第7章 細(xì)菌感染的檢查方法與防治原則

1、第七章第七章 細(xì)菌感染的檢查與防治細(xì)菌感染的檢查與防治 要求：要求：（1 1）掌握臨床標(biāo)本的采集原則；）掌握臨床標(biāo)本的采集原則；（2 2）掌握細(xì)菌的檢驗(yàn)程序）掌握細(xì)菌的檢驗(yàn)程序（3 3）了解常用的血清學(xué)診斷方法）了解常用的血清學(xué)診斷方法第七章第七章 細(xì)菌感染的檢查與防治細(xì)菌感染的檢查與防治 感染性疾病的病因?qū)W診斷感染性疾病的病因?qū)W診斷 確定感染的微生物，為臨床診斷提供根據(jù)。確定感染的微生物，為臨床診斷提供根據(jù)。 由于該診斷是通過確定感染的微生物而確立的，由于該診斷是通過確定感染的微生物而確立的，故稱微生物學(xué)診斷（故稱微生物學(xué)診斷（病原學(xué)診斷病原學(xué)診斷）。）。 關(guān)系到正確的關(guān)系到正確的治療、控制

2、和預(yù)防治療、控制和預(yù)防。 檢查方法檢查方法 微生物學(xué)微生物學(xué)( (細(xì)菌的細(xì)菌的形態(tài)學(xué)檢查、形態(tài)學(xué)檢查、分離培養(yǎng)和鑒定分離培養(yǎng)和鑒定） 免疫學(xué)（免疫學(xué)（查查AgAg或或AbAb） 分子生物學(xué)分子生物學(xué)（查核酸）（查核酸） 一、標(biāo)本的采集和送檢原則一、標(biāo)本的采集和送檢原則無菌操作無菌操作適當(dāng)?shù)臉?biāo)本適當(dāng)?shù)臉?biāo)本（注意病程）（注意病程）早期采集早期采集采集雙份血清采集雙份血清做好標(biāo)記做好標(biāo)記盡快送檢（盡快送檢（標(biāo)本必須新鮮）標(biāo)本必須新鮮） 第一節(jié)第一節(jié) 細(xì)菌感染的實(shí)驗(yàn)室診斷細(xì)菌感染的實(shí)驗(yàn)室診斷（一）細(xì)菌形態(tài)學(xué)檢查（一）細(xì)菌形態(tài)學(xué)檢查 針對一些在形態(tài)與染色上具有特征的針對一些在形態(tài)與染色上具有特征的 病原

3、菌。病原菌。 1 1）光學(xué)顯微鏡）光學(xué)顯微鏡 2 2）染色法檢查）染色法檢查 （二）細(xì)菌分離培養(yǎng)與鑒定（二）細(xì)菌分離培養(yǎng)與鑒定主要內(nèi)容：主要內(nèi)容：1 1、細(xì)菌分離培養(yǎng)、細(xì)菌分離培養(yǎng)菌落大小、色素、溶血；菌落大小、色素、溶血；2 2、涂片、染色、鏡檢。涂片、染色、鏡檢。 尤其用于尤其用于在形態(tài)、排列和染色性在形態(tài)、排列和染色性方面無特方面無特征的某些病原菌的檢查。征的某些病原菌的檢查。 陽性率高于直接鏡檢，但時間長。陽性率高于直接鏡檢，但時間長。 革蘭染色原理：細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)不同。革蘭染色原理：細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)不同。 G G+ +結(jié)構(gòu)致密、肽聚糖層厚結(jié)構(gòu)致密、肽聚糖層厚、乙醇不易透入；、乙醇不易透入； 乙

4、醇使胞壁脫水形成一道屏障，短暫阻止結(jié)晶乙醇使胞壁脫水形成一道屏障，短暫阻止結(jié)晶紫紫- -碘復(fù)合物從胞內(nèi)滲出；碘復(fù)合物從胞內(nèi)滲出；G-G-疏松、肽聚糖層薄疏松、肽聚糖層薄、外膜均含大量脂質(zhì)，易、外膜均含大量脂質(zhì)，易被乙醇溶解，使胞壁通透性增高，胞內(nèi)結(jié)晶紫被乙醇溶解，使胞壁通透性增高，胞內(nèi)結(jié)晶紫- -碘復(fù)合物被溶解脫出而脫色。碘復(fù)合物被溶解脫出而脫色。 革蘭染色實(shí)際意義革蘭染色實(shí)際意義-鑒別細(xì)菌鑒別細(xì)菌選擇用藥選擇用藥研究細(xì)菌致病性研究細(xì)菌致病性其它染色有：其它染色有：單染色、抗酸染色、特殊染色等。單染色、抗酸染色、特殊染色等。 抗酸染色法抗酸染色法特殊染色法：鞭毛染色特殊染色法：鞭毛染色 莢膜染

