第十章維生素測定

1、重重 點(diǎn)點(diǎn)l 維生素的分類、主要理化性質(zhì)。維生素的分類、主要理化性質(zhì)。l 維生素維生素A 、維生素、維生素B1、維生素、維生素C的的測定方法。測定方法。第十章第十章 維生素的測定維生素的測定第一節(jié)第一節(jié) 概概 述述 維生素既不是構(gòu)成機(jī)體組織的基本原料，也不是維生素既不是構(gòu)成機(jī)體組織的基本原料，也不是機(jī)體的供能物質(zhì)，它是一類需求量極少、人體不能機(jī)體的供能物質(zhì)，它是一類需求量極少、人體不能合成（或合成量很少）、主要以輔酶的形式參與代合成（或合成量很少）、主要以輔酶的形式參與代謝調(diào)節(jié)，是維持人體正常生命活動所謝調(diào)節(jié)，是維持人體正常生命活動所必需必需的天然有的天然有機(jī)化合物。目前已確認(rèn)的有機(jī)化合物。目

2、前已確認(rèn)的有30余種，其中被認(rèn)為至余種，其中被認(rèn)為至關(guān)重要的有關(guān)重要的有20余種。這些維生素結(jié)構(gòu)復(fù)雜，理化性余種。這些維生素結(jié)構(gòu)復(fù)雜，理化性質(zhì)及生理功能各異，有的屬于醇類，有的屬于胺類，質(zhì)及生理功能各異，有的屬于醇類，有的屬于胺類，有的屬于酯類，還有的屬于酚或醌類化臺物。有的屬于酯類，還有的屬于酚或醌類化臺物。C H2C H3C H3C H3C H3C H2O HCH3CH3CH3CH3CH3CH2OHCH3CH3CH3CH3CH3CH3CH3CH3CH3CH3CH3CH3CH3OHCH3CH3CH3C H3C H3OHCH3CH3OCH3CH3CH3CH3CH3R1R3R2OHOCH3CH3

3、CH3CH3CH3R1R3R2OHVA17 7脫氫膽固醇脫氫膽固醇 生育三烯酚生育三烯酚生育酚生育酚 胡蘿卜素胡蘿卜素 VA2維生素維生素D D3 3( (膽鈣化醇膽鈣化醇) ) 維生素分類：維生素分類：脂溶性（脂溶性（A、D、E、K） 水溶性（水溶性（B族、族、C）測定意義測定意義1、評價(jià)食品的營養(yǎng)價(jià)值；、評價(jià)食品的營養(yǎng)價(jià)值；2、尋找富含維生素的食品資源；、尋找富含維生素的食品資源；3、指導(dǎo)人們合理調(diào)整膳食結(jié)構(gòu)，防止維生素缺、指導(dǎo)人們合理調(diào)整膳食結(jié)構(gòu)，防止維生素缺乏癥或維生素中毒；乏癥或維生素中毒；4、研究維生素在食品加工、貯存等過程中的穩(wěn)、研究維生素在食品加工、貯存等過程中的穩(wěn)定性，指導(dǎo)人

4、們制定合理的工藝及貯存條件；定性，指導(dǎo)人們制定合理的工藝及貯存條件；5、監(jiān)督維生素強(qiáng)化食品的強(qiáng)化劑量。、監(jiān)督維生素強(qiáng)化食品的強(qiáng)化劑量。食品分析的重要內(nèi)容食品分析的重要內(nèi)容測定方法測定方法優(yōu)點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)缺點(diǎn)生物鑒定法生物鑒定法不用詳盡分離不用詳盡分離費(fèi)時(shí)費(fèi)力費(fèi)時(shí)費(fèi)力微生物法微生物法選擇性高，主要用于水溶性選擇性高，主要用于水溶性V操作繁瑣，耗時(shí)過長操作繁瑣，耗時(shí)過長紫外法、熒光法紫外法、熒光法靈敏、快速、有較好的選擇性靈敏、快速、有較好的選擇性柱、紙、薄層層柱、紙、薄層層析析高分離效能，可分離、純化、高分離效能，可分離、純化、定性、定量定性、定量高壓液相色譜和高壓液相色譜和氣相色譜氣相色譜可同時(shí)完

