放射配基受體結(jié)合法-1 (1)

1、放射配基受體結(jié)合法放射配基受體結(jié)合法 Radio Ligand Receptor Binding Assay（RRA） 實(shí)驗(yàn)藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)藥理學(xué) 中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院藥物研究所中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院藥物研究所 放射配基結(jié)合測(cè)定法是可以定量測(cè)定配基放射配基結(jié)合測(cè)定法是可以定量測(cè)定配基與受體結(jié)合的參數(shù)的一種方法。與受體結(jié)合的參數(shù)的一種方法。與受體結(jié)合的與受體結(jié)合的配基可以是激素、神經(jīng)遞質(zhì)、生長(zhǎng)因子等內(nèi)源配基可以是激素、神經(jīng)遞質(zhì)、生長(zhǎng)因子等內(nèi)源性物質(zhì)和相關(guān)藥物。性物質(zhì)和相關(guān)藥物。 放射配基結(jié)合測(cè)定法的基本操作是比較簡(jiǎn)放射配基結(jié)合測(cè)定法的基本操作是比較簡(jiǎn)單的，將含有受體的制備物與適當(dāng)?shù)姆派渑?/p>

2、基單的，將含有受體的制備物與適當(dāng)?shù)姆派渑浠黄饻胤跻欢芜m當(dāng)?shù)臅r(shí)間，然后對(duì)與受體結(jié)合一起溫孵一段適當(dāng)?shù)臅r(shí)間，然后對(duì)與受體結(jié)合的放射活性進(jìn)行測(cè)定。的放射活性進(jìn)行測(cè)定。 主要包括三種類型的實(shí)驗(yàn)：飽和實(shí)驗(yàn)，競(jìng)主要包括三種類型的實(shí)驗(yàn)：飽和實(shí)驗(yàn)，競(jìng)爭(zhēng)實(shí)驗(yàn)和動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)。爭(zhēng)實(shí)驗(yàn)和動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)。 我們將依次介紹受體制備，放射配基，檢我們將依次介紹受體制備，放射配基，檢測(cè)條件，分離結(jié)合與游離放射配基的方法，數(shù)測(cè)條件，分離結(jié)合與游離放射配基的方法，數(shù)據(jù)分析等實(shí)驗(yàn)內(nèi)容。據(jù)分析等實(shí)驗(yàn)內(nèi)容。 一、受體制備一、受體制備 1. .目的：受體制備是在放射配基結(jié)合實(shí)驗(yàn)前將含目的：受體制備是在放射配基結(jié)合實(shí)驗(yàn)前將含有某種受體的組織進(jìn)

3、行預(yù)處理，使之更符合實(shí)有某種受體的組織進(jìn)行預(yù)處理，使之更符合實(shí)驗(yàn)的要求。驗(yàn)的要求。2. .步驟步驟1）將組織或細(xì)胞在低滲緩沖液中勻漿。通常大）將組織或細(xì)胞在低滲緩沖液中勻漿。通常大部分受體在數(shù)小時(shí)是比較穩(wěn)定的。但為了保持部分受體在數(shù)小時(shí)是比較穩(wěn)定的。但為了保持活性，經(jīng)常將組織盡快地放置在冰內(nèi)。纖維組活性，經(jīng)常將組織盡快地放置在冰內(nèi)。纖維組織，例如肺，應(yīng)該用尼龍網(wǎng)（織，例如肺，應(yīng)該用尼龍網(wǎng)（50m50m）加以）加以過濾。過濾。2）慢速離心（）慢速離心（500g500g）可幫助除去組織中某些不）可幫助除去組織中某些不需要的部分需要的部分( (細(xì)胞核及大碎片細(xì)胞核及大碎片) ) 。 3）將勻漿在盡可