5、色莢膜染色 負(fù)染色法負(fù)染色法2 2、生化反應(yīng)、生化反應(yīng) 現(xiàn)有現(xiàn)有“程序控制的自動分析儀程序控制的自動分析儀”。3 3、血清學(xué)鑒定：用已知、血清學(xué)鑒定：用已知AbAb鑒定從標(biāo)本中分離鑒定從標(biāo)本中分離培養(yǎng)出的未知菌培養(yǎng)出的未知菌（玻片法簡便易行）。（玻片法簡便易行）。分群、分型分群、分型4 4、動物試驗(yàn)、動物試驗(yàn) 用于：分離鑒定病原菌；用于：分離鑒定病原菌； 測定細(xì)菌的毒力及產(chǎn)毒性測定細(xì)菌的毒力及產(chǎn)毒性 選用高度易感、健康等條件的動物。選用高度易感、健康等條件的動物。 如：毒素如：毒素- -抗毒素中和試驗(yàn)抗毒素中和試驗(yàn)-小白鼠；小白鼠； 鉤端螺旋體鉤端螺旋體-幼齡豚鼠、金地鼠。幼齡豚鼠、金地鼠。

6、5 5、藥物敏感試驗(yàn)、藥物敏感試驗(yàn) 指導(dǎo)臨床選擇用藥，及時治療和控制感指導(dǎo)臨床選擇用藥，及時治療和控制感染有重要意義。染有重要意義。 藥敏試驗(yàn)（紙片法）藥敏試驗(yàn)（紙片法） 6 6、自動微生物鑒定和藥敏分析系統(tǒng)：、自動微生物鑒定和藥敏分析系統(tǒng)： 微生物編碼鑒定技術(shù)微生物編碼鑒定技術(shù)-數(shù)據(jù)庫數(shù)據(jù)庫 微量培養(yǎng)微量培養(yǎng) 自動監(jiān)測分析自動監(jiān)測分析 自動記錄藥敏結(jié)果自動記錄藥敏結(jié)果（三）（三）細(xì)菌抗原的檢測細(xì)菌抗原的檢測 用已知用已知AbAb檢測未知抗原（檢測未知抗原（Ag-AbAg-Ab反應(yīng)）。反應(yīng)）。優(yōu)點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)-特異、靈敏、簡便特異、靈敏、簡便方法：玻片凝集、協(xié)同凝集、間接血凝試驗(yàn)、方法：玻片凝集、協(xié)同

7、凝集、間接血凝試驗(yàn)、乳膠凝集、對流免疫、酶免疫技術(shù)、免疫熒光乳膠凝集、對流免疫、酶免疫技術(shù)、免疫熒光技術(shù)。技術(shù)。載體顆粒載體顆粒SPASPA、乳膠、乳膠特異性特異性Ab待檢待檢Ag凝集凝集協(xié)同凝集試驗(yàn)示意圖協(xié)同凝集試驗(yàn)示意圖常用的免疫學(xué)技術(shù)有常用的免疫學(xué)技術(shù)有- 協(xié)同凝集試驗(yàn)協(xié)同凝集試驗(yàn) 乳膠凝集試驗(yàn)乳膠凝集試驗(yàn)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn) (ELISA, (ELISA,間接法間接法) )enzymes such as peroxidase react with appropriate substrates such as 3,3,5,5-Tetramethylbenzidine), th

8、is causes a change in color.對流免疫電泳對流免疫電泳免疫擴(kuò)散試驗(yàn)免疫擴(kuò)散試驗(yàn)（四）（四）細(xì)菌核酸的檢測細(xì)菌核酸的檢測核酸雜交、核酸雜交、PCRPCR、16S rRNA16S rRNA基因測序、基因芯基因測序、基因芯片等技術(shù)。片等技術(shù)。 更特異、敏感、快速更特異、敏感、快速5353PCR35355535353353555353535353535353535353檢測檢測PCRPCR產(chǎn)物產(chǎn)物 三、細(xì)菌感染的血清學(xué)診斷三、細(xì)菌感染的血清學(xué)診斷(serological diagnosis)(serological diagnosis)查查AbAb：檢測病人血液中由于細(xì)菌感染

