液質(zhì)聯(lián)用儀原理及操作注意事項(xiàng)安捷倫6410

1、LDD高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用（HPLC/MS）是指高效液相色譜與質(zhì)譜串聯(lián)的技術(shù)，是將應(yīng)用范圍極廣的高效液相分離方法與靈敏、專屬、能夠提供分子量和結(jié)構(gòu)信息的質(zhì)譜法結(jié)合起來的一種現(xiàn)代分析技術(shù)。HPLC-MS主要由HPLC儀、接口離子源（LC與MS連接裝置）、質(zhì)量分析器、真空系統(tǒng)、計(jì)算機(jī)數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)組成。過程：混合樣品通過液相色譜系統(tǒng)進(jìn)樣，由色譜柱分離，從色譜儀流出的被分離組分依次通過接口進(jìn)入MS儀的離子源處被離子化，然后離子被聚焦于質(zhì)量分析器中，根據(jù)質(zhì)荷比而分離，分離后的離子信號(hào)轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘?hào)，傳送至數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，對樣品進(jìn)行定性定量分析。 質(zhì)譜系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)介紹（ESI、庫倫爆炸）定量方法的開發(fā)液質(zhì)聯(lián)用各

2、系統(tǒng)的操作注意事項(xiàng)質(zhì)譜系統(tǒng)的維護(hù) 主要內(nèi)容主要內(nèi)容一一、質(zhì)譜的系統(tǒng)結(jié)構(gòu)示意質(zhì)譜的系統(tǒng)結(jié)構(gòu)示意圖圖質(zhì)譜系統(tǒng)各部件介紹1.離子源 ：產(chǎn)生離子化，并將產(chǎn)生的離子在電場的作用下進(jìn)入毛細(xì)管 3.離子光學(xué)組件：包括skimmer 1，八級(jí)桿以及Len 1和Len 2,進(jìn)一步除去溶劑和中性分子，高效的離子傳輸組件，聚焦隨機(jī)運(yùn)動(dòng)的離子進(jìn)入四級(jí)桿。2.毛細(xì)管 ：離子導(dǎo)入通道，將離子源產(chǎn)生的離子傳輸進(jìn)入質(zhì)譜，同時(shí)隔離外部的常壓與質(zhì)譜內(nèi)部的高真空4.四級(jí)桿MS1和MS2：質(zhì)量過濾器，優(yōu)化離子傳輸和質(zhì)譜分辨率，可以選擇讓某些質(zhì)荷比的離子一次通過或者所有離子全通過。5.碰撞池：高壓碰撞池，優(yōu)化裂解，六級(jí)桿設(shè)計(jì)有助于捕獲

3、碎片離子6.檢測器：包括高能打拿級(jí)和電子倍增器，增強(qiáng)信號(hào)，高增益毛細(xì)管電壓 Capillary Voltage毛細(xì)管出口電壓Fragmentor碰撞能 Collision energy電子倍增電壓 EMVESI離子源的原理 ESI將溶液中的離子轉(zhuǎn)變?yōu)闅庀嚯x子三大步驟三大步驟：1.在噴霧毛細(xì)管尖端產(chǎn)生帶電霧滴2.通過溶劑蒸發(fā)和霧滴分裂使帶電霧滴變小，這一過程反復(fù)進(jìn)行，直至生成很小的帶電霧滴3.由很小帶電霧滴產(chǎn)生氣相離子特點(diǎn)1.直角噴霧離子源設(shè)計(jì)，大大減少了未離子化的中性液滴進(jìn)入質(zhì)譜中，降低噪音，保證毛細(xì)管和離子光路更干凈，抗污染2.反吹干燥系統(tǒng)，加速噴霧的溶劑揮發(fā)，減少溶劑簇和流動(dòng)相的附加離子，

4、在standby狀態(tài)時(shí)，仍維持一定的干燥氣溫度和流量，避免空氣吸入質(zhì)譜真空系統(tǒng)，極大的減少了污染 庫倫爆炸原理：帶有被測物質(zhì)離子的流動(dòng)相在霧化針尖端發(fā)生霧化，液滴表面富集帶同種電荷的離子，內(nèi)部帶相反電荷聚集，形成帶電液滴細(xì)的噴霧，在電場的作用下，飛向毛細(xì)管。加熱的氮?dú)飧稍餁怏w反向流動(dòng)，帶走液滴中的中性溶劑分子，從而收縮液滴，直至排斥的靜電力超過液滴表面張力，引起庫倫爆炸，過程不斷重復(fù)，待分析物離子最終變成氣態(tài)進(jìn)入毛細(xì)管。1.全掃描scan,確認(rèn)得到化合物離子質(zhì)量數(shù)2.選擇離子模式，優(yōu)化毛細(xì)管出口電壓(fragmentor),保證母離子的傳輸效率3.子離子掃描，使用優(yōu)化好的fragmentor,

5、選擇定量離子，優(yōu)化碰撞能量，優(yōu)化子離子的響應(yīng)4多重反應(yīng)監(jiān)測MRM定量，使用已優(yōu)化好的fragmentor,優(yōu)化每個(gè)子離子的碰撞能MS2 ScanMS2 ScanMS2 SIMMS2 SIMProduct Product Ion Ion ScanScanMRMMRM二、定量方法的開發(fā)邏輯順序：1.MS2 Scan 確定待測物的分子離子2.MS2 SIM 優(yōu)化待測物的fragmentor3. Product Ion Scan Product Ion Scan 確定定性定量離子4. MRM MRM 優(yōu)化子離子碰撞能流動(dòng)相以及樣品必須過膜（有機(jī)濾膜、水系膜）流動(dòng)相應(yīng)超聲脫氣1020min,否則壓力易波

