基因工程與克隆技術(shù)

1、基因工程與克隆技術(shù)基因工程相關(guān)知識整合基因工程相關(guān)知識整合 概述基因工程和蛋白質(zhì)工程基本操作過概述基因工程和蛋白質(zhì)工程基本操作過程，并思考下列問題。程，并思考下列問題。答案答案 基因工程基本操作過程：獲取目的基因基因工程基本操作過程：獲取目的基因構(gòu)建構(gòu)建基因表達(dá)載體基因表達(dá)載體將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞目的基因目的基因的檢測與鑒定。的檢測與鑒定。蛋白質(zhì)工程基本操作過程：蛋白質(zhì)預(yù)期功能蛋白質(zhì)工程基本操作過程：蛋白質(zhì)預(yù)期功能蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)的三維結(jié)構(gòu)的三維結(jié)構(gòu) 氨基酸序列的多肽鏈氨基酸序列的多肽鏈基因（基因（DNA）分子分子設(shè)計(jì)設(shè)計(jì)DNA合成合成（1）基因工程誕生的理論基礎(chǔ)和技術(shù)支持

2、分別是什么？）基因工程誕生的理論基礎(chǔ)和技術(shù)支持分別是什么？答案答案 理論基礎(chǔ)：理論基礎(chǔ)：DNA是遺傳物質(zhì)；是遺傳物質(zhì)；DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)和雙螺旋結(jié)構(gòu)和中心法則的確立；遺傳密碼的破譯。中心法則的確立；遺傳密碼的破譯。技術(shù)支持：基因轉(zhuǎn)移載體的發(fā)現(xiàn)；工具酶的發(fā)明；技術(shù)支持：基因轉(zhuǎn)移載體的發(fā)現(xiàn)；工具酶的發(fā)明；DNA體外體外重組的實(shí)現(xiàn)；重組重組的實(shí)現(xiàn)；重組DNA表達(dá)實(shí)驗(yàn)的成功。表達(dá)實(shí)驗(yàn)的成功。 （2）基因工程的基本操作步驟中哪幾處用到了限制酶，）基因工程的基本操作步驟中哪幾處用到了限制酶，其特性和來源是什么？又有哪幾處涉及堿基互補(bǔ)配對？其特性和來源是什么？又有哪幾處涉及堿基互補(bǔ)配對？答案答案 限制酶在第限

3、制酶在第1、2步中用到而且要求同一種，目的是步中用到而且要求同一種，目的是產(chǎn)生相同的黏性末端；限制酶主要從原核生物中分離純產(chǎn)生相同的黏性末端；限制酶主要從原核生物中分離純化而來，它能識別化而來，它能識別DNA分子的某種特定的核苷酸序列，分子的某種特定的核苷酸序列，并且切割兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵，產(chǎn)生的末端有并且切割兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵，產(chǎn)生的末端有黏性末端和平末端；只有第三步將目的基因?qū)胧荏w細(xì)黏性末端和平末端；只有第三步將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞不需堿基互補(bǔ)配對，其余三個(gè)步驟都涉及堿基互補(bǔ)配胞不需堿基互補(bǔ)配對，其余三個(gè)步驟都涉及堿基互補(bǔ)配對。對。（3）基因表達(dá)載體如何構(gòu)建？）基因表達(dá)載

4、體如何構(gòu)建？答案答案（4）將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞的常用方法？）將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞的常用方法？答案答案 植物細(xì)胞：農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法；動(dòng)物細(xì)胞：顯微注射法；植物細(xì)胞：農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法；動(dòng)物細(xì)胞：顯微注射法；微生物：微生物：Ca2+處理法。處理法。（5）目的基因的導(dǎo)入與表達(dá)如何進(jìn)行檢測與鑒定？）目的基因的導(dǎo)入與表達(dá)如何進(jìn)行檢測與鑒定？答案答案 分子水平檢測分子水平檢測a.導(dǎo)入檢測：導(dǎo)入檢測：DNA分子雜交技術(shù)，即使用放射性同位素標(biāo)記分子雜交技術(shù)，即使用放射性同位素標(biāo)記的含目的基因的的含目的基因的DNA片段作探針檢測。片段作探針檢測。b.表達(dá)檢測表達(dá)檢測個(gè)體生物學(xué)水平鑒定：對轉(zhuǎn)基因生物進(jìn)行抗蟲或抗病個(gè)體生

5、物學(xué)水平鑒定：對轉(zhuǎn)基因生物進(jìn)行抗蟲或抗病的接種實(shí)驗(yàn)。的接種實(shí)驗(yàn)。轉(zhuǎn)錄檢測：分子雜交法，即目的基因作轉(zhuǎn)錄檢測：分子雜交法，即目的基因作 探針與探針與mRNA雜交雜交翻譯檢測：抗原翻譯檢測：抗原抗體雜交法抗體雜交法 （09沈陽質(zhì)檢）轉(zhuǎn)基因植物油是由轉(zhuǎn)基因植沈陽質(zhì)檢）轉(zhuǎn)基因植物油是由轉(zhuǎn)基因植物通過壓榨或浸出法加工制得的，因其出油率高而被廣物通過壓榨或浸出法加工制得的，因其出油率高而被廣泛采用。我國是植物油消費(fèi)大國，每年都從國外進(jìn)口大泛采用。我國是植物油消費(fèi)大國，每年都從國外進(jìn)口大量的轉(zhuǎn)基因植物油。量的轉(zhuǎn)基因植物油。（1）在培育轉(zhuǎn)基因油料植物的過程中，基因操作需要的工）在培育轉(zhuǎn)基因油料植物的過程中，基

6、因操作需要的工具酶是具酶是 。在基因表達(dá)載體。在基因表達(dá)載體中，目的基因的首端必須含有中，目的基因的首端必須含有 ，它是，它是 識識別和結(jié)合位點(diǎn)。別和結(jié)合位點(diǎn)。（2）請寫出一種將目的基因?qū)胗土现参锛?xì)胞可以采）請寫出一種將目的基因?qū)胗土现参锛?xì)胞可以采用的方法：用的方法： 。若。若受體細(xì)胞為植物體細(xì)胞，可采用受體細(xì)胞為植物體細(xì)胞，可采用 技術(shù)技術(shù)獲得轉(zhuǎn)基因植物體，該技術(shù)所依據(jù)的原理是獲得轉(zhuǎn)基因植物體，該技術(shù)所依據(jù)的原理是 。限制性核酸內(nèi)切酶和限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶連接酶啟動(dòng)子啟動(dòng)子RNA聚合酶聚合酶農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化（或基因槍、花粉管通農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化（或基因槍、花粉管通道）法道）法植物組植物組織培

7、養(yǎng)織培養(yǎng)植物細(xì)胞全能性植物細(xì)胞全能性（3）若要檢測（）若要檢測（2）中獲得的植物細(xì)胞染色體上是否含有目的）中獲得的植物細(xì)胞染色體上是否含有目的基因，可采用基因，可采用技術(shù)。而想要得知上述植技術(shù)。而想要得知上述植物是否真的出油率高，應(yīng)如何做？物是否真的出油率高，應(yīng)如何做？ 。（4）若利用蛋白質(zhì)工程繼續(xù)提高油料植物的出油率，其）若利用蛋白質(zhì)工程繼續(xù)提高油料植物的出油率，其設(shè)計(jì)流程應(yīng)從預(yù)期的設(shè)計(jì)流程應(yīng)從預(yù)期的 出發(fā)，設(shè)計(jì)預(yù)期的出發(fā)，設(shè)計(jì)預(yù)期的 結(jié)構(gòu)，推測出應(yīng)有的結(jié)構(gòu)，推測出應(yīng)有的 序列，然后找到相對應(yīng)的序列，然后找到相對應(yīng)的 序列，再用轉(zhuǎn)基因技術(shù)改變其現(xiàn)有性狀。序列，再用轉(zhuǎn)基因技術(shù)改變其現(xiàn)有性狀。D

