第二章紫外可見(jiàn)分光光度法

1、紫外可見(jiàn)分光光度法劉曉燕&qqqqq朗伯比耳定律、朗伯比耳定律、。朗伯比耳定律。朗伯比耳定律。第一章分光光度分析第一章分光光度分析(Vis-UV Spectrophotometry)第二章 紫外可見(jiàn)分光光度法 分光光度法是根據(jù)物質(zhì)的吸收光譜和光的吸收定律，對(duì)物質(zhì)進(jìn)行定量、定性分析的一種儀器分析方法。 根據(jù)測(cè)定時(shí)所選用的光源：可見(jiàn)分光光度法(400800nm) 紫外分光光度法(200400 nm)紅外分光光度法(800nm50m) 11.定性分析各種物質(zhì)具有各自不同的分子、原子和不同的分子空間結(jié)構(gòu)，其吸收光能量的情況也就不會(huì)相同，因此，每種物質(zhì)就有其特有的、固定的吸收光譜曲線(xiàn)2純度的鑒定

2、 用紫外吸收光譜確定試樣的純度是比較方便的。如果一化合物在紫外區(qū)沒(méi)有吸收峰，而其雜質(zhì)有較強(qiáng)吸收，就可方便的檢出該化合物中的痕量雜質(zhì)。3結(jié)構(gòu)分析 紫外-可見(jiàn)吸收光譜一般不用于化合物的結(jié)構(gòu)分析，但利用紫外吸收光譜鑒定化合物中的共軛結(jié)構(gòu)和芳環(huán)結(jié)構(gòu)還是有一定價(jià)值。應(yīng)用5第一節(jié)第一節(jié) 紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)的構(gòu)造紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)的構(gòu)造v分光光度計(jì)工作原理：v 采用一個(gè)可以產(chǎn)生多個(gè)波長(zhǎng)的裝置，通過(guò)系列分光裝置，得到一束平行的波長(zhǎng)范圍很窄的單色光，透過(guò)一定厚度的試樣溶液后，部分光被吸收，剩余的光照射到光電元件上，產(chǎn)生光電流，在儀器上可讀取相應(yīng)的吸光度或透光率，完成測(cè)定。一紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)的基本組成光源光源單

3、色器單色器吸收池吸收池檢測(cè)器檢測(cè)器讀出系統(tǒng)讀出系統(tǒng)1光源 在所需光譜區(qū)域內(nèi)發(fā)射連續(xù)的、足夠強(qiáng)度、穩(wěn)定的輻射光。 可見(jiàn)區(qū)：鎢燈；紫外區(qū)：氫燈、氘燈 通常用通常用612 V鎢絲燈作可見(jiàn)光區(qū)的光源，最鎢絲燈作可見(jiàn)光區(qū)的光源，最適宜的使用范圍在適宜的使用范圍在360800nm。光源應(yīng)該穩(wěn)定，。光源應(yīng)該穩(wěn)定，即要求電源電壓保持穩(wěn)定。為此，通常在儀器內(nèi)同即要求電源電壓保持穩(wěn)定。為此，通常在儀器內(nèi)同時(shí)配有電源穩(wěn)壓器。時(shí)配有電源穩(wěn)壓器。 /nm鎢燈（鎢燈（熱輻射光源熱輻射光源）40040060060080080010001000氙燈（氙燈（氣體放電光源氣體放電光源）氫燈氫燈強(qiáng)度強(qiáng)度氙燈氙燈氫燈氫燈鎢燈鎢燈色散

4、原理：色散原理：依據(jù)不同波長(zhǎng)光通過(guò)棱鏡時(shí)折射率不同分依據(jù)不同波長(zhǎng)光通過(guò)棱鏡時(shí)折射率不同分光光入射狹縫入射狹縫準(zhǔn)直透鏡準(zhǔn)直透鏡棱鏡棱鏡聚焦透鏡聚焦透鏡出射狹縫出射狹縫白光白光紅紅紫紫1 12 2800 600 5004002單色器單色器是將光源發(fā)出的連續(xù)光譜分解為單色光的裝置。單色器由棱鏡或光柵等色散元件及狹縫和透鏡等組成。其中色散元件是關(guān)鍵部件。 棱鏡棱鏡是根據(jù)光的折射原理而將復(fù)合光色散為不是根據(jù)光的折射原理而將復(fù)合光色散為不同波長(zhǎng)的單色光，然后再讓所需波長(zhǎng)的光通過(guò)一個(gè)同波長(zhǎng)的單色光，然后再讓所需波長(zhǎng)的光通過(guò)一個(gè)很窄的狹縫照射到吸收池上。它由玻璃或石英制成。很窄的狹縫照射到吸收池上。它由玻璃或