6、動(dòng)（裝有在線脫氣機(jī)，影響會(huì)小一些）流動(dòng)相每兩天至少更換 過膜處理反相常用流動(dòng)相為甲醇、乙腈、水以及緩沖鹽溶液。注意：LC中常采用無機(jī)緩沖鹽，LC/MS中則應(yīng)該使用揮發(fā)性的緩沖鹽，如甲酸銨、乙酸銨；或揮發(fā)性酸堿甲酸、乙酸、氨水等調(diào)節(jié)pH緩沖鹽的使用三、液質(zhì)操作系統(tǒng)的注意事項(xiàng)LC/MS中不能使用磷酸鹽、硼酸鹽、硫酸鹽、三氟乙酸、三乙胺，易殘留，會(huì)形成強(qiáng)離子對，產(chǎn)生離子抑制，降低靈敏度不能使用的溶劑添加劑溶劑的截止波長：乙腈/190nm,甲醇/210nm,水/190nm.一般分析時(shí)樣品檢測波長應(yīng)至少大于所用溶劑的截止波長20nm以上，否則背景較高。溶劑截止波長1 12 23 34 4流動(dòng)相色譜柱根據(jù)

7、鍵合相的不同可分為氨基柱、C8、C18、C30柱等等色譜柱使用完要沖洗，特別是使用緩沖鹽分析樣品時(shí)，原則上用于沖洗的流動(dòng)相中水的比例應(yīng)該等于或高于分析時(shí)所用流動(dòng)相中水的比例。嚴(yán)禁用純水沖洗柱子，易造成固定相的流失和鍵合相的坍塌。（特殊柱子除外，如T3柱，因具有三相鍵合相，所以高耐水性，用于分析丙酸、EDTA、三聚氰胺等）三、液質(zhì)操作系統(tǒng)的注意事項(xiàng)123反相色譜柱紫外檢測器UV二極管陣列檢測器DAD熒光檢測器FLD蒸發(fā)光散色檢測器ELSD示差檢測器RID質(zhì)譜檢測器MS三、液質(zhì)操作系統(tǒng)的注意事項(xiàng)檢測器的選擇適用于堿性樣品，可用乙酸或甲酸對樣品甲乙酸化。樣品中含有仲氨或叔氨時(shí)可優(yōu)先考慮使用正離子模式

8、（如磺胺類、喹諾酮類物質(zhì)）適合于酸性樣品，可用氨水對樣品進(jìn)行堿化，樣品中含有較多的強(qiáng)負(fù)電性基團(tuán)，如含氯、含溴和多個(gè)羥基時(shí)可嘗試使用負(fù)離子模式（如氯霉素）三、液質(zhì)操作系統(tǒng)的注意事項(xiàng)正離子 模式負(fù)離子 模式正負(fù)離子模式選擇的一般原則正負(fù)離子模式選擇的一般原則： 四、質(zhì)譜系統(tǒng)的日常維護(hù)及故障排除維護(hù)周期四、質(zhì)譜系統(tǒng)的日常維護(hù)及故障排除1.沖洗霧化氣組件樣品運(yùn)行結(jié)束后，可以使用90%乙腈/10%水,把質(zhì)譜設(shè)置on,沖洗三分鐘，可以有效除去霧化器以及質(zhì)譜切換閥內(nèi)痕量的樣品殘留。當(dāng)霧化器較臟時(shí)，可取下霧化器，使用合適的，可以充分溶解可能的樣品殘留的溶劑超聲（霧化器尖端不可接觸到容器壁）四、質(zhì)譜系統(tǒng)的日常維

9、護(hù)及故障排除2.清洗電噴霧霧化室將儀器設(shè)置為standby,待離子源溫度冷卻后，用50%異丙醇-水溶液浸濕無塵布，擦拭弧形電極和噴霧擋蓋以及周圍。（切禁直接對著毛細(xì)管末端沖洗，壓力會(huì)增大，造成渦輪泵負(fù)載急劇增加，容易損壞渦輪泵）四、質(zhì)譜系統(tǒng)的日常維護(hù)及故障排除3.打開氣鎮(zhèn)閥必須每周逆時(shí)針擰開氣鎮(zhèn)閥到底，維持20-30min，把油氣分離器內(nèi)多余的泵油放回泵內(nèi)，然后順時(shí)擰緊，關(guān)閉氣鎮(zhèn)閥。關(guān)機(jī)前務(wù)必確認(rèn)氣鎮(zhèn)閥處于關(guān)閉狀態(tài)，否則泵油可能因此回流到質(zhì)譜的真空腔內(nèi)，損壞儀器四、故障排除1.檢查溶液化學(xué)性質(zhì)，確定樣品溶劑是合適的2.保證用新樣品，并且正確存儲(chǔ)樣品3.檢查霧化器條件4.清潔毛細(xì)管入口5.檢查毛細(xì)管有無損壞和污染1.重新校正質(zhì)量軸2.確定調(diào)諧用離子，估計(jì)樣品離子的質(zhì)量范圍并顯示強(qiáng)穩(wěn)定的信號(hào)1.確保霧化氣壓設(shè)定足夠高以利液相色譜流動(dòng)相氣化2.檢查霧化器中針頭的