高中生物奧林匹克競賽教程：生物實驗的基本技術

1、第十三章 生物實驗的基本技術第一節(jié) 細胞學實驗技術【知識概要】一、玻片標本的制作技術制作玻片標本對認識生物體的形態(tài)結構具有重要意義。玻片標本有臨時玻片標本（如涂片、壓片、臨時裝片）和永久玻片標本（如永久裝片、切片）。1涂片法涂片法是將材料均勻地涂布在載玻片上的一種制片方法。涂片材料有單細胞生物、小型藻類、血液、細菌培養(yǎng)液、動植物的疏松組織、精巢、花藥等。涂片時應注意：（1）載玻片必須清潔。（2）載玻片要持平。（3）涂層須均勻。涂抹液滴在載玻片中間偏右，用解剖刀刃或牙簽等涂勻。（4）涂層要薄。用另一載玻片作推片，沿滴有涂抹液的載玻片面（二載玻片夾角應為30°45°）由右向左輕

2、輕推動，涂成均勻一薄層。（5）固定。如需固定可用化學固定劑或干燥法（細菌）固定。（6）染色。細菌用亞甲基藍，血液用瑞氏染液。染色液要蓋住全部涂面。（7）沖洗。用吸水紙吸干或烤干。（8）封片。長期保存用加拿大的樹膠片片。2壓片法壓片法是將生物材料置于載玻片和蓋片之間，施加一定壓力，將組織細胞壓散的一種制片方法。壓片法的一般過程：（1）取材。觀察細胞分裂，應選取細胞分裂旺盛、新鮮的組織細胞為材料。如根尖、莖尖分生組織、骨髓細胞、花藥（花粉母細胞）。精巢（精母細胞）等。（2）固定。材料固定可根據(jù)需要而定，取材后立即壓片觀察，可不作單獨固定處理（與染色同步進行）；取材后不立即視察，可將材料用固定液（一

3、般用醋酸酒精固定液）固定。固定224小時（因材料而異）后用95乙醇清洗，保存于70乙醇中，備用。（3）離析。對細胞不易散開材料用水解分離液（如1N HCl或鹽酸一酒精液）處理，一般處理620min，解離后經(jīng)水漂洗后方能染色。（4）染色。染色劑種類很多。觀察染色體常用醋酸洋紅染色液染色。（5）壓片。將材料放在載玻片上，加一滴清水或染液，蓋上蓋玻片用拇指輕輕壓片。（6）觀察。壓片后，即可在顯微鏡下觀察。3裝片法裝片法是將生物材料采取整體封固制成玻片標本的方法，用此法可制成臨時或永久裝片。裝片材料有：微小生物如衣藻、水綿、變形蟲、水螅，植物的葉表皮；昆蟲的翅、足、口器，人的口腔上皮細胞等。裝片法制作

4、時應注意：（1）手持載玻片時，應注意持平，或放在平臺上。滴水時水量要適當，以恰好被蓋玻片蓋滿為度。（2）應將材料用解剖針或鑷子展開不使重疊，展平在同一平面上。（3）放蓋玻片時，從一側慢慢蓋在水滴上，防止出現(xiàn)氣泡。（4）染色時，將一滴染色液滴在蓋玻片的一側，用吸水紙從另一側吸引，使蓋玻片下的標本均勻著色。著色后，用同樣的方法，滴一滴清水，把染色液吸出后，在顯微鏡下觀察。二、顯微鏡基本實驗技術1低倍鏡（4X、10X）的使用方法顯微鏡操作主要包括兩個方面：（1）光度調節(jié)。正確對光是能否成功地觀察到物象的首要條件。對光時，先把聚光器上提，打開可變闌，轉動反光鏡，這時一邊看鏡內視野，一邊調節(jié)聚光器螺旋，

5、直至視野內得到均勻而明亮的光線。（2）焦距的調節(jié)。調焦時，先把觀察的切片，用推進器對正通光孔中央。然后分兩步調焦。先用粗調器定焦，用左眼看目鏡，使粗調器慢慢上升，直到能清楚地看到標本為止。隨后調節(jié)細調器，使鏡筒微微升降，至物象更清晰為止。2高倍鏡（40X）的使用方法（1）將在低倍鏡中找到的物象欲放大部分移到視野中央。（2）轉動物鏡轉換器，使40X物鏡對準通光孔，轉動時從側面注視物鏡，以防鏡頭緊壓玻片。（3）調節(jié)細調螺旋，使物象清晰。3油鏡（100X）的使用方法（l）先用低倍鏡找到欲觀察細微結構，將其結構移至視野中央換高倍鏡。（2）下降鏡臺，在玻片標本上滴一滴香柏油，轉換油鏡。從側面注視油鏡，把

6、鏡臺上升，使油鏡頭浸在香柏油滴中。（3）轉動細調螺旋，使物象清晰，進行觀察。（4）觀察完畢，用鏡頭紙擦去油鏡頭和玻片上的香柏油，再用少許二甲苯或乙醚 / 無水乙醇把鏡頭擦干凈。4安裝指針的簡易方法將目鏡的上蓋（一片透鏡）旋下，剪取一小段頭發(fā)（其長度約等于目鏡的半徑），用鑷子夾住一端，將另一端蘸少許中性膠，將其粘在目鏡內壁的金屬光欄（一鐵圈）上。稍干后，旋緊上蓋，即可使用。三、單細胞的計數(shù)方法在細菌培養(yǎng)和體外細胞培養(yǎng)，以及環(huán)境監(jiān)測血液檢查中常常需要統(tǒng)計細菌、細胞、單細胞藻類、原生動物、血細胞、花粉等數(shù)量。細胞計數(shù)方法的原理是把一定體積的細胞液體，在顯微鏡下直接計算其個數(shù)，利用所得結果推算出每毫升

7、水體中的單細胞數(shù)。具體方法如下：1水滴計數(shù)法用管口圓而平滑、大小適宜的吸管，吸取1mL水，然后測定這一吸管1rnL水可滴出多少滴水（反復測定，直到準確為止）。這樣可以計算出該吸管滴出的每一滴水的體積。用吸管取樣時，如果單細胞是活動的要用碘殺死后，再計數(shù)；如果樣品濃度太大，計數(shù)困難，按倍數(shù)稀釋到適宜的濃度；另外，取樣前必須攪拌，攪拌后，立即取樣。取樣后，在顯微鏡下計數(shù)，得到一滴水中細胞數(shù)的平均值后，可依下列公式求出1mL水體中所含細胞的數(shù)目。1mL水體中含細胞數(shù)計數(shù)平均值×定量吸管每毫升的滴數(shù)×稀釋倍數(shù)2血球計數(shù)板計數(shù)法血球計數(shù)板是由一塊厚玻片特制而成，其中央有兩個計數(shù)室。每