5、石英制成。玻璃棱鏡用于可見(jiàn)光范圍，石英棱鏡則在紫外和可玻璃棱鏡用于可見(jiàn)光范圍，石英棱鏡則在紫外和可見(jiàn)光范圍均可使用。見(jiàn)光范圍均可使用。光柵：光柵：在鍍鋁的玻璃表面刻有數(shù)量很大的等寬度在鍍鋁的玻璃表面刻有數(shù)量很大的等寬度等間距條痕等間距條痕(600、1200、2400條條/mm )。M1M2出出射射狹狹縫縫光屏光屏透透鏡鏡平面透平面透射光柵射光柵光柵衍射示意圖光柵衍射示意圖原理原理：利用光通過(guò)光柵時(shí)利用光通過(guò)光柵時(shí)發(fā)生衍射和干涉現(xiàn)象而發(fā)生衍射和干涉現(xiàn)象而分光分光. 光柵光柵是根據(jù)光的衍射和干涉原理將復(fù)合光色散為不是根據(jù)光的衍射和干涉原理將復(fù)合光色散為不同波長(zhǎng)的單色光，然后再讓所需波長(zhǎng)的光通過(guò)狹縫

6、同波長(zhǎng)的單色光，然后再讓所需波長(zhǎng)的光通過(guò)狹縫照射到吸收池上。它的分辨率比棱鏡大，可用的波照射到吸收池上。它的分辨率比棱鏡大，可用的波長(zhǎng)范圍也較寬。長(zhǎng)范圍也較寬。v入射狹縫：光源的光由此進(jìn)入單色器，用于限制雜入射狹縫：光源的光由此進(jìn)入單色器，用于限制雜散光進(jìn)入單色器散光進(jìn)入單色器 v 準(zhǔn)直鏡：透鏡或凹面反射鏡，使入射光成為平行光準(zhǔn)直鏡：透鏡或凹面反射鏡，使入射光成為平行光束束 v色散元件：棱鏡或光柵，將復(fù)合光分解成單色光色散元件：棱鏡或光柵，將復(fù)合光分解成單色光v準(zhǔn)直鏡：透鏡或凹面反射鏡，將分光后所得單色光準(zhǔn)直鏡：透鏡或凹面反射鏡，將分光后所得單色光聚焦至出射狹縫聚焦至出射狹縫 v出射狹縫：用于

7、限制通帶寬度出射狹縫：用于限制通帶寬度3吸收池吸收池也稱(chēng)比色皿，用于盛放參比溶液或待測(cè)溶液。它是由無(wú)色透明、耐腐蝕、化學(xué)性質(zhì)相同、它是由無(wú)色透明、耐腐蝕、化學(xué)性質(zhì)相同、厚度相等的玻璃制成的，按其厚度分為厚度相等的玻璃制成的，按其厚度分為0.5 cm，1 cm，2 cm，3 cm和和5 cm。在可見(jiàn)光區(qū)測(cè)量吸。在可見(jiàn)光區(qū)測(cè)量吸光度時(shí)使用玻璃吸收池，紫外區(qū)則使用石英吸收光度時(shí)使用玻璃吸收池，紫外區(qū)則使用石英吸收池。使用比色皿時(shí)應(yīng)注意保持清潔、透明，避免池。使用比色皿時(shí)應(yīng)注意保持清潔、透明，避免磨損透光面。磨損透光面。 使用時(shí)注意點(diǎn)使用時(shí)注意點(diǎn)4檢測(cè)器檢測(cè)器 檢測(cè)器的作用是接受從比色皿發(fā)出的透射光并

8、轉(zhuǎn)檢測(cè)器的作用是接受從比色皿發(fā)出的透射光并轉(zhuǎn)換成電信號(hào)進(jìn)行測(cè)量。分為光電管和光電倍增管。換成電信號(hào)進(jìn)行測(cè)量。分為光電管和光電倍增管。 光電管是一個(gè)真空或充有少量惰性氣體的二極管。光電管是一個(gè)真空或充有少量惰性氣體的二極管。陰極是金屬做成的半圓筒，內(nèi)側(cè)涂有光敏物質(zhì)，陽(yáng)極陰極是金屬做成的半圓筒，內(nèi)側(cè)涂有光敏物質(zhì)，陽(yáng)極為一金屬絲。光電管依其對(duì)光敏感的波長(zhǎng)范圍不同分為一金屬絲。光電管依其對(duì)光敏感的波長(zhǎng)范圍不同分為紅敏和紫敏兩種。紅敏光電管是在陰極表面涂銀和為紅敏和紫敏兩種。紅敏光電管是在陰極表面涂銀和氧化銫，適用波長(zhǎng)范圍為氧化銫，適用波長(zhǎng)范圍為6251 000nm；紫敏光電管；紫敏光電管是陰極表面涂銻