5、成多種可同時(shí)完成多種V及其異構(gòu)體及其異構(gòu)體的分離、檢測的分離、檢測比色法比色法簡便、快速、不需特殊儀器簡便、快速、不需特殊儀器第二節(jié)第二節(jié) 脂溶性維生素的測定脂溶性維生素的測定 VA、VD、VE與脂類一起共存于食物中，攝食與脂類一起共存于食物中，攝食時(shí)可吸收，可在體內(nèi)積貯。時(shí)可吸收，可在體內(nèi)積貯。 脂溶性維生素具有以下理化性質(zhì)：脂溶性維生素具有以下理化性質(zhì)： 1溶解性：不溶于水，易溶于脂肪、乙醇、溶解性：不溶于水，易溶于脂肪、乙醇、丙酮、氯仿、乙醚、苯等有機(jī)溶劑。丙酮、氯仿、乙醚、苯等有機(jī)溶劑。 2耐酸堿性：維生素耐酸堿性：維生素A、D對酸不穩(wěn)定，對酸不穩(wěn)定， 對堿對堿穩(wěn)定，維生素穩(wěn)定，維生素

6、E對堿不穩(wěn)定，但在抗氧化劑存在對堿不穩(wěn)定，但在抗氧化劑存在下或惰性氣體保護(hù)下，也能經(jīng)受堿的煮沸。下或惰性氣體保護(hù)下，也能經(jīng)受堿的煮沸。 3耐熱性、耐氧化性：耐熱性、耐氧化性： 耐熱性耐熱性 氧化性氧化性VA 好，能經(jīng)受煮沸好，能經(jīng)受煮沸 易被氧化易被氧化 （光、熱促進(jìn)其氧化）（光、熱促進(jìn)其氧化）V D 好，能經(jīng)受煮沸好，能經(jīng)受煮沸 不易被氧化不易被氧化 V E 好，能經(jīng)受煮沸好，能經(jīng)受煮沸 在空氣中能慢慢在空氣中能慢慢 被氧化被氧化 （光熱堿促進(jìn)其氧化）光熱堿促進(jìn)其氧化） 根據(jù)上述性質(zhì)，測定脂溶性維生素時(shí)，通常：根據(jù)上述性質(zhì)，測定脂溶性維生素時(shí)，通常：皂化樣品皂化樣品 水洗去除類脂物水洗去除類

7、脂物 有機(jī)溶劑有機(jī)溶劑提取脂溶性維生素提取脂溶性維生素(不皂化物不皂化物) 濃縮濃縮 溶于適當(dāng)?shù)娜軇┤苡谶m當(dāng)?shù)娜軇?測定。測定。 在皂化和濃縮時(shí)，為防止維生素的氧化分解，在皂化和濃縮時(shí)，為防止維生素的氧化分解，常加入抗氧化劑常加入抗氧化劑( (如焦性沒食子酸、維生素如焦性沒食子酸、維生素C C等等) )。 對于對于A、D、E共存的樣品，或雜質(zhì)含量高的共存的樣品，或雜質(zhì)含量高的樣品，在皂化提取后，還需進(jìn)行層析分離。樣品，在皂化提取后，還需進(jìn)行層析分離。一、維生素一、維生素A的測定的測定 維生素維生素A存在于動物性脂肪中，主要來源于存在于動物性脂肪中，主要來源于肝臟、魚肝油、蛋類、乳類等動物性食品

8、中。植肝臟、魚肝油、蛋類、乳類等動物性食品中。植物性食品中不含物性食品中不含VA，但在深色果蔬中含有胡蘿卜，但在深色果蔬中含有胡蘿卜素，它在人體內(nèi)可轉(zhuǎn)變?yōu)樗?，它在人體內(nèi)可轉(zhuǎn)變?yōu)閂A，故稱為，故稱為VA原。原。 樣品樣品皂化（含皂化（含VcVc及及內(nèi)標(biāo)物）內(nèi)標(biāo)物）乙醚提取乙醚提取水洗水洗揮去乙醚揮去乙醚乙醇乙醇溶解提取物溶解提取物色譜分析色譜分析C18反相柱分離，甲醇反相柱分離，甲醇-水為流動相，紫水為流動相，紫外檢測器，保留時(shí)間定性，內(nèi)標(biāo)法定量。外檢測器，保留時(shí)間定性，內(nèi)標(biāo)法定量。（一）高效液相色譜法同時(shí)測定（一）高效液相色譜法同時(shí)測定VA 和和VE P 193-194 GB/T 5009.8

