(三)網(wǎng)織紅細胞計數(shù)ppt課件

1、 實驗三網(wǎng)織紅細胞計數(shù)實驗三網(wǎng)織紅細胞計數(shù)一、實驗原理一、實驗原理 網(wǎng)織紅細胞胞漿內殘存有嗜堿性的網(wǎng)織紅細胞胞漿內殘存有嗜堿性的RNA物質，經(jīng)煌焦油藍或新亞甲藍活體物質，經(jīng)煌焦油藍或新亞甲藍活體染色后染色后RNA中負電荷基團與帶正電荷的中負電荷基團與帶正電荷的有色基團結合，凝聚成顆粒呈淺藍或藍有色基團結合，凝聚成顆粒呈淺藍或藍黑色的點狀、絲狀或網(wǎng)狀構造，可在顯黑色的點狀、絲狀或網(wǎng)狀構造，可在顯微鏡下識別。計數(shù)微鏡下識別。計數(shù)1000個紅細胞中一切個紅細胞中一切的網(wǎng)織紅細胞數(shù)直接報告其百分比，或的網(wǎng)織紅細胞數(shù)直接報告其百分比，或紅細胞計數(shù)結果報告其絕對值。紅細胞計數(shù)結果報告其絕對值。 網(wǎng)織紅細胞

2、網(wǎng)織紅細胞Ret 是晚幼紅細胞脫核后到成熟紅細是晚幼紅細胞脫核后到成熟紅細胞間的過渡細胞，是尚未完全成熟的胞間的過渡細胞，是尚未完全成熟的紅細胞，其胞漿內殘存有嗜堿性的紅細胞，其胞漿內殘存有嗜堿性的RNA物質。嗜堿性物質與染料凝聚物質。嗜堿性物質與染料凝聚成藍色顆粒，顆粒與顆粒連綴成線，成藍色顆粒，顆粒與顆粒連綴成線，線銜接成網(wǎng)，故而得名。線銜接成網(wǎng)，故而得名。分型：絲球型、網(wǎng)型、破網(wǎng)型、點分型：絲球型、網(wǎng)型、破網(wǎng)型、點粒型。粒型。、型型網(wǎng)織紅細胞計數(shù)方法n1、普通光學顯微鏡法：活體染色后推片鏡檢n2、網(wǎng)織細胞計數(shù)儀法：熒光染色后用流式細胞術計數(shù)二、試劑器材1、試劑 10g/L煌焦油藍酒精水溶

3、液 2、器材 毛細血管采血器具、小試管、載玻片、推片、顯微鏡、香柏油、二甲苯及擦鏡紙、Miller窺盤或直徑約20 mm較目鏡內徑稍小的圓形硬紙片正中央開一邊長為3mm的菱形或正方形小孔，置目鏡光闌處，用于縮視野法計數(shù)三、操作步驟1. 染色：于載玻片的一端加煌焦油藍酒精溶液染色：于載玻片的一端加煌焦油藍酒精溶液1滴，滴，任其自然涼干后備用，取末梢血或抗凝血一滴，于任其自然涼干后備用，取末梢血或抗凝血一滴，于已枯燥的染料上，用推片角混勻后，將兩玻片蓋合已枯燥的染料上，用推片角混勻后，將兩玻片蓋合玻片法；試管法取染液玻片法；試管法取染液2滴入試管，加血滴入試管，加血2滴滴混勻，封鎖好，待混勻，封鎖

4、好，待15分鐘以上時間，分鐘以上時間，2. 推片：取混合液推片：取混合液1小滴于載玻片的一端，推制成薄小滴于載玻片的一端，推制成薄而均勻的血膜，而均勻的血膜，3. 低倍鏡閱讀，選取紅細胞分布均勻網(wǎng)織紅細胞染低倍鏡閱讀，選取紅細胞分布均勻網(wǎng)織紅細胞染色較好的部分體尾交界處，滴香柏油轉換至油色較好的部分體尾交界處，滴香柏油轉換至油鏡，在鏡，在Miller窺盤下計數(shù)小方格中的窺盤下計數(shù)小方格中的RBC數(shù)和大方數(shù)和大方格中的網(wǎng)織紅細胞數(shù)或數(shù)出整個視野中的格中的網(wǎng)織紅細胞數(shù)或數(shù)出整個視野中的RBC總數(shù)和其中的網(wǎng)織紅細胞數(shù)，換一視野同法計數(shù)至總數(shù)和其中的網(wǎng)織紅細胞數(shù)，換一視野同法計數(shù)至幾個視野幾個視野RB