4、能快的轉(zhuǎn)速下離心）將勻漿在盡可能快的轉(zhuǎn)速下離心5-10min5-10min，但，但不要用超速（即不要用超速（即50,000g50,000g）。盡管對(duì)于很多受體）。盡管對(duì)于很多受體并不需要低溫，但離心常規(guī)是在并不需要低溫，但離心常規(guī)是在4 4下進(jìn)行。下進(jìn)行。4）將沉淀用相同緩沖液再度勻漿和離心。最終的）將沉淀用相同緩沖液再度勻漿和離心。最終的組織制備被稱為粗微粒部分或膜部分。組織制備被稱為粗微粒部分或膜部分。5）兩步離心的目的是去除任何可溶性干擾物，如）兩步離心的目的是去除任何可溶性干擾物，如內(nèi)源性的神經(jīng)遞質(zhì)、鳥嘌呤核苷酸等，它們可內(nèi)源性的神經(jīng)遞質(zhì)、鳥嘌呤核苷酸等，它們可能干擾放射配基結(jié)合測(cè)定。

5、能干擾放射配基結(jié)合測(cè)定。 3.注意事項(xiàng)注意事項(xiàng)1）勻漿緩沖液）勻漿緩沖液 勻漿緩沖液的選擇通常不是關(guān)鍵，對(duì)于大勻漿緩沖液的選擇通常不是關(guān)鍵，對(duì)于大部分受體制備，在中性部分受體制備，在中性pH下的任何緩沖液已經(jīng)下的任何緩沖液已經(jīng)足夠。對(duì)于某些受體推薦在勻漿緩沖液和足夠。對(duì)于某些受體推薦在勻漿緩沖液和/或溫或溫孵液中加入孵液中加入EDTA，以完全去除各種內(nèi)源性物質(zhì)。，以完全去除各種內(nèi)源性物質(zhì)。 質(zhì)質(zhì) 2）受體制備的貯存）受體制備的貯存 大部分在冷凍下是穩(wěn)定的，原組織或膜部大部分在冷凍下是穩(wěn)定的，原組織或膜部分均能貯藏在分均能貯藏在-20或或-80一段時(shí)間。某些受一段時(shí)間。某些受體和小塊組織（體和小

6、塊組織（10mg）儲(chǔ)存后效果不好，應(yīng)該）儲(chǔ)存后效果不好，應(yīng)該用新鮮組織進(jìn)行測(cè)定。用新鮮組織進(jìn)行測(cè)定。 二、放射配基二、放射配基 對(duì)于任何受體系統(tǒng)，商業(yè)上可提供若干種對(duì)于任何受體系統(tǒng)，商業(yè)上可提供若干種放射配基，要根據(jù)放射配基的特征和要解決的放射配基，要根據(jù)放射配基的特征和要解決的問題加以選擇。應(yīng)考慮的問題包括：放射性同問題加以選擇。應(yīng)考慮的問題包括：放射性同位素的種類（通常是位素的種類（通常是3 3H H或或125125I I），非特異結(jié)合），非特異結(jié)合的程度，放射配基對(duì)受體的選擇性和親和力以的程度，放射配基對(duì)受體的選擇性和親和力以及放射配基是激動(dòng)劑還是拮抗劑等。及放射配基是激動(dòng)劑還是拮抗劑等

7、。 1.放射配基的種類放射配基的種類 3H放射配基的優(yōu)點(diǎn)是在化學(xué)上較穩(wěn)定，生物學(xué)放射配基的優(yōu)點(diǎn)是在化學(xué)上較穩(wěn)定，生物學(xué)上與非標(biāo)記的化合物沒有差異，有較長(zhǎng)的半衰期上與非標(biāo)記的化合物沒有差異，有較長(zhǎng)的半衰期（12年），標(biāo)記配基經(jīng)常使用數(shù)月或更長(zhǎng)時(shí)間，年），標(biāo)記配基經(jīng)常使用數(shù)月或更長(zhǎng)時(shí)間，但它的特異活性較低（但它的特異活性較低（30-100Ci/mmol）。）。 而而125I的半衰期短（的半衰期短（60天），它的放射配基通天），它的放射配基通常每常每4-6周購買和準(zhǔn)備一次。碘標(biāo)放射配基的優(yōu)點(diǎn)周購買和準(zhǔn)備一次。碘標(biāo)放射配基的優(yōu)點(diǎn)是比較高的特異活性（是比較高的特異活性（2,200 Ci/mmol），在受

