有機物的分離和結構鑒定

1、第二章有機物提取收集方法2.1 溶劑提取法一.溶劑提取法：1 .溶劑提取法：利用相似相溶原理選擇合適的溶劑將有機物從待分離和結構鑒定的樣品中提取出來。2 .原理：利用有機物在溶劑和樣品中的溶解度的差異。（關鍵：選用合適的溶劑）二.溶劑的選擇：水；有機溶劑。1 .極性：指溶劑對電荷的親和能力，常用介電常數來比較溶劑的極性大小。2 .水：適用于無機鹽、單和低聚糖、糅質、氨基酸、蛋白質及多肽、有機酸、生物堿和甘類（適當時可用稀酸或稀堿水溶液提取）。3 .有機溶劑：4 .溶劑選擇原則：極性物質易溶于極性溶劑；非極性物質易溶于非極性溶劑；堿性物質易溶于酸性溶劑；酸性物質易溶于堿溶劑。溶劑的惰性：（針對性

2、）化學惰性：指溶劑本身不能和有機物發(fā)生化學反應而導致有機物結構變化。溶劑的混合：溶劑的去除：盡可能選用低沸點易揮發(fā)的溶劑。樣品的形態(tài)：提取溫度和時間等。3 .提取方法：1 .液一氣提取法：選擇合適的溶劑，將氣態(tài)樣品通過溶劑（將有機物溶解并吸收）C裝置：導氣管、溶劑池、動力泵和氣體流量計等。<要點：盡可能使氣體與溶劑有較大的接觸面積。溶劑：水、親水或親脂有機溶劑。I例：用5%甲醇溶液收集有機磷農藥；用10%乙醇溶液收集硝基苯。2 .液一周提取法：原理方法：將固體樣品放入溶劑中浸泡（必要時進行振蕩和加熱處理），一定的時間后通過離心或過濾操作將溶劑和固體分開。間接：I連續(xù)：saxhlet提取器

3、分配系數E=C有/C水.（水相一有機相）（可用分液漏斗）JE大，有機物易從水相轉移到有機相，LE小，相反。（可用連續(xù)液一液萃?。┓忠郝┒凡僮髯⒁恻c：分液漏斗容量應比液體體積大1倍以上，加入溶劑的體積約為樣品體積的1/3左右；防止有機蒸氣沖開活塞；萃取振蕩應間歇進行，并將分液漏豆下部分出口朝上并面對通風柜打開活塞放氣；下層液由下部出口放出，長層液由上部出口倒出；各次萃取液合并。連續(xù)逆流萃?。╟ountercurrentdistribution）：適用于E很小的強親水有機物的萃取。乳化：可通過靜止，加鹽或其它有機溶劑，過濾和離心等方法破乳（細金屬絲與容器壁摩擦）。無機鹽：NaCl、Na2SO4等。

4、1有機溶劑：甲醇等。離心：2000rmin-1,2min。4 .常見有機物的溶劑提取通法：1 .溶劑梯度和極性溶劑直接提取方法：溶劑梯度提取方法：低極性溶劑提取（石油醴、正己烷）一脂溶性物質一葉綠素、油脂、蠟等雜質;中極性溶劑提取（氯仿、乙醴）一中性物質一雜質較少；高極性溶劑提?。ㄒ宜嵋阴ァ⒓状迹┮桓邩O性物質一樹脂、蛋白質、糖等雜質。極性溶劑梯度法：2 .提取通法：生物堿類物質：用甲醇浸提樣品，浸提液除去甲醇后加5mL2啕HCl溶液溶解殘渣。酸水加23滴Dragendoff或Wagner試劑。如有黃棕色或紅棕色沉淀，表明樣品中含有生物堿物質。Dragendoff試齊1J（碘化鈿鉀試劑）：取次硝