8、個計數(shù)室劃分出9個大方格（見下圖），每格面積1mm2，加蓋玻片后的深度為0.1mm。因此，每大方格容積為0.1mm。另外，中央大方格以雙線等分為25個中方格。每個中方格又分16個小方格，供細胞計數(shù)用。 1 2 3 4血球計數(shù)板的構造l頂面觀 2側面觀 3放大后的網(wǎng)格 4放大后的計數(shù)室計數(shù)方法：首先用吸管吸取少許稀釋倍數(shù)的單細胞懸液，從蓋片端滴一小滴（不宜過多），液體自行向內滲入，靜置數(shù)分鐘后，再放在微鏡下觀察計數(shù)。一般選取計數(shù)室內四個角及中央五個中方格（80小方格）計數(shù)，若細胞位于小方格的線上，應遵循“數(shù)上線不數(shù)下線，數(shù)左線不數(shù)右線”的原則，以減少誤差。計數(shù)應重復3次，取其平均值。數(shù)完畢后，依

9、下式計算：每1mL懸液細胞數(shù)或每克細胞數(shù)80個小方格細胞總數(shù) / 80×400×10000×稀釋倍數(shù)四、顯微測微尺的應用方法顯微測微尺是在顯微鏡下測量生物細微結構的測微工具，用它測量細胞各部分的厚薄和大小。顯微測微尺（見下圖）包括目鏡測微尺（目尺）和物鏡測微尺（臺尺），測量時須將其配合使用方可達到測量目的。目鏡測微尺為一圓形玻片，玻片中央有一橫線刻有大小格的等距離線。物鏡測微尺有一特制的玻片，中央圓圈內有一1mm長分為100個等距小格的刻線，每一小格即10m。目鏡測微尺 物鏡測微尺顯微測微尺測量方法：首先須算出目鏡測微尺的每一格在不同倍物鏡下各為多少m。即取下接目

10、鏡卸下透鏡，裝上目鏡測微尺。然后將物鏡測微尺放在鏡臺中央，眼觀目鏡，調好焦距，使兩種測微尺上的刻度平行并重疊在一起。按下面公式計算出目鏡測微尺每格的實際長度。目鏡測微尺每格的長度（m）物鏡測微尺的格數(shù) / 目鏡測微尺的格數(shù)×10計算出目鏡測微尺每格的實際長度后，再在鏡臺上放上需要測量的物體標本或玻片標本，即可用目鏡測微尺測出它們的長度。五、顯微結構圖的繪制技巧生物繪圖是科學記錄的一種方法。繪圖時應注意：（1）繪科學圖以精確為主，不能藝術加工渲染。（2）只在紙的一面繪圖。繪圖時要用2H以上繪圖鉛筆，紙面力求整潔。（3）繪圖大小適宜，布局合理。一般要求圖畫在紙的稍偏左側，留出圖注的位置。

11、（4）圖的各部分的位置和比例，應與顯微鏡中實際觀察的一致，而要注意突出顯微結構的每個特征。（5）顯微構造圖的點線不要重復描繪。以實線表示輪廓，虛線表示被遮蔽但需表現(xiàn)的輪廓，用圓點的疏密來表示明暗、凹凸等層次。點點時筆尖直立。點的大小、疏密要均勻、整齊、渾圓。（6）繪圖時，一般先草擬輪廓圖，經(jīng)檢查無誤后，再以準確、清晰的線作最后的描繪?！窘忸}指導】例1 用顯微鏡觀察洋蔥根尖細胞的有絲分裂，要看清各時期細胞內染色體的變化情況，目鏡、物鏡的合理搭配應該是 A 目鏡（24X）、物鏡（10X，N·A0.25）B 目鏡（ 5X）、物鏡（40X，N·A0.65）C 目鏡（10X）、物鏡（

12、40X，N·A0.65）D 目鏡（24X）、物鏡（40X，N·A0.65）析 此題屬鏡像亮度問題。鏡像亮度與物鏡鏡口率（N·A）平方成正比，與總放大倍數(shù)成反比。由此，在總放大倍數(shù)相同情況下，要使物像亮度增加，應該使用高鏡口率（N·A）的物鏡與低倍目鏡配合，根據(jù)這一原理應選擇C。例2 在觀察顯微鏡時，經(jīng)常遇到以下5種現(xiàn)象：（1）視野亮度晃眼；（2）視野不圓；（3）對光時視野中出現(xiàn)窗欞、樹影等物現(xiàn)象；（4）只見視野不見圖像；（5）圖像結構不完整，試分析出現(xiàn)這些現(xiàn)象的可能原因，并提出排除方法。析 （1）視野亮度晃眼，可能原因：反光鏡直射強光源；光照到通光孔上緣

13、。排除方法：用平面鏡斜對光源；挪鏡。（2）視野不圓的可能原因：遮光器或轉換器沒有轉到頭；遮光器或轉換器螺絲動。排除方法：把兩者轉到頭（彈簧片入槽）；擰緊螺絲。（3）對光時視野中出現(xiàn)其他物象，其可能原因是鏡筒太高或太低，調節(jié)一下鏡筒即可消除。（4）只見視野不見圖像，可能是操作不仔細，低倍鏡頭偏于一旁。排除方法：將低倍鏡頭對準通光孔。（5）圖像結構不完整的可能原因是未根據(jù)材料的不同折光性用光，應調節(jié)光圈使透明度一致。例3 某架顯微鏡由于磨損，低倍鏡上的放大倍數(shù)看不清，而高倍物鏡尚看得出是40倍，借助實驗臺上的哪些材料可幫你測出低信鏡的放大倍數(shù)？說明測定方法。（實驗臺上有顯微鏡、目鏡測微尺、物鏡測微

14、尺、刻度尺、放大鏡）析 此題可利用顯微測量技術測定。利用實驗臺上的顯微鏡和測微尺進行測量。由于目鏡測微尺每格的實際長度因不同物鏡的放大倍數(shù)有所不同，因此可以在相同目鏡下，測量變換高（40X）、低倍物鏡下的視野直徑，由于放大倍數(shù)與視野直徑成反比，按下式計算即可求出低倍鏡的放大倍數(shù)。高倍鏡放大倍數(shù) / 低倍鏡放大倍數(shù)低倍鏡視野直徑 / 高倍鏡視野直徑例4 在一黃粉岬幼蟲尾部45節(jié)的節(jié)間刺一針，用毛細吸管取14mL血淋巴，再用毛細吸管取1520mL生理鹽水，用血球計數(shù)板計細胞數(shù)（區(qū)別脂類顆粒、組織碎片與細胞），計算血淋巴細胞濃度填入下表。30min重復一次（針刺部位前移一體節(jié)），60min重復一次（

