人教版教學(xué)課件動物細(xì)胞融合與單克隆抗體(共20張PPT)

1、12動物細(xì)胞與植物細(xì)胞的差別：無細(xì)胞壁全能性受限制，不能發(fā)育成雜種動物動物細(xì)胞雜交與植物細(xì)胞雜交的不同：不需去除細(xì)胞壁不能發(fā)育成新的動物個體3一、動物細(xì)胞融合（細(xì)胞雜交）一、動物細(xì)胞融合（細(xì)胞雜交）P521、概念、概念：指兩個或多個動物細(xì)胞結(jié)合形成一個細(xì)胞的過程。2、結(jié)果、結(jié)果：形成單核的雜交細(xì)胞3、原理、原理： 細(xì)胞膜的流動性4、誘導(dǎo)方式、誘導(dǎo)方式物理法：離心、振動、電激化學(xué)法：聚乙二醇（PEG)生物法：滅活的病毒5 5、動物細(xì)胞融合過程、動物細(xì)胞融合過程(利用滅活仙臺病毒利用滅活仙臺病毒是動物細(xì)胞融合所是動物細(xì)胞融合所特有的。特有的。 病毒外殼病毒外殼上的某些糖蛋白可上的某些糖蛋白可能有促

2、進(jìn)細(xì)胞融合能有促進(jìn)細(xì)胞融合的功能。的功能。) 不滅活的話會感染胞，而不能誘導(dǎo)細(xì)胞融合不滅活的話會感染胞，而不能誘導(dǎo)細(xì)胞融合4 5不同不同DNADNA的兩個細(xì)胞的兩個細(xì)胞滅活病毒誘導(dǎo)細(xì)胞融合滅活病毒誘導(dǎo)細(xì)胞融合融合后的細(xì)胞融合后的細(xì)胞進(jìn)行有絲分裂進(jìn)行有絲分裂5 5、動物細(xì)胞融合過程、動物細(xì)胞融合過程66、意義、意義：突破了有性雜交方法的局限，使遠(yuǎn)緣雜交（種間、屬間、科間、動植物之間）成為可能。7、應(yīng)用、應(yīng)用：成為研究細(xì)胞遺傳、細(xì)胞免疫、腫瘤和生物新品種培育等的重要手段 特別是利用雜交瘤技術(shù)制造單克隆抗體閱讀課本53頁7總結(jié)：比較植物體細(xì)胞雜交和動物細(xì)胞融合總結(jié)：比較植物體細(xì)胞雜交和動物細(xì)胞融合8

3、提問？1.1.抗體是由何種細(xì)胞產(chǎn)生的？抗體是由何種細(xì)胞產(chǎn)生的？ 效應(yīng)效應(yīng)B B細(xì)胞（漿細(xì)胞）。細(xì)胞（漿細(xì)胞）。2.2.一個淋巴細(xì)胞一個淋巴細(xì)胞( (漿細(xì)胞漿細(xì)胞) )能分泌多種抗體嗎？能分泌多種抗體嗎？ 每一個淋巴細(xì)胞只分泌每一個淋巴細(xì)胞只分泌一種一種特異性抗體。特異性抗體。3. 3. 簡述獲得抗體的傳統(tǒng)途徑？簡述獲得抗體的傳統(tǒng)途徑？ 抗原抗原 動物體動物體 抗體抗體 抗原不純抗原不純 抗體不純抗體不純二、單克隆抗體二、單克隆抗體刺激漿細(xì)胞9體外培養(yǎng)淋巴細(xì)胞能無限增殖嗎體外培養(yǎng)淋巴細(xì)胞能無限增殖嗎? ?怎樣解怎樣解決這個問題？決這個問題？4.4.這種方法獲得的抗體有什么缺陷？這種方法獲得的抗體

4、有什么缺陷？ 產(chǎn)量低，純度低，特異性差產(chǎn)量低，純度低，特異性差10一個一個B B淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體 骨髓瘤細(xì)胞能無限增殖骨髓瘤細(xì)胞能無限增殖雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)設(shè)計方案：設(shè)計方案：動物細(xì)胞融合技術(shù)動物細(xì)胞融合技術(shù)單克隆單克隆抗體抗體 既能產(chǎn)生特異性抗體，既能產(chǎn)生特異性抗體， 又能大量繁殖的細(xì)胞又能大量繁殖的細(xì)胞11(1)(1)、原理、原理：雜交瘤細(xì)胞具有兩個親本的特性，即能迅速大量增殖，又能足夠數(shù)量的單一抗體。(2)(2)、過過程程12效應(yīng)效應(yīng)B B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞注射特定注射特定抗原蛋白抗原蛋白骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞培養(yǎng)骨髓

