蛋白質的結構與功能-兼容2

1、蛋白質的結構與功能蛋白質的結構與功能第一章第一章Structure and Function of Protein蛋白質蛋白質(protein)是由許多氨基酸是由許多氨基酸(amino acids)通過肽鍵通過肽鍵(peptide bond)相連形成的高分子相連形成的高分子含氮化合物，是生命活動的載體。含氮化合物，是生命活動的載體。蛋白質的分子組成蛋白質的分子組成The Molecular Component of Protein第一節(jié)第一節(jié)n蛋白質的元素組成蛋白質的元素組成主要有主要有C C、H H、O O、N N和和 S S。 有些蛋白質含有少量其他元素，如：磷、有些蛋白質含有少量其他元素

2、，如：磷、鐵、銅、鋅、錳、鈷、鉬、碘等。鐵、銅、鋅、錳、鈷、鉬、碘等。 各種蛋白質的含氮量很接近，平均為各種蛋白質的含氮量很接近，平均為16。根據生物樣品中的含氮量可以推算出蛋白根據生物樣品中的含氮量可以推算出蛋白質的大致含量。質的大致含量。一、組成人體蛋白質的一、組成人體蛋白質的20種種L- -氨基酸氨基酸存在自然界中的氨基酸有存在自然界中的氨基酸有300300余種，但余種，但組成人體蛋白質的氨基酸僅有組成人體蛋白質的氨基酸僅有2020種，且均種，且均屬屬 L-L-氨基酸氨基酸（甘氨酸除外）。（甘氨酸除外）。COO-C+NH3L-L-氨基酸的通式氨基酸的通式RH非極性脂肪族氨基酸非極性脂肪族

3、氨基酸極性中性氨基酸極性中性氨基酸芳香族氨基酸芳香族氨基酸酸性氨基酸酸性氨基酸堿性氨基酸堿性氨基酸二、氨基酸二、氨基酸可根據側鏈結構和理化可根據側鏈結構和理化性質進行分類性質進行分類n幾種特殊氨基酸幾種特殊氨基酸1. 1.脯氨酸脯氨酸（亞氨基酸）（亞氨基酸）CH2CHCOO-NH2+CH2CH2CH2CHCOO-NH2+CH2CH2 其他氨酸其他氨酸（ - -氨基酸）氨基酸）C O O-C+NH3RH2. 2.半胱氨酸半胱氨酸 胱氨酸胱氨酸二硫鍵二硫鍵-OOC-CH-CH2-S+NH3S-CH2-CH-COO-+NH3-OOC-CH-CH2-S+NH3S-CH2-CH-COO-+NH3+-OO

4、C-CH-CH2-SH+NH3-OOC-CH-CH2-SH+NH3HS-CH2-CH-COO-+NH3HS-CH2-CH-COO-+NH3 在蛋白質翻譯后，脯氨酸和賴氨酸可分別被羥化在蛋白質翻譯后，脯氨酸和賴氨酸可分別被羥化為羥脯氨酸和羥賴氨酸。為羥脯氨酸和羥賴氨酸。3. 3.羥脯氨酸和羥賴氨酸羥脯氨酸和羥賴氨酸三、氨基酸的理化性質三、氨基酸的理化性質n兩性解離及等電點兩性解離及等電點氨基酸是兩性電解質，其解離程度取決于所氨基酸是兩性電解質，其解離程度取決于所處溶液的酸堿度。處溶液的酸堿度。等電點等電點(isoelectric point, pI) 在某一在某一pH的溶液中，氨基酸解離成陽離子

5、和的溶液中，氨基酸解離成陽離子和陰離子的趨勢及程度相等，成為兼性離子，呈電陰離子的趨勢及程度相等，成為兼性離子，呈電中性。此時溶液的中性。此時溶液的pH值值稱為該氨基酸的稱為該氨基酸的等電點等電點。（一）氨基酸具有兩性解離的性質（一）氨基酸具有兩性解離的性質pH=pI+OH-pHpI+H+OH-+H+pHpI氨基酸的兼性離子氨基酸的兼性離子 陽離子陽離子陰離子陰離子CHNH2COOHR CHNH2COOHRCHNH3+COO-R CHNH3+COO-RCHNH2COO-R CHNH2COO-RCH COOHRNH3+CH COOHRNH3+（二）含共軛雙鍵的氨基酸具有紫外吸收性質（二）含共軛雙