15、針刺部位再前移一體節(jié)）。（1）將有關數(shù)據(jù)填入下表：時間間隔（min）血淋巴長度（a）mL生理鹽水（b）mL細胞數(shù)（數(shù)25個中方格）細胞密度（個mL）03060（2）將細胞密度變化繪成曲線，并回答下列問題：計數(shù)時怎樣處理壓線細胞？用一句話回答。給出計算細胞密度的公式。用一句話回答為什么血蓋片較一般蓋玻片厚。（注意：針刺幼蟲時，食指與中指夾住頭部，拇指按住尾部，使其不動。針刺不要過深，不要挑動，以免蟲死亡或使頭部器官的細胞或雜物進入血淋巴。蟲不可死。）析 此題按血球計數(shù)極計數(shù)的方法操作，所得數(shù)據(jù)鎮(zhèn)入表中。根據(jù)繪制函數(shù)曲線原理，以時間間隔為橫坐標，細胞密度（個mL）為縱坐標，繪制曲線。在計數(shù)時，對壓

16、線細胞采取“數(shù)上線不數(shù)下線，數(shù)左線不數(shù)右線”的原則處理。計算細胞數(shù)方法：每mL懸液細胞數(shù)80個小方格細胞總數(shù) / 80×400×10000×稀釋倍數(shù)血蓋片比普通蓋玻片厚是因為要蓋住計數(shù)板上的計數(shù)室溝槽?！眷柟叹毩暋?某同學在做觀察洋蔥根尖細胞有絲分裂裝片時，有兩次出了差錯。第一次是解離時間為2min，第二次是60min。請你推出實驗結果并說明原因。第一次是因 ，所以觀察到的是 。第二次，則因 ，所以 。2在照明充分的情況下，在顯微鏡視野內可看清洋蔥鱗莖表皮細胞無色的細胞壁，但看不清液泡，為了能顯示細胞質與液泡的界面，此時應 A 改用凹面反光鏡，放大光圈 B 改用凹

17、面反光鏡，縮小光圈C 改用平面反光鏡，放大光圈 D 改用平面反光鏡，縮小光圈3在顯微鏡視野中觀察玻片標本，物鏡測微尺和目鏡（5X）測微尺在0點處重合時，物境測微尺的80格與目鏡測微尺的55格處也相重疊時，試問目鏡測微尺一格的長度是 m；如觀察測量某種植物的細胞大小時，測量其長為7個小格，那么此細胞的實際長度是 m。4撕取所給葉片的下表皮，放在顯微鏡下觀察，繪出保衛(wèi)細胞及表皮細胞的特征。隨機取五個視野計算氣孔數(shù)，取其平均值，計算氣孔密度（個cm2）。（低倍物鏡視野直徑為1.5mm，目鏡統(tǒng)一用10倍）第二節(jié) 物理學和化學分析技術【知識概要】、分離技術分離技術主要是利用物理學和化學的原理建立起來的各

18、種分離、純化方法。常用的分離技術有以下幾種：1紙層析法層析技術是從一個混合物中分離和純化一種或幾種生物化合物的最簡便的方法，用濾紙為支持物的層析法，叫紙層析法。紙層析用的展層溶劑大多由水和有機溶劑組成。濾紙纖維與水的親和力強，與有機溶劑的親和力弱，因此在展層時，水是靜止相，紙是靜止相的支持物，有機溶劑是流動相，它沿著濾紙流動。若將生物樣品（提取液）點在濾紙上（此點稱為原點）進行展層，樣品中的各種溶質（如葉綠體中的四種色素，各種氨基酸等）即在兩相溶劑中不斷進行分配。由于它們的分配系數(shù)不同，不同溶質隨流動相移動的速率不等，于是就將這些溶質分離開來，形成距原點不等的層析點。紙層析的具體方法：（1）制

19、樣。將樣品經(jīng)研磨、過濾制備成提取液；（2）制備濾紙條。將濾紙剪成長10cm、寬1cm的紙條。在一端用鉛筆畫一橫線（點樣線）；（3）點樣。用毛細吸管將濾液沿點樣線畫一直的濾液細線；（4）層析：將層析液（石油醚、丙酮、苯的混合液）倒入燒杯，然后將濾紙條靠燒杯內壁輕輕插入層析液中。（5）結果。幾分鐘后，出現(xiàn)層析現(xiàn)象。2電泳法電泳技術主要是根據(jù)不同物質所帶的電荷的數(shù)量和性質不同，因而在電場移動中的速度和方向就不同。生物分子如氨基酸、多肽、蛋白質、酶和核酸等都具有可電離的集團，在溶劑中能形成帶電荷的分子，由于在不同的溶劑介質中所帶的電荷的數(shù)量和性質的差別，在電場中泳動的速度（遷移率）不同，由此可以分離各

20、種物質成分。電泳的方法很多，有紙電泳、瓊脂平板電泳、聚丙烯酰胺凝膠電泳等，其中較簡單的是紙上電泳法，它是用濾紙作為電泳載體的一種電泳方法。紙上電泳一般操作過程（以分離血清蛋白為例）：（1）儀器準備。電泳設備主要是電泳儀和電泳槽（見下圖）。電泳槽是供兩極電泳分離和盛裝緩沖液之用。電泳儀提供可控電源。一般采用電壓在100500V，電流在0mA50mA或100mA。（2）配制緩沖液。緩沖液的種類很多，可用0.5M、pH5.6巴比妥緩沖液或 Ph8.6硼酸緩沖液。緩沖液配好后直接加入兩側電泳槽中。（3）裁剪濾紙。取電泳濾紙，按2×20cm剪裁，于一端約1/3處用鉛筆劃點樣線，將紙用緩沖液浸濕

21、。（4）點樣。在點樣線上，用50L微量注射器點樣，一般為10mL。點樣后，將濾紙放在電泳槽兩極隔板上，兩端浸入緩沖液中。（5）電泳。接上電源，按濾紙長和寬選用電壓（8Vcm）和電流（0.4mAcm），以點樣線一側為負極，向正極泳行。（6）烘干。取下電泳紙條在烤箱（90105）迅速烘干。（7）染色。將烘干濾紙條浸入溴酚蘭染液10min，取出以0.5醋酸溶液脫色，逐漸顯出電泳帶。（8）比色。將各條區(qū)帶濾紙剪下，以電泳空白濾紙為對照，在分光光比色計上比色。（9）計算。按光密度值計算出各部分蛋白質的百分數(shù)。水平電泳槽裝置3離心法離心法是一種利用物質在溶液中的密度、大小和形狀的不同，以及它們沉降系數(shù)、質