5、瘤細(xì)胞培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞融合融合（只考慮兩兩融合）（只考慮兩兩融合）培養(yǎng)液中細(xì)胞有幾培養(yǎng)液中細(xì)胞有幾種類型？融合細(xì)胞種類型？融合細(xì)胞幾種幾種類型類型？骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞-骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞B B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞- B- B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞B B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞-骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞多種多種雜交細(xì)胞雜交細(xì)胞在具有篩選作用的培養(yǎng)基上培養(yǎng)在具有篩選作用的培養(yǎng)基上培養(yǎng)專一抗體檢驗陽性專一抗體檢驗陽性克隆上述雜交細(xì)胞克隆上述雜交細(xì)胞分開不同雜交細(xì)胞，克隆專一抗體，分開不同雜交細(xì)胞，克隆專一抗體，檢驗陽性細(xì)胞檢驗陽性細(xì)胞單克隆抗體單克隆抗體注射到小鼠體內(nèi)注射到小鼠體內(nèi)體外培養(yǎng)體外培養(yǎng) 該細(xì)胞繼承該細(xì)胞繼承

6、雙親細(xì)胞雙親細(xì)胞的遺傳特性，既能的遺傳特性，既能產(chǎn)生專產(chǎn)生專一抗體一抗體又能又能無限增殖無限增殖。雜交瘤細(xì)胞有何特點？雜交瘤細(xì)胞有何特點？特異性強，靈敏度高特異性強，靈敏度高132.誘導(dǎo)其融合的方法有哪些？誘導(dǎo)其融合的方法有哪些？3.融合后培養(yǎng)液中有幾種細(xì)胞融合后培養(yǎng)液中有幾種細(xì)胞?4.怎樣篩選出雜交瘤細(xì)胞，雜怎樣篩選出雜交瘤細(xì)胞，雜交瘤細(xì)胞有何優(yōu)點交瘤細(xì)胞有何優(yōu)點?原因？原因？1.注射抗原的目的是什么注射抗原的目的是什么?5.為何要進(jìn)行克隆化培養(yǎng)和為何要進(jìn)行克隆化培養(yǎng)和專一抗體檢測，多次篩選專一抗體檢測，多次篩選?6.大量增殖雜交瘤細(xì)胞和獲大量增殖雜交瘤細(xì)胞和獲得單抗的方法得單抗的方法?14

7、如何進(jìn)行雜交瘤細(xì)胞的如何進(jìn)行雜交瘤細(xì)胞的抗體檢測抗體檢測及及克隆化培養(yǎng)克隆化培養(yǎng)？ 融合后的細(xì)胞經(jīng)選擇性培養(yǎng)基培養(yǎng)后，能存活的融合后的細(xì)胞經(jīng)選擇性培養(yǎng)基培養(yǎng)后，能存活的細(xì)胞就是雜交瘤細(xì)胞。細(xì)胞就是雜交瘤細(xì)胞。但這些雜交瘤細(xì)胞并非都是能分泌所需抗體的細(xì)胞，但這些雜交瘤細(xì)胞并非都是能分泌所需抗體的細(xì)胞，通常用通常用“有限稀釋法有限稀釋法”來選擇。來選擇。將雜交瘤細(xì)胞稀釋，將雜交瘤細(xì)胞稀釋，用多孔細(xì)胞培養(yǎng)板培養(yǎng)，使每孔細(xì)胞不超過一個，用多孔細(xì)胞培養(yǎng)板培養(yǎng)，使每孔細(xì)胞不超過一個，通過培養(yǎng)讓其增殖。然后通過培養(yǎng)讓其增殖。然后檢測各孔上清液中細(xì)胞分檢測各孔上清液中細(xì)胞分泌的抗體泌的抗體。那些上清液可與。那

