免疫細(xì)胞分離與其表面標(biāo)志檢測(cè)工作技術(shù)應(yīng)用

1、免疫細(xì)胞分離與其表面標(biāo)志檢測(cè)工作技術(shù)應(yīng)用第一節(jié)第一節(jié) 免疫細(xì)胞的分離免疫細(xì)胞的分離 一、一、 外周血單個(gè)核細(xì)胞分離外周血單個(gè)核細(xì)胞分離 二、二、 淋巴細(xì)胞的分離淋巴細(xì)胞的分離 三、三、 T T細(xì)胞和細(xì)胞和B B細(xì)胞的分離細(xì)胞的分離 四、四、 T T細(xì)胞亞群的分離細(xì)胞亞群的分離第二節(jié)第二節(jié) 淋巴細(xì)胞標(biāo)志及亞群分類淋巴細(xì)胞標(biāo)志及亞群分類 一、一、 細(xì)胞表面標(biāo)志及亞群細(xì)胞表面標(biāo)志及亞群 二、二、 B B細(xì)胞表面標(biāo)志細(xì)胞表面標(biāo)志 三、三、 NKNK細(xì)胞表面標(biāo)志細(xì)胞表面標(biāo)志第三節(jié)第三節(jié) 其他的免疫細(xì)胞其他的免疫細(xì)胞第四節(jié)第四節(jié) 免疫細(xì)胞表面標(biāo)志的檢測(cè)及應(yīng)用免疫細(xì)胞表面標(biāo)志的檢測(cè)及應(yīng)用 一、一、免疫細(xì)胞表

2、面標(biāo)志的檢測(cè)方法免疫細(xì)胞表面標(biāo)志的檢測(cè)方法 二、二、 淋巴細(xì)胞表面標(biāo)志檢測(cè)的臨床意義淋巴細(xì)胞表面標(biāo)志檢測(cè)的臨床意義思考題思考題小結(jié)小結(jié) 第一節(jié)第一節(jié) 免疫細(xì)胞的分離免疫細(xì)胞的分離 外周血單個(gè)核細(xì)胞分離外周血單個(gè)核細(xì)胞分離 淋巴細(xì)胞的分離淋巴細(xì)胞的分離 T T細(xì)胞和細(xì)胞和B B細(xì)胞的分離細(xì)胞的分離 T T細(xì)胞亞群的分離細(xì)胞亞群的分離一、外周血單個(gè)核細(xì)胞分離一、外周血單個(gè)核細(xì)胞分離 外周血單個(gè)核細(xì)胞外周血單個(gè)核細(xì)胞（peripheralmononuclearcells,PMNC）包括淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞（包括淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞（monocyte）。）。 Ficoll分離液法主要用于分離外周血中的單個(gè)

3、核細(xì)胞，是分離液法主要用于分離外周血中的單個(gè)核細(xì)胞，是一種單次差速密度梯度離心的分離法。一種單次差速密度梯度離心的分離法。 細(xì)胞分離基本原理細(xì)胞分離基本原理不同細(xì)胞密度不同不同細(xì)胞密度不同不同細(xì)胞表面生物學(xué)特性不同不同細(xì)胞表面生物學(xué)特性不同不同細(xì)胞表面分化抗原不同不同細(xì)胞表面分化抗原不同不同細(xì)胞密度不同不同細(xì)胞密度不同人的紅細(xì)胞密度為人的紅細(xì)胞密度為1.093 粒細(xì)胞密度為粒細(xì)胞密度為1.092 單個(gè)核細(xì)胞（淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞）的密度為單個(gè)核細(xì)胞（淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞）的密度為 不同細(xì)胞密度不同不同細(xì)胞密度不同用用1.0771.0770.0010.001的分層液可將細(xì)胞分離的分層液可將細(xì)胞分離

4、密度梯度離心密度梯度離心(Ficoll)(Ficoll)離心離心二二、淋巴細(xì)胞分離、淋巴細(xì)胞分離貼壁粘附法貼壁粘附法 吸附柱過濾法吸附柱過濾法 磁鐵吸引法磁鐵吸引法 Percoll Percoll 分離液法分離液法 （連續(xù)密度梯度離心）（連續(xù)密度梯度離心）（去單核細(xì)胞）（去單核細(xì)胞）E E花環(huán)沉降法花環(huán)沉降法 尼龍毛柱分離法尼龍毛柱分離法 三、三、T T細(xì)胞和細(xì)胞和B B細(xì)胞的分離細(xì)胞的分離四、四、T T細(xì)胞亞群的分離細(xì)胞亞群的分離 親和板結(jié)合分離法親和板結(jié)合分離法 磁性微球分離法磁性微球分離法 熒光激活細(xì)胞分離儀分離法熒光激活細(xì)胞分離儀分離法 熒光激活細(xì)胞分離儀分離法熒光激活細(xì)胞分離儀分離法