6、鍵的氨基酸具有紫外吸收性質色氨酸、酪氨酸色氨酸、酪氨酸的最大吸收峰在的最大吸收峰在 280 nm 附近。附近。大多數蛋白質含大多數蛋白質含有這兩種氨基酸殘基，有這兩種氨基酸殘基，所以測定蛋白質溶液所以測定蛋白質溶液280nm的光吸收值是分的光吸收值是分析溶液中蛋白質含量析溶液中蛋白質含量的快速簡便的方法。的快速簡便的方法。芳香族氨基酸的紫外吸收芳香族氨基酸的紫外吸收（三）氨基酸與茚三酮反應生成藍紫色化合物（三）氨基酸與茚三酮反應生成藍紫色化合物所有所有氨基酸氨基酸及具有游離及具有游離-氨基的肽與茚氨基的肽與茚三酮反應都產生藍紫色物質，只有脯氨酸和三酮反應都產生藍紫色物質，只有脯氨酸和羥脯氨酸與

7、茚三酮反應產生黃色物質。氨基羥脯氨酸與茚三酮反應產生黃色物質。氨基酸與茚三酮水合物共熱，可生成酸與茚三酮水合物共熱，可生成藍紫色藍紫色化合化合物，其最大吸收峰在物，其最大吸收峰在570nm處。處。由于此吸收峰值與氨基酸的含量存在正由于此吸收峰值與氨基酸的含量存在正比關系，因此可作為氨基酸定量分析方法。比關系，因此可作為氨基酸定量分析方法。四、氨基酸通過肽鍵連接而形成蛋白四、氨基酸通過肽鍵連接而形成蛋白質或活性肽質或活性肽（一）（一）氨基酸通過肽鍵連接而形成肽氨基酸通過肽鍵連接而形成肽NH2-CH-CHOOH甘甘氨氨酸酸NH2-CH-CHOOH甘甘氨氨酸酸+NH-CH-CHOHO OH甘甘氨氨酸

8、酸-HOH甘氨酰甘氨酸甘氨酰甘氨酸NH2-CH-C-N-CH-COOHHHHONH2-CH-C-N-CH-COOHHHHO肽鍵二肽二肽R2-N-CH COH-NH2-CH-CR1ONH2-CH-COR10N-CH COH-OH肽肽(peptide)是由氨基酸通過肽鍵縮合而形是由氨基酸通過肽鍵縮合而形成的化合物。成的化合物。R3N-CH COH-三肽三肽十個以內氨基酸構成的肽稱為寡肽。十個以內氨基酸構成的肽稱為寡肽。十個以上氨基酸構成的肽稱為多肽。十個以上氨基酸構成的肽稱為多肽。氨基酸殘基N 末端：多肽鏈中有末端：多肽鏈中有游離游離-氨基氨基的一端的一端C 末端：多肽鏈中有末端：多肽鏈中有游離游

9、離-羧基羧基的一端的一端 蛋白質是由許多氨基酸殘基組成、折疊蛋白質是由許多氨基酸殘基組成、折疊成特定的空間結構、并具有特定生物學功能成特定的空間結構、并具有特定生物學功能的多肽。一般而論，蛋白質的氨基酸殘基數的多肽。一般而論，蛋白質的氨基酸殘基數通常在通常在50個以上，個以上，50個氨基酸殘基以下則仍個氨基酸殘基以下則仍稱為多肽。稱為多肽。（二）（二）體內存在多種重要的生物活性肽體內存在多種重要的生物活性肽 1. 谷胱甘肽谷胱甘肽(glutathione, GSH)GSH過氧過氧化物酶化物酶H2O2 2GSH 2H2O GSSG GSH還原酶還原酶NADPH+H+ NADP+ nGSH與與GS

10、SG間的轉換間的轉換 體內許多激素屬寡肽或多肽體內許多激素屬寡肽或多肽 神經肽神經肽(neuropeptide)2.多肽類激素及神經肽多肽類激素及神經肽蛋白質的分子結構蛋白質的分子結構The Molecular Structure of Protein 第二節(jié)第二節(jié)n蛋白質的分子結構包括蛋白質的分子結構包括: 高級高級結構結構一級結構一級結構(primary structure)二級結構二級結構(secondary structure)三級結構三級結構(tertiary structure)四級結構四級結構(quaternary structure)n定義定義:蛋白質的一級結構指在蛋白質分子從

