微生物的利用

1、微生物的利用微生物的利用微生物所需的營養(yǎng)物質(zhì)微生物所需的營養(yǎng)物質(zhì)1、碳源：、碳源：能為微生物提供生長繁殖所需碳元素的營養(yǎng)物質(zhì)能為微生物提供生長繁殖所需碳元素的營養(yǎng)物質(zhì)COCO2 2、NaHCONaHCO3 3、糖類、脂肪酸、花生餅、石油等、糖類、脂肪酸、花生餅、石油等有些碳源還是異養(yǎng)微生物是能源物質(zhì)有些碳源還是異養(yǎng)微生物是能源物質(zhì)能為微生物提供所需氮元素的營養(yǎng)物質(zhì)能為微生物提供所需氮元素的營養(yǎng)物質(zhì)2、氮源：、氮源：分子態(tài)氮、氨、銨鹽、硝酸鹽、尿素、牛肉膏、蛋白胨等分子態(tài)氮、氨、銨鹽、硝酸鹽、尿素、牛肉膏、蛋白胨等對(duì)異養(yǎng)微生物，含對(duì)異養(yǎng)微生物，含C C、H H、O O、N N的化合物既是碳源，又

2、是的化合物既是碳源，又是氮源氮源3、無機(jī)鹽：、無機(jī)鹽：4、水：、水：注意：注意： 培養(yǎng)基還需要滿足微生物生長對(duì)培養(yǎng)基還需要滿足微生物生長對(duì)PH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)（維生素）及氧氣。特殊營養(yǎng)物質(zhì)（維生素）及氧氣。1 1、培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分培養(yǎng)基組分培養(yǎng)基組分含量含量提供的主要營養(yǎng)提供的主要營養(yǎng)牛肉膏牛肉膏5g5g蛋白胨蛋白胨10g10gNaClNaCl5g5g水水定容至定容至1000ml1000ml1000ml1000ml牛肉膏蛋白胨牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的營養(yǎng)構(gòu)成培養(yǎng)基的營養(yǎng)構(gòu)成碳源、磷酸鹽、維碳源、磷酸鹽、維生素、氮源生素、氮源氮源、碳源、維生素氮源、碳源、維生素?zé)o機(jī)鹽無機(jī)鹽氫、氧元素氫、氧元素培養(yǎng)基培

3、養(yǎng)基2、培養(yǎng)基的類別、培養(yǎng)基的類別按培養(yǎng)基的化學(xué)成分按培養(yǎng)基的化學(xué)成分天然培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基按培養(yǎng)基制成后的形式按培養(yǎng)基制成后的形式（根據(jù)物理性質(zhì)）（根據(jù)物理性質(zhì)）液體培養(yǎng)基（用于擴(kuò)大培養(yǎng)）液體培養(yǎng)基（用于擴(kuò)大培養(yǎng)）固體培養(yǎng)基（分離純化）固體培養(yǎng)基（分離純化）按培養(yǎng)基使用的用途按培養(yǎng)基使用的用途選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基是在培養(yǎng)基中加入某種選擇培養(yǎng)基是在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)化學(xué)物質(zhì)，以以抑制抑制不需要的微生物的生長，不需要的微生物的生長，促進(jìn)促進(jìn)所需要的所需要的微生物的生長微生物的生長如需要霉菌和酵母菌是，可加入青霉素，抑制細(xì)如需要霉菌和酵母菌是，

4、可加入青霉素，抑制細(xì)菌、放線菌的生長。菌、放線菌的生長。加入高濃度的食鹽可抑制多種細(xì)菌的生長，但不加入高濃度的食鹽可抑制多種細(xì)菌的生長，但不影響金黃色葡萄球菌的生長影響金黃色葡萄球菌的生長鑒別培養(yǎng)基是根據(jù)微生物的代謝特點(diǎn)，在培養(yǎng)基中鑒別培養(yǎng)基是根據(jù)微生物的代謝特點(diǎn)，在培養(yǎng)基中加入加入某種某種指示劑或化學(xué)藥品指示劑或化學(xué)藥品配制而成的，用以配制而成的，用以鑒別鑒別不同種類的不同種類的微生物微生物。如在培養(yǎng)基中加入伊紅和美藍(lán)，可用來鑒別飲用如在培養(yǎng)基中加入伊紅和美藍(lán)，可用來鑒別飲用水和乳制品中是否存在大腸桿菌等細(xì)菌。如有大水和乳制品中是否存在大腸桿菌等細(xì)菌。如有大腸桿菌，其代謝產(chǎn)物（有機(jī)酸）就與伊