8、NA分子雜交分子雜交將該植物制出植物油與同等質(zhì)量的非轉(zhuǎn)基因植物制出將該植物制出植物油與同等質(zhì)量的非轉(zhuǎn)基因植物制出的植物油稱重比較的植物油稱重比較蛋白質(zhì)功能蛋白質(zhì)功能蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)氨基酸氨基酸脫氧核苷酸脫氧核苷酸關(guān)鍵信息關(guān)鍵信息 “工具酶工具酶”、“植物細(xì)胞植物細(xì)胞”、“原理原理”、“染色染色體上體上”、“預(yù)期預(yù)期”知識依據(jù)知識依據(jù) 基因工程和蛋白質(zhì)工程基因工程和蛋白質(zhì)工程完整分析完整分析 （1）轉(zhuǎn)基因植物的培育過程中，基因工）轉(zhuǎn)基因植物的培育過程中，基因工具酶是限制性核酸內(nèi)切酶和具酶是限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶，目的基因連接酶，目的基因只有含有啟動(dòng)子，才能被只有含有啟動(dòng)子，才能被RNA聚合酶

9、識別并與之結(jié)聚合酶識別并與之結(jié)合進(jìn)行轉(zhuǎn)錄。（合進(jìn)行轉(zhuǎn)錄。（2）接受目的基因的受體細(xì)胞若為植）接受目的基因的受體細(xì)胞若為植物體細(xì)胞，可采用植物組織培養(yǎng)技術(shù)獲得轉(zhuǎn)基因植物。物體細(xì)胞，可采用植物組織培養(yǎng)技術(shù)獲得轉(zhuǎn)基因植物。（3）通過對比轉(zhuǎn)基因植物與普通的非轉(zhuǎn)基因植物的）通過對比轉(zhuǎn)基因植物與普通的非轉(zhuǎn)基因植物的出油率，可得知轉(zhuǎn)基因植物是否真的出油率高。出油率，可得知轉(zhuǎn)基因植物是否真的出油率高。（4）蛋白質(zhì)工程設(shè)計(jì)流程是：預(yù)期蛋白質(zhì)的功能）蛋白質(zhì)工程設(shè)計(jì)流程是：預(yù)期蛋白質(zhì)的功能設(shè)計(jì)預(yù)期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)預(yù)期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)推出應(yīng)有的氨基酸序列推出應(yīng)有的氨基酸序列找找到相應(yīng)的脫氧核苷酸序列。到相應(yīng)的脫氧核苷酸序

10、列。植物組織培養(yǎng)和植物體細(xì)胞雜交植物組織培養(yǎng)和植物體細(xì)胞雜交 圖示植物組織培養(yǎng)和植物體細(xì)胞雜交過程，圖示植物組織培養(yǎng)和植物體細(xì)胞雜交過程，并思考下列問題。并思考下列問題。 （1）上述兩過程依據(jù)的原理是什么？）上述兩過程依據(jù)的原理是什么？答案答案 植物組織培養(yǎng)：細(xì)胞全能性；植物體細(xì)胞雜交：細(xì)胞膜的植物組織培養(yǎng)：細(xì)胞全能性；植物體細(xì)胞雜交：細(xì)胞膜的流動(dòng)性和細(xì)胞的全能性。流動(dòng)性和細(xì)胞的全能性。（2）在植物體細(xì)胞雜交過程中，原生質(zhì)體經(jīng)誘導(dǎo)劑處理）在植物體細(xì)胞雜交過程中，原生質(zhì)體經(jīng)誘導(dǎo)劑處理后，會有幾種細(xì)胞類型？后，會有幾種細(xì)胞類型？答案答案 5種：甲、乙、甲甲、乙乙、甲乙種：甲、乙、甲甲、乙乙、甲乙

11、野生馬鈴薯品種的植株具有較強(qiáng)的抗病、抗野生馬鈴薯品種的植株具有較強(qiáng)的抗病、抗蟲、抗鹽堿、抗寒能力，但塊莖不能食用。俄、德、芬蟲、抗鹽堿、抗寒能力，但塊莖不能食用。俄、德、芬蘭專家共同做實(shí)驗(yàn)研究，用野生馬鈴薯與馬鈴薯的體細(xì)蘭專家共同做實(shí)驗(yàn)研究，用野生馬鈴薯與馬鈴薯的體細(xì)胞進(jìn)行雜交，培育出了生活能力強(qiáng)的雜交系馬鈴薯。據(jù)胞進(jìn)行雜交，培育出了生活能力強(qiáng)的雜交系馬鈴薯。據(jù)圖分析回答問題：圖分析回答問題： （1）過程植物細(xì)胞原生質(zhì)體的分離需經(jīng)過酶解，其中）過程植物細(xì)胞原生質(zhì)體的分離需經(jīng)過酶解，其中“酶解酶解”所用的酶應(yīng)該包括所用的酶應(yīng)該包括 。（2）過程可用聚乙二醇（）過程可用聚乙二醇（PEG），其目的是

12、），其目的是 。（3）請用文字和箭頭表示出技術(shù)過程的實(shí)驗(yàn)流程：）請用文字和箭頭表示出技術(shù)過程的實(shí)驗(yàn)流程： 。由此過程。由此過程可以看出植物細(xì)胞有形成完整個(gè)體的可能性，這是可以看出植物細(xì)胞有形成完整個(gè)體的可能性，這是 。（4）在培養(yǎng)基上培養(yǎng)一段時(shí)間后，原生質(zhì)體會再生出細(xì)）在培養(yǎng)基上培養(yǎng)一段時(shí)間后，原生質(zhì)體會再生出細(xì)胞壁?？梢匀?，通過胞壁?？梢匀?，通過 實(shí)驗(yàn)來鑒實(shí)驗(yàn)來鑒別細(xì)胞壁是否已經(jīng)再生。別細(xì)胞壁是否已經(jīng)再生。纖維素酶、果膠酶纖維素酶、果膠酶誘導(dǎo)原誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合生質(zhì)體融合融合細(xì)胞融合細(xì)胞 愈傷組織愈傷組織 幼苗幼苗脫分化脫分化再分化再分化植物植物細(xì)胞具有全能性的表現(xiàn)細(xì)胞具有全能性的表現(xiàn)植物

13、細(xì)胞的質(zhì)壁分離與復(fù)原植物細(xì)胞的質(zhì)壁分離與復(fù)原（5）請說明運(yùn)用植物體細(xì)胞雜交法的最大好處：）請說明運(yùn)用植物體細(xì)胞雜交法的最大好處： ?？梢钥梢钥朔煌镞h(yuǎn)緣雜交不親和的障礙克服不同生物遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙關(guān)鍵信息關(guān)鍵信息 “酶酶”、“聚乙二醇聚乙二醇”、“文字和箭頭文字和箭頭”、“細(xì)細(xì)胞壁胞壁”知識依據(jù)知識依據(jù) 植物體細(xì)胞雜交植物體細(xì)胞雜交完整分析完整分析 （1）若去掉細(xì)胞壁而獲得原生質(zhì)體，需用）若去掉細(xì)胞壁而獲得原生質(zhì)體，需用纖維素酶和果膠酶來處理。（纖維素酶和果膠酶來處理。（2）用聚乙二醇處理原生）用聚乙二醇處理原生質(zhì)體，可以誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合。（質(zhì)體，可以誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合。（3）分別為脫分

14、）分別為脫分化和再分化過程，能夠形成一個(gè)完整植株，體現(xiàn)出植化和再分化過程，能夠形成一個(gè)完整植株，體現(xiàn)出植物細(xì)胞的全能性。（物細(xì)胞的全能性。（4）可以通過質(zhì)壁分離與復(fù)原實(shí)驗(yàn)）可以通過質(zhì)壁分離與復(fù)原實(shí)驗(yàn)來鑒別原生質(zhì)體是否再生出細(xì)胞壁。（來鑒別原生質(zhì)體是否再生出細(xì)胞壁。（5）植物體細(xì)胞）植物體細(xì)胞雜交最大好處在于可以克服遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙。雜交最大好處在于可以克服遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙。 圖示動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞核移植和單克隆圖示動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞核移植和單克隆抗體制備過程，并思考以下問題?？贵w制備過程，并思考以下問題。動(dòng)物組織工程技術(shù)的相關(guān)知識整合動(dòng)物組織工程技術(shù)的相關(guān)知識整合（1）上述過程的原理是