11、蛋白質的一級結構指在蛋白質分子從N-端至端至C-端的端的氨基酸排列順序氨基酸排列順序。一、一、蛋白質的一級結構蛋白質的一級結構n主要的化學鍵主要的化學鍵:肽鍵肽鍵，有些蛋白質還包括二硫鍵。，有些蛋白質還包括二硫鍵。 一級結構是蛋白質空間構象和特異生物學一級結構是蛋白質空間構象和特異生物學功能功能的基礎的基礎，但但不是不是決定蛋白質空間構象的決定蛋白質空間構象的唯一因素唯一因素。二、二、蛋白質二級結構蛋白質二級結構蛋白質分子中某一段肽鏈的局部空間結蛋白質分子中某一段肽鏈的局部空間結構，即該段肽鏈主鏈骨架原子的相對空間位構，即該段肽鏈主鏈骨架原子的相對空間位置，并不涉及氨基酸殘基側鏈的構象。置，并

12、不涉及氨基酸殘基側鏈的構象。n定義定義: : CR2-CR1-CO-COHNHHCO-N-HHCOR3N-CH-HCOR10N-CH-OHHn肽鏈主鏈骨架由氨基氮肽鏈主鏈骨架由氨基氮N N、CC和羰基和羰基C C等等3 3個個原子依次重復排列構成。原子依次重復排列構成。 （一）參與肽鍵形成的（一）參與肽鍵形成的6個原子在同一平面上個原子在同一平面上肽鍵具有雙鍵屬性，參與肽鍵的肽鍵具有雙鍵屬性，參與肽鍵的6個原子個原子C 1、C、O、N、H、C 2位于同一平面，位于同一平面，C 1和和C 2在平面上所處的位置為反式在平面上所處的位置為反式(trans)構型，此同一平面上的構型，此同一平面上的6個

13、原子構成了所謂的個原子構成了所謂的肽單元肽單元 (peptide unit) 。 - -螺旋螺旋 ( -helix) - -折疊折疊 ( -pleated sheet) - -轉角轉角 ( -turn) 無規(guī)卷曲無規(guī)卷曲 (random coil) （二）（二）-螺旋結構是常見的蛋白質二級結構螺旋結構是常見的蛋白質二級結構n蛋白質二級結構蛋白質二級結構n維持二級結構的化學鍵維持二級結構的化學鍵：氫鍵氫鍵 （二）（二）-螺旋結構是常見的蛋白質二級結構螺旋結構是常見的蛋白質二級結構1）右手螺旋結構。）右手螺旋結構。2）螺距為）螺距為0.54nm，每一圈，每一圈含有含有3.6個氨基酸殘基。個氨基酸殘

14、基。3）靠鏈內氫鍵維持的，每）靠鏈內氫鍵維持的，每個肽鍵的個肽鍵的N-H與第與第4個殘基個殘基的羰基氧形成氫鍵。的羰基氧形成氫鍵。4）側鏈基團伸向螺旋外側）側鏈基團伸向螺旋外側。 （三）（三） - -折疊使多肽鏈形成片層結構折疊使多肽鏈形成片層結構1）-折疊是由兩條或多條伸展的多肽鏈靠氫鍵聯結而折疊是由兩條或多條伸展的多肽鏈靠氫鍵聯結而成的鋸齒狀結構。成的鋸齒狀結構。2）維持）維持-折疊結構穩(wěn)定性的氫鍵在鏈與鏈之間形成，折疊結構穩(wěn)定性的氫鍵在鏈與鏈之間形成，由一條鏈上的羰基氧和另一條鏈上的氨基由一條鏈上的羰基氧和另一條鏈上的氨基N-H之間形之間形成。成。3）側鏈基團交替地分布于片層平面兩側。）