5、 磁珠大小可以選擇磁珠大小可以選擇大小免疫磁珠分離細(xì)胞的特點(diǎn)比較大小免疫磁珠分離細(xì)胞的特點(diǎn)比較 比較項(xiàng)目比較項(xiàng)目大磁珠大磁珠小磁珠小磁珠對(duì)細(xì)胞的影響對(duì)細(xì)胞的影響對(duì)細(xì)胞造成機(jī)械壓力，影響對(duì)細(xì)胞造成機(jī)械壓力，影響其生物學(xué)活性，不利于分離其生物學(xué)活性，不利于分離后培養(yǎng)。后培養(yǎng)。對(duì)細(xì)胞溫和，不影響分離細(xì)對(duì)細(xì)胞溫和，不影響分離細(xì)胞的后續(xù)培養(yǎng)。胞的后續(xù)培養(yǎng)。對(duì)流式細(xì)胞儀的影響對(duì)流式細(xì)胞儀的影響阻塞流式細(xì)胞儀的噴嘴，影阻塞流式細(xì)胞儀的噴嘴，影響散射光。響散射光。可直接上流式細(xì)胞儀檢測(cè)，可直接上流式細(xì)胞儀檢測(cè)，不影響散射光。不影響散射光。分離條件要求分離條件要求技術(shù)簡(jiǎn)單，分離可在試管中技術(shù)簡(jiǎn)單，分離可在試管中

6、完成。完成。需要很強(qiáng)的磁場(chǎng)來分離細(xì)胞需要很強(qiáng)的磁場(chǎng)來分離細(xì)胞。 收率收率得率高。得率高。得率不高。得率不高。純度純度純度低。純度低。純度高。純度高。分離時(shí)間分離時(shí)間分離速度快。分離速度快。分離速度慢。分離速度慢。分離成本分離成本成本低。成本低。需要很強(qiáng)的磁場(chǎng)來分離細(xì)胞需要很強(qiáng)的磁場(chǎng)來分離細(xì)胞，需要一次性的分離柱，不，需要一次性的分離柱，不能在普通試管進(jìn)行。能在普通試管進(jìn)行。免疫磁珠法細(xì)胞分選過程免疫磁珠法細(xì)胞分選過程免免疫疫磁磁珠珠細(xì)細(xì)胞胞分分選選裝裝置置全自動(dòng)細(xì)胞分選系統(tǒng)全自動(dòng)細(xì)胞分選系統(tǒng)流式細(xì)胞分析儀流式細(xì)胞分析儀第二節(jié)第二節(jié) 淋巴細(xì)胞標(biāo)志及亞群分類淋巴細(xì)胞標(biāo)志及亞群分類 常用于鑒定和檢測(cè)

7、淋巴細(xì)胞表面標(biāo)志是常用于鑒定和檢測(cè)淋巴細(xì)胞表面標(biāo)志是簇分化抗原（簇分化抗原（Cluster of Cluster of differentiationdifferentiation，CDCD）。）。 細(xì)胞表面分化抗原（細(xì)胞表面分化抗原（CDCD抗原抗原）適用于適用于T T、B B細(xì)胞的分離細(xì)胞的分離已知已知CDCD抗原細(xì)胞亞群的分離抗原細(xì)胞亞群的分離未知未知CDCD抗原細(xì)胞亞群的分離抗原細(xì)胞亞群的分離（陰性分選）（陰性分選）一、一、T T細(xì)胞表面標(biāo)志及其亞群細(xì)胞表面標(biāo)志及其亞群 CD3+CD4+CD8-輔助性輔助性T細(xì)胞細(xì)胞（helpTcell,Th） CD3+CD4-CD8+細(xì)胞毒性細(xì)胞毒性

8、T細(xì)胞細(xì)胞（cytotoxicTcell,TcorCTL） CD4+CD25+調(diào)節(jié)性調(diào)節(jié)性T細(xì)胞細(xì)胞（regulatoryTcell,TrorTreg）二、二、B B細(xì)胞表面標(biāo)志細(xì)胞表面標(biāo)志 SmIgSmIg、FcFc受體、補(bǔ)體受體、受體、補(bǔ)體受體、EBEB病毒受體，部分病毒受體，部分CDCD分子分子是是B B細(xì)胞的重要表面標(biāo)志，其中以細(xì)胞的重要表面標(biāo)志，其中以SmIgSmIg為為B B細(xì)胞所特有，細(xì)胞所特有，是鑒定是鑒定B B細(xì)胞可靠的指標(biāo)。細(xì)胞可靠的指標(biāo)。 CD19/CD5CD19/CD5分子：可將分子：可將B B細(xì)胞區(qū)分為細(xì)胞區(qū)分為B1B1細(xì)胞和細(xì)胞和B2B2細(xì)胞，細(xì)胞，B1B1細(xì)胞為細(xì)