22、量、浮力因子等方面的差別，通過強離心力的作用使其分離、濃縮、提純的技術，并可用于分子量的測定。在生物學研究中，常用離心方法從組織勻漿中分離各種細胞器及各種蛋白質、核酸等生物大分子。離心的設備主要是離心機，它是利用離心力對混合液進行分離和沉淀的專門儀器。離心機的種類很多，有低速離心機（4000/ min以下）、高速離心機（4000/ min以上，20000/ min以下）和超速高心機（20000/ min以上）。離心分離方法很多，常用的是差速離心機，是指低速和高速離心交替進行，用不同強度的離心力使不同質量的物質分批分離的方法。例如，利用離心機的不同轉數(shù)（rpm，即/ min）和時間，從鼠肝勻漿中

23、分離各種亞細胞組分的過程（下圖）：大白鼠肝臟勻裝分級分離各種亞細胞組分圖解二、測定技術1定性測定比色法生物材料化學成分的測定技術很多，在生物學實驗中最常用的簡便方法是比色法。比色法是利用生物組織中的有機物與某些化學試劑相互作用，能產生顏色反應的原理，可以根據(jù)顏色反應鑒定生物組織中某種有機物的存在。從細胞組織中，鑒定有機物的常用比色法，參見下表。成分試劑作用顏色反應還原糖斐林（Fehling）試劑使自由醛或酮基的糖氧化產生棕紅色Cu2O沉淀蛋白質雙縮脲試劑肽錠在堿性環(huán)境中與CuSO4結合產生紅紫色的絡合物淀粉碘液淀粉與碘結合藍色反應脂肪蘇丹酒精溶液脂肪與蘇丹結合紅色反應維生素A三氯化銻一氯仿溶液

24、與SbCl3作用藍色反應維生素B1重氮化氨基苯磺酸溶液在堿性溶液中發(fā)生作用紅色反應核酸亞硫酸復紅溶液與DNA發(fā)生作用呈紅色或紫色2定量測定滴定法滴定法是將一定濃度的標準溶液滴入被測物質溶液中，當反應到終點后，根據(jù)所用標準溶液的體積計算被測物質的含量，這是一種常用的容量分析法。滴定法常用的儀器是滴定管。它是帶有刻度和活栓的玻璃管，用它放送已知體積的溶液。滴定法的一般操作技術（以維生素C定量測定為例）：（1）樣品制備。將樣品（洗凈蔬菜）20g，加2草酸100g，置組織攪拌機中打成漿狀。稱取5g漿狀物倒入50mL容量瓶中以2草酸溶液稀釋至刻度。靜置10min，過濾備用。（2）滴定。標準液滴定：準確吸

25、取標準抗壞血酸（Vc）溶液 1mL（含0.1mgVc）置100mL錐形瓶中，加9Ml1草酸，微量滴定管以0.12，6-二氯酚靛酚滴至淡紅色，并保持15sec即為終點。由所用染料的體積計算出1mL染料相當于多少mg抗壞血酸。樣液滴定：準確吸取濾液兩份，每份10mL分別放入兩個100mL錐形瓶內，測定方法同前。計算：V×T / W×100100g樣品中含抗壞血酸（Vc）mg數(shù)式中：V滴定時所用去染料毫升數(shù)。T1mL染料能氧化Vc毫克數(shù)。W10mL樣液相當于含樣品之克數(shù)?！窘忸}指導】例1 葉綠體中色素的提取和分離：（1）提取和分離葉綠體的色素，可采用 方法。（2）用毛細吸管在濾紙

26、上劃出濾液細線時，線條越細越好，這樣可以避免 ，以便取得較好的 。（3）葉綠體b為黃綠色，層折后的位置是在濾紙條的 。（4）實驗應盡量在通風處進行，實驗后一定要將手洗凈，這是因為 。析 提取和分離葉綠體中的色素可采用紙層析法。在點樣劃線時，越細越好，這樣可避免色素帶之間部分重疊，以便取得較好的分離效果。層析后，濾紙條上自上而下有4條色素帶。因為該實驗使用了苯、丙酮等有毒化學藥品，實驗時應通風，實驗后要洗手，確保安全。例2 在雞血DNA的粗提取與鑒定實驗中，請回答：（1）為什么使用NaCl溶液離析DNA？（2）為什么使用乙醇純化DNA？（3）為什么甲基綠能鑒定DNA？析 DNA在NaCl溶液中有

27、一定的溶解度，并隨著NaCl溶液的溶度變化而改變。當NaCl的質量濃度為0.14ML時，DNA的溶解度最低。利用這一原理，可促使溶解在NaCl溶液中的DNA析出。DNA不溶于乙醇，但細胞中的某些物質可以溶于乙醇。利用這一原理，可以進一步取出較純凈的DNA。DNA遇甲基綠會被染成藍綠色。因此，甲基綠可用作鑒定DNA的特定試劑。例3 利用紙電泳法分離血清蛋白。已知血清蛋白中含有5種蛋白質，依分子量由小到大排列為清蛋白A、1、2、球蛋白。試問：（1）電泳后，濾紙上出現(xiàn)幾條區(qū)帶？離點樣線最遠者是什么蛋白質？說明其原因。（2）欲計算各部分蛋白質的百分數(shù)，請說明計算方法。析：電泳后，在濾紙上應出現(xiàn)5條區(qū)帶

28、，因為分子量小的蛋白質，電場中泳動的速度快，也就是遷移率大。因此，離點樣線最遠者為清蛋白A，依次是1、2、球蛋白。計算各蛋白質的百分數(shù)，可通過比色法測定，在分光光電比色計上對各條區(qū)帶進行比色，波長在580nm600nm，記錄各自的光密度。然后按光密度總和TA12的各光密度值，計算出各部分蛋白質的百分數(shù)：清蛋白 AA / T×100；球蛋白11 / T×100其他蛋白質依次類推?！眷柟叹毩暋?在實驗臺上有天平、100mL燒杯、培養(yǎng)皿（6個）、紅墨水、I2-KI溶液、蘇丹溶液、雙縮脲試劑、顯微鏡、刀片、鑷子、小麥種子、菜豆種子、蓖麻種子（將以上種子分出一半浸泡使部分種子剛好發(fā)芽