8、體），在受體密度低和組織數(shù)量少時(shí)特別有用。使用碘標(biāo)配基密度低和組織數(shù)量少時(shí)特別有用。使用碘標(biāo)配基不需要閃爍液，免除了購買閃爍液的費(fèi)用和操作不需要閃爍液，免除了購買閃爍液的費(fèi)用和操作步驟，因而方便和價(jià)廉。步驟，因而方便和價(jià)廉。 2.放射配基的親和力放射配基的親和力 放射配基與受體親和力越高越好，因?yàn)闇y(cè)定中放射配基與受體親和力越高越好，因?yàn)闇y(cè)定中可以使用較低濃度的放射配基，且非特異結(jié)合的水可以使用較低濃度的放射配基，且非特異結(jié)合的水平也較低。另外，親和力越高，解離速率越慢，操平也較低。另外，親和力越高，解離速率越慢，操作較方便。作較方便。 3.放射配基的稀釋放射配基的稀釋 有時(shí)，為了將一個(gè)測(cè)定管的

9、特異活性的最有時(shí)，為了將一個(gè)測(cè)定管的特異活性的最大值限制在大值限制在106計(jì)數(shù)計(jì)數(shù)/min（cpm），可以用非標(biāo)），可以用非標(biāo)記配基稀釋記配基稀釋125I放射配基，從而降低其特異活性。放射配基，從而降低其特異活性。另外，非標(biāo)記配基應(yīng)該使用非活性的含碘配基，另外，非標(biāo)記配基應(yīng)該使用非活性的含碘配基，而不是非碘的配基，因?yàn)楹笳吲c放射配基在化而不是非碘的配基，因?yàn)楹笳吲c放射配基在化學(xué)上是不同的，可能有不同的藥理學(xué)特征。學(xué)上是不同的，可能有不同的藥理學(xué)特征。 4.放射配基的總結(jié)合放射配基的總結(jié)合 通常放射配基的非特異結(jié)合越低越好。一通常放射配基的非特異結(jié)合越低越好。一個(gè)測(cè)定中如果個(gè)測(cè)定中如果50%總結(jié)

10、合是特異的，它被認(rèn)為總結(jié)合是特異的，它被認(rèn)為是合格的；是合格的；70%是好的，是好的，90%是非常好的。是非常好的。 三、溫孵條件三、溫孵條件 1.時(shí)間和溫度時(shí)間和溫度 對(duì)于飽和和競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合，所用的模型是平衡實(shí)驗(yàn)。溫孵對(duì)于飽和和競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合，所用的模型是平衡實(shí)驗(yàn)。溫孵的時(shí)間要足夠長(zhǎng)，以保證達(dá)到平衡（或至少是穩(wěn)態(tài)）。的時(shí)間要足夠長(zhǎng)，以保證達(dá)到平衡（或至少是穩(wěn)態(tài)）。 由于達(dá)到穩(wěn)態(tài)的時(shí)間依賴放射配基的濃度，在預(yù)測(cè)溫孵由于達(dá)到穩(wěn)態(tài)的時(shí)間依賴放射配基的濃度，在預(yù)測(cè)溫孵時(shí)間時(shí)，應(yīng)使用低濃度的放射配基。室溫下，使用接近它們時(shí)間時(shí)，應(yīng)使用低濃度的放射配基。室溫下，使用接近它們Kd的濃度，的濃度，20-60min可達(dá)