15、側鏈基團交替地分布于片層平面兩側。4）-折疊分平行式和反平行式。折疊分平行式和反平行式。 （四）（四） - -轉角轉角 - -轉角轉角也稱也稱-回折，存在于球狀蛋白中。其特點是肽鏈回回折，存在于球狀蛋白中。其特點是肽鏈回折折180，使得第一個氨基酸殘基的，使得第一個氨基酸殘基的C=O和與第四個殘基和與第四個殘基的的N-H形成氫鍵。形成氫鍵。（四）無規(guī)卷曲（四）無規(guī)卷曲無規(guī)卷曲是用來闡述沒有確定規(guī)律性的那部分無規(guī)卷曲是用來闡述沒有確定規(guī)律性的那部分肽鏈結構。肽鏈結構。（五）（五）二級結構可組成蛋白質分子中的二級結構可組成蛋白質分子中的模體模體二個或三個具有二級結構的肽段，在空間上二個或三個具有二

16、級結構的肽段，在空間上相互接近，形成一個特殊的空間構象，稱為相互接近，形成一個特殊的空間構象，稱為模體模體(motif) ，也被稱為，也被稱為超二級結構超二級結構。- -螺旋螺旋-轉角（或環(huán)）轉角（或環(huán)）-螺旋模體螺旋模體鏈鏈-轉角轉角- -鏈模體鏈模體鏈鏈-轉角轉角-螺旋螺旋-轉角轉角- -鏈模體鏈模體n模體常見的形式模體常見的形式鈣結合蛋白中結合鈣結合蛋白中結合鈣離子的模體鈣離子的模體鋅指結構鋅指結構（六）氨基酸殘基的側鏈影響二級結構的形成（六）氨基酸殘基的側鏈影響二級結構的形成蛋白質二級結構是以一級結構為基礎的。蛋白質二級結構是以一級結構為基礎的。一段肽鏈其氨基酸殘基的側鏈適合形成一段肽

17、鏈其氨基酸殘基的側鏈適合形成 - -螺旋螺旋或或-折疊，它就會出現相應的二級結構。折疊，它就會出現相應的二級結構。 多聚丙氨酸在多聚丙氨酸在pH7的水溶液中能形成的水溶液中能形成-螺旋，螺旋，多聚異亮氨酸不能形成多聚異亮氨酸不能形成螺旋，螺旋，多聚脯氨酸不能形成多聚脯氨酸不能形成螺旋。螺旋。多聚賴氨酸在多聚賴氨酸在pH7不形成不形成螺旋，而在螺旋，而在pH12時時自發(fā)形成自發(fā)形成螺旋。螺旋。n 實例實例1、 -螺旋螺旋肽鏈中脯氨酸經常形成肽鏈中脯氨酸經常形成-轉角，轉角，肽鏈中甘氨酸經常形成肽鏈中甘氨酸經常形成-轉角。轉角。2、 -轉角轉角三、三、多肽鏈在二級結構基礎上進一步折疊多肽鏈在二級結

18、構基礎上進一步折疊形成三級結構形成三級結構疏水鍵、離子鍵、氫鍵和疏水鍵、離子鍵、氫鍵和 范德華力等。范德華力等。n主要的化學鍵主要的化學鍵:整條肽鏈中全部氨基酸殘基的相對空間位置。整條肽鏈中全部氨基酸殘基的相對空間位置。即肽鏈中所有原子在三維空間的排布位置。即肽鏈中所有原子在三維空間的排布位置。n定義定義:（一）三級結構是指整條肽鏈中全部氨基酸（一）三級結構是指整條肽鏈中全部氨基酸殘基的相對空間位置殘基的相對空間位置 肌紅蛋白肌紅蛋白 (Mb) N 端端 C端端（二）結構域（二）結構域是三級結構層次上的獨立功能區(qū)是三級結構層次上的獨立功能區(qū)分子量較大的蛋白質?？烧郫B成多個結構較分子量較大的蛋白

19、質?？烧郫B成多個結構較為緊密且穩(wěn)定的區(qū)域，并各行其功能，稱為結構為緊密且穩(wěn)定的區(qū)域，并各行其功能，稱為結構域域 ( (domain) ) 。 大多數結構域含有序列上連續(xù)的大多數結構域含有序列上連續(xù)的100100至至200200個氨基酸殘個氨基酸殘基，若用限制性蛋白酶水解，含多個結構域的蛋白質基，若用限制性蛋白酶水解，含多個結構域的蛋白質常分解出常分解出獨立獨立的結構域，而各結構域的構象可以基本的結構域，而各結構域的構象可以基本不改變，并保持其功能。不改變，并保持其功能。 超二級結構則不具備這種特點。超二級結構則不具備這種特點。 因此，結構域也可看作是球狀蛋白質的獨立折疊單位，因此，結構域也可看