15、什么？）上述過程的原理是什么？答案答案 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)：細(xì)胞增殖；細(xì)胞核移植動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)：細(xì)胞增殖；細(xì)胞核移植:細(xì)胞核細(xì)胞核全能性；單克隆抗體的制備原理：全能性；單克隆抗體的制備原理：a.免疫原理：經(jīng)免疫的免疫原理：經(jīng)免疫的B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生特異性抗體。淋巴細(xì)胞產(chǎn)生特異性抗體。b.增殖原理：骨髓瘤細(xì)胞能在增殖原理：骨髓瘤細(xì)胞能在體外培養(yǎng)的條件下大量增殖。體外培養(yǎng)的條件下大量增殖。c.融合原理：細(xì)胞膜的流動(dòng)性以及病毒對宿主細(xì)胞的穿透性。融合原理：細(xì)胞膜的流動(dòng)性以及病毒對宿主細(xì)胞的穿透性。（2）區(qū)分原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)、細(xì)胞株和細(xì)胞系。）區(qū)分原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)、細(xì)胞株和細(xì)胞系。答案答案 原代培養(yǎng)：可有兩種

16、表述。原代培養(yǎng)：可有兩種表述。a.細(xì)胞懸浮液第一次在瓶中細(xì)胞懸浮液第一次在瓶中培養(yǎng)，沒有分瓶培養(yǎng)之前的細(xì)胞培養(yǎng)；培養(yǎng)，沒有分瓶培養(yǎng)之前的細(xì)胞培養(yǎng)；b.第第1代細(xì)胞的培養(yǎng)與代細(xì)胞的培養(yǎng)與傳傳10代以內(nèi)的細(xì)胞培養(yǎng)統(tǒng)稱為原代培養(yǎng)。兩種表述沒有本質(zhì)區(qū)代以內(nèi)的細(xì)胞培養(yǎng)統(tǒng)稱為原代培養(yǎng)。兩種表述沒有本質(zhì)區(qū)別。別。傳代培養(yǎng)：同樣有兩種表述。傳代培養(yǎng)：同樣有兩種表述。a.細(xì)胞懸浮液培養(yǎng)一段時(shí)間細(xì)胞懸浮液培養(yǎng)一段時(shí)間后，分瓶再進(jìn)行的細(xì)胞培養(yǎng)；后，分瓶再進(jìn)行的細(xì)胞培養(yǎng)；b.傳傳10代以后的細(xì)胞培養(yǎng)，代以后的細(xì)胞培養(yǎng)，統(tǒng)稱為傳代培養(yǎng)。統(tǒng)稱為傳代培養(yǎng)。細(xì)胞株：原代培養(yǎng)的細(xì)胞一般傳至細(xì)胞株：原代培養(yǎng)的細(xì)胞一般傳至10代左

17、右會出現(xiàn)生長停滯，代左右會出現(xiàn)生長停滯，衰老死亡，少數(shù)度過衰老死亡，少數(shù)度過“危機(jī)危機(jī)”的細(xì)胞能傳的細(xì)胞能傳4050代，形成細(xì)胞代，形成細(xì)胞株。細(xì)胞株的遺傳物質(zhì)并沒有發(fā)生改變。株。細(xì)胞株的遺傳物質(zhì)并沒有發(fā)生改變。細(xì)胞系：細(xì)胞株傳至細(xì)胞系：細(xì)胞株傳至50代以后，會出現(xiàn)第二次危機(jī)，少數(shù)代以后，會出現(xiàn)第二次危機(jī)，少數(shù)度過第二次危機(jī)的細(xì)胞能夠無限制地傳下去，形成細(xì)胞系。度過第二次危機(jī)的細(xì)胞能夠無限制地傳下去，形成細(xì)胞系。細(xì)胞系的遺傳物質(zhì)發(fā)生了改變，有癌細(xì)胞的特點(diǎn)。細(xì)胞系的遺傳物質(zhì)發(fā)生了改變，有癌細(xì)胞的特點(diǎn)。（3）單克隆抗體制備過程中有哪兩次篩選？）單克隆抗體制備過程中有哪兩次篩選？答案答案 第一次篩選

18、是將未融合的第一次篩選是將未融合的B細(xì)胞、骨髓瘤細(xì)胞以及細(xì)胞、骨髓瘤細(xì)胞以及BB融融合、瘤瘤融合的細(xì)胞通過選擇培養(yǎng)基淘汰，篩選出合、瘤瘤融合的細(xì)胞通過選擇培養(yǎng)基淘汰，篩選出B瘤融合的瘤融合的細(xì)胞。細(xì)胞。第二次篩選是將產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞通過細(xì)胞第二次篩選是將產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞通過細(xì)胞培養(yǎng)用相應(yīng)抗原檢測的辦法篩選出來。因?yàn)閺捏w內(nèi)獲培養(yǎng)用相應(yīng)抗原檢測的辦法篩選出來。因?yàn)閺捏w內(nèi)獲取的免疫過的取的免疫過的B淋巴細(xì)胞有很多種，形成的雜交瘤細(xì)胞淋巴細(xì)胞有很多種，形成的雜交瘤細(xì)胞有很多種，所以需篩選出產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞。有很多種，所以需篩選出產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞。 （09濰坊質(zhì)檢）人濰坊

19、質(zhì)檢）人CD20單克隆抗體是治療一單克隆抗體是治療一些惡性腫瘤的特效藥物，目前主要是通過培養(yǎng)哺乳動(dòng)物些惡性腫瘤的特效藥物，目前主要是通過培養(yǎng)哺乳動(dòng)物細(xì)胞的方式生產(chǎn)。我國科學(xué)家已經(jīng)培育出世界上第一頭細(xì)胞的方式生產(chǎn)。我國科學(xué)家已經(jīng)培育出世界上第一頭轉(zhuǎn)入了轉(zhuǎn)入了CD20抗體基因的轉(zhuǎn)基因牛，可以從它產(chǎn)的牛奶中抗體基因的轉(zhuǎn)基因牛，可以從它產(chǎn)的牛奶中直接提取直接提取CD20抗體。這項(xiàng)技術(shù)成熟后，有望使這一特效抗體。這項(xiàng)技術(shù)成熟后，有望使這一特效藥的生產(chǎn)成本降至現(xiàn)在的藥的生產(chǎn)成本降至現(xiàn)在的1/10。請回答：。請回答：（1）單克隆抗體的制備過程需先將）單克隆抗體的制備過程需先將 融合，這一過程的誘導(dǎo)方法融合，

20、這一過程的誘導(dǎo)方法與植物體細(xì)胞雜交不同的是與植物體細(xì)胞雜交不同的是 。（2）動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)需要在含）動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)需要在含 混合氣體的混合氣體的培養(yǎng)箱中進(jìn)行，培養(yǎng)液中通常需加入培養(yǎng)箱中進(jìn)行，培養(yǎng)液中通常需加入 等一些天然成分。等一些天然成分。經(jīng)過免疫的經(jīng)過免疫的B淋淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞用滅活病毒誘導(dǎo)用滅活病毒誘導(dǎo)血清、血清、血漿血漿95%空氣加空氣加5%CO2（3）轉(zhuǎn)基因技術(shù)的核心是）轉(zhuǎn)基因技術(shù)的核心是 。該。該過程用到的工具酶有過程用到的工具酶有 和和 ?；虮磉_(dá)載體的構(gòu)建基因表達(dá)載體的構(gòu)建限制性核酸內(nèi)切酶（限制酶）限制性核酸內(nèi)切酶（限制酶）DNA連接酶連接酶關(guān)鍵信息關(guān)鍵信息

21、“單克隆抗體單克隆抗體”、“植物體細(xì)胞雜交植物體細(xì)胞雜交”、“混合混合氣體氣體”、“天然成分天然成分”、“核心核心”、“工具酶工具酶”知識依據(jù)知識依據(jù) 單克隆抗體、植物體細(xì)胞雜交、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)、轉(zhuǎn)基單克隆抗體、植物體細(xì)胞雜交、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)、轉(zhuǎn)基因因完整分析完整分析 單克隆抗體的制備首先是將經(jīng)過免疫的單克隆抗體的制備首先是將經(jīng)過免疫的B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合，其誘導(dǎo)方法與植物體細(xì)淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合，其誘導(dǎo)方法與植物體細(xì)胞雜交不同的是用滅活的病毒誘導(dǎo)。動(dòng)物體細(xì)胞培養(yǎng)胞雜交不同的是用滅活的病毒誘導(dǎo)。動(dòng)物體細(xì)胞培養(yǎng)需要滿足以下條件：無菌無毒的環(huán)境、營養(yǎng)、溫度和需要滿足以下條件：無菌無毒的環(huán)境、

