實(shí)驗(yàn)五血紅蛋白含量的測(cè)定、血型鑒定

1、實(shí)驗(yàn)五 血紅蛋白含量的測(cè)定、血型鑒定實(shí)驗(yàn)?zāi)康膌掌握血紅蛋白的測(cè)定方法；l學(xué)習(xí)鑒定血型的基本方法，觀察紅細(xì)胞凝集現(xiàn)象，掌握ABO血型鑒定的原理。測(cè)定血紅蛋白的意義n人血紅蛋白參考值 成年男性：13-15克/dl ；成年女性：11-14克/dl ；兒童：（依年齡而異）12-14克/dl。n臨床意義：大致與紅細(xì)胞增減相似。高原地區(qū)居民的血紅蛋白濃度一般比平原居民為高，這是機(jī)體對(duì)低氣壓環(huán)境的一種適應(yīng)現(xiàn)象。一般來說，在疾病狀況下，血紅蛋白的增減是與紅細(xì)胞的改變相平行的，即引起紅細(xì)胞增多的疾病，也會(huì)使血紅蛋白含量增加。使紅細(xì)胞減少的疾病，也使血紅蛋白含量減少。在貧血時(shí)，血液中的紅細(xì)胞數(shù)量和血紅蛋白濃度都有

2、不同程度的下降，但不一定按相同的比例變化。有時(shí)紅細(xì)胞數(shù)量可以減少很多，而血紅蛋白的濃度的降低卻相對(duì)地不那么顯著，見于大細(xì)胞性貧血，由于單個(gè)紅細(xì)胞所含的血紅蛋白量較正常者為多。相反，也有的紅細(xì)胞減少得不很多，而血紅蛋白濃度卻顯著降低，例如缺鐵性貧血，這是由于每個(gè)紅細(xì)胞的血紅蛋白含量比正常明顯減少，故血紅蛋白減低的程度較紅細(xì)胞減少更為顯著。 依據(jù)檢驗(yàn)結(jié)果，分析病因，做到準(zhǔn)確的診斷和治療都是很必要的。 基本原理基本原理 n血紅蛋白是紅細(xì)胞的主要成分，在正常情況下，每個(gè)紅細(xì)胞均含有一定量的血紅蛋白。血紅蛋白是由珠蛋白和亞鐵血紅素組成的結(jié)合蛋白質(zhì)。血紅蛋白除能與氧結(jié)合形成氧合血紅蛋白外，尚能與某些物質(zhì)作

3、用形成多種血紅蛋白衍生物。它們具有特定的色澤和吸光譜，在臨床上，可用以診斷某些變性血紅蛋白血癥和血紅蛋白的定量測(cè)定。n測(cè)定血紅蛋白含量的方法很多，實(shí)驗(yàn)常用比色法。其原理是在一定量的血液中，血紅蛋白經(jīng)少量鹽酸的作用，使亞鐵血紅素變成高鐵血紅素，呈現(xiàn)較穩(wěn)定的棕色。用水稀釋后與標(biāo)準(zhǔn)色比較，求出每100ml血液中所含的血紅蛋白克數(shù)。正常成年男子每100ml血液平均含14.4g，女子為13.1g。 實(shí)驗(yàn)原理-血型鑒定n血型一般指紅細(xì)胞的血型，是根據(jù)紅細(xì)胞膜外表面存在的特異性抗原（鑲嵌于紅細(xì)胞膜上的糖蛋白和糖脂）來確定的，這種抗原或凝集原是由遺傳決定的。n抗體或凝集素存在于血清中，與紅細(xì)胞的不同抗原起反應(yīng)

4、，產(chǎn)生凝集，最后溶解，由于這種現(xiàn)象，臨床上在輸血前必須注意鑒定血型，以確保安全輸血。ABO血型鑒定實(shí)驗(yàn)原理n抗原抗體反應(yīng)在ABO血型系統(tǒng)中，紅細(xì)胞膜上抗原分A和B兩種抗原，而血清抗體分抗A和抗B兩種抗體。A抗原加抗A抗體或B抗原加抗B抗體，則產(chǎn)生凝集現(xiàn)象從而測(cè)知受試者紅細(xì)胞膜上有無A或/和B抗原判斷血型n抗體在相鄰的紅細(xì)胞表面抗原決定簇之間搭橋抗體在相鄰的紅細(xì)胞表面抗原決定簇之間搭橋形成肉眼可見的顆粒狀凝集團(tuán)塊形成肉眼可見的顆粒狀凝集團(tuán)塊.見圖見圖IgM抗體凝集紅細(xì)胞示意圖IgM抗體凝集紅細(xì)胞示意圖 IgGM在鹽水介質(zhì)中產(chǎn)生凝集實(shí)驗(yàn)材料n血紅蛋白計(jì)、血紅蛋白計(jì)、0.1mol/L0.1mol/L

5、鹽酸溶液；鹽酸溶液；n載玻片、刺血針、牙簽、一次性采血管、載玻片、刺血針、牙簽、一次性采血管、A A型和型和B B型標(biāo)準(zhǔn)血清、生理鹽水、酒精棉型標(biāo)準(zhǔn)血清、生理鹽水、酒精棉球等。球等。方法與步驟-血紅蛋白測(cè)定n于測(cè)定管內(nèi)加入0.1mol/L鹽酸溶液至百分刻度20處。n取20l被檢血液, 迅速將吸血管插入測(cè)定管底部鹽酸液中，緩慢擠出血液，再吸取上部清液，反復(fù)沖洗吸血管23次，并混勻，靜置10min。n沿著管壁加入蒸餾水，逐步稀釋至與標(biāo)準(zhǔn)色柱色調(diào)一致后，讀取重量（或百分）刻度值報(bào)告結(jié)果。v 標(biāo)準(zhǔn)制換算：血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)制換算：血紅蛋白(g/L)=血紅蛋白血紅蛋白(g/dl)10方法與步驟方法與步驟- -