5、C總數(shù)總數(shù)1000為止。為止。Miller窺盤 A31B將將MillerMiller窺盤放在顯窺盤放在顯微鏡目鏡中微鏡目鏡中, ,經(jīng)過窺盤經(jīng)過窺盤中大小方格間的中大小方格間的9 9比比1 1比例關系計算比例關系計算RBCRBC數(shù)和數(shù)和RetRet數(shù)。數(shù)。四、計算 1.Miller窺盤法：網(wǎng)織紅細胞Retic百分率(%)= 大方格內Retic總數(shù)/小方格內RBC總數(shù)9100% 2.直接計數(shù)法：網(wǎng)織紅細胞Retic百分率(%)= 多個視野內Retic總數(shù)/多個視野內RBC總數(shù)100%五、本卷須知1.用酒精染液時，應待玻璃片上的酒精揮發(fā)枯燥用酒精染液時，應待玻璃片上的酒精揮發(fā)枯燥后，才干加血液，染色

6、時運用推片角不停攪動，后，才干加血液，染色時運用推片角不停攪動，使染料和血液混合，防止凝固。使染料和血液混合，防止凝固。2.染色時間一定要充足，混合后不能立刻推片，染色時間一定要充足，混合后不能立刻推片，室溫低時染色時間應適當延伸，應覆以另一玻室溫低時染色時間應適當延伸，應覆以另一玻片防止蒸發(fā)。片防止蒸發(fā)。3.染液與血液比例以染液與血液比例以1：1為宜，貧血適當加血量。為宜，貧血適當加血量。4.涂片厚薄均勻適宜，弓形挪動，多個區(qū)域計數(shù)涂片厚薄均勻適宜，弓形挪動，多個區(qū)域計數(shù)5.試劑應定期重配，以免蛻變沉淀。試劑應定期重配，以免蛻變沉淀。6.與變性珠蛋白小體鑒別與變性珠蛋白小體鑒別六、參考值成人

7、：成人：0.005-0.0150.5%-1.5%新生兒：新生兒：0.02-0.062%-6%兒童：兒童：0.005-0.0750.5%-7.5%成人絕對值成人絕對值24-84 109/L 七、臨床意義七、臨床意義1評價骨髓增生才干，判別貧血類型評價骨髓增生才干，判別貧血類型 再障時，明顯降低。絕對值低于再障時，明顯降低。絕對值低于5109/L可可做為急性再障的輔助診斷目的。做為急性再障的輔助診斷目的。失血、多數(shù)溶血性貧血患者網(wǎng)織紅細胞可明失血、多數(shù)溶血性貧血患者網(wǎng)織紅細胞可明顯高于正常。顯高于正常。營養(yǎng)不良性貧血在治療前網(wǎng)織紅細胞可堅持營養(yǎng)不良性貧血在治療前網(wǎng)織紅細胞可堅持正常、輕度升高或降低

8、。正常、輕度升高或降低。2評價療效網(wǎng)織紅細胞反響：IDA或巨幼細胞貧血分別給予鐵劑、維生素B12或葉酸治療23d后，網(wǎng)織紅細胞計數(shù)值開場上升，710d到達最高(10%左右)；兩周以后逐漸降至正常程度，紅細胞、血紅蛋白開場升高。骨髓移植、EPO治療后：假設骨髓開場恢復造血功能，RMI升高，網(wǎng)織紅細胞計數(shù)值上升。3 3放、化療監(jiān)測放、化療監(jiān)測 機體接受放、化療后，如出現(xiàn)骨髓機體接受放、化療后，如出現(xiàn)骨髓抑制，早期抑制，早期HFRHFR和和MFRMFR降低，然后才檢測到降低，然后才檢測到網(wǎng)織紅細胞的降低。而停頓放、化療，骨網(wǎng)織紅細胞的降低。而停頓放、化療，骨髓功能恢復后，又見上述目的依次上升。髓功能

9、恢復后，又見上述目的依次上升?？芍更c臨床醫(yī)師適時調整治療方案，防止可指點臨床醫(yī)師適時調整治療方案，防止呵斥嚴重的骨髓抑制。呵斥嚴重的骨髓抑制。 RPI=RPI=病人網(wǎng)織紅細胞病人網(wǎng)織紅細胞% %/2 /2 * * 病人病人HCT/HCT/正常人正常人HCTHCT男男0.450.45，女，女0.400.40 臨床運用：臨床運用： 3 3提示溶血性貧血或急性失血性貧血；提示溶血性貧血或急性失血性貧血；網(wǎng)織紅生成指數(shù)網(wǎng)織紅生成指數(shù)Reticulocyte Reticulocyte production index,RPIproduction index,RPI八、思索題 一溶血性貧血患者，紅細胞計數(shù)2.6x1012/L，血細胞比容0.29，網(wǎng)織紅細胞計數(shù)相對值為35%，如何報告網(wǎng)織紅細胞檢測結果？n外周血網(wǎng)織紅細胞計數(shù)百分數(shù)和絕對值是一反映骨髓紅系增生活性的常用目的。許多學者先后提出運用FCM和不同的RNA特異性熒光染料自動計數(shù)網(wǎng)織紅細胞的方法，如派假設寧Y、AO、溴化乙啶、thiazole orange等。 目前最普遍運用的是 thiazoieorange 染色法，這種特異性RNA 的激發(fā)波488nm丈量的特點，與人工計數(shù)法相比，它不但能得到網(wǎng)織紅細胞的百