11、到穩(wěn)態(tài)。如果在可達(dá)到穩(wěn)態(tài)。如果在20和和60min之間結(jié)之間結(jié)合是恒定的，那麼可選定溫孵時(shí)間為合是恒定的，那麼可選定溫孵時(shí)間為30min。 盡管有人認(rèn)為生理溫度（盡管有人認(rèn)為生理溫度（37）更好，但實(shí)際上在室溫）更好，但實(shí)際上在室溫下（下（22）測(cè)定最為方便。另外，某些測(cè)定選在冰中（）測(cè)定最為方便。另外，某些測(cè)定選在冰中（4）進(jìn)行，因?yàn)樵谶@個(gè)溫度下的數(shù)據(jù)重復(fù)性較好。進(jìn)行，因?yàn)樵谶@個(gè)溫度下的數(shù)據(jù)重復(fù)性較好。 2.緩沖液緩沖液 通常緩沖液通常緩沖液pH在生理范圍，即在生理范圍，即pH7和和8之間。之間。實(shí)驗(yàn)中經(jīng)常使用實(shí)驗(yàn)中經(jīng)常使用Tris作為緩沖液，主要原因是使作為緩沖液，主要原因是使用方便，因?yàn)?/p>

12、商品用方便，因?yàn)樯唐稵ris是預(yù)先配制好的，不需要是預(yù)先配制好的，不需要調(diào)整調(diào)整pH。但。但Tris不一定是最好的，可試用其它不一定是最好的，可試用其它的緩沖液。的緩沖液。 3.放射配基的濃度放射配基的濃度 在測(cè)定中，放射配基采用的濃度要依據(jù)實(shí)驗(yàn)的類型。在測(cè)定中，放射配基采用的濃度要依據(jù)實(shí)驗(yàn)的類型。對(duì)于動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)，濃度應(yīng)較低，只要保證測(cè)定計(jì)數(shù)（例對(duì)于動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)，濃度應(yīng)較低，只要保證測(cè)定計(jì)數(shù)（例如如300cpm）即可，大約為）即可，大約為0.2Kd較好。對(duì)于競(jìng)爭(zhēng)實(shí)較好。對(duì)于競(jìng)爭(zhēng)實(shí)驗(yàn)，使用相似的濃度，約為驗(yàn)，使用相似的濃度，約為Kd或更低一些。對(duì)于飽和實(shí)或更低一些。對(duì)于飽和實(shí)驗(yàn)，如果可能，放射配基

13、濃度范圍應(yīng)該是驗(yàn)，如果可能，放射配基濃度范圍應(yīng)該是0.1Kd10Kd。如果放射配基與一個(gè)以上受體位點(diǎn)結(jié)合，對(duì)高。如果放射配基與一個(gè)以上受體位點(diǎn)結(jié)合，對(duì)高親和力位點(diǎn)（低親和力位點(diǎn)（低Kd）應(yīng)采用）應(yīng)采用0.1Kd，對(duì)低親和力位點(diǎn)，對(duì)低親和力位點(diǎn)（高（高Kd）應(yīng)采用）應(yīng)采用10Kd。 4.受體濃度受體濃度 在合理的范圍內(nèi)，組織（受體）濃度越高，結(jié)合在合理的范圍內(nèi)，組織（受體）濃度越高，結(jié)合越好。增加受體濃度將增加特異結(jié)合對(duì)非特異結(jié)合的比越好。增加受體濃度將增加特異結(jié)合對(duì)非特異結(jié)合的比率，因?yàn)榉翘禺惤Y(jié)合中的大部分是與玻璃纖維濾膜的結(jié)率，因?yàn)榉翘禺惤Y(jié)合中的大部分是與玻璃纖維濾膜的結(jié)合。合。 粗略地看，