22、營養(yǎng)、溫度和pH以及氣體環(huán)境。氣體環(huán)境必須是含以及氣體環(huán)境。氣體環(huán)境必須是含95%的空氣加的空氣加5%的的CO2，O2是細(xì)胞代謝所必需的，是細(xì)胞代謝所必需的，CO2是維持培養(yǎng)液的是維持培養(yǎng)液的pH。在使用合成培養(yǎng)基培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞時(shí)，由于人們對一些在使用合成培養(yǎng)基培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞時(shí)，由于人們對一些細(xì)胞所需的營養(yǎng)物質(zhì)還沒有完全搞清楚，因此通常需細(xì)胞所需的營養(yǎng)物質(zhì)還沒有完全搞清楚，因此通常需加入血清、血漿等一些天然成分。轉(zhuǎn)基因技術(shù)的核心加入血清、血漿等一些天然成分。轉(zhuǎn)基因技術(shù)的核心是基因表達(dá)載體的構(gòu)建，用到的工具酶是限制性核酸是基因表達(dá)載體的構(gòu)建，用到的工具酶是限制性核酸內(nèi)切酶和內(nèi)切酶和DNA連接酶。連接

23、酶。1.將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞生物種類生物種類 植物細(xì)胞植物細(xì)胞 動(dòng)物細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞 微生物細(xì)胞微生物細(xì)胞 常用方法常用方法 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法 顯微注射技術(shù)顯微注射技術(shù) Ca2+處理法處理法 受體細(xì)胞受體細(xì)胞 體細(xì)胞體細(xì)胞 受精卵受精卵 原核細(xì)胞原核細(xì)胞 轉(zhuǎn)化過程轉(zhuǎn)化過程 將目的基因插將目的基因插入到入到Ti質(zhì)粒的質(zhì)粒的T-DNA上上農(nóng)農(nóng)桿菌桿菌導(dǎo)入植導(dǎo)入植物細(xì)胞物細(xì)胞整合整合到受體細(xì)胞的到受體細(xì)胞的DNA表達(dá)表達(dá) 將含有目的基因?qū)⒑心康幕虻谋磉_(dá)載體提純的表達(dá)載體提純?nèi)÷眩ㄊ芫眩┤÷眩ㄊ芫眩╋@微注射顯微注射受受精卵發(fā)育精卵發(fā)育獲得獲得具有新性狀的動(dòng)具有新性狀

24、的動(dòng)物物 Ca2+處理細(xì)胞處理細(xì)胞感受態(tài)細(xì)胞感受態(tài)細(xì)胞重組表達(dá)載重組表達(dá)載體與感受態(tài)細(xì)體與感受態(tài)細(xì)胞混合胞混合感受感受態(tài)細(xì)胞吸收態(tài)細(xì)胞吸收DNA分子分子 2.動(dòng)物細(xì)胞融合與植物體細(xì)胞雜交的不同動(dòng)物細(xì)胞融合與植物體細(xì)胞雜交的不同項(xiàng)目項(xiàng)目 動(dòng)物細(xì)胞融合動(dòng)物細(xì)胞融合 植物體細(xì)胞雜交植物體細(xì)胞雜交原理原理細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞膜的流動(dòng)性 細(xì)胞膜的流動(dòng)性及細(xì)胞膜的流動(dòng)性及細(xì)胞的全能性細(xì)胞的全能性 誘導(dǎo)手段誘導(dǎo)手段 除物理、化學(xué)方法除物理、化學(xué)方法外還可用滅活的病外還可用滅活的病毒毒 物理、化學(xué)方法物理、化學(xué)方法酶酶胰蛋白酶或膠原蛋胰蛋白酶或膠原蛋白酶白酶 纖維素酶和果膠酶纖維素酶和果膠酶結(jié)果結(jié)果雜種細(xì)胞群雜

25、種細(xì)胞群 雜種植株雜種植株應(yīng)用應(yīng)用制備單克隆抗體等制備單克隆抗體等 培育白菜培育白菜甘藍(lán)等甘藍(lán)等一、選擇題一、選擇題1.由于乙肝病毒不能用動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)，因此無法用細(xì)胞由于乙肝病毒不能用動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)，因此無法用細(xì)胞培養(yǎng)的方法生產(chǎn)疫苗。自培養(yǎng)的方法生產(chǎn)疫苗。自1979年乙肝病毒基因組的年乙肝病毒基因組的DNA測序完成后，已知病毒的核心蛋白和表面抗原測序完成后，已知病毒的核心蛋白和表面抗原蛋白的氨基酸序列。如圖所示是應(yīng)用生物工程技術(shù)生蛋白的氨基酸序列。如圖所示是應(yīng)用生物工程技術(shù)生產(chǎn)乙肝疫苗的示意圖，下列相關(guān)敘述中不正確的是產(chǎn)乙肝疫苗的示意圖，下列相關(guān)敘述中不正確的是（）A.生產(chǎn)乙肝疫苗的過程也達(dá)到了

26、定向改造細(xì)菌的目的生產(chǎn)乙肝疫苗的過程也達(dá)到了定向改造細(xì)菌的目的B.用于生產(chǎn)疫苗的目的基因?yàn)榫幋a核心蛋白的基因用于生產(chǎn)疫苗的目的基因?yàn)榫幋a核心蛋白的基因C.在過程中需要限制性核酸內(nèi)切酶和在過程中需要限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶連接酶D.用于生產(chǎn)疫苗的目的基因?yàn)榫幋a表面抗原蛋白的基因用于生產(chǎn)疫苗的目的基因?yàn)榫幋a表面抗原蛋白的基因解析解析 基因工程能定向地改造生物的遺傳性狀，題中將乙肝病基因工程能定向地改造生物的遺傳性狀，題中將乙肝病毒的有關(guān)基因引入細(xì)菌，從而達(dá)到定向改造細(xì)菌的目的；乙肝毒的有關(guān)基因引入細(xì)菌，從而達(dá)到定向改造細(xì)菌的目的；乙肝病毒起抗原作用的是其表面抗原蛋白，所以生產(chǎn)乙肝疫苗的目病毒

27、起抗原作用的是其表面抗原蛋白，所以生產(chǎn)乙肝疫苗的目的基因是編碼表面抗原蛋白的基因，而不是編碼核心蛋白的基的基因是編碼表面抗原蛋白的基因，而不是編碼核心蛋白的基因；圖中是將目的基因與載體連接，并將重組因；圖中是將目的基因與載體連接，并將重組DNA導(dǎo)入細(xì)菌導(dǎo)入細(xì)菌細(xì)胞中的過程，此過程需要限制性核酸內(nèi)切酶和細(xì)胞中的過程，此過程需要限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶。連接酶。答案答案 B2.（09浙江金華十校期末）為擴(kuò)大可耕地面積，增加浙江金華十校期末）為擴(kuò)大可耕地面積，增加糧食產(chǎn)量，黃河三角洲等鹽堿地的開發(fā)利用備受關(guān)注。糧食產(chǎn)量，黃河三角洲等鹽堿地的開發(fā)利用備受關(guān)注。我國科學(xué)家應(yīng)用耐鹽基因培育出了耐鹽水

28、稻新品系。我國科學(xué)家應(yīng)用耐鹽基因培育出了耐鹽水稻新品系。以下說法不正確的是以下說法不正確的是（）A.獲得耐鹽基因后，構(gòu)建重組獲得耐鹽基因后，構(gòu)建重組DNA分子需要限制分子需要限制 性核酸內(nèi)切酶和性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶連接酶B.將重組將重組DNA分子導(dǎo)入水稻受體細(xì)胞的常用方法分子導(dǎo)入水稻受體細(xì)胞的常用方法 有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法和顯微注射法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法和顯微注射法C.由導(dǎo)入目的基因的水稻細(xì)胞培養(yǎng)成植株需要利用由導(dǎo)入目的基因的水稻細(xì)胞培養(yǎng)成植株需要利用 植物組織培養(yǎng)技術(shù)植物組織培養(yǎng)技術(shù)D.為了確定耐鹽轉(zhuǎn)基因水稻是否培育成功，既要用為了確定耐鹽轉(zhuǎn)基因水稻是否培育成功，既要用 放射性同位素標(biāo)記的耐鹽基因