5、酸鈿8g,溶于17mL30的HNO§液中,攪拌下緩慢滴加到含有27.2gKI的20mL*溶液中，靜谿過夜，上層清液加水稀釋至100mL即成?；蛑苯訉?6g碘化鈿，30gKI和3mLHC蛀溶于100mLzK中。Wagner試劑（碘一碘化鉀試劑）：將1g碘和10gKI共溶于50mLK中，加熱條件下加入2mL乙酸，用水稀釋至100mL酸水提取方法：先用1%左右稀酸水溶液浸提樣品，酸水浸提液再加有機溶劑并用稀堿堿化，分離出有機相并濃縮可得到生物堿粗品（室溫下進行）。親水溶劑提取法：用甲醇和乙酸等親水溶劑直接提取樣品，一般在加熱回流的條件下進行（提取效率不如酸水提取法）。親脂溶劑提取方法：用1

6、0%R水或碳酸鈉水溶液使樣品中生物堿全部轉為游離狀態(tài)，然后用苯、氯仿和乙醴等溶劑提?。ㄟx擇性高、雜質少、效率低）。酚類物質：可用1%E氯化鐵或三氯化鐵一鐵氟化鉀水或醇溶液鑒別酚類物質（藍色、綠色或紫色配合物）。提取：可用稀堿水溶液提取（可以加熱），提取液冷卻和濃縮可以直接得到酚鹽。稀酸中和堿性水提取液再用乙酸乙酯等溶劑萃取。黃酮類物質：鑒別：（鎂粉鹽酸反應）將樣品用鉀醇浸提后取1mL浸提液并加少許鎂粉，再添加34滴濃鹽酸（必要時加熱），黃酮：橙色和微紅色；黃酮醇、二氫黃酮醇分別呈紅、紫、綠和藍色。提?。核崛?，6070c水提取液濃縮后，加入34倍量的乙醇至水提濃縮液中，使蛋白質和糖類物質沉淀析

7、出，過濾濃縮醇水溶液可得到黃酮。醇提?。簩悠吩?0猿醇中加熱回流，提取液趁熱過濾，濾渣反復洗滌，合并濾液和洗液，用乙酸乙酯萃取可得到黃酮類物質。慈釀類物質（天然的色素）：檢驗：堿試驗（Borntrager反應）：1mL樣品的醇浸提液，先加12滴10%勺NaOH溶液，試驗呈深紅色，再加NaOK加熱，深紅不褪，但加10%勺HCl溶液則褪色，冉加堿，試驗又呈深紅色。提?。合葘悠吩?0%酸水中水解，然后用苯萃取酸水液可得到慈釀類物質。糖甘：用90%乙醇加熱提取，提取液濃縮后，分別用苯或氯仿、水萃取，有機相可得到游離的慈釀物質，水相可得糖甘蔥釀。香豆素及內酯化合物：鑒別：樣品的95%的乙醇溶液浸提液

8、加入數滴飽和鹽酸羥胺和氫氧化鉀乙醇溶液，加熱數分鐘后冷卻，試樣用5%的HCl溶液調至酸性，再加10%三氯化鐵水溶液12滴，若試樣呈紫色則表明樣品中含有香豆素及內酯物質。提?。海ㄌ荻热軇┓ǎ┫扔檬王返鹊蜆O性溶劑將大多數親脂性的香豆素及內酯提取出來，然后繼續(xù)用乙醴等中極性溶劑提取相應極性的香豆素及內酯（若還有較強極性香豆素及內酯可繼續(xù)用甲醇、乙醇甚至水為溶劑進行提取）。強心甘類物質：鑒別（三氯化鐵一冰乙酸試劑KellerKiliani反應）：將生物樣品研碎后用甲醇提取，醇浸提液在試管中濃縮后加0.5%的三氯化鐵一冰乙酸溶液12mL,然后沿試管壁小心加入等體積濃硫酸，若硫酸和冰乙酸界面會很快出現紅

9、棕色環(huán)，上層冰乙酸逐漸變?yōu)樗{色，則表明試樣中含有強心甘。提?。?0%以上乙醇破壞酶的活性，再用有機溶劑提取，也可用混合溶劑（氯仿一甲醇一水）提取。皂甘類物質：鑒別：將樣品的水提液在試管中用力振搖數分鐘，若產生泡沫并在10min以后不消失，則可肯定樣品中含有皂甘。乙酸酊一濃硫酸反應（LiebermanrBurchard反應）：取樣品水提液3mL并蒸干，殘渣用0.5mL乙酸酊溶解放入試管或比色盤中，從邊沿小心加濃硫酸1滴，試樣出現顏色變化，一般由黃色變?yōu)榧t色、紫色、藍色或綠色，如果是番體皂甘，顏色變化較快，最后呈污綠色，如果是三菇皂昔則最終呈藍色。提?。嚎捎?070%甲醇或乙醇為溶劑提取（熱醇中溶