20、作是球狀蛋白質的獨立折疊單位，有較為獨立的三維空間結構。有較為獨立的三維空間結構。 3-磷酸甘油醛磷酸甘油醛脫氫酶亞基的脫氫酶亞基的結構示意圖結構示意圖 （三）（三）蛋白質的多肽鏈須折疊成正確的空間構象蛋白質的多肽鏈須折疊成正確的空間構象分子伴侶分子伴侶(chaperon)通過提供一個保護環(huán)境從而通過提供一個保護環(huán)境從而加速蛋白質折疊成天然構象或形成四級結構。加速蛋白質折疊成天然構象或形成四級結構。分子伴侶可逆地與未折疊肽段的疏水部分結合隨分子伴侶可逆地與未折疊肽段的疏水部分結合隨后松開，如此重復進行可防止錯誤的聚集發(fā)生，后松開，如此重復進行可防止錯誤的聚集發(fā)生，使肽鏈正確折疊。使肽鏈正確折疊

21、。 分子伴侶也可與錯誤聚集的肽段結合，使之解聚分子伴侶也可與錯誤聚集的肽段結合，使之解聚后，再誘導其正確折疊。后，再誘導其正確折疊。 分子伴侶在蛋白質分子折疊過程中二硫鍵的正確分子伴侶在蛋白質分子折疊過程中二硫鍵的正確形成起了重要的作用。形成起了重要的作用。 亞基之間的結合主要是氫鍵和離子鍵。亞基之間的結合主要是氫鍵和離子鍵。四、四、含有二條以上多肽鏈的蛋白質含有二條以上多肽鏈的蛋白質具有四級結構具有四級結構蛋白質分子中各亞基的空間排布及亞基接蛋白質分子中各亞基的空間排布及亞基接觸部位的布局和相互作用，稱為觸部位的布局和相互作用，稱為蛋白質的四級蛋白質的四級結構結構。許多功能性蛋白質分子含有許

22、多功能性蛋白質分子含有2 2條或條或2 2條以上條以上多肽鏈。每一條多肽鏈都有完整的三級結構，多肽鏈。每一條多肽鏈都有完整的三級結構，稱為蛋白質的稱為蛋白質的亞基亞基 (subunit)。由由2個亞基組成的蛋白質四級結構中，若亞基分子個亞基組成的蛋白質四級結構中，若亞基分子結構相同，稱之為結構相同，稱之為同二聚體同二聚體(homodimer)，若亞基分子，若亞基分子結構不同，則稱之為結構不同，則稱之為異二聚體異二聚體(heterodimer)。 血紅蛋白的血紅蛋白的四級結構四級結構五、蛋白質的分類五、蛋白質的分類n根據蛋白質組成成分根據蛋白質組成成分:單純蛋白質單純蛋白質結合蛋白質結合蛋白質

23、= = 蛋白質部分蛋白質部分 + + 非蛋白質部分非蛋白質部分n根據蛋白質形狀根據蛋白質形狀:纖維狀蛋白質纖維狀蛋白質球狀蛋白質球狀蛋白質n蛋白質家族（蛋白質家族（protein family） : 氨基酸序列相氨基酸序列相似而且空間結構與功能也十分相近的蛋白質。似而且空間結構與功能也十分相近的蛋白質。n屬于同一蛋白質家族的成員，稱為屬于同一蛋白質家族的成員，稱為同源蛋白質同源蛋白質（homologous protein） 。 n蛋白質超家族蛋白質超家族（superfamily） : 2 2個或個或2 2個以上的蛋個以上的蛋白質家族之間，其氨基酸序列的相似性并不高，白質家族之間，其氨基酸序列的

24、相似性并不高，但含有發(fā)揮相似作用的同一模體結構。但含有發(fā)揮相似作用的同一模體結構。蛋白質結構與功能的關系蛋白質結構與功能的關系The Relation of Structure and Function of Protein第三節(jié)第三節(jié)（一）一級結構是空間構象的基礎（一）一級結構是空間構象的基礎一、蛋白質一級結構一、蛋白質一級結構是高級結構是高級結構與功能的基礎與功能的基礎牛核糖核酸酶的牛核糖核酸酶的一級結構一級結構二二硫硫鍵鍵 天然狀態(tài)，天然狀態(tài)，有催化活性有催化活性 尿素、尿素、 -巰基乙醇巰基乙醇 去除尿素、去除尿素、-巰基乙醇巰基乙醇非折疊狀態(tài)，無活性非折疊狀態(tài)，無活性（二）一級結構相