29、作探針進(jìn)行分子放射性同位素標(biāo)記的耐鹽基因作探針進(jìn)行分子 雜交檢測，又要用一定濃度的鹽水澆灌方法從雜交檢測，又要用一定濃度的鹽水澆灌方法從 個(gè)體水平鑒定水稻植株的耐鹽性個(gè)體水平鑒定水稻植株的耐鹽性解析解析 用限制性核酸內(nèi)切酶剪切耐鹽基因后，還用限制性核酸內(nèi)切酶剪切耐鹽基因后，還需要用同種限制性核酸內(nèi)切酶將載體切開，同時(shí)需要用同種限制性核酸內(nèi)切酶將載體切開，同時(shí)還需要用還需要用DNA連接酶連接目的基因和載體。將重連接酶連接目的基因和載體。將重組組DNA導(dǎo)入水稻細(xì)胞常用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，將重組導(dǎo)入水稻細(xì)胞常用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，將重組DNA導(dǎo)入動(dòng)物細(xì)胞常用顯微注射法。檢測目的基導(dǎo)入動(dòng)物細(xì)胞常用顯微注射法。檢測

30、目的基因表達(dá)與否，可以用分子水平的檢測方法，如用因表達(dá)與否，可以用分子水平的檢測方法，如用耐鹽基因做成探針檢測受體細(xì)胞是否有目的基因，耐鹽基因做成探針檢測受體細(xì)胞是否有目的基因，或檢測受體細(xì)胞是否有目的基因表達(dá)產(chǎn)生的或檢測受體細(xì)胞是否有目的基因表達(dá)產(chǎn)生的mRNA或蛋白質(zhì)。還可以檢測個(gè)體是否具有抵抗鹽堿溶液或蛋白質(zhì)。還可以檢測個(gè)體是否具有抵抗鹽堿溶液的能力。的能力。答案答案 B3.（09南通調(diào)研）蛋白質(zhì)工程中，要對蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)進(jìn)行南通調(diào)研）蛋白質(zhì)工程中，要對蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)進(jìn)行設(shè)計(jì)改造，必須通過基因修飾或基因合成來完成，而設(shè)計(jì)改造，必須通過基因修飾或基因合成來完成，而不直接改造蛋白質(zhì)的原因是不直接改造蛋

31、白質(zhì)的原因是（）A.缺乏改造蛋白質(zhì)所必需的工具酶缺乏改造蛋白質(zhì)所必需的工具酶B.改造基因易于操作且改造后能夠遺傳改造基因易于操作且改造后能夠遺傳C.人類對大多數(shù)蛋白質(zhì)的高級結(jié)構(gòu)知之甚少人類對大多數(shù)蛋白質(zhì)的高級結(jié)構(gòu)知之甚少D.蛋白質(zhì)中氨基酸的排列順序千變?nèi)f化，操作難度大蛋白質(zhì)中氨基酸的排列順序千變?nèi)f化，操作難度大解析解析 因蛋白質(zhì)是由基因控制合成的，按照人類的意因蛋白質(zhì)是由基因控制合成的，按照人類的意愿對控制蛋白質(zhì)合成的基因進(jìn)行修飾，既易于操作又愿對控制蛋白質(zhì)合成的基因進(jìn)行修飾，既易于操作又能遺傳。能遺傳。B4.（09宜昌調(diào)研）關(guān)于植物組織培養(yǎng)的敘述中，錯(cuò)誤的宜昌調(diào)研）關(guān)于植物組織培養(yǎng)的敘述中，

32、錯(cuò)誤的是是（）A.培養(yǎng)基中添加蔗糖是因?yàn)橛鷤M織分化形成幼培養(yǎng)基中添加蔗糖是因?yàn)橛鷤M織分化形成幼 苗之前進(jìn)行異養(yǎng)代謝苗之前進(jìn)行異養(yǎng)代謝B.培養(yǎng)基中添加不同比例的生長素和細(xì)胞分裂素培養(yǎng)基中添加不同比例的生長素和細(xì)胞分裂素 可以影響愈傷組織的再分化可以影響愈傷組織的再分化C.離體器官或組織細(xì)胞必須通過脫分化才能形成離體器官或組織細(xì)胞必須通過脫分化才能形成 愈傷組織愈傷組織D.離體的胚珠經(jīng)過脫分化獲得愈傷組織，所有細(xì)離體的胚珠經(jīng)過脫分化獲得愈傷組織，所有細(xì) 胞的基因型相同胞的基因型相同解析解析 愈傷組織分化形成幼苗之前其同化類型為異養(yǎng)型。愈傷組織分化形成幼苗之前其同化類型為異養(yǎng)型。培養(yǎng)基中細(xì)胞分裂

33、素含量與生長素含量之間的不同比培養(yǎng)基中細(xì)胞分裂素含量與生長素含量之間的不同比例，可以調(diào)控植物組織培養(yǎng)過程中芽和根的形成。胚例，可以調(diào)控植物組織培養(yǎng)過程中芽和根的形成。胚珠由珠被、胚囊、受精卵、受精極核組成，其中珠被珠由珠被、胚囊、受精卵、受精極核組成，其中珠被與胚囊的基因型相同，而與受精卵、受精極核的基因與胚囊的基因型相同，而與受精卵、受精極核的基因型不一定相同。型不一定相同。答案答案 D5.（09江西重點(diǎn)中學(xué)聯(lián)考）植物組織培養(yǎng)的過程可以歸江西重點(diǎn)中學(xué)聯(lián)考）植物組織培養(yǎng)的過程可以歸納為：納為：下列敘述錯(cuò)誤的是下列敘述錯(cuò)誤的是（）A.的再分化過程中，當(dāng)細(xì)胞分裂素與生長素的再分化過程中，當(dāng)細(xì)胞分裂

34、素與生長素 的濃度比較低時(shí)，有利于根的生長的濃度比較低時(shí)，有利于根的生長B.植物組織培養(yǎng)所依據(jù)的原理是植物細(xì)胞的全能性植物組織培養(yǎng)所依據(jù)的原理是植物細(xì)胞的全能性C.過程指植物的營養(yǎng)生長和生殖生長階段過程指植物的營養(yǎng)生長和生殖生長階段D.包裹上人造種皮可獲得人工種子包裹上人造種皮可獲得人工種子解析解析 過程為分化形成的試管苗移栽到地里，發(fā)過程為分化形成的試管苗移栽到地里，發(fā)育成完整植物體的過程。育成完整植物體的過程。C6.（09浙江十二校聯(lián)考）如圖是浙江十二校聯(lián)考）如圖是“白菜白菜甘藍(lán)甘藍(lán)”雜種植雜種植株的培育過程。下列說法正確的是株的培育過程。下列說法正確的是 （）A.圖示圖示“白菜白菜甘藍(lán)甘

35、藍(lán)”植株不能結(jié)籽植株不能結(jié)籽B.愈傷組織的代謝類型是自養(yǎng)需氧型愈傷組織的代謝類型是自養(yǎng)需氧型C.上述過程中包含著有絲分裂、細(xì)胞分化和減數(shù)分上述過程中包含著有絲分裂、細(xì)胞分化和減數(shù)分 裂等過程裂等過程D.“白菜白菜甘藍(lán)甘藍(lán)”雜種植株具有的性狀是基因選擇性雜種植株具有的性狀是基因選擇性 表達(dá)的結(jié)果表達(dá)的結(jié)果解析解析 白菜和甘藍(lán)都是二倍體，它們的體細(xì)胞雜交后培育白菜和甘藍(lán)都是二倍體，它們的體細(xì)胞雜交后培育的的“白菜白菜甘藍(lán)甘藍(lán)”雜種植株中有雜種植株中有2個(gè)染色體組來自白菜，個(gè)染色體組來自白菜，2個(gè)染色體組來自甘藍(lán)，因此個(gè)染色體組來自甘藍(lán)，因此“白菜白菜甘藍(lán)甘藍(lán)”屬于異源四屬于異源四倍體，是可育的，能

36、產(chǎn)籽；愈傷組織是一種高度液泡化的倍體，是可育的，能產(chǎn)籽；愈傷組織是一種高度液泡化的呈無定形狀態(tài)的薄壁細(xì)胞，不能進(jìn)行光合作用制造有機(jī)物，呈無定形狀態(tài)的薄壁細(xì)胞，不能進(jìn)行光合作用制造有機(jī)物，因此愈傷組織的代謝類型是異養(yǎng)需氧型；上述過程包括去因此愈傷組織的代謝類型是異養(yǎng)需氧型；上述過程包括去壁、原生質(zhì)體融合、植物組織培養(yǎng)等過程，其結(jié)果是形成壁、原生質(zhì)體融合、植物組織培養(yǎng)等過程，其結(jié)果是形成“白菜白菜甘藍(lán)甘藍(lán)”幼苗，并未發(fā)育到性成熟個(gè)體，因此整個(gè)幼苗，并未發(fā)育到性成熟個(gè)體，因此整個(gè)過程中有有絲分裂和細(xì)胞分化，沒有減數(shù)分裂過程；任何過程中有有絲分裂和細(xì)胞分化，沒有減數(shù)分裂過程；任何性狀都是基因選擇性表達(dá)