6、血紅蛋白測(cè)定血紅蛋白測(cè)定 n血紅蛋白計(jì)包括 標(biāo)準(zhǔn)比色架，架的兩側(cè)鑲有兩個(gè)棕色標(biāo)準(zhǔn)玻璃色柱。 血紅蛋白稀釋管，有方形也有圓形的。兩側(cè)有刻度，一側(cè)以g為計(jì)數(shù)單位，對(duì)側(cè)以百分率計(jì)，按我國情況，是以每100ml血液內(nèi)含血紅蛋白14.5g為100%。20mm3血紅蛋白吸管，還有玻璃棒、滴管。n用滴管加0.1mol/LHCl于血紅蛋白稀釋管內(nèi)，到刻度10處。n用刺血針刺破指尖采血，血滴宜大些。用血紅蛋白吸管的尖端接觸血滴，吸血至刻度20ul處（0.02ml）。方法與步驟方法與步驟- -血紅蛋白測(cè)定血紅蛋白測(cè)定 n用濾紙片或棉球擦凈吸管口周圍的血液，將吸管插入血紅蛋白稀釋管的鹽酸內(nèi)，輕輕吹出血液至管底部，反

7、復(fù)吸入并吹出稀釋管內(nèi)上層的鹽酸，洗滌吸管多次，使吸管內(nèi)的血液完全洗入稀釋管內(nèi)。搖勻或用小玻璃棒攪勻后，放置10min，使鹽酸與血紅蛋白充分作用。n把稀釋管插入標(biāo)準(zhǔn)比色架兩色柱中央的空格中，使無刻度的兩側(cè)面位于空格的前后方，便于透光和比色。n用滴管向稀釋管內(nèi)逐滴加入蒸餾水（每加一滴要攪拌），邊滴邊觀察顏色，直至顏色與標(biāo)準(zhǔn)玻璃色柱相同為止。稀釋管上液面的刻度讀數(shù)即為每100ml血液血紅蛋白的克數(shù)。n從指尖或耳垂取血一滴，加入含1ml生理鹽水的小試管內(nèi)，混勻，即得約5紅細(xì)胞懸液。采血時(shí)應(yīng)注意先用75酒精消毒指尖或耳垂。)(取少量受檢者紅細(xì)胞（約0.20.5 ml）用生理鹽水洗滌3次，然后加入適量生理

8、鹽水調(diào)配成5%濃度。方法與步驟-血型鑒定方法與步驟-血型鑒定n（1） 取雙凹玻片一塊，用干凈紗布輕拭使之潔凈，在玻片兩端用記號(hào)筆標(biāo)明A及B，并分別各滴入A及B標(biāo)準(zhǔn)血清一滴。n（2） 用滴管吸取紅細(xì)胞懸液，分別各滴一滴于玻片兩端的血清上，注意勿使滴管與血清相接觸。n（3） 竹簽兩頭分別混合，攪勻。用兩根 分別用來混合A型和B型標(biāo)準(zhǔn) （4）觀察結(jié)果。如有凝集反應(yīng)可見到呈紅色點(diǎn)狀或小片狀凝集塊浮起。先用肉眼看有無凝集現(xiàn)象，肉眼不易分辨時(shí)，則在低倍顯微鏡下觀察，如有凝集反應(yīng)，可見紅細(xì)胞聚集成團(tuán)。n（5） 判斷血型 根據(jù)被試者紅細(xì)胞是否被A，B型標(biāo)準(zhǔn)血清所凝集，判斷其血型。 血型判定正定型正定型反定型反

9、定型 結(jié)果結(jié)果抗抗A A 抗抗B BA A型型RBC BRBC B型型RBC RBC O O型型RBCRBC- -+ + - O + - + - A- + + - - B+ +- - - AB注意事項(xiàng)注意事項(xiàng) n吹血液入稀釋管及洗凈吸管時(shí)，不宜用力過猛。n蒸餾水需逐滴加入，多做幾次比色，以免稀釋過量。每次比色時(shí)，應(yīng)將攪拌用的玻璃棒取出，以免影響比色。n由于操作過程過長(zhǎng)而造成吸管內(nèi)血液凝固，堵塞管孔時(shí)，則要按下列溶液的順序重復(fù)沖洗吸管，即用水95%酒精乙醚或丙酮。五 注意事項(xiàng)n玻片、試管都要標(biāo)記！玻片、試管都要標(biāo)記！， A及B標(biāo)準(zhǔn)血清絕對(duì)不能相混,不要依靠用染料顏色標(biāo)記血清。工作中要形成自己的習(xí)慣！n所用玻片、試管實(shí)驗(yàn)前必須清洗干凈，以免出現(xiàn)假凝集現(xiàn)象。n紅細(xì)胞懸液滴管頭不能接觸標(biāo)準(zhǔn)血清液面，竹簽一端去混勻一側(cè)