25、似的蛋白質具有相似的高級（二）一級結構相似的蛋白質具有相似的高級結構與功能結構與功能一級結構相似的多肽或蛋白質，其空間構象一級結構相似的多肽或蛋白質，其空間構象以及功能也相似。以及功能也相似。 氨基酸殘基序號氨基酸殘基序號胰島素胰島素 A5 5 A6 6 A10 10 A3030 人人 Thr Ser Ile Thr 豬豬 Thr Ser Ile Ala 狗狗 Thr Ser Ile Ala 兔兔 Thr Gly Ile Ser 牛牛 Ala Gly Val Ala 羊羊 Ala Ser Val Ala 馬馬 Thr Ser Ile Ala（三）重要蛋白質的氨基酸序列改變可引起疾?。ㄈ┲匾?/p>

26、白質的氨基酸序列改變可引起疾病n例：鐮刀形紅細胞貧血例：鐮刀形紅細胞貧血N-val his leu thr pro glu glu C(146)HbS 肽鏈肽鏈HbA 肽肽 鏈鏈N-val his leu thr pro val glu C(146) 這種由蛋白質分子發(fā)生變異所導致的疾病，這種由蛋白質分子發(fā)生變異所導致的疾病，稱為稱為“分子病分子病”。n肌紅蛋白肌紅蛋白/ /血紅蛋白血紅蛋白含有血紅素輔基含有血紅素輔基血紅素結構血紅素結構 二、二、蛋白質的功能依賴特定空間結構蛋白質的功能依賴特定空間結構（一）（一）血紅蛋白亞基與肌紅蛋白結構相似血紅蛋白亞基與肌紅蛋白結構相似n肌紅蛋白肌紅蛋白(

27、 (myoglobin，Mb) ) 肌紅蛋白由一個多肽鏈和肌紅蛋白由一個多肽鏈和一個含鐵血紅素輔基組成，存一個含鐵血紅素輔基組成，存在于骨骼肌和心肌等組織。它在于骨骼肌和心肌等組織。它有有8 8段段 - -螺旋結構。血紅素位于螺旋結構。血紅素位于分子內部的袋形空穴，以離子分子內部的袋形空穴，以離子鍵形式與肽鏈中的兩個堿性氨鍵形式與肽鏈中的兩個堿性氨基酸側鏈相連，肽鏈中的基酸側鏈相連，肽鏈中的F8F8組組氨酸殘基還與氨酸殘基還與FeFe2+2+形成配位結形成配位結合，所以血紅素輔基與蛋白質合，所以血紅素輔基與蛋白質部分穩(wěn)定結合。部分穩(wěn)定結合。 n血紅蛋白血紅蛋白( (hemoglobin，Hb)

28、 )血紅蛋白具有血紅蛋白具有4個亞個亞基，基，每個亞基可結合每個亞基可結合1 1個個血紅素并攜帶血紅素并攜帶1 1分子氧分子氧。Hb亞基的三級結構亞基的三級結構與肌紅蛋白極為相似。與肌紅蛋白極為相似。 Hb與與Mb一樣能可逆地與一樣能可逆地與O2結合，結合， Hb與與O2 2結合后稱為結合后稱為氧合氧合Hb。氧合。氧合Hb占總占總Hb的百分數的百分數（稱（稱百分飽和度百分飽和度）隨）隨O2 2濃度變化而改變。濃度變化而改變。（二）血紅蛋白亞基構象變化可影響亞基（二）血紅蛋白亞基構象變化可影響亞基與氧結合與氧結合肌紅蛋白肌紅蛋白(Mb)和血紅蛋白和血紅蛋白(Hb)的氧解離曲線的氧解離曲線脫氧脫氧