9、22003中第一法中第一法 （二）二）比色法測定比色法測定VA（GB/T 5009.822003中第二法）中第二法） 原理原理 在氯仿溶液中，在氯仿溶液中，VA與三氯化銻可生成藍(lán)色可溶與三氯化銻可生成藍(lán)色可溶性絡(luò)合物，在性絡(luò)合物，在 620 nm 波長處有最大吸收峰，其吸波長處有最大吸收峰，其吸光度與光度與VA的含量在一定的范圍內(nèi)成正比，故可比色的含量在一定的范圍內(nèi)成正比，故可比色測定。測定。測定步驟：測定步驟：皂化：皂化：適量樣品于三角瓶中適量樣品于三角瓶中加加10ml 1 1 KOH及及20-40ml 乙醇乙醇回流回流30min。提?。禾崛。涸砘阂迫敕忠郝┒?，乙醚提取不皂化物。皂化液移入

10、分液漏斗，乙醚提取不皂化物。洗滌：洗滌：水洗、稀水洗、稀KOH洗、水洗至中性。洗、水洗至中性。濃縮：濃縮：醚層經(jīng)無水醚層經(jīng)無水Na2SO4濾入三角瓶中濾入三角瓶中回收乙醚回收乙醚至干至干CHCl3溶解。溶解。標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制于數(shù)只于數(shù)只3cm比色皿中分別加入比色皿中分別加入 1mlVA各標(biāo)準(zhǔn)系列液，各各標(biāo)準(zhǔn)系列液，各加加1滴乙酸酐。在滴乙酸酐。在620nm處，以處，以10ml CHCl3 加加1滴乙酸滴乙酸酐調(diào)零點(diǎn)，然后用注射器迅速加入酐調(diào)零點(diǎn)，然后用注射器迅速加入9ml SbCl3-CHCl3溶溶液，于液，于6s內(nèi)測內(nèi)測A（或最大值）。繪制曲線。（或最大值）。繪制曲線。樣品測定：樣品

11、測定：取取1ml樣液，同上測樣液，同上測A。 該法的主要缺點(diǎn)是生成的藍(lán)色絡(luò)合物的穩(wěn)定性該法的主要缺點(diǎn)是生成的藍(lán)色絡(luò)合物的穩(wěn)定性差。比色測定必須在差。比色測定必須在 ，否則藍(lán)色會迅，否則藍(lán)色會迅速消退，將造成極大誤差。速消退，將造成極大誤差。6秒鐘內(nèi)完成秒鐘內(nèi)完成豬肝樣品用研磨法豬肝樣品用研磨法注意：注意：1. 維生素維生素A見光易分解，實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在微弱光線見光易分解，實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在微弱光線下進(jìn)行，或采用棕色玻璃避光。下進(jìn)行，或采用棕色玻璃避光。2. 三氯化銻腐蝕性強(qiáng)，不能沾在手上，三氯化銻三氯化銻腐蝕性強(qiáng)，不能沾在手上，三氯化銻遇水生成白色沉淀因此用過的儀器要先用稀遇水生成白色沉淀因此用過的儀器

12、要先用稀鹽酸浸泡后再清洗。鹽酸浸泡后再清洗。測定測定V VA A還有：還有：l紫外分光光度法（紫外分光光度法（V VA A的異丙醇溶液在的異丙醇溶液在325nm325nm下下有最大吸收，可測低含量樣品，干擾較多）有最大吸收，可測低含量樣品，干擾較多）l熒光法熒光法 二、二、-胡蘿卜素的測定胡蘿卜素的測定 （GB/T 5009.832003 ）第一方法是）第一方法是HPLC； 第二方法為紙層析法。第二方法為紙層析法。 胡蘿卜素是一種廣泛存在于有色蔬菜和水果中的胡蘿卜素是一種廣泛存在于有色蔬菜和水果中的天然色素，有多種異構(gòu)體和衍生物，總稱為類胡蘿天然色素，有多種異構(gòu)體和衍生物，總稱為類胡蘿卜素，其