29、，然后將每種種子浸泡過的和干燥的分別裝于培養(yǎng)皿中）。試問：（1）繪圖說明培養(yǎng)皿中各種材料各部分的結構名稱。（2）測定各類種子萌發(fā)所需的吸水量（g水 / g種子），并寫明實驗過程。（3）測定各類種子潛在的萌發(fā)率（），并寫明實驗過程。（4）各類種子貯存有機物有何特點？依據(jù)是什么？6研磨葉肉細胞后放入離心管中離心，細胞壁和核物質沉淀在管底，這些沉淀物為P1，上清液為S1。將S1倒入另一管離心，分離出橢球或球形顆粒P2和上清液S2。將S2再倒入另一離心管離心，分離出棒狀的顆粒民P3和上清液S3。再將S3倒入另一離心管離心，分離出上清液S4和含粒狀小體的沉淀物P4。而S4中只含有溶解于水的物質。（見下圖

30、）。請在AE中選正確答案填入下列各問中。A P1 B P2 C P3 D P4 E S4 （1）合成蛋白質的結構存在于 。（2）DNA含量最多的是 。（3）含有將CO2和H2O合成C6H12O6的反應所需酶的是 。（4）含有將葡萄糖分解成酒精的反應所需酶的是 。7用碘液、乙醇、蘇丹溶液、鹽酸液、氫氧化鈉溶液、硫酸銅溶液、氯化鉀溶液、醋酸洋紅溶液、亞甲基藍溶液、丙酮等藥品，如何證明面粉團用紗布包起來在清水中搓洗后，紗布中的面筋是蛋白質？洗出來的白漿是淀粉？8將花盆橫放在轉盤上，若轉盤以最大速度旋轉時，花枝朝什么方向生長？并說明其原因？9用小刀將數(shù)十只螢火蟲發(fā)光器割下，干燥后研成粉末狀，取兩等分分

31、別裝入兩只小玻璃瓶中各加入少量的水，使之混合，可見到玻璃瓶中有淡黃色熒光出現(xiàn)，經(jīng)過15min熒光消失。這時，再將ATP溶液加入其中一只玻璃瓶中，將葡萄糖溶液加入另一只玻璃瓶中，可觀察到加ATP溶液的玻璃瓶中熒光出現(xiàn)，而加葡萄溶液的瓶中沒有熒光出現(xiàn)。以上現(xiàn)象說明了（1） ；（2） ；（3） 。第三節(jié)微生物培養(yǎng)技術【知識概要】一、培養(yǎng)基的制作技術制作培養(yǎng)基是微生物實驗的基礎。培養(yǎng)基的制作有以下幾個環(huán)節(jié)：1玻璃器皿的清潔在制作培養(yǎng)基前，首先應準備好合乎要求的清潔玻璃器皿。一般用肥皂液煮沸30min，或浸入用重鉻酸鉀和濃硫酸配制的洗液數(shù)10min，然后用清水沖洗，晾干后保存?zhèn)溆谩?培養(yǎng)基的制作過程（1

32、）配制液體培養(yǎng)基 根據(jù)需要配制培養(yǎng)基的數(shù)量，先在大杯中注入部分蒸餾水；按培養(yǎng)基配方稱量各種成分的原料，依次加入使之溶解；補足需水量；如用肉膏等配制時，需加熱溶解；加熱后，補足因加熱所蒸發(fā)的水分，即成液體培養(yǎng)基。（2）配制固定培養(yǎng)基 在液體培養(yǎng)基里加凝固材料（瓊脂），加入后繼續(xù)加熱使之融化，即成固體培養(yǎng)基。（3）調整 pH值 配好培養(yǎng)基后用pH試紙測試，用10% HCl或10NaOH調到所需的pH。（4）過濾分裝 用濾紙或紗布趁熱過濾，將過濾液分裝于試管中，其量約為試管的1/41/3（不要沾污管壁），塞上棉塞。（5）滅菌 將分裝好的培養(yǎng)基，經(jīng)高壓蒸汽滅菌30min，保存?zhèn)溆谩?制平面或斜面培養(yǎng)基

33、在分裝時，如裝入培養(yǎng)皿則成平面培養(yǎng)基。欲制成斜面培養(yǎng)基，則將滅菌后的瓊脂培養(yǎng)基，趁熱倒入試管，蓋上棉塞，并將試管擺放在小木條支架上，呈適當斜度（見下圖），凝固后即成斜面培養(yǎng)基，可保存?zhèn)溆谩Ｅ囵B(yǎng)基的斜面擺法4細菌培養(yǎng)基的制法培養(yǎng)不同的微生物需制備不同的培養(yǎng)基。培養(yǎng)細菌主要用牛肉膏培養(yǎng)基（牛肉膏0.5g；蛋白胨1g；食鹽0.5g；瓊脂1.5g；水100mL）。制法是：按照配方先配好各種成分的培養(yǎng)液，加熱使之充分溶解，并補足所失水分。調pH為7.47.8（滅菌后的pH為 7.27.6）。分裝后滅菌，制成斜面，即成肉膏蛋白胨培養(yǎng)基。二、分病菌技術分離菌技術主要包括接種和稀釋技術。微生物的各項實驗操作均

34、應在無菌條件下進行。1接種技術（1）接種設備 接種時可在無菌操作箱（見下圖）或超凈工作臺上操作。無此設備條件也可直接在酒精燈上操作。接種工具有接種環(huán)、接種針和接種鉤。無菌操作箱1通氣孔；2移動門；3手孔（2）接種的方法步驟 用品的消毒滅菌。接種箱和接種用品用紫外燈滅菌。雙手用75乙醇消毒。采種。菌種由窗門放入，兩手從袖套伸進接種箱，點燃酒精燈，用左手并排拿起有菌種的試管和培養(yǎng)試管，試管口靠近酒精燈火焰，旋松棉塞；右手的拇指和食指拿起接種環(huán)，放在火焰上燒紅滅菌。接種。用右手的中指、無名指和小指夾下兩個棉塞，把兩個試管口放在火焰上燎一下。把滅菌的接種環(huán)伸進菌種試管，挑取一點菌落，再插入培養(yǎng)基試管里

35、，在培養(yǎng)基斜面上由管底向管口連續(xù)輕輕地劃幾道曲線，使菌落涂在培養(yǎng)基上。然后抽出接種環(huán)，將試管口再在火焰上燎一燎，塞上棉塞，連續(xù)操作使所有培養(yǎng)基試管都涂上菌落。（參看下圖接種方法示意圖）保溫培養(yǎng)。接種后，將試管放保溫箱37恒溫培養(yǎng)，34天后，在培養(yǎng)基上可以看到正在發(fā)育的菌落。接種方法示意圖1接種環(huán)滅菌；2采種；3接種；4試管口滅菌；5裝好棉塞2稀釋技術在自然界，微生物都是混雜生活在一起的，要想研究某種細菌，必須從混雜的細菌群體中分離得到一種細菌。這種純培養(yǎng)分離菌種的方法很多，較簡單的有稀釋倒平皿法。這種方法是將待分離的材料作一系列稀釋（如110、1100、11000、110000等），取不同稀釋