29、Hb亞基間和亞基內的鹽鍵亞基間和亞基內的鹽鍵 血紅素與氧結合后，鐵原子半徑變小，就能進血紅素與氧結合后，鐵原子半徑變小，就能進入卟啉環(huán)的小孔中，繼而引起肽鏈位置的變動。入卟啉環(huán)的小孔中，繼而引起肽鏈位置的變動。n協同效應協同效應( (cooperativity) )一個寡聚體蛋白質的一個亞基與其配體結合一個寡聚體蛋白質的一個亞基與其配體結合后，能影響此寡聚體中另一個亞基與配體結合能后，能影響此寡聚體中另一個亞基與配體結合能力的現象，稱為力的現象，稱為協同效應協同效應。 如果是促進作用則稱為如果是促進作用則稱為正協同效應正協同效應 ( (positive cooperativity) )如果是抑

30、制作用則稱為如果是抑制作用則稱為負協同效應負協同效應( (negative cooperativity) )n別構效應別構效應(allosteric effect)蛋白質空間結構的改變伴隨其功能的蛋白質空間結構的改變伴隨其功能的變化，稱為變化，稱為別構效應別構效應。（三）蛋白質構象改變（三）蛋白質構象改變可引起疾病可引起疾病蛋白質構象疾病蛋白質構象疾?。喝舻鞍踪|的折疊發(fā)生錯：若蛋白質的折疊發(fā)生錯誤，盡管其一級結構不變，但蛋白質的構象發(fā)誤，盡管其一級結構不變，但蛋白質的構象發(fā)生改變，仍可影響其功能，嚴重時可導致疾病生改變，仍可影響其功能，嚴重時可導致疾病發(fā)生。發(fā)生。這類疾病包括這類疾病包括：人紋

31、狀體脊髓變性病、老：人紋狀體脊髓變性病、老年癡呆癥、亨停頓舞蹈病、瘋牛病等。年癡呆癥、亨停頓舞蹈病、瘋牛病等。瘋牛病是由朊病毒蛋白瘋牛病是由朊病毒蛋白(prion protein, PrP)引起的一組人和動物神經退行性病變。引起的一組人和動物神經退行性病變。正常的正常的PrP富含富含-螺旋，稱為螺旋，稱為PrPc。PrPc在某種未知蛋白質的作用下可轉變成全在某種未知蛋白質的作用下可轉變成全為為-折疊的折疊的PrPsc，從而致病。，從而致病。n瘋牛病中的蛋白質構象改變瘋牛病中的蛋白質構象改變第四節(jié)第四節(jié)蛋白質的理化性質蛋白質的理化性質The Physical and Chemical Chara

32、cters of Protein一、一、蛋白質具有兩性電離的性質蛋白質具有兩性電離的性質蛋白質分子除兩端的氨基和羧基可解離外，蛋白質分子除兩端的氨基和羧基可解離外，氨基酸殘基側鏈中某些基團，在一定的溶液氨基酸殘基側鏈中某些基團，在一定的溶液pH條條件下都可解離成帶負電荷或正電荷的基團。件下都可解離成帶負電荷或正電荷的基團。 當蛋白質溶液處于某一當蛋白質溶液處于某一pH時，蛋白質解離成時，蛋白質解離成正、負離子的趨勢相等，即成為兼性離子，凈電正、負離子的趨勢相等，即成為兼性離子，凈電荷為零，此時溶液的荷為零，此時溶液的pH稱為稱為蛋白質的等電點。蛋白質的等電點。n蛋白質的等電點蛋白質的等電點(

33、isoelectric point, pI)二、蛋白質具有膠體性質二、蛋白質具有膠體性質蛋白質屬于生物大分子之一，分子量可自蛋白質屬于生物大分子之一，分子量可自1萬至萬至100萬之巨，其分子的直徑可達萬之巨，其分子的直徑可達1100nm，為膠粒范圍之內。為膠粒范圍之內。 顆粒表面電荷顆粒表面電荷 水化膜水化膜n蛋白質膠體穩(wěn)定的因素蛋白質膠體穩(wěn)定的因素:+帶正電荷的蛋白質帶正電荷的蛋白質帶負電荷的蛋白質帶負電荷的蛋白質在等電點的蛋白質在等電點的蛋白質水化膜水化膜+帶正電荷的蛋白質帶正電荷的蛋白質帶負電荷的蛋白質帶負電荷的蛋白質不穩(wěn)定的蛋白質顆粒不穩(wěn)定的蛋白質顆粒酸酸堿堿酸酸堿堿酸酸堿堿脫水作用脫