13、中在分子結(jié)構(gòu)中含有卜素，其中在分子結(jié)構(gòu)中含有 一紫羅寧殘基的類一紫羅寧殘基的類胡蘿卜素，在人體內(nèi)可轉(zhuǎn)變?yōu)榫S生素胡蘿卜素，在人體內(nèi)可轉(zhuǎn)變?yōu)榫S生素A，故稱為維，故稱為維生素生素A原。如原。如、胡蘿卜素，其中以胡蘿卜素，其中以胡蘿卜胡蘿卜素效價(jià)最高。素效價(jià)最高。 胡蘿卜素原只存在于植物性食品中，但以含胡蘿卜素原只存在于植物性食品中，但以含有胡蘿卜為食物的家禽、獸類、水產(chǎn)動物及其加有胡蘿卜為食物的家禽、獸類、水產(chǎn)動物及其加工產(chǎn)品，以及為著色而添加胡蘿卜素的食品，當(dāng)工產(chǎn)品，以及為著色而添加胡蘿卜素的食品，當(dāng)然也含有胡蘿卜素。然也含有胡蘿卜素。胡蘿卜素的結(jié)構(gòu)如下：胡蘿卜素的結(jié)構(gòu)如下： 胡蘿卜素對熱及酸、堿

14、比較穩(wěn)定，但紫外線胡蘿卜素對熱及酸、堿比較穩(wěn)定，但紫外線和空氣中的氧可促進(jìn)其氧化破壞。因系脂溶性維和空氣中的氧可促進(jìn)其氧化破壞。因系脂溶性維生素，故可用有機(jī)溶劑從食物中提取。生素，故可用有機(jī)溶劑從食物中提取。 胡蘿卜素本身是一種色素，在胡蘿卜素本身是一種色素，在450 nm 波長波長處有最大吸收，故只要能完全分離，便可定性和處有最大吸收，故只要能完全分離，便可定性和定量。但在植物體內(nèi)，胡蘿卜素經(jīng)常與葉綠素、定量。但在植物體內(nèi)，胡蘿卜素經(jīng)常與葉綠素、葉黃素等共存，在提取葉黃素等共存，在提取 一胡蘿卜素時(shí)，這些色一胡蘿卜素時(shí)，這些色素也能被有機(jī)溶劑提取，因此在測定前，必須將素也能被有機(jī)溶劑提取，因

15、此在測定前，必須將胡蘿卜素與其它色素分開。常用的方法有紙層析、胡蘿卜素與其它色素分開。常用的方法有紙層析、柱層析和薄層層析法。柱層析和薄層層析法。原理（原理（紙層析法）紙層析法）： 以丙酮和石油醚提取食物中的胡蘿卜素及其他以丙酮和石油醚提取食物中的胡蘿卜素及其他植物色素；以石油醚為展開劑進(jìn)行紙層析，胡蘿植物色素；以石油醚為展開劑進(jìn)行紙層析，胡蘿卜素極性最小，移動速度最快，從而與其他色素卜素極性最小，移動速度最快，從而與其他色素分離；剪下含胡蘿卜素的區(qū)帶、洗脫后于分離；剪下含胡蘿卜素的區(qū)帶、洗脫后于450nm450nm波長下定量測定（波長下定量測定（總的總的）。）。 脂肪含量高的先皂化脂肪含量高