9、而產(chǎn)生的檢測病人血液中由于細(xì)菌感染而產(chǎn)生的特異性抗體，輔助臨床診斷。特異性抗體，輔助臨床診斷。 廣泛用于多種病原體的微生物診斷和流行廣泛用于多種病原體的微生物診斷和流行病學(xué)調(diào)查。病學(xué)調(diào)查。 雙份血清：早期（急性期）雙份血清：早期（急性期） 晚期（恢復(fù)期）晚期（恢復(fù)期） 結(jié)果：根據(jù)雙份血清中測到的抗體效價，結(jié)果：根據(jù)雙份血清中測到的抗體效價，若升高若升高4 4倍或以上，有輔助診斷價值。倍或以上，有輔助診斷價值。 方法：凝集試驗(yàn)，中和試驗(yàn)，方法：凝集試驗(yàn)，中和試驗(yàn)，ELISAELISA等。等。 致病菌的檢驗(yàn)程序致病菌的檢驗(yàn)程序藥物敏感試驗(yàn)藥物敏感試驗(yàn)直接涂片染色直接涂片染色分離培養(yǎng)分離培養(yǎng)生化試驗(yàn)

10、生化試驗(yàn)血清學(xué)試驗(yàn)血清學(xué)試驗(yàn)動物試驗(yàn)動物試驗(yàn)明明確確診診斷斷初步診斷初步診斷分子生物學(xué)技術(shù)分子生物學(xué)技術(shù)其他檢測技術(shù)其他檢測技術(shù)第二節(jié)第二節(jié) 細(xì)菌感染的特異性預(yù)防細(xì)菌感染的特異性預(yù)防 一、人工主動免疫一、人工主動免疫(artificial active immunization) （一）疫苗、類毒素（一）疫苗、類毒素 1 1、死疫苗、死疫苗傷寒、霍亂等。傷寒、霍亂等。 2 2、活疫苗、活疫苗BCGBCG、鼠疫等。、鼠疫等。 疫苗接種疫苗接種區(qū)別點(diǎn)區(qū)別點(diǎn)死疫苗死疫苗活疫苗活疫苗制劑特點(diǎn)制劑特點(diǎn)死，強(qiáng)毒株死，強(qiáng)毒株活，減毒株活，減毒株接種劑量與特點(diǎn)接種劑量與特點(diǎn)量大，量大，2323次次量較小，量較

11、小，1 1次次保存及有效期保存及有效期易保存，約易保存，約1 1年年不易保存不易保存免疫效果免疫效果較低，較低，維持?jǐn)?shù)月維持?jǐn)?shù)月2年年較高，較高，維持維持35年甚至更長年甚至更長死疫苗與活疫苗的比較死疫苗與活疫苗的比較3 3、亞單位疫苗、亞單位疫苗(subunit vaccine) (subunit vaccine) 利用現(xiàn)代生物技術(shù)，利用現(xiàn)代生物技術(shù)，除去細(xì)菌或病毒無關(guān)有除去細(xì)菌或病毒無關(guān)有害成分，分離提取純化對人體有保護(hù)性的抗害成分，分離提取純化對人體有保護(hù)性的抗原。原。如：肺炎鏈球菌、腦膜炎球菌的莢膜多如：肺炎鏈球菌、腦膜炎球菌的莢膜多糖疫苗，糖疫苗，+ +佐劑即成。佐劑即成。 接種少量

12、抗原可使人體產(chǎn)生良好免疫應(yīng)接種少量抗原可使人體產(chǎn)生良好免疫應(yīng)答，且接種反應(yīng)輕微。答，且接種反應(yīng)輕微。 優(yōu)點(diǎn)優(yōu)點(diǎn) a a、去除引起副反應(yīng)的物質(zhì)；、去除引起副反應(yīng)的物質(zhì)； b b、因、因不含核酸不含核酸可免去減毒活疫苗回復(fù)突可免去減毒活疫苗回復(fù)突變及滅活全疫苗發(fā)生感染性復(fù)活的可能；變及滅活全疫苗發(fā)生感染性復(fù)活的可能； c c、消除腫瘤病毒潛在的致癌作用；、消除腫瘤病毒潛在的致癌作用； d d、可利用化學(xué)試劑分解病毒體。、可利用化學(xué)試劑分解病毒體。 4 4、基因工程疫苗、基因工程疫苗本質(zhì)上是亞單位疫苗本質(zhì)上是亞單位疫苗如：含宋內(nèi)志賀菌表面抗原質(zhì)粒的傷如：含宋內(nèi)志賀菌表面抗原質(zhì)粒的傷寒沙門菌寒沙門菌T