14、如果加入的放射配基有粗略地看，如果加入的放射配基有10%被結(jié)合，被結(jié)合，那麼組織的濃度就太高了。那麼組織的濃度就太高了。 另外，特異結(jié)合的量與組織濃度應(yīng)該呈線性關(guān)系。另外，特異結(jié)合的量與組織濃度應(yīng)該呈線性關(guān)系。對(duì)于大部分受體測(cè)定實(shí)驗(yàn)，一般采用的組織濃度范圍是對(duì)于大部分受體測(cè)定實(shí)驗(yàn)，一般采用的組織濃度范圍是2-10mg/ml濕重組織，或者濕重組織，或者100-500g/ml膜蛋白。對(duì)于膜蛋白。對(duì)于轉(zhuǎn)染細(xì)胞，它們的受體是過表達(dá)的，測(cè)定采用的蛋白濃轉(zhuǎn)染細(xì)胞，它們的受體是過表達(dá)的，測(cè)定采用的蛋白濃度應(yīng)該大大降低。度應(yīng)該大大降低。 5.非放射活性藥物的濃度非放射活性藥物的濃度 如果競(jìng)爭(zhēng)性藥物抑制放射配基

15、結(jié)合是按照如果競(jìng)爭(zhēng)性藥物抑制放射配基結(jié)合是按照單一位點(diǎn)模型，那麼大約單一位點(diǎn)模型，那麼大約10倍抑制劑濃度是足倍抑制劑濃度是足夠的。如果涉及多位點(diǎn)結(jié)合或親和力狀態(tài)，那夠的。如果涉及多位點(diǎn)結(jié)合或親和力狀態(tài)，那麼至少需要麼至少需要20倍濃度，跨越更大范圍。倍濃度，跨越更大范圍。 6.確定特異性結(jié)合確定特異性結(jié)合1）特異性結(jié)合和非特異性結(jié)合）特異性結(jié)合和非特異性結(jié)合 在所有放射配基結(jié)合測(cè)定中最重要的是確定特異性結(jié)合。在所有放射配基結(jié)合測(cè)定中最重要的是確定特異性結(jié)合。 從概念上講，特異性結(jié)合可以被定義為與受體的結(jié)合。非特異從概念上講，特異性結(jié)合可以被定義為與受體的結(jié)合。非特異結(jié)合是除此以外其它的結(jié)合。

16、結(jié)合是除此以外其它的結(jié)合。 實(shí)際操作上講，非特異結(jié)合是有適當(dāng)?shù)倪^量非標(biāo)記藥物存在實(shí)際操作上講，非特異結(jié)合是有適當(dāng)?shù)倪^量非標(biāo)記藥物存在（例如：比（例如：比IC50高高100倍），受體被完全阻斷時(shí)的結(jié)合。非特異結(jié)合倍），受體被完全阻斷時(shí)的結(jié)合。非特異結(jié)合包括放射配基與其它受體位點(diǎn)、玻璃纖維濾膜的結(jié)合，組織的吸附包括放射配基與其它受體位點(diǎn)、玻璃纖維濾膜的結(jié)合，組織的吸附和溶解于膜脂類等。特異性結(jié)合是總結(jié)合與非特異結(jié)合的差值。和溶解于膜脂類等。特異性結(jié)合是總結(jié)合與非特異結(jié)合的差值。 特征上講，非特異結(jié)合達(dá)到穩(wěn)態(tài)比特異性結(jié)合要快，當(dāng)放射配特征上講，非特異結(jié)合達(dá)到穩(wěn)態(tài)比特異性結(jié)合要快，當(dāng)放射配基濃度增加時(shí)

17、不會(huì)飽和。基濃度增加時(shí)不會(huì)飽和。 2）注意事項(xiàng)）注意事項(xiàng) 用于確定非特異結(jié)合的藥物濃度不要太高，因?yàn)楹芨叩乃幬餄舛扔糜诖_定非特異結(jié)合的藥物濃度不要太高，因?yàn)楹芨叩乃幬餄舛纫部赡芤种品翘禺惤Y(jié)合。也可能抑制非特異結(jié)合。 確定非特異結(jié)合的一個(gè)好方法是用不同的非標(biāo)記配基進(jìn)行抑制實(shí)確定非特異結(jié)合的一個(gè)好方法是用不同的非標(biāo)記配基進(jìn)行抑制實(shí)驗(yàn)。在比驗(yàn)。在比IC50高高100倍濃度下，它們對(duì)結(jié)合的抑制程度應(yīng)該是相同的。倍濃度下，它們對(duì)結(jié)合的抑制程度應(yīng)該是相同的。 在測(cè)定非特異結(jié)合時(shí)，最好用與放射配基化學(xué)上不相似的藥物。在測(cè)定非特異結(jié)合時(shí)，最好用與放射配基化學(xué)上不相似的藥物。這是因?yàn)橄嗨扑幬锟赡芤种婆c放射配基同