34、水作用脫水作用脫水作用脫水作用脫水作用溶液中蛋白質的聚沉溶液中蛋白質的聚沉三、蛋白質空間結構破壞而引起變性三、蛋白質空間結構破壞而引起變性在某些物理和化學因素作用下，其特定的在某些物理和化學因素作用下，其特定的空間構象被破壞，也即有序的空間結構變成無空間構象被破壞，也即有序的空間結構變成無序的空間結構，從而導致其理化性質改變和生序的空間結構，從而導致其理化性質改變和生物活性的喪失。物活性的喪失。n蛋白質的變性蛋白質的變性(denaturation)n造成變性的因素造成變性的因素: :如如加熱、乙醇等有機溶劑、強酸、強堿、加熱、乙醇等有機溶劑、強酸、強堿、重金屬離子及生物堿試劑等重金屬離子及生物

35、堿試劑等 。 n變性的本質變性的本質: :破壞非共價鍵和二硫鍵，不改變蛋白破壞非共價鍵和二硫鍵，不改變蛋白質的一級結構。質的一級結構。n 應用舉例應用舉例: :臨床醫(yī)學上，變性因素常被應用來消毒及臨床醫(yī)學上，變性因素常被應用來消毒及滅菌。滅菌。此外此外, , 防止蛋白質變性也是有效保存蛋白質防止蛋白質變性也是有效保存蛋白質制劑（如疫苗等）的必要條件。制劑（如疫苗等）的必要條件。 若蛋白質變性程度較輕，去除變性因素若蛋白質變性程度較輕，去除變性因素后，蛋白質仍可恢復或部分恢復其原有的構后，蛋白質仍可恢復或部分恢復其原有的構象和功能，稱為象和功能，稱為復性復性(renaturation) 。在一定

36、條件下，蛋白疏水側鏈暴露在外，肽在一定條件下，蛋白疏水側鏈暴露在外，肽鏈融會相互纏繞繼而聚集，因而從溶液中析出。鏈融會相互纏繞繼而聚集，因而從溶液中析出。變性的蛋白質易于沉淀，有時蛋白質發(fā)生沉變性的蛋白質易于沉淀，有時蛋白質發(fā)生沉淀，但并不變性。淀，但并不變性。 蛋白質變性后的絮狀物加熱可變成比較堅固蛋白質變性后的絮狀物加熱可變成比較堅固的凝塊，此凝塊不易再溶于強酸和強堿中。的凝塊，此凝塊不易再溶于強酸和強堿中。 n蛋白質沉淀蛋白質沉淀n蛋白質的凝固作用蛋白質的凝固作用(protein coagulation)四、蛋白質四、蛋白質在紫外光譜區(qū)有特征性吸收峰在紫外光譜區(qū)有特征性吸收峰由于蛋白質分

37、子中含有共軛雙鍵的酪氨酸由于蛋白質分子中含有共軛雙鍵的酪氨酸和色氨酸，因此在和色氨酸，因此在280nm波長處有特征性吸收波長處有特征性吸收峰。蛋白質的峰。蛋白質的A280與其濃度呈正比關系，因此與其濃度呈正比關系，因此可作蛋白質定量測定?？勺鞯鞍踪|定量測定。蛋白質經水解后產生的氨基酸也可發(fā)生茚蛋白質經水解后產生的氨基酸也可發(fā)生茚三酮反應。三酮反應。 蛋白質和多肽分子中肽鍵在稀堿溶液中與蛋白質和多肽分子中肽鍵在稀堿溶液中與硫酸銅共熱，呈現紫色或紅色，此反應稱為硫酸銅共熱，呈現紫色或紅色，此反應稱為雙雙縮脲反應縮脲反應，雙縮脲反應可用來檢測蛋白質水解，雙縮脲反應可用來檢測蛋白質水解程度。程度。五、應用蛋白質呈色反應可測定蛋白質五、應用蛋白質呈色反應可測定蛋白質溶液含量溶液含量 茚三酮反應茚三酮反應(ninhydrin reaction)雙縮脲反應雙縮脲反應(biuret reaction)第五節(jié)第五節(jié)蛋白質的分離純化與結構分析蛋白質的分離純化與結構分析The Separation and Purification and Structure Analysis of Protein一、一、去除蛋白質溶液中的小分子的技術去除蛋白質溶液中的小分子的技術應用正壓或離心力使蛋白