10、解，冷醇中的溶解度降低），提取液冷卻，過濾，濾液濃縮后加入適量乙醴或丙酮，可以析出其它皂甘。水提取：將樣品放入熱水中并加熱，水提取液濃縮后，加入二倍量95%乙醇溶液，使蛋白質和糖類沉淀并濾去，濾液中加入適量乙醴可析出皂昔。第三章.有機物常規(guī)分離方法§ 3.1 蒸儲法一.簡單蒸儲（組份少且各組份間沸點相差較大30C以上的混合液體有機物的分離。）1 .操作裝置：蒸儲瓶、蒸儲頭、溫度計、冷凝管、接受瓶等組成。2 .操作要點：2 .分儲（精儲）：沸點相差30c以上不用分儲柱，相差20c左右時選用簡單的分儲柱，相差約10c時選用精細的分儲柱，相差10c以下時選復雜精細的分儲柱。3 .減壓蒸儲：

11、§ 3.2 結晶和沉淀法一.基本原理和基本操作：1 .溶劑的選擇：所選溶劑應不與固體有機物發(fā)生化學反應，尤其在加熱條件下，溶劑沸點不易太高（以便結晶后除去），且毒性小，價格便宜等。溶劑應能使一種固體有機物在其中的溶解度隨溫度變化越大越好，而使另一種固體有機物要么在高低溫溶解度都大，要么在高低溫溶解度都很小?；旌先軇┑倪x用：一般由兩種溶劑組成，一種溶劑對固體有機物有很好的溶解性能，另一種則難以溶解固體有機物，且兩種溶劑必須是任意混溶的（如水一甲醇、石油醴一苯、乙醴一丙酮和氯仿一甲醇等）。使用混合溶劑重結晶時，可將不同的溶劑按比例預先混合好，但經常采用的操作是將固體有機固體放在溶解性能好

12、的溶劑中，加熱回流后濾去不溶物后，濾液趁熱滴加另一種溶解性能差的溶劑，使濾液至渾濁為止，再加熱回流或滴加溶劑性能好的溶劑使濾液再變清后放置冷卻（若冷卻放置沒有固體析出或析出油狀物，則需調整兩溶劑的比例）。預實驗：取100mg固體有機混合物放入試管中，滴加1mL溶劑，振蕩觀察試樣溶解情況，若很快溶解，表明溶劑對試樣溶解性太好，不適合選用，若試樣不溶解，且加熱至沸騰并補加34倍溶劑，仍難溶解，表明該溶劑溶解性能太差，也不能選用，只有在加熱條件下，使用14mL就能溶解100mg試樣，并能在冷卻情況下析出固體的溶劑才能選作結晶的溶劑。2 .結晶或重結晶的操作：使用回流裝置3 .沉淀法：沉淀劑：乙酸鉛中

13、性I堿性中性乙酸鉛：有機酸、酸性皂甘、部分黃酮、蛋白質、氨基酸、糅質、樹脂等酸性和酚性物質生成沉淀。:堿性乙酸鉛：能沉淀中性乙酸鉛的物質外，還能沉淀醇、酮、醛、異黃酮、部分生物堿和糖類有機物。乙酸沉淀法分離植物體有機物：脫鉛：硫化氫、硫酸、強酸性陽離子交換樹脂等。二.應用實例：1.小集堿（berberine及相關生物堿的提取分離：藥用價值（“黃連素”的主要成份）與其伴生的有：藥根堿（jatrorrhizine）、巴馬亭（palmatime）、小聚胺（berbamine污。§3.3固相萃取和膜分離技術一.周相萃取技術(SolidPhaseExtractionSPE)：1 .原理：2 .分離模式：正相：吸附劑的極性大于洗脫液極性，吸附劑中有機物依洗脫劑的極性從小到大順序被洗脫出來。反相：吸附劑極性小于洗脫液極性，有機物依洗脫溶劑極性從大到小順序被洗脫出來。3 .分離模式的