18、樣這是因?yàn)橄嗨扑幬锟赡芤种婆c放射配基同樣“特異的特異的”結(jié)合，但并不結(jié)合，但并不是受體的結(jié)合位點(diǎn)。如果可能，應(yīng)避免使用放射配基的非放射活性形是受體的結(jié)合位點(diǎn)。如果可能，應(yīng)避免使用放射配基的非放射活性形式。有很多例子表明，在確定非特異結(jié)合時(shí)，由于未很好選擇藥物或式。有很多例子表明，在確定非特異結(jié)合時(shí)，由于未很好選擇藥物或濃度，導(dǎo)致錯(cuò)誤的數(shù)據(jù)和結(jié)論。濃度，導(dǎo)致錯(cuò)誤的數(shù)據(jù)和結(jié)論。放射配基的總結(jié)合、非特異性結(jié)合和特異性結(jié)合。放射配基的總結(jié)合、非特異性結(jié)合和特異性結(jié)合。 四、四、 結(jié)合與游離放射配基的分離結(jié)合與游離放射配基的分離 受體結(jié)合測(cè)定的一個(gè)關(guān)鍵步驟是分離結(jié)合受體結(jié)合測(cè)定的一個(gè)關(guān)鍵步驟是分離結(jié)合與

19、游離放射配基。在進(jìn)行分離時(shí)，防止受體與游離放射配基。在進(jìn)行分離時(shí)，防止受體-放放射配基復(fù)合物的解離是很重要的。射配基復(fù)合物的解離是很重要的。 降低溫度可以減慢解離的速率，快速操作降低溫度可以減慢解離的速率，快速操作可以縮短解離的時(shí)間?？梢钥s短解離的時(shí)間。 對(duì)于膜結(jié)合測(cè)定經(jīng)常使用的技術(shù)是玻璃纖維濾膜對(duì)于膜結(jié)合測(cè)定經(jīng)常使用的技術(shù)是玻璃纖維濾膜的真空過濾。通過過濾將含有放射配基的真空過濾。通過過濾將含有放射配基-受體復(fù)合物的膜受體復(fù)合物的膜碎片留在濾膜上，游離的（未結(jié)合的）放射配基與濾液碎片留在濾膜上，游離的（未結(jié)合的）放射配基與濾液一起穿過濾膜被棄去。一起穿過濾膜被棄去。 用大量的緩沖液洗滌膜碎片

20、和濾膜可降低非特異結(jié)用大量的緩沖液洗滌膜碎片和濾膜可降低非特異結(jié)合。另外，預(yù)先將濾膜用某種溶液（如合。另外，預(yù)先將濾膜用某種溶液（如0.1%聚乙烯亞胺聚乙烯亞胺水溶液）洗滌或浸泡一段時(shí)間，也可減少濾膜上的非特水溶液）洗滌或浸泡一段時(shí)間，也可減少濾膜上的非特異結(jié)合。在某些測(cè)定中，選擇濾膜的材料也是很重要的。異結(jié)合。在某些測(cè)定中，選擇濾膜的材料也是很重要的。 過濾法的優(yōu)點(diǎn)是快速和方便。缺點(diǎn)是只有在放射配過濾法的優(yōu)點(diǎn)是快速和方便。缺點(diǎn)是只有在放射配基基-受體復(fù)合物的親和力高于受體復(fù)合物的親和力高于10nM時(shí)才能應(yīng)用。它的時(shí)才能應(yīng)用。它的主要非特異結(jié)合是與濾膜而不是與組織制備的結(jié)合。主要非特異結(jié)合是與