37、的結(jié)果，因此選項(xiàng)性狀都是基因選擇性表達(dá)的結(jié)果，因此選項(xiàng)D正確。正確。答案答案 D7.（09北京東城期末）下面關(guān)于植物細(xì)胞工程的敘述，正確北京東城期末）下面關(guān)于植物細(xì)胞工程的敘述，正確的是的是（）不同種植物葉肉細(xì)胞融合時(shí)，應(yīng)先去掉細(xì)胞膜不同種植物葉肉細(xì)胞融合時(shí)，應(yīng)先去掉細(xì)胞膜葉肉細(xì)胞脫分化后，可形成無定形狀態(tài)的薄壁細(xì)胞葉肉細(xì)胞脫分化后，可形成無定形狀態(tài)的薄壁細(xì)胞葉肉細(xì)胞經(jīng)過再分化過程，可形成愈傷組織葉肉細(xì)胞經(jīng)過再分化過程，可形成愈傷組織葉肉細(xì)胞離體培養(yǎng)時(shí)，可以表現(xiàn)出細(xì)胞全能性葉肉細(xì)胞離體培養(yǎng)時(shí)，可以表現(xiàn)出細(xì)胞全能性A.B.C.D.解析解析 因細(xì)胞壁阻礙原生質(zhì)體的融合，故植物細(xì)胞融合時(shí)，應(yīng)先因細(xì)胞

38、壁阻礙原生質(zhì)體的融合，故植物細(xì)胞融合時(shí)，應(yīng)先去掉細(xì)胞壁；葉肉細(xì)胞經(jīng)過脫分化過程形成的愈傷組織細(xì)胞是高去掉細(xì)胞壁；葉肉細(xì)胞經(jīng)過脫分化過程形成的愈傷組織細(xì)胞是高度液泡化呈無定形狀態(tài)的薄壁細(xì)胞；離體的葉肉細(xì)胞通過植物組度液泡化呈無定形狀態(tài)的薄壁細(xì)胞；離體的葉肉細(xì)胞通過植物組織培養(yǎng)可得到完整的植物個(gè)體，表現(xiàn)出細(xì)胞的全能性?？椗囵B(yǎng)可得到完整的植物個(gè)體，表現(xiàn)出細(xì)胞的全能性。B8.（09南通調(diào)研）下列有關(guān)植物細(xì)胞工程應(yīng)用的敘述，不正確的南通調(diào)研）下列有關(guān)植物細(xì)胞工程應(yīng)用的敘述，不正確的是是（）A.利用組織培養(yǎng)技術(shù)培育脫毒苗，獲得具有抗病毒利用組織培養(yǎng)技術(shù)培育脫毒苗，獲得具有抗病毒 的新品種的新品種B.利用組

39、織培養(yǎng)技術(shù)獲得人工種子，能保持親本的利用組織培養(yǎng)技術(shù)獲得人工種子，能保持親本的 優(yōu)良性狀優(yōu)良性狀C.利用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)獲得紫草素，實(shí)現(xiàn)了細(xì)胞產(chǎn)物利用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)獲得紫草素，實(shí)現(xiàn)了細(xì)胞產(chǎn)物 的工廠化生產(chǎn)的工廠化生產(chǎn)D.利用植物體細(xì)胞雜交技術(shù)獲得利用植物體細(xì)胞雜交技術(shù)獲得“蘿卜蘿卜甘藍(lán)甘藍(lán)”，克，克 服了不同生物遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙服了不同生物遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙解析解析 考查植物細(xì)胞工程的應(yīng)用。利用組織培養(yǎng)技術(shù)獲得的脫考查植物細(xì)胞工程的應(yīng)用。利用組織培養(yǎng)技術(shù)獲得的脫毒苗，具有無病毒的特征，但不能抗病毒。毒苗，具有無病毒的特征，但不能抗病毒。A9.關(guān)于動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的敘述，正確的是關(guān)于動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的敘

40、述，正確的是（）A.培養(yǎng)基往往需要添加細(xì)胞分裂素和動(dòng)物血清培養(yǎng)基往往需要添加細(xì)胞分裂素和動(dòng)物血清B.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的目的就是獲得大量的分泌蛋白動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的目的就是獲得大量的分泌蛋白C.先用胰蛋白酶處理使離體組織分散成單個(gè)細(xì)胞，先用胰蛋白酶處理使離體組織分散成單個(gè)細(xì)胞， 培養(yǎng)至細(xì)胞系時(shí)遺傳物質(zhì)已發(fā)生改變培養(yǎng)至細(xì)胞系時(shí)遺傳物質(zhì)已發(fā)生改變D.將雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)在小鼠體內(nèi)無法產(chǎn)生相應(yīng)的抗將雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)在小鼠體內(nèi)無法產(chǎn)生相應(yīng)的抗 體體解析解析 細(xì)胞分裂素是植物激素，動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)不需要細(xì)胞分裂素是植物激素，動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)不需要添加。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的目的除了獲得大量蛋白質(zhì)外，添加。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的目的除了獲得

41、大量蛋白質(zhì)外，還可用于皮膚移植、有毒物質(zhì)的檢測等。雜交瘤細(xì)胞還可用于皮膚移植、有毒物質(zhì)的檢測等。雜交瘤細(xì)胞可在小鼠體內(nèi)培養(yǎng)也可在體外培養(yǎng)，均可產(chǎn)生單克隆可在小鼠體內(nèi)培養(yǎng)也可在體外培養(yǎng)，均可產(chǎn)生單克隆抗體。細(xì)胞系遺傳物質(zhì)已發(fā)生改變，帶有癌細(xì)胞的特抗體。細(xì)胞系遺傳物質(zhì)已發(fā)生改變，帶有癌細(xì)胞的特點(diǎn)，可無限增殖。點(diǎn)，可無限增殖。C10.下圖為克隆羊下圖為克隆羊“多利多利”的培育過程示意圖：的培育過程示意圖：下列各項(xiàng)有關(guān)表述錯(cuò)誤的是下列各項(xiàng)有關(guān)表述錯(cuò)誤的是（）A.克隆羊克隆羊“多利多利”的主要性狀與甲羊一致，因?yàn)槠涞闹饕誀钆c甲羊一致，因?yàn)槠?細(xì)胞核基因來自甲羊細(xì)胞核基因來自甲羊B.克隆羊克隆羊“多利多

42、利”的培育過程中采用的生物技術(shù)有的培育過程中采用的生物技術(shù)有 核移植和胚胎移植核移植和胚胎移植C.乙羊的去核卵細(xì)胞為重組細(xì)胞的基因表達(dá)提供乙羊的去核卵細(xì)胞為重組細(xì)胞的基因表達(dá)提供 了細(xì)胞內(nèi)的環(huán)境條件了細(xì)胞內(nèi)的環(huán)境條件D.此過程說明高度分化的動(dòng)物細(xì)胞的具有全能性此過程說明高度分化的動(dòng)物細(xì)胞的具有全能性解析解析 A正確，生物的性狀主要由細(xì)胞核中的遺傳物質(zhì)控正確，生物的性狀主要由細(xì)胞核中的遺傳物質(zhì)控制，克隆羊的主要性狀與提供細(xì)胞核的個(gè)體基本一致；制，克隆羊的主要性狀與提供細(xì)胞核的個(gè)體基本一致；B正確，甲羊的體細(xì)胞核移植到去核的卵細(xì)胞中形成重組正確，甲羊的體細(xì)胞核移植到去核的卵細(xì)胞中形成重組胚胎后，在