16、的先皂化三、維生素三、維生素D的測定的測定l指含有抗佝僂病活性的一類物質(zhì)。指含有抗佝僂病活性的一類物質(zhì)。l維生素維生素D 2無天然存在，維生素?zé)o天然存在，維生素D3只存在于某些動物性只存在于某些動物性食物中。但它們都可由維生素食物中。但它們都可由維生素D原原(麥角固醇和麥角固醇和7一脫氫一脫氫膽固醇膽固醇)經(jīng)紫外線照射形成。經(jīng)紫外線照射形成。l測定方法測定方法(一一) 三氯化銻比色法三氯化銻比色法(二二) 高效液相色譜法高效液相色譜法 靈敏度較比色法高靈敏度較比色法高30倍以上，且操作簡便，精度高，倍以上，且操作簡便，精度高，是目前分析維生素是目前分析維生素D的最好方法。的最好方法。第三節(jié)第三

17、節(jié) 水溶性維生素的測定水溶性維生素的測定 水溶性維生素水溶性維生素B1、B2和和C，廣泛存在于動植物，廣泛存在于動植物組織中，飲食來源充足。但是由于它們本身的水組織中，飲食來源充足。但是由于它們本身的水溶性質(zhì)，除滿足人體生理、生化作用外，任何多溶性質(zhì)，除滿足人體生理、生化作用外，任何多余量都會從小便中排出。為避免耗盡，需要經(jīng)常余量都會從小便中排出。為避免耗盡，需要經(jīng)常地由飲食來提供。地由飲食來提供。 水溶性維生素都易溶于水，而不溶于苯、乙醚、水溶性維生素都易溶于水，而不溶于苯、乙醚、氯仿等大多數(shù)有機(jī)溶劑。氯仿等大多數(shù)有機(jī)溶劑。在酸性介質(zhì)中很穩(wěn)定，在酸性介質(zhì)中很穩(wěn)定，既既使加熱也不破壞；但在堿性

18、介質(zhì)中不穩(wěn)定，易于分使加熱也不破壞；但在堿性介質(zhì)中不穩(wěn)定，易于分解，特別在堿性條件下加熱，可大部或全部破壞。解，特別在堿性條件下加熱，可大部或全部破壞。它們易受空氣、光、熱、酶、金屬離子等的影響。它們易受空氣、光、熱、酶、金屬離子等的影響。 維生素維生素B2對光，特別是紫外線敏感，易被光線對光，特別是紫外線敏感，易被光線破壞；破壞； 維生素維生素C對氧、銅離子敏感，易被氧化。對氧、銅離子敏感，易被氧化。 根據(jù)上述性質(zhì)，測定水溶性維生素時(shí)，一般根據(jù)上述性質(zhì)，測定水溶性維生素時(shí)，一般都在酸性溶液中進(jìn)行前處理。都在酸性溶液中進(jìn)行前處理。 維生素維生素Bl、B2 鹽酸水解鹽酸水解 酶解酶解 凈化凈化

19、維生素維生素C通常采用草酸、草酸通常采用草酸、草酸醋酸、偏磷醋酸、偏磷酸酸醋酸溶液直接提取。草酸價(jià)廉，使用方便，醋酸溶液直接提取。草酸價(jià)廉，使用方便，對維生素對維生素C有很好的穩(wěn)定作用。有很好的穩(wěn)定作用。淀粉酶、淀粉酶、木瓜蛋白酶木瓜蛋白酶活性人造沸石、活性人造沸石、硅鎂吸附劑硅鎂吸附劑一、維生素一、維生素Bl的測定的測定 維生素維生素Bl又名硫胺素、抗神經(jīng)炎素，通常以又名硫胺素、抗神經(jīng)炎素，通常以游離態(tài)，或以焦磷酸酯形式存在于自然界。在酵游離態(tài)，或以焦磷酸酯形式存在于自然界。在酵母、米糠、麥胚、花生、黃豆以及綠色蔬菜和牛母、米糠、麥胚、花生、黃豆以及綠色蔬菜和牛乳、蛋黃中含量較為豐富。乳、蛋