36、液各少許與已溶化并冷卻至45的瓊脂培養(yǎng)基相混合，傾入滅過菌的培養(yǎng)皿中，待培養(yǎng)基凝固后，保溫培養(yǎng)一定時間，即有菌落出現(xiàn)（如下圖）。如果稀釋得當，平皿中出現(xiàn)分散的單個菌落便可能由一個細菌繁殖而成，挑取此單個菌落或再重復以上操作數(shù)次，便可得到純培養(yǎng)的菌株。稀釋倒平皿分離法三、染色技術鑒別細菌主要采用革蘭氏染色法。按照細菌對這種染色反應的不同，分為革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌兩大類。染色方法要點是：細菌先經(jīng)草酸結晶紫染色處理，用媒染劑（碘液）處理后，再用酒精脫色，最后番紅或沙黃復染。如果細菌不脫色不復染，呈紫色，稱為革蘭氏陽性細菌（用G表示），如芽孢桿菌、放線菌、酵母菌和多數(shù)球菌呈陽性反應；如果細菌被酒

37、精脫色而被番紅或沙黃復染成紅色的稱為革蘭氏陰性細菌（用G表示），如大多數(shù)無芽孢桿菌和某些球菌、螺旋菌，呈陰性反應。【解題指導】例1 現(xiàn)提供以下實驗條件：顯微鏡一臺、革蘭氏染色用具一套、血球計數(shù)板一套、吸管、小燒杯、天平、測微尺一套、試管、吸水紙、二甲苯、香柏油。請進行下列實驗并回答問題。（1）請設計一實驗來判斷：成型顆粒樣品A。該樣品可能含有何種生物細胞？該成型顆粒樣品A中生物細胞含量為多少？（個/g）若該成型顆粒全為生物細胞組成，試求出每個細胞的重量？（要求寫出實驗過程、所用器材，測定的數(shù)據(jù)、計算公式、結果等）（2）有材料C，請對其進行革蘭氏染色。判斷該細菌為何形態(tài)？染色結果如何？繪出該細胞

38、的形態(tài)圖？（要求同上）析 （1）實驗提供的樣品A為市售干性活酵母。先將定量樣品A用定量無菌水稀釋成菌液，然后用革蘭氏染色法鑒別該菌的類型并在顯微鏡下識別該菌的形態(tài)。實驗結果呈革蘭氏陽性反應，再根據(jù)形態(tài)說明該樣品可能是酵母菌。通過顯微測量，用血球計數(shù)板測定樣品A的細胞含量（個/g）和每個細胞的重量（g個）。（2）材料C為短桿菌。通過革蘭氏染色后，在油鏡下觀察細胞的形態(tài)，并繪出該細胞的形態(tài)圖。例2 將10mL酵母液放在適宜溫度下培養(yǎng)，并于不同時間內等量均勻取樣4次，分別測定樣品中酵母菌的數(shù)量和pH，結果如下表。請分析回答。（1）表中樣品的取樣先后次序為 。（2）對酵母菌而言，100mL該培養(yǎng)液的環(huán)

39、境負荷量為 個。（3）若第5次均勻取樣時，樣品中的酵母菌數(shù)量為760個/mm3。產生這一結果的原因是 。析 （1）根據(jù)樣品菌數(shù)，越在先菌數(shù)越少，由此取樣順序為2、4、1、3。（2）經(jīng)過培養(yǎng)10mL培養(yǎng)液中有菌數(shù)1210個/mm3，環(huán)境負荷量應為1.21×107。（3）培養(yǎng)液中的營養(yǎng)物質不斷被消耗，pH值減小，部分酵母菌因營養(yǎng)缺乏不適應而死亡并解體?！眷柟叹毩暋?0有材料A1和A2。A1為接種后經(jīng)32培養(yǎng)10小時的樣品；A2為接種同樣菌種并經(jīng)培養(yǎng)12h后的樣品，假設接種后該菌種細胞即開始以指數(shù)生長（即12482n，這里n表示細胞分裂的次數(shù)），請通過試驗測定出該微生物分裂一次所需要的時間

40、。（用G表示，單位為min）要求：（1）判斷該生物細胞是什么？（2）記錄一些重要的測定數(shù)據(jù)并寫出計算公式。（3）寫出測定所需要的主要設備、器材。注：材料為培養(yǎng)的啤酒酵母。11有某一濃度的細菌懸液B，若不用血球計數(shù)極，請用實驗臺上給出的材料C測出該細菌懸液的濃度。請在試卷上寫出測定過程和測定的結果（B為細菌培養(yǎng)液，C為已知濃度的雞血）。12有平板培養(yǎng)材料D。請對其進行革蘭氏染色并指出形態(tài)及革蘭氏染色結果。該材料是否有自主運動（真性運動）？如何簡便判斷？如能運動，請判斷該菌鞭毛類型。（要求寫出實驗過程及結果）第四節(jié) 植物解剖與生理測定技術【知識概要】一、植物解剖技術（見下表）植物各種器官解剖與觀察

41、方法名稱材料解剖方法觀察順序總結根洋蔥或小麥根尖壓片法（縱剖面）、徒手切片法（橫切面），顯微鏡下觀察表皮外皮層內皮層中柱（中柱鞘、維管束）根結構特點莖1新生楊樹枝條2玉米幼莖1取枝條插在紅墨水中，葉片顯紅色后，用解剖刀橫切和縱切，直接觀察2徒手切片法，顯微鏡下觀察1樹皮表皮皮層韌皮部（篩管）木質部（導管）髓2表皮機械組織維管束（導管、韌皮部）雙子葉木質莖構造特點單子葉草質莖構造特點葉蠶豆葉或青菜葉徒手切片法，顯微鏡下觀察上表皮氣孔葉肉（柵欄組織、海綿組織）葉脈下表皮氣孔葉結構特點花桃花玉米雌、雄花用鑷子分層解剖，將花的各部分擺在白紙上直接觀察花萼（萼片數(shù)）花冠（花瓣數(shù)）雄蕊（花絲、花藥）雌蕊（