43、體外適宜條件下培養(yǎng)至早期胚胎再移植到第胚胎后，在體外適宜條件下培養(yǎng)至早期胚胎再移植到第三只羊的子宮內(nèi)完成妊娠、分娩等過程；三只羊的子宮內(nèi)完成妊娠、分娩等過程；C正確，選擇去正確，選擇去核卵細(xì)胞的原因是因?yàn)槠浼?xì)胞質(zhì)中含有使體細(xì)胞核表達(dá)核卵細(xì)胞的原因是因?yàn)槠浼?xì)胞質(zhì)中含有使體細(xì)胞核表達(dá)全能性的物質(zhì)；全能性的物質(zhì)；D錯(cuò)誤，此實(shí)驗(yàn)只能說明高度分化的動(dòng)物錯(cuò)誤，此實(shí)驗(yàn)只能說明高度分化的動(dòng)物細(xì)胞的細(xì)胞核具有全能性。細(xì)胞的細(xì)胞核具有全能性。答案答案 D11.（09杭州質(zhì)檢）利用細(xì)胞工程方法，以杭州質(zhì)檢）利用細(xì)胞工程方法，以SARS病毒核衣病毒核衣殼蛋白為抗原制備出單克隆抗體。下列相關(guān)敘述正確的是殼蛋白為抗原制備

44、出單克隆抗體。下列相關(guān)敘述正確的是（）A.用純化的核衣殼蛋白反復(fù)注射到小鼠體內(nèi)，產(chǎn)生用純化的核衣殼蛋白反復(fù)注射到小鼠體內(nèi)，產(chǎn)生 的血清抗體為單克隆抗體的血清抗體為單克隆抗體B.體外培養(yǎng)單個(gè)效應(yīng)體外培養(yǎng)單個(gè)效應(yīng)B細(xì)胞可以獲得大量針對細(xì)胞可以獲得大量針對 SARS病毒的單克隆抗體病毒的單克隆抗體C.將等量效應(yīng)將等量效應(yīng)B細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞混合，經(jīng)細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞混合，經(jīng)PEG誘誘 導(dǎo)融合后的細(xì)胞均為雜交瘤細(xì)胞導(dǎo)融合后的細(xì)胞均為雜交瘤細(xì)胞D.利用該單克隆抗體與利用該單克隆抗體與SARS病毒核衣殼蛋白特異病毒核衣殼蛋白特異 性結(jié)合的方法可診斷出病毒感染者性結(jié)合的方法可診斷出病毒感染者解析解析 經(jīng)過特異抗

45、原刺激后的效應(yīng)經(jīng)過特異抗原刺激后的效應(yīng)B細(xì)胞與小鼠骨髓細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞融合后，產(chǎn)生雜交瘤細(xì)胞，雜交瘤細(xì)胞所產(chǎn)生瘤細(xì)胞融合后，產(chǎn)生雜交瘤細(xì)胞，雜交瘤細(xì)胞所產(chǎn)生的特異性抗體叫做單克隆抗體。在細(xì)胞融合過程中，的特異性抗體叫做單克隆抗體。在細(xì)胞融合過程中，可產(chǎn)生三種類型的雜交細(xì)胞，要進(jìn)行篩選；利用抗可產(chǎn)生三種類型的雜交細(xì)胞，要進(jìn)行篩選；利用抗原原抗體反應(yīng)可用來診斷出病毒感染者，是一種常用抗體反應(yīng)可用來診斷出病毒感染者，是一種常用的診斷方法。的診斷方法。答案答案 D12.（09江西重點(diǎn)中學(xué)聯(lián)考）下列關(guān)于生物工程相關(guān)江西重點(diǎn)中學(xué)聯(lián)考）下列關(guān)于生物工程相關(guān)知識的敘述，正確的是知識的敘述，正確的是（）在人

46、工合成目的基因時(shí)，蛋白質(zhì)中氨基酸的順序在人工合成目的基因時(shí)，蛋白質(zhì)中氨基酸的順序可為合成目的基因提供資料可為合成目的基因提供資料 若想通過植物細(xì)胞若想通過植物細(xì)胞培養(yǎng)的方法來培養(yǎng)人工種子，其胚狀體應(yīng)具有胚芽、胚根、培養(yǎng)的方法來培養(yǎng)人工種子，其胚狀體應(yīng)具有胚芽、胚根、子葉、胚乳等結(jié)構(gòu)子葉、胚乳等結(jié)構(gòu) 用放射性同位素、熒用放射性同位素、熒光分子等標(biāo)記的光分子等標(biāo)記的DNA分子作為探針可進(jìn)行基因診分子作為探針可進(jìn)行基因診斷斷 限制酶基因只存在于微生物體內(nèi)，通常用鳥限制酶基因只存在于微生物體內(nèi)，通常用鳥槍法來獲得，它能識別多種核苷酸序列并在一定位槍法來獲得，它能識別多種核苷酸序列并在一定位點(diǎn)進(jìn)行切割點(diǎn)

47、進(jìn)行切割 質(zhì)粒的復(fù)制既能在自身細(xì)胞中完質(zhì)粒的復(fù)制既能在自身細(xì)胞中完成，也能在宿主細(xì)胞內(nèi)完成成，也能在宿主細(xì)胞內(nèi)完成A.B.C.D.解析解析 通過植物組織培養(yǎng)獲得人工種子時(shí)，胚狀體中不包通過植物組織培養(yǎng)獲得人工種子時(shí)，胚狀體中不包括胚乳。限制酶主要存在于微生物體內(nèi)，一種限制酶只能括胚乳。限制酶主要存在于微生物體內(nèi)，一種限制酶只能識別一種特定的核苷酸序列并在特定位點(diǎn)進(jìn)行切割。識別一種特定的核苷酸序列并在特定位點(diǎn)進(jìn)行切割。答案答案 C二、非選擇題二、非選擇題13.（09泰安模擬）科學(xué)家通過基因工程成功培育出能抗棉鈴泰安模擬）科學(xué)家通過基因工程成功培育出能抗棉鈴蟲的棉花植株蟲的棉花植株抗蟲棉，其過程大

48、致如下圖所示：抗蟲棉，其過程大致如下圖所示：（1）進(jìn)行基因工程操作的工具酶有）進(jìn)行基因工程操作的工具酶有 ，將蘇云金芽孢桿菌的將蘇云金芽孢桿菌的Bt基因?qū)朊藁?xì)胞基因?qū)朊藁?xì)胞內(nèi)，使棉花植株產(chǎn)生抗蟲性狀，引起這種新性狀產(chǎn)內(nèi)，使棉花植株產(chǎn)生抗蟲性狀，引起這種新性狀產(chǎn)生依賴于生依賴于 。（2）含有）含有Bt基因的基因的Ti質(zhì)粒導(dǎo)入棉花細(xì)胞是否可以穩(wěn)質(zhì)粒導(dǎo)入棉花細(xì)胞是否可以穩(wěn)定維持和表達(dá)其遺傳特性，必須進(jìn)行檢測與鑒定。定維持和表達(dá)其遺傳特性，必須進(jìn)行檢測與鑒定。檢測目的基因是否導(dǎo)入成功可以檢測檢測目的基因是否導(dǎo)入成功可以檢測Bt基因是否轉(zhuǎn)基因是否轉(zhuǎn)錄出了錄出了mRNA，這是檢測目的基因是否發(fā)揮功

49、能作，這是檢測目的基因是否發(fā)揮功能作用的用的 。檢測方法是。檢測方法是 。限制酶、限制酶、DNA連連接酶接酶基因重組或重組基因重組或重組DNA第一步第一步從轉(zhuǎn)基因棉花細(xì)胞內(nèi)提取從轉(zhuǎn)基因棉花細(xì)胞內(nèi)提取mRNA，用標(biāo)記的目的基因作探針與，用標(biāo)記的目的基因作探針與mRNA雜交，如果顯雜交，如果顯示出雜交帶，則表明目的基因轉(zhuǎn)錄出了示出雜交帶，則表明目的基因轉(zhuǎn)錄出了mRNA（3）由獲得）由獲得Bt基因的植株細(xì)胞培養(yǎng)成抗蟲棉植株的基因的植株細(xì)胞培養(yǎng)成抗蟲棉植株的過程是：植株細(xì)胞首先要通過細(xì)胞的過程是：植株細(xì)胞首先要通過細(xì)胞的 過過程，培養(yǎng)出程，培養(yǎng)出 ，再在一定的培養(yǎng)條件下，再在一定的培養(yǎng)條件下，再分化出