20、黃中含量較為豐富。 分析方法：分析方法：GB/T 5009.842003中唯一的方中唯一的方法是熒光計(jì)法（書中介紹）。法是熒光計(jì)法（書中介紹）。目前較先進(jìn)簡便的方法是高效液相色譜法目前較先進(jìn)簡便的方法是高效液相色譜法原理：原理： 硫胺素在堿性介質(zhì)中可被鐵氰化鉀氧化產(chǎn)生硫硫胺素在堿性介質(zhì)中可被鐵氰化鉀氧化產(chǎn)生硫色素，在紫外光照射下產(chǎn)生藍(lán)色熒光，可借此以色素，在紫外光照射下產(chǎn)生藍(lán)色熒光，可借此以熒光比色法定量。熒光比色法定量。 ex =365nm em=435nm比較法定量比較法定量見見P197計(jì)算式計(jì)算式步驟：步驟：P197二、維生素二、維生素B 2的測定的測定 VB2即核黃素。在食品中以游離形

21、式或磷酸即核黃素。在食品中以游離形式或磷酸酯等結(jié)合形式存在。膳食中的主要來源是各種動酯等結(jié)合形式存在。膳食中的主要來源是各種動物性食品，其中以肝、腎、心、蛋、奶含量最多，物性食品，其中以肝、腎、心、蛋、奶含量最多，其次是植物性食品的豆類和新鮮綠葉蔬菜。其次是植物性食品的豆類和新鮮綠葉蔬菜。 分析方法：分析方法： GB/T 5009.852003中第一法為熒光法。中第一法為熒光法。 第二法為微生物法。第二法為微生物法。HPLC簡便、快速簡便、快速利用自身熒光利用自身熒光微生物法原理：微生物法原理： 某一種微生物的生長（繁殖）必需某些維生某一種微生物的生長（繁殖）必需某些維生素。例如干酪乳酸桿菌的

22、生長需要核黃素，培養(yǎng)素。例如干酪乳酸桿菌的生長需要核黃素，培養(yǎng)基中若缺乏這種維生素該細(xì)菌便不能生長。在一基中若缺乏這種維生素該細(xì)菌便不能生長。在一定條件下，該細(xì)菌生長情況，以及它的代謝物乳定條件下，該細(xì)菌生長情況，以及它的代謝物乳酸的濃度與培養(yǎng)基中該維生素含量成正比，因此酸的濃度與培養(yǎng)基中該維生素含量成正比，因此可以用酸度及混濁度的測定法來測定試樣中核黃可以用酸度及混濁度的測定法來測定試樣中核黃素的含量。素的含量。三、維生素三、維生素C的測定的測定 維生素維生素C是一種己糖醛基酸，有抗壞血病的是一種己糖醛基酸，有抗壞血病的作用，所以又稱作抗壞血酸。維生素作用，所以又稱作抗壞血酸。維生素C廣泛存

23、在廣泛存在于植物組織中，新鮮的水果、蔬菜，特別是棗、于植物組織中，新鮮的水果、蔬菜，特別是棗、辣椒、獼猴桃、柑桔等食品中含量尤豐富。辣椒、獼猴桃、柑桔等食品中含量尤豐富。 維生素維生素C具有較強(qiáng)的還原性，對光敏感，氧具有較強(qiáng)的還原性，對光敏感，氧化后的產(chǎn)物稱為脫氫抗壞血酸，仍然具有生理活化后的產(chǎn)物稱為脫氫抗壞血酸，仍然具有生理活性。進(jìn)一步水解則生成性。進(jìn)一步水解則生成2，3 -二酮古樂糖酸，失二酮古樂糖酸，失去生理作用。去生理作用。食品分析中的所謂總抗壞血酸食品分析中的所謂總抗壞血酸是指？是指？(一一) 2，6二氯靛酚滴定法二氯靛酚滴定法 1原理原理 還原型抗壞血酸可以定量還原染料還原型抗壞血

24、酸可以定量還原染料2，6-二氯靛二氯靛酚。該染料在酸性溶液中呈粉紅色（在中性或堿酚。該染料在酸性溶液中呈粉紅色（在中性或堿性溶液中呈藍(lán)色），被還原后顏色消失。性溶液中呈藍(lán)色），被還原后顏色消失。 還原型抗壞血酸還原染料后，本身被氧化成脫還原型抗壞血酸還原染料后，本身被氧化成脫氫抗壞血酸。在沒有雜質(zhì)干擾時(shí)，一定量的樣品氫抗壞血酸。在沒有雜質(zhì)干擾時(shí)，一定量的樣品提取液還原標(biāo)準(zhǔn)染料液的量，與樣品中抗壞血酸提取液還原標(biāo)準(zhǔn)染料液的量，與樣品中抗壞血酸含量成正比。含量成正比。OOHOHHOHHCH2OHO+ONClClOHOOOHOHOHCH2OH+OClClNOHH還原型抗壞血酸還原型抗壞血酸 染料染料