42、柱頭、花柱、子房）花托單性花和兩性花結構特點，花圖式果實桃（核果）番茄（漿果）蠶豆（角果）蘋果（梨果）用解剖刀將果實縱剖或橫剖后，直接觀察莢殼果皮（外果皮、內果皮）果肉子房壁種子胎座不同果實的結構特點二、徒手切片技術徒手切片是將要觀察的材料切成極薄的片，以達到了解其形態(tài)結構的一種方法。徒手切片步驟如下：1選擇材料和夾持物可作徒手切片的材料有各種植物的葉片、較軟的嫩莖等。由于能作徒手切片的材料較柔軟，切片時須有夾持物輔助。夾持物一般用胡蘿卜或白蘿卜的圓錐根、馬鈴薯的塊莖等。對于較薄的葉可直接夾在夾持物的劈口中；對于較厚的材料，則須按材料大小先在夾持物的劈口上挖成合適的凹穴，把材料加進去，再開始切

43、片。2正確手持材料和持刀方法應用左手持材料，夾在拇指和食指（或其他四指）之間，材料略高于拇指和食指。拇指略低于食指，以免切時刀刃傷手。右手持刀（剃刀或刮臉刀片），刀身要放平，刀口向著切片材料（見右圖）。3切片技術先將材料和刀口蘸些水，切去材料上端不整齊的一段，然后再正式切，切時要保持在同一水平面上，由左前外方向右內方（即向著自己）迅速拉動，動作要快。切時用力靠臂，才能平穩(wěn)。切下的片，棄去較厚不適用的，對合乎要求的立即侵入有水的培養(yǎng)血內。4選片和裝片徒手切片往往厚薄不一，可放在載玻片上，在顯微鏡下檢查，選出合適的切片。切片選好后，進行染色，蓋上蓋玻片，即可作為臨時裝片，在顯微鏡下觀察。三、光合作

44、用強度的測定方法1干重法的實驗原理植物的木質部輸送水分，韌皮部輸送營養(yǎng)物質。如果用化學或物理的方法破壞植物葉片基柄的韌皮部而保留木質部，就可以阻斷葉片中光合產物輸出，而同時保持葉片中正常水分的供應。在這樣條件下，用干重法比較：留在植株上進行一定時間光合作用后的半張葉片，與處理前取下并在暗中保存的半張葉片的單位面積干重差，就可以測得植物葉片的光合作用強度。2操作技術（1）選擇測定用的樣品 在麥田或棉田選擇有代表性植株的葉片（葉片在植株上的部位、葉齡、受光條件應一致），用小紙牌編號掛好。一般每個處理選用1020張葉片。（2）葉片基部（或葉柄）的處理 為了破壞葉的輸導系統(tǒng)的韌皮部，可根據(jù)測定植物的不

45、同而采取不同處理方法。如測棉花等雙子葉植物的葉片，可用刀片將葉柄的外皮環(huán)割掉1cm左右，然后用橡皮膏包好套上塑料套管；如測小麥等單子葉植物的葉片，可采用石蠟燙傷葉片基部的辦法，即用酒精燈，在燈上外加鐵絲圈，可將裝有石蠟的小燒杯放在燈上加熱，一般在90左右，用毛筆蘸蠟在葉基部燙一下。燙后要不影響葉片的自然生長角度。（3）剪取樣品 葉基部處理完畢即可剪取樣品，一般用打孔器取樣，也可用剪刀剪取。取樣同時記錄時間，開始進行光合作用測定。剪取樣品時應按實驗編號次序分別剪下對稱葉片的一半（主脈不剪下）。取下的半張葉片按編號次序放入鋁制樣品盒中或夾在濕紗布中并貯于暗處。45h后再剪取另外半張葉片，同樣放在鋁

46、盒或濕紗布中。（4）稱量比較 將上述葉片按光暗兩張半葉的對應部分重疊起并壓上模板，用單面刀片割下等面積的葉片，如用打孔器取樣時，應出取樣面積大小，然后分別存放在稱量皿或短的玻璃管內，也可放在鋁盒中，在8090烘箱中烘至恒重（約5h），然后在分析天平上稱重并做好記錄，計算出平均值和誤差。（5）計算結果 將上面的實驗數(shù)據(jù)代入下面公式即可算出作物光合作用強度。光合作用強度（mg干物質dm2·h）（光暗）葉片干重差（mg）/ 單位葉面積（dm2）/ 照光時間（h）四、蒸騰作用的測定方法1氯化鈷檢驗法原理植物通過蒸騰作用散失水分。氯化鈷紙干燥時呈藍色，受潮吸水后逐漸變成粉紅色。由此，可通過氯化

47、鈷紙檢驗葉的蒸騰作用。2操作技術（1）裁取兩張邊都是3cm正方形的藍色的5氯化鈷紙。在盆栽天竺葵上選擇一片葉，把一氯化鈷紙覆在葉的表皮上，取另一張氯化鈷紙覆在葉的下表皮上。然后兩面覆褶一張大于氯化鈷紙的玻璃紙，用回形針或夾子夾住玻璃紙和葉片（見右圖）。（2）也可以用玻璃膠把氯化鈷紙固定在葉的上、下表面，外包玻璃紙并夾住。（3）觀察氯化鈷紙顏色的變化，比較上、下表面氯化鈷紙變化的速度和變色的程度。（4）實驗結果，下表面氯化鈷變成粉紅色的時間比上表面快，且表面程度大。因葉下表皮氣孔分布多，蒸騰出的水蒸氣也多，氯化鈷易受【解題指導】例1 有2張無標簽的切片標本，根據(jù)以下觀察：切片1：橫切面圓形，紙管

48、束排成一輪，木質部和韌皮都相對排列，維管束中有形成層，有髓，初生木質部為外始式，次生韌皮部有纖維、篩管和伴胞。切片2：橫切面圓形，木質部、韌皮部相對排列。維管束星散排列，無形成層，無明顯髓與表層。寫出切片屬哪類植物，何種器官。切片1 切片2 析 切片1為雙子葉植物根的結構，切片2為單子葉植物莖的結構。例2 有人設計了一個實驗來證明光合作用需要CO2，他在兩支試管里裝入藍色的BTB溶液（這種溶液在酸性條件下呈黃色，堿性條件下呈藍色），向管內吹入CO2，溶液都變?yōu)辄S色。在1號管內加入綠色水草，放在陽光下，2號管內也加入綠色水草，用黑紙包起來。如后，發(fā)現(xiàn)1號管內BTB液變藍，2號管內液體仍然黃色。因