50、幼根和芽，形成完整的植株。為了克服季再分化出幼根和芽，形成完整的植株。為了克服季節(jié)限制快速制種，便于大面積推廣種植，可將植株節(jié)限制快速制種，便于大面積推廣種植，可將植株細(xì)胞培養(yǎng)得到細(xì)胞培養(yǎng)得到。（4）有人擔(dān)心種植上述抗蟲棉，它所攜帶的）有人擔(dān)心種植上述抗蟲棉，它所攜帶的Bt基因基因可以通過花粉傳遞給近親物種，造成可以通過花粉傳遞給近親物種，造成“基因污染基因污染”，請?zhí)岢瞿愕慕鉀Q方法。請?zhí)岢瞿愕慕鉀Q方法。 。脫分化脫分化愈傷組織愈傷組織胚狀體、不定芽、頂芽和腋芽等胚狀體、不定芽、頂芽和腋芽等將目的基因?qū)肴~綠體基因?qū)⒛康幕驅(qū)肴~綠體基因組或線粒體基因組中組或線粒體基因組中解析解析 該題考查現(xiàn)

51、代生物技術(shù)中的基因工程和組織培養(yǎng)的相該題考查現(xiàn)代生物技術(shù)中的基因工程和組織培養(yǎng)的相關(guān)內(nèi)容。關(guān)內(nèi)容。（1）該小題考查基因工程的工具：限制酶、）該小題考查基因工程的工具：限制酶、DNA連接酶連接酶及載體。及載體。（2）該小題考查基因工程的步驟。第一步先提取目的基因；）該小題考查基因工程的步驟。第一步先提取目的基因；第二步目的基因的整合，形成重組質(zhì)粒或重組第二步目的基因的整合，形成重組質(zhì)?；蛑亟MDNA；第三步導(dǎo)；第三步導(dǎo)入宿主細(xì)胞；第四步檢測與表達(dá)。入宿主細(xì)胞；第四步檢測與表達(dá)。（3）該小題考查植物組織培養(yǎng)。如果受體細(xì)胞是受精卵）該小題考查植物組織培養(yǎng)。如果受體細(xì)胞是受精卵則直接發(fā)育成目的植株。如果

52、是體細(xì)胞則需要?jiǎng)t直接發(fā)育成目的植株。如果是體細(xì)胞則需要進(jìn)行組織培養(yǎng)。組織培養(yǎng)過程為：脫分化形成愈傷組織或胚進(jìn)行組織培養(yǎng)。組織培養(yǎng)過程為：脫分化形成愈傷組織或胚狀體，再進(jìn)行再分化，分化出根和芽，最后培養(yǎng)形成植株。狀體，再進(jìn)行再分化，分化出根和芽，最后培養(yǎng)形成植株?；蛟谂郀铙w時(shí)包裹上人工膜，制成人工種子，提高發(fā)芽率?；蛟谂郀铙w時(shí)包裹上人工膜，制成人工種子，提高發(fā)芽率。（4）該小題考查細(xì)胞質(zhì)遺傳。受精卵中的細(xì)胞質(zhì)來自）該小題考查細(xì)胞質(zhì)遺傳。受精卵中的細(xì)胞質(zhì)來自于卵細(xì)胞，所以將目的基因?qū)氲骄€粒體或葉綠體的于卵細(xì)胞，所以將目的基因?qū)氲骄€粒體或葉綠體的基因組中能避免基因污染?；蚪M中能避免基因污染。1

53、4.下圖表示用基因工程技術(shù)培育轉(zhuǎn)人生長激素基因牛、下圖表示用基因工程技術(shù)培育轉(zhuǎn)人生長激素基因牛、制備單克隆抗體、培育抗蟲棉的示意圖，請根據(jù)圖示回制備單克隆抗體、培育抗蟲棉的示意圖，請根據(jù)圖示回答下列問題：答下列問題：（1）過程表示）過程表示 ，要用同一種，要用同一種限制性核酸內(nèi)切酶處理目的基因和載體，原因是限制性核酸內(nèi)切酶處理目的基因和載體，原因是 。受體細(xì)胞可以是牛的一般體細(xì)胞嗎？。受體細(xì)胞可以是牛的一般體細(xì)胞嗎？ ，為什么？，為什么？ 。（2）制備單克隆抗體的常規(guī)方法是將分泌抗體的漿細(xì)）制備單克隆抗體的常規(guī)方法是將分泌抗體的漿細(xì)胞與能無限增殖的骨髓瘤細(xì)胞融合，而圖中單克隆抗胞與能無限增殖的

54、骨髓瘤細(xì)胞融合，而圖中單克隆抗體的制備過程則運(yùn)用了基因工程技術(shù)與動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)體的制備過程則運(yùn)用了基因工程技術(shù)與動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，請你說出目的基因的名稱技術(shù)，請你說出目的基因的名稱 。單克隆抗體主要具有。單克隆抗體主要具有 的特性。的特性。基因表達(dá)載體的構(gòu)建基因表達(dá)載體的構(gòu)建同一種限制酶處理目的基因和載體，可以產(chǎn)生相同一種限制酶處理目的基因和載體，可以產(chǎn)生相同的黏性末端同的黏性末端不能不能因?yàn)榉只膭?dòng)物細(xì)胞沒有因?yàn)榉只膭?dòng)物細(xì)胞沒有全能性全能性無限增殖無限增殖調(diào)控基因調(diào)控基因特異性強(qiáng)、靈特異性強(qiáng)、靈敏度高敏度高（3）抗蟲棉的培育過程中，抗蟲基因的受體細(xì)胞可）抗蟲棉的培育過程中，抗蟲基因的受體細(xì)胞

55、可以是棉花的一般體細(xì)胞，原因是以是棉花的一般體細(xì)胞，原因是 。最后檢驗(yàn)培育的棉花是否抗蟲，常。最后檢驗(yàn)培育的棉花是否抗蟲，常用的方法是用的方法是 。分化的植物細(xì)胞分化的植物細(xì)胞具有全能性具有全能性用培育的棉花的葉等器官喂食害蟲，觀用培育的棉花的葉等器官喂食害蟲，觀察害蟲的生活情況察害蟲的生活情況解析解析 本題考查基因工程的應(yīng)用。構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，需要本題考查基因工程的應(yīng)用。構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，需要目的基因與載體具有相同的黏性末端，所以要用同一種限制酶目的基因與載體具有相同的黏性末端，所以要用同一種限制酶處理二者。分化的動(dòng)物細(xì)胞沒有全能性，而分化的植物細(xì)胞具處理二者。分化的動(dòng)物細(xì)胞沒有全能性，

56、而分化的植物細(xì)胞具有全能性。單克隆抗體的制備關(guān)鍵就是讓漿細(xì)胞獲得無限增殖有全能性。單克隆抗體的制備關(guān)鍵就是讓漿細(xì)胞獲得無限增殖的能力。圖示中的方法，是將能調(diào)控細(xì)胞增殖的基因?qū)霛{細(xì)的能力。圖示中的方法，是將能調(diào)控細(xì)胞增殖的基因?qū)霛{細(xì)胞（受體細(xì)胞），使其獲得了無限增殖的能力，所以無限增殖胞（受體細(xì)胞），使其獲得了無限增殖的能力，所以無限增殖調(diào)控基因?yàn)槟康幕颉Ｕ{(diào)控基因?yàn)槟康幕颉?5.某二倍體植物是雜合子，下圖為其花藥中未成熟花粉在適某二倍體植物是雜合子，下圖為其花藥中未成熟花粉在適宜的培養(yǎng)基上培養(yǎng)產(chǎn)生完整植株的過程。據(jù)圖回答：宜的培養(yǎng)基上培養(yǎng)產(chǎn)生完整植株的過程。據(jù)圖回答：（1）圖中表示的是該花粉培養(yǎng)過程中的）圖中表示的是該花粉培養(yǎng)過程中的 過過程，表示的是程，表示的是 過程，過程，X代表的是代表的是 ，表示的是表示的是 過程，表示的是誘導(dǎo)過程，表示的是誘導(dǎo)過程。過程。脫分化脫分化再分化再分化胚狀體胚狀體分化（或發(fā)育）分化（或發(fā)育）生根生根（2）圖中從愈傷組織形成完整植株的途徑有兩條，）圖中從愈傷組織形成完整植株的途徑有兩條，具體通過哪一條途徑主要取決于培養(yǎng)基成分中具體通過哪一條途徑主要取決于培養(yǎng)基成分中 的種類及其濃度配比，最后獲得的來源于未成熟花的種類及其濃度配比，最后獲得的來源于未成熟花粉的完整植株都稱為粉的完