8、些上清液可與特定抗原特定抗原結(jié)合的培養(yǎng)結(jié)合的培養(yǎng)孔為陽性孔?？诪殛栃钥?。陽性孔中的細(xì)胞還不能保證是來自單陽性孔中的細(xì)胞還不能保證是來自單個細(xì)胞，挑選陽性孔的細(xì)胞繼續(xù)進(jìn)行有限稀釋，一個細(xì)胞，挑選陽性孔的細(xì)胞繼續(xù)進(jìn)行有限稀釋，一般需進(jìn)行般需進(jìn)行3 34 4次，直至確信每個孔中增殖的細(xì)胞為次，直至確信每個孔中增殖的細(xì)胞為單克隆細(xì)胞單克隆細(xì)胞。該過程即為雜交瘤細(xì)胞的克隆化培養(yǎng)。該過程即為雜交瘤細(xì)胞的克隆化培養(yǎng)。15(2)(2)、過過程程B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞誘導(dǎo)融合B-B細(xì)胞B-瘤細(xì)胞瘤-瘤細(xì)胞選擇培養(yǎng)基第一次篩選第一次篩選雜交瘤細(xì)胞（ B-瘤細(xì)胞）克隆化培養(yǎng)專一抗體檢測 第二次篩選第二次篩選相應(yīng)雜交瘤

9、細(xì)胞體外培養(yǎng)小鼠腹腔內(nèi)增殖單克隆抗體16(3).(3).單克隆抗體的應(yīng)用：單克隆抗體的應(yīng)用：單克隆抗體的優(yōu)點：特異性強、靈敏度高、產(chǎn)單克隆抗體的優(yōu)點：特異性強、靈敏度高、產(chǎn)量大量大 作為診斷試劑：準(zhǔn)確識別各種抗原物質(zhì)，并與作為診斷試劑：準(zhǔn)確識別各種抗原物質(zhì)，并與特異性結(jié)合特異性結(jié)合 優(yōu)點：優(yōu)點：準(zhǔn)確、高效、簡易、快速準(zhǔn)確、高效、簡易、快速用于用于運載藥物：制成運載藥物：制成“生物導(dǎo)彈生物導(dǎo)彈”治療疾?。褐饕糜诎┌Y治療治療疾?。褐饕糜诎┌Y治療既不損傷正常細(xì)胞，又減少了用藥劑量。既不損傷正常細(xì)胞，又減少了用藥劑量。17一種誘導(dǎo)細(xì)胞融合的新方法一種誘導(dǎo)細(xì)胞融合的新方法一種新細(xì)胞一種新細(xì)胞滅活病毒

10、滅活病毒雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞一個優(yōu)勢一個優(yōu)勢單克隆抗體特異性強、單克隆抗體特異性強、靈敏度高的優(yōu)勢靈敏度高的優(yōu)勢181、科學(xué)家用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與某種細(xì)胞融合，得到、科學(xué)家用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與某種細(xì)胞融合，得到雜交細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)可產(chǎn)生大量的單克隆抗體，與骨雜交細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)可產(chǎn)生大量的單克隆抗體，與骨髓瘤細(xì)胞融合的是（髓瘤細(xì)胞融合的是（ ） A.經(jīng)過免疫的經(jīng)過免疫的B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞 B.沒經(jīng)過免疫的沒經(jīng)過免疫的T淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞C.經(jīng)過免疫的經(jīng)過免疫的T淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞 D.沒經(jīng)過免疫的淋巴細(xì)胞沒經(jīng)過免疫的淋巴細(xì)胞A192.動物細(xì)胞融合的目的中最重要的是動物細(xì)胞融合的目的中最重要的是-（ ）A.克服遠(yuǎn)緣雜交不親和克服遠(yuǎn)緣雜交不親和 B. 制備單克隆抗體制備單克隆抗體 C.培育新品種培育新品種 D.生產(chǎn)雜種細(xì)胞生產(chǎn)雜種細(xì)胞3.動物細(xì)胞融合與植物體細(xì)胞雜交的比較中，正確的是動物細(xì)胞融合與植物體細(xì)胞雜交的比較中，正確的是（ ）誘導(dǎo)融合的方法完全相同誘導(dǎo)融合的方法完全相同 B.所用的技術(shù)手段基本相同所用的技術(shù)手段基本相同 C. 所采用的原理完全相同所采用的原理完全相同 D. 都能形成雜種細(xì)胞都能形成雜種細(xì)胞 B D204. 單克隆抗體制備過程中培育的雜交細(xì)胞是單克隆抗體制備過程中培育的雜交細(xì)胞是