操作步驟：具體操作步驟：（1）加入適量自來水于滅菌鍋中（至水位線）。）加入適量自來水于滅菌鍋中（至水位線）。（2）擺入上述包裝好的待滅菌的培養(yǎng)基（）擺入上述包裝好的待滅菌的培養(yǎng)基（注意：不要擺得太擠，以免影注意：不要擺得太擠，以免影響蒸汽流通和滅菌效果）。響蒸汽流通和滅菌效果）。（3）加蓋旋緊螺旋，使蒸汽鍋密閉不漏氣（對角線均勻擰旋）。）加蓋旋緊螺旋，使蒸汽鍋密閉不漏氣（對角線均勻擰旋）。（4）打開放氣閥，打開電源，自開始產(chǎn)生蒸汽后）打開放氣閥，打開電源，自開始產(chǎn)生蒸汽后10

7、分鐘（此時蒸汽鍋內(nèi)分鐘（此時蒸汽鍋內(nèi)的冷空氣由排氣閥排盡）關(guān)緊放氣閥，讓溫度隨蒸汽壓力上升而上升，當(dāng)?shù)睦淇諝庥膳艢忾y排盡）關(guān)緊放氣閥，讓溫度隨蒸汽壓力上升而上升，當(dāng)達所需壓力時控制熱源維持所需時間（達所需壓力時控制熱源維持所需時間（1530分鐘）然后停止加熱，讓分鐘）然后停止加熱，讓其自然冷卻。其自然冷卻。（5）待壓力降至）待壓力降至0時，打開排氣閥，再打開鍋蓋，取出滅菌物。時，打開排氣閥，再打開鍋蓋，取出滅菌物。注意：壓力未降至注意：壓力未降至0時，切勿打開鍋蓋，否則突然降壓，招致培養(yǎng)基沸騰，時，切勿打開鍋蓋，否則突然降壓，招致培養(yǎng)基沸騰，沾濕棉塞，甚至沖出管外。沾濕棉塞，甚至沖出管外。（6）自鍋中取出滅菌好的培養(yǎng)基，放置稍冷卻后擺成斜面，或倒入滅菌）自鍋中取出滅菌好的培養(yǎng)基，放置稍冷卻后擺成斜面，或倒入滅菌的培養(yǎng)皿（的培養(yǎng)皿（15ml左右）中冷卻后置入左右）中冷卻后置入37恒溫箱培養(yǎng)恒溫箱培養(yǎng)24小時，無菌生長，小時，無菌生長，方可保存?zhèn)溆?。方可保存?zhèn)溆谩Ｋ伎甲鳂I(yè)題思考作業(yè)題 1、配制培養(yǎng)基應(yīng)注意哪些問題？、配制培養(yǎng)基應(yīng)注意