21、濾膜而不是與組織制備的結(jié)合。對(duì)于放射配基與受體的親和力在對(duì)于放射配基與受體的親和力在10nM-1M范圍（這范圍（這時(shí)解離可能太快）的測(cè)定，以及與濾膜的非特異結(jié)合時(shí)解離可能太快）的測(cè)定，以及與濾膜的非特異結(jié)合高得不能應(yīng)用時(shí)，經(jīng)常使用離心技術(shù)來代替過濾。高得不能應(yīng)用時(shí)，經(jīng)常使用離心技術(shù)來代替過濾。五、配體結(jié)合試驗(yàn)類型和結(jié)果分析五、配體結(jié)合試驗(yàn)類型和結(jié)果分析 （一）飽和曲線（一）飽和曲線 用一固定濃度的受體蛋白和不同濃度的放射配體用一固定濃度的受體蛋白和不同濃度的放射配體一起孵育，將特異性結(jié)合與配體濃度作圖，可畫出一一起孵育，將特異性結(jié)合與配體濃度作圖，可畫出一矩形拋物線即飽和曲線。矩形拋物線即飽和

22、曲線。放射配基受體結(jié)合的飽和曲線放射配基受體結(jié)合的飽和曲線 1. ClarkClark模型：模型： 配體受體結(jié)合反應(yīng)為可逆雙分子反應(yīng)（配體受體結(jié)合反應(yīng)為可逆雙分子反應(yīng)（L+RLRL+RLR）；所有受體都）；所有受體都是等效和獨(dú)立的；配體本身不代謝，也不與其它位置結(jié)合；生物效是等效和獨(dú)立的；配體本身不代謝，也不與其它位置結(jié)合；生物效應(yīng)正比于結(jié)合受體數(shù)目。應(yīng)正比于結(jié)合受體數(shù)目。根據(jù)質(zhì)量作用定律：根據(jù)質(zhì)量作用定律：平衡時(shí)（平衡時(shí)（LT）(RL) (LT)(L) RLRLLRLRRLLRTT)()(KD （1） 故故 KD= RLLRLRT（2） (LT)總配體濃度；（總配體濃度；（L）游離配體濃度；

23、（）游離配體濃度；（RL）結(jié)合配體濃度；）結(jié)合配體濃度； (RT)總受體濃度，即最大結(jié)合；總受體濃度，即最大結(jié)合；KD平衡解離常數(shù)；平衡解離常數(shù)；KA親和常親和常數(shù)數(shù) KA= 1/KD2.Scatchard作圖：作圖：（2）式變換）式變換 DDTKRLKRLRL（3） LRL用用對(duì)（對(duì)（RL）作圖，可得直線，其斜率為）作圖，可得直線，其斜率為 DK1，橫軸截距橫軸截距為（為（RT）。）。 飽和實(shí)驗(yàn)的飽和實(shí)驗(yàn)的Scatchard作圖作圖 3.Hill作圖：作圖：當(dāng)配體受體結(jié)合反應(yīng)不是簡(jiǎn)單的雙分子反應(yīng)時(shí)，當(dāng)配體受體結(jié)合反應(yīng)不是簡(jiǎn)單的雙分子反應(yīng)時(shí)， R+nL=RLn根據(jù)質(zhì)量作用定律根據(jù)質(zhì)量作用定律 nDnTLKLRRL經(jīng)變換有經(jīng)變換有 log( RLRRLT)=nlog(L)-log(kD) n為大于為大于1的整數(shù)時(shí)，結(jié)合過程是的整數(shù)時(shí)，結(jié)合過程是n+1個(gè)分子反應(yīng)。個(gè)分子反應(yīng)。n不是整數(shù)時(shí)不是整數(shù)時(shí) n1,正協(xié)同作用；正協(xié)同作用；n1，負(fù)協(xié)同作用，負(fù)協(xié)同作用協(xié)同是一種現(xiàn)象，指配體與受體部位結(jié)合后，可影響與另一受協(xié)同是一種現(xiàn)象，指配體與受體部位結(jié)