9、胞為CD19CD19和和CD5CD5雙陽(yáng)性，而雙陽(yáng)性，而B2B2細(xì)胞僅為細(xì)胞僅為CD19CD19陽(yáng)性，陽(yáng)性，B2B2細(xì)胞為通常所指的細(xì)胞為通常所指的B B細(xì)胞。細(xì)胞。 三、三、NKNK細(xì)胞表面標(biāo)志細(xì)胞表面標(biāo)志 人類人類NK細(xì)胞表面標(biāo)志主要以細(xì)胞表面標(biāo)志主要以CD16、CD56來認(rèn)定，臨床上將來認(rèn)定，臨床上將CD3-CD56+CD16+淋巴細(xì)胞認(rèn)定為淋巴細(xì)胞認(rèn)定為NK細(xì)胞。細(xì)胞。T細(xì)胞及細(xì)胞及NK細(xì)胞細(xì)胞第三節(jié)第三節(jié) 其他的免疫細(xì)胞其他的免疫細(xì)胞抗原提呈類細(xì)胞表面標(biāo)志抗原提呈類細(xì)胞表面標(biāo)志第四節(jié)第四節(jié) 免疫細(xì)胞表面標(biāo)志的檢測(cè)及應(yīng)用免疫細(xì)胞表面標(biāo)志的檢測(cè)及應(yīng)用 免疫細(xì)胞表面標(biāo)志的檢測(cè)方法免疫細(xì)胞表

10、面標(biāo)志的檢測(cè)方法 淋巴細(xì)胞表面標(biāo)志檢測(cè)的臨床意義淋巴細(xì)胞表面標(biāo)志檢測(cè)的臨床意義一、免疫細(xì)胞表面標(biāo)志的檢測(cè)一、免疫細(xì)胞表面標(biāo)志的檢測(cè)抗體致敏細(xì)胞花環(huán)法抗體致敏細(xì)胞花環(huán)法 免疫細(xì)胞化學(xué)法免疫細(xì)胞化學(xué)法 免疫熒光法免疫熒光法 流式細(xì)胞分析法流式細(xì)胞分析法 二、淋巴細(xì)胞表面標(biāo)志檢測(cè)的臨床意義二、淋巴細(xì)胞表面標(biāo)志檢測(cè)的臨床意義 淋巴細(xì)胞表面標(biāo)志檢測(cè)是評(píng)價(jià)免疫功能的重淋巴細(xì)胞表面標(biāo)志檢測(cè)是評(píng)價(jià)免疫功能的重要指標(biāo)。要指標(biāo)。 對(duì)對(duì)CD4+CD4+和和CD8+TCD8+T細(xì)胞的測(cè)定，有助于免疫缺細(xì)胞的測(cè)定，有助于免疫缺陷疾病、自身免疫性疾病和移植排斥反應(yīng)的陷疾病、自身免疫性疾病和移植排斥反應(yīng)的監(jiān)測(cè)。監(jiān)測(cè)。 臨床

11、常見疾病中的臨床常見疾病中的T淋巴細(xì)胞的變化淋巴細(xì)胞的變化思考題思考題1.1.免疫細(xì)胞都包括哪些細(xì)胞？為什么要將其分離純化？免疫細(xì)胞都包括哪些細(xì)胞？為什么要將其分離純化？2.2.淋巴細(xì)胞有哪幾類細(xì)胞？能用形態(tài)學(xué)的方法加以區(qū)別淋巴細(xì)胞有哪幾類細(xì)胞？能用形態(tài)學(xué)的方法加以區(qū)別嗎？嗎？3.3.將細(xì)胞分離的原理有哪些？各有什么特點(diǎn)？將細(xì)胞分離的原理有哪些？各有什么特點(diǎn)？4.4.形態(tài)學(xué)相同的一類細(xì)胞為什么還要分亞群？形態(tài)學(xué)相同的一類細(xì)胞為什么還要分亞群？5.T5.T細(xì)胞和細(xì)胞和B B細(xì)胞進(jìn)一步區(qū)分亞群的依據(jù)是什么？細(xì)胞進(jìn)一步區(qū)分亞群的依據(jù)是什么？6.6.什么是細(xì)胞表面標(biāo)志？其作用是什么？什么是細(xì)胞表面標(biāo)志？其作用是什么？7.7.細(xì)胞表面標(biāo)志的檢測(cè)方法有哪些？細(xì)胞表面標(biāo)志的檢測(cè)方法有哪些？8.8.利用細(xì)胞表面標(biāo)志（利用細(xì)胞表面標(biāo)志（CDCD抗原）分離細(xì)胞的方法有哪幾種？抗原）分離細(xì)胞的方法有哪幾種？9.T9.T細(xì)胞、細(xì)胞、B B細(xì)胞、細(xì)胞、NKNK細(xì)胞、單核細(xì)胞的主要生物標(biāo)志是細(xì)胞、單核細(xì)胞的主要生物標(biāo)志是什么？什么？10.10.淋巴細(xì)胞表面標(biāo)志檢測(cè)的臨床意義是什么？淋巴細(xì)胞表面標(biāo)志檢測(cè)的臨床意義是什么？小小 結(jié)結(jié) 淋巴細(xì)胞并不是功能單一的群體，但其