13、y21aTy21a優(yōu)點(diǎn)：安全、經(jīng)濟(jì)、可批量生產(chǎn)；優(yōu)點(diǎn)：安全、經(jīng)濟(jì)、可批量生產(chǎn)；缺點(diǎn)：抗原的回收純化困難。缺點(diǎn)：抗原的回收純化困難。5 5、重組載體疫苗、重組載體疫苗將抗原表位的目的基因片段轉(zhuǎn)入減毒的病將抗原表位的目的基因片段轉(zhuǎn)入減毒的病毒或細(xì)菌。毒或細(xì)菌。形式：整合于病毒、細(xì)菌基因組或質(zhì)粒形式：整合于病毒、細(xì)菌基因組或質(zhì)粒本質(zhì)：活疫苗本質(zhì)：活疫苗6 6、DNA VaccineDNA Vaccine）核酸疫苗原理：將病原體的保護(hù)性抗原核酸疫苗原理：將病原體的保護(hù)性抗原基因與質(zhì)粒重組，重組體注入機(jī)體，使基因與質(zhì)粒重組，重組體注入機(jī)體，使機(jī)體持續(xù)表達(dá)該抗原，誘導(dǎo)體液和細(xì)胞機(jī)體持續(xù)表達(dá)該抗原，誘導(dǎo)體液

14、和細(xì)胞免疫。免疫。 優(yōu)點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)： a a、制備簡便、成本低；、制備簡便、成本低； b b、便于貯藏和運(yùn)輸；、便于貯藏和運(yùn)輸； c c、免疫應(yīng)答持久。、免疫應(yīng)答持久。 核酸疫苗缺點(diǎn)：安全性問題核酸疫苗缺點(diǎn)：安全性問題a a、人們擔(dān)心、人們擔(dān)心外源外源DNADNA整合到宿主染色體中整合到宿主染色體中而激活癌基因而激活癌基因和影響抑癌基因的表達(dá)，和影響抑癌基因的表達(dá)，導(dǎo)致細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化。導(dǎo)致細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化。b b、可能、可能誘導(dǎo)自身免疫性疾病誘導(dǎo)自身免疫性疾病。 （二）類毒素（二）類毒素 概念：概念： 可誘導(dǎo)機(jī)體建立特異性抗毒素免疫?？烧T導(dǎo)機(jī)體建立特異性抗毒素免疫。 + +吸附劑（佐劑）吸附劑（佐劑

15、） 如：白喉如：白喉- -百日咳百日咳- -破傷風(fēng)三聯(lián)疫苗（破傷風(fēng)三聯(lián)疫苗（DPTDPT） 二、人工被動免疫二、人工被動免疫 1 1抗毒素抗毒素如：精制破傷風(fēng)、白喉、肉毒抗毒素如：精制破傷風(fēng)、白喉、肉毒抗毒素 2血清丙種球蛋白、血清丙種球蛋白、胎盤丙種球蛋白胎盤丙種球蛋白 3 3抗菌血清：已淘汰抗菌血清：已淘汰 4 4 其他免疫制劑其他免疫制劑：IFNIFN、ILIL等。等。 區(qū)別要點(diǎn)區(qū)別要點(diǎn)人工主動免疫人工主動免疫人工被動免疫人工被動免疫免疫物質(zhì)免疫物質(zhì)抗原抗原抗體、細(xì)胞因子抗體、細(xì)胞因子接種次數(shù)接種次數(shù) 免疫出現(xiàn)時間免疫出現(xiàn)時間1313次次 慢，慢，2424周周1 1次次快，立即快，立即免疫維持時間免疫維持時間長，數(shù)年長，數(shù)年 數(shù)月數(shù)月短，短，2323周周主要用途主要用途預(yù)防預(yù)防治療或緊急預(yù)防治療或緊急預(yù)防 兩種人工免疫方法比較兩種人工免疫方法比較第三節(jié)第三節(jié) 細(xì)