25、(粉紅色粉紅色) 脫氫抗壞血酸脫氫抗壞血酸 染料染料(無色無色)測定步驟：測定步驟：1. Vc標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制2. Vc標(biāo)準(zhǔn)溶液的標(biāo)定（用標(biāo)準(zhǔn)溶液的標(biāo)定（用KIO3）3. 樣品溶液的制備（用草酸提取）樣品溶液的制備（用草酸提?。?. 靛酚的標(biāo)定（用靛酚滴靛酚的標(biāo)定（用靛酚滴Vc標(biāo)液）標(biāo)液）5. 樣品溶液的測定（用靛酚滴樣液）樣品溶液的測定（用靛酚滴樣液）6. 計(jì)算計(jì)算標(biāo)定：準(zhǔn)確吸取標(biāo)定：準(zhǔn)確吸取VcVc標(biāo)準(zhǔn)液標(biāo)準(zhǔn)液5 5毫升于毫升于5050毫升錐形毫升錐形瓶中，加入瓶中，加入6%6%碘化鉀溶液碘化鉀溶液0.50.5毫升，毫升，1%1%淀粉溶淀粉溶液液3 3滴，再以滴，再以1.667

26、1.6671010-4-4mol/Lmol/L碘酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶碘酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，終點(diǎn)為淡蘭色，按下式計(jì)算：液滴定，終點(diǎn)為淡蘭色，按下式計(jì)算：抗壞血酸濃度（毫克抗壞血酸濃度（毫克/ /毫升）毫升）= =V V1 1滴定時(shí)所耗滴定時(shí)所耗1.6671.6671010-4-4mol/Lmol/L碘酸鉀的碘酸鉀的毫升數(shù)毫升數(shù)0.08810.0881毫升毫升1.6671.6671010-4-4mol/Lmol/L碘酸鉀標(biāo)準(zhǔn)碘酸鉀標(biāo)準(zhǔn)液相當(dāng)于液相當(dāng)于VcVc的量（毫克的量（毫克/ /毫升）毫升）10.0885V 注意：注意：提取提取VC時(shí)（或配時(shí)（或配VC標(biāo)液）加入標(biāo)液）加入H2C2O4溶液，其作用是溶液，其

27、作用是防止防止VC氧化損失。因氧化損失。因VC在酸性溶液中穩(wěn)定（在酸性溶液中穩(wěn)定（H2C2O4能抑能抑制抗壞血酸氧化酶）。制抗壞血酸氧化酶）。提取時(shí)要盡量避光，避氧氣進(jìn)入，測定過程要迅速，以提取時(shí)要盡量避光，避氧氣進(jìn)入，測定過程要迅速，以減少減少VC的氧化。的氧化。深色樣液采用白陶土脫色（之前測回收率）。深色樣液采用白陶土脫色（之前測回收率）。如何減少樣中其它還原性雜質(zhì)的干擾？如何減少樣中其它還原性雜質(zhì)的干擾？滴定樣液時(shí)，滴加靛酚盡量地快，（一般雜質(zhì)還原染料滴定樣液時(shí)，滴加靛酚盡量地快，（一般雜質(zhì)還原染料的速度比的速度比VC慢）。慢）。也可取樣液加少量也可取樣液加少量Cu2+，破壞，破壞VC，然后用染料滴定，扣，然后用染料滴定，扣除此校正值。除此校正值。(二二)熒光法熒光法GB/T 5009.862003 第一法第一法l樣品還原型抗壞血酸經(jīng)活性炭氧化為脫氫抗壞酸后，樣品還原型抗壞血酸經(jīng)活性炭氧化為脫氫抗壞酸后，與鄰苯二胺（與鄰苯二胺（OPDAOPDA）反應(yīng)生成有熒光的喹喔啉，其熒）反應(yīng)