49、此，他認為這個實驗可以證明光合作用需要CO2。有人認為這個實驗不夠嚴密，你認為如何在上述實驗裝置的基礎上加以改進，就可以使實驗更加嚴密地說明光合作用需要CO2？ 。析 應增加1支黃色BTB液的試管中不放水草，但是照光，排除BTB液遇光變色的可能。【鞏固練習】13用所給的材料（睡蓮的葉柄）作徒手切片觀察，繪出結構簡圖，注明特殊結構并回答下列問題：（1）有哪些特殊結構？各有什么作用？（2）判斷其所處生態(tài)環(huán)境。14在實驗臺上提供體視鏡、顯微鏡、雙面刀片、單面刀片、載玻片、蓋玻片、番紅水溶液等實驗條件，測定龍舌蘭、狗牙根、大麥、莎草4種植物的葉，試回答：（1）選擇填空 屬C3植物， 屬C4植物， 屬C

50、AM植物。 耐旱性極強， 耐旱性較弱， 耐旱性較弱。 的最高凈光合率較高。 的最高凈光合率中等， 的最高凈光合率較低。1A：龍舌蘭；lB：狗牙根；1C：大麥；lD：莎草（2）簡答題：判斷材料1A至1D各屬C3或C4植物或CAM植物的依據(jù)是什么？1A： ； 1B： ；1一C： ；1一D： 。15下圖是未完成的實驗裝置，請利用a、b、c三支試管，新鮮葉片和必要的輔助材料，設計一個光合作用吸收CO2與呼吸作用釋放CO2的實驗，并預計實驗結果。（1）當a管用于證明光合作用吸收CO2實驗時，需 ，指示劑呈色 。（2）當b管用于證明呼吸作用釋放CO2實驗時，需要 ，指示劑呈 色。（3）C管在實驗中起 作用

51、，指示劑呈 色。（4）用幾層紗布包上照光的d管，實驗結果表明指示劑顏色沒有變化，其原因是 。16觀察兩株不同表現(xiàn)的白菜植株：一株生長正常；另一株有黃化現(xiàn)象。試回答下列問題：（1）使植物呈現(xiàn)這兩個表現(xiàn)差異主要是由于植物體內兩種物質含量不同所致，這兩種物質是什么？（2）使植物呈現(xiàn)這兩個表現(xiàn)差異的外界因子是什么？（3）該外界因子是怎樣影響植物而造成這種差異的？17取A液（高滲溶液）中的一實驗材料侵入B液（蒸餾水）中。在A液中取另一實驗材料于顯微鏡下觀察其細胞結構并繪圖。待B液中的材料浸泡20min后，取出于顯微鏡下觀察并繪圖。解釋你觀察到的現(xiàn)象。18用徒手切片法橫切黃豆芽的根，做一個典型的初生根切片

52、裝片，畫出簡圖，標出凱氏點、原生木質部、后生木質部的位置，請回答選取下列哪一類染料作為染色劑？A 間苯三酚、鹽酸飽和溶液 B 龍膽紫 C 亞甲基蘭 D I2-IK溶液第五節(jié) 動物解剖與生理測定技術【知識概要】一、小型無脊椎動物的解剖技術1蚯蚓的解剖（1）取材 最好取活蚯蚓經(jīng)過麻醉或加溫水的方法，然后解剖，可以見到心臟的活動。（2）解剖 解剖時要腹側向下，背側向上，前端向外，后端向著解剖者。先以大頭針將前端固定解剖盤上，再以大頭針固定后端，使蚯蚓平直，然后用解剖剪在背中線（這是解剖蚯蚓的特點）從后端向前端剪背壁。（3）展平體壁 先用鑷子夾著一側體壁，用解剖刀割斷節(jié)間的膜，再割斷另一側隔膜，最后向

53、左右展平體壁，為了便于觀察內部器所在節(jié)的位置，每隔5節(jié)體節(jié)在左右各插上一個大頭針（針要斜插），插至30節(jié)以后，便可不按節(jié)插，插的較能固定即可。（4）注清水 為了觀察清楚，解剖盤內應放些清水，浸泡蚯蚓。（5）觀察 先觀察各器官的自然位置，辨認各器官的形狀、顏色位置等，然后再按各器官系統(tǒng)逐步觀察。2蝗蟲的解剖（1）取材 已浸制保存的蝗蟲（包括雌性和雄性）。（2）外部觀察 取蝗蟲放在解剖盤上，先觀察外形，觀察順序是先整體，再從頭、胸、腹各部從前至后分別觀察。（3）解剖 解剖蝗蟲的方式不同于一般左右對稱的動物。解剖蝗蟲要先沿左側氣門上方，由腹部末端向前剪開，直至前端；再沿右側同樣剪開，背壁除掉即可觀察

54、內部構造。（4）固定蝗蟲 用大頭針固定蝗蟲材料于解剖盤上，并注入清水浸泡蟲體。（5）觀察 先按各器官的自然位置從前至后辨認其形態(tài)、特點、顏色和位置等，再就各器官系統(tǒng)分別觀察。二、雙筒解剖鏡的使用技術1解剖鏡的構造雙筒解剖鏡的構造基本上與顯微鏡相似，也分為機械裝置和光學系統(tǒng)兩部分，不過它的構造比較簡單。機械裝置有鏡座、鏡臺、鏡筒、支柱（立柱）和調節(jié)手輪等部分：光學系統(tǒng)有接目鏡、接物鏡和反光鏡等部分（見右圖）。雙筒解剖鏡具有兩個鏡筒、兩個目鏡和物鏡，因此，使用時兩眼可以同時觀察。在鏡筒的其中一個附有調整目鏡筒（目鏡調節(jié)圈），用以校正觀察者的兩眼間距離。雙筒解剖鏡只設有一對粗調焦手輪，進行焦距調節(jié)。

55、按目鏡和接物鏡也有各種不同的放大率，一般雙筒解剖鏡的放大倍數(shù)，從幾十倍至一百倍左右。在雙筒解剖鏡上有的有反光鏡，有的缺反光鏡；有的在鏡身上附有照明燈。鏡臺上有一塊厚玻璃板和一塊一面白色一面黑色的瓷板，根據(jù)觀察物的顏色和透明度可以調換使用。2解剖鏡的使用方法把解剖鏡放在面向光源的位置，調節(jié)兩鏡筒間的距離，使適合自己的兩眼間的寬度。如觀察透明的標本，鏡臺選用玻璃板，光源由反光鏡底下照射。如觀察不透明的標本，鏡臺選用瓷板，深色標本用白色一面，淺色標本用黑色一面，光源以強光或燈光從上面直接照在標本上，標本要觀察的部位應轉向光源。在解剖鏡下，觀察到的物象為一正立像，而且標本移動方向和物像的移動方向完全一致。三、小型動物整體裝片的制備技術整體裝片的制作，可以用于封固小形動、植物的整個身體，或個別組織和器官，制成永久裝片后能長期保存。現(xiàn)以水螅整體裝片為例說明制作技術，其步驟如下：1配制固定液固定液用波因（Bouin）氏固定液，即用7