5、紅和美藍(lán)腸桿菌，其代謝產(chǎn)物（有機(jī)酸）就與伊紅和美藍(lán)結(jié)合，使菌落呈深紫色，并帶有金屬光澤結(jié)合，使菌落呈深紫色，并帶有金屬光澤微生物培養(yǎng)的無菌技術(shù)微生物培養(yǎng)的無菌技術(shù)無菌操作泛指無菌操作泛指在培養(yǎng)微生物的操作中，所有防止雜菌在培養(yǎng)微生物的操作中，所有防止雜菌污染的方法。污染的方法。1、實(shí)驗(yàn)室常用的消毒和滅菌方法、實(shí)驗(yàn)室常用的消毒和滅菌方法滅菌滅菌：利用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生：利用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子。物，包括芽孢和孢子。消毒消毒：用較為溫和的物理或化學(xué)方法僅殺死物體：用較為溫和的物理或化學(xué)方法僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分對(duì)人體有害的微生物（不包括表面或

6、內(nèi)部一部分對(duì)人體有害的微生物（不包括芽孢和孢子）。芽孢和孢子）。消毒不一定能達(dá)到滅菌的要求，而滅菌則可達(dá)到消消毒不一定能達(dá)到滅菌的要求，而滅菌則可達(dá)到消毒的目的。毒的目的。2、實(shí)驗(yàn)室常用的消毒和滅菌方法、實(shí)驗(yàn)室常用的消毒和滅菌方法化學(xué)藥劑消毒化學(xué)藥劑消毒 如酒精擦雙手如酒精擦雙手紫外線消毒紫外線消毒煮沸消毒法煮沸消毒法巴氏消毒法巴氏消毒法灼燒滅菌灼燒滅菌干熱滅菌干熱滅菌高壓蒸汽滅菌高壓蒸汽滅菌常見消毒方常見消毒方法：法：常見滅菌方常見滅菌方法：法：大腸桿菌培養(yǎng)和分離純化的基本操作程序大腸桿菌培養(yǎng)和分離純化的基本操作程序1、配制培養(yǎng)基配制培養(yǎng)基2 2、滅菌（、滅菌（1Kg1Kg，滅菌，滅菌15m

7、in15min）3、倒平板倒平板（冷卻到冷卻到50左右）左右） 注意事項(xiàng)注意事項(xiàng)4、分離分離 注意事項(xiàng)注意事項(xiàng)5、菌種的保存、菌種的保存冰箱保存冰箱保存甘油管藏甘油管藏制備制備LBLB培養(yǎng)基培養(yǎng)基（牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基）（適合細(xì)菌生長）（適合細(xì)菌生長）2.2.調(diào)調(diào)pHpH：pH6pH6.5-7.55-7.53.3.分裝：分裝過程中注意不要使培養(yǎng)基沾在分裝：分裝過程中注意不要使培養(yǎng)基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。分裝三角燒瓶的量以不超過三角燒瓶容積的分裝三角燒瓶的量以不超過三角燒瓶容積的一半為宜。一半為宜。5.5.加塞加塞6.6.

8、包扎包扎1.1.計(jì)算、稱量、溶化、定容計(jì)算、稱量、溶化、定容為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。培養(yǎng)基。平板冷凝后，為什么要將平板倒置？平板冷凝后，為什么要將平板倒置？在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個(gè)平板還能用來培皿蓋與皿底之間的部位，這個(gè)平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？養(yǎng)微生物嗎？為什么？平板冷凝后，皿蓋上會(huì)凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)平板冷凝后，皿蓋上會(huì)凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以

9、使基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以防止皿蓋培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個(gè)平板培養(yǎng)微生基上滋生，因此最好不要用這個(gè)平板培養(yǎng)微生物。物。細(xì)菌的分離（接種方法）細(xì)菌的分離（接種方法）平板劃線法平板劃線法固體培養(yǎng)基上劃線分離固體培養(yǎng)基上劃線分離稀釋涂布平板法稀釋涂布平板法將菌液稀釋將菌液稀釋1010-5-5-10-10-7-7倍倍固固體培養(yǎng)基上涂布體培養(yǎng)基上涂布0.2ml 0.2m

10、l 優(yōu)點(diǎn)：方法簡單優(yōu)點(diǎn)：方法簡單優(yōu)點(diǎn)：單菌落更易分開優(yōu)點(diǎn)：單菌落更易分開為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時(shí)，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時(shí)，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？為什么？操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線前灼燒接種環(huán)是為每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下了殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時(shí)，接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的一次劃

11、線時(shí)，接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端，末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時(shí)菌種從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時(shí)菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。劃線結(jié)束后灼燒接劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時(shí)殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污種環(huán)，能及時(shí)殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。染環(huán)境和感染操作者。在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進(jìn)在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線？行劃線？以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。在作第二次以及其后的劃線操作時(shí)，為什么總在作第二次以及其后的劃線操作時(shí)，為什么總是從上一次劃線的