9、和銫，適用波長(zhǎng)范圍為是陰極表面涂銻和銫，適用波長(zhǎng)范圍為200625nm。 光電倍增管是由光電管改進(jìn)而成的，管中有若光電倍增管是由光電管改進(jìn)而成的，管中有若干個(gè)稱(chēng)為倍增極的附加電極。因此，可使光激發(fā)的干個(gè)稱(chēng)為倍增極的附加電極。因此，可使光激發(fā)的電流得以放大，一個(gè)光子約產(chǎn)生電流得以放大，一個(gè)光子約產(chǎn)生106107個(gè)電子。個(gè)電子。它的靈敏度比光電管高它的靈敏度比光電管高200多倍。適用波長(zhǎng)范圍為多倍。適用波長(zhǎng)范圍為160700 nm。光電倍增管在現(xiàn)代的分光光度計(jì)中。光電倍增管在現(xiàn)代的分光光度計(jì)中被廣泛采用。被廣泛采用。 5顯示裝置顯示裝置 顯示裝置的作用是把放大的信號(hào)以吸光度顯示裝置的作用是把放大的

10、信號(hào)以吸光度A或透或透光率光率T的方式顯示或記錄下來(lái)。分光光度計(jì)常用的顯的方式顯示或記錄下來(lái)。分光光度計(jì)常用的顯示裝置是檢流計(jì)、微安表、數(shù)字顯示記錄儀。示裝置是檢流計(jì)、微安表、數(shù)字顯示記錄儀。二、紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)類(lèi)型二、紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)類(lèi)型1. 單光束分光光度計(jì)單光束分光光度計(jì)2. 雙光束分光光度計(jì)雙光束分光光度計(jì)3. 雙波長(zhǎng)分光光度計(jì)雙波長(zhǎng)分光光度計(jì)721分光光度計(jì)分光光度計(jì)0.5750.575光源光源單色器單色器吸收池吸收池檢測(cè)器檢測(cè)器顯示顯示單波長(zhǎng)單光束分光光度計(jì)單波長(zhǎng)單光束分光光度計(jì)簡(jiǎn)單，價(jià)廉，適于在給定波長(zhǎng)處測(cè)量吸光度或透光度，簡(jiǎn)單，價(jià)廉，適于在給定波長(zhǎng)處測(cè)量吸光度或透光度，一般

11、不能作全波段光譜掃描，要求光源和檢測(cè)器具有一般不能作全波段光譜掃描，要求光源和檢測(cè)器具有很高的穩(wěn)定性，且操作麻煩，任一波長(zhǎng)的光均要用參很高的穩(wěn)定性，且操作麻煩，任一波長(zhǎng)的光均要用參比調(diào)比調(diào)T=100T=100后，再測(cè)樣品后，再測(cè)樣品儀器儀器 可見(jiàn)分光光度計(jì)雙光束分光光度計(jì)雙光束分光光度計(jì)自動(dòng)記錄，快速全波段掃描?？上庠床环€(wěn)定、檢測(cè)器靈自動(dòng)記錄，快速全波段掃描?？上庠床环€(wěn)定、檢測(cè)器靈 敏度變化等因素的影響，特別適合于結(jié)構(gòu)分析。儀器復(fù)雜，敏度變化等因素的影響，特別適合于結(jié)構(gòu)分析。儀器復(fù)雜， 價(jià)格較高。價(jià)格較高。儀器儀器 紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)v雙波長(zhǎng)分光光度計(jì)雙波長(zhǎng)分光光度計(jì)光源單色器單色器

12、切光源檢測(cè)器吸收池不需要參比溶液；可以消除背景吸收干擾；適合多組分混不需要參比溶液；可以消除背景吸收干擾；適合多組分混合物、渾濁試樣的定量分析，可進(jìn)行導(dǎo)數(shù)光譜分析。價(jià)格合物、渾濁試樣的定量分析，可進(jìn)行導(dǎo)數(shù)光譜分析。價(jià)格昂貴昂貴三、儀器使用基本流程v紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)1、分光光度計(jì)的保養(yǎng)與維護(hù)2、操作的注意事項(xiàng)3、定性分析依據(jù)？ 定量依據(jù)？定性分析基礎(chǔ)定性分析基礎(chǔ)定量分析基礎(chǔ)定量分析基礎(chǔ)物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收在一定實(shí)驗(yàn)條件下在一定實(shí)驗(yàn)條件下, AcA c增增大大AB )(maxA)(maxBA 第二節(jié)第二節(jié) 紫外可見(jiàn)分光光度法的定性紫外可見(jiàn)分光光度法的定性分析分析1分子吸收光譜

13、的產(chǎn)生 當(dāng)一束光照射到某物質(zhì)或某溶液時(shí)，組成該物質(zhì)的分子、原子或離子等粒子與吸光子作用，光子的能量發(fā)生轉(zhuǎn)移，使這些粒子由低能量軌道躍遷到高能量軌道，即由基態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)榧ぐl(fā)態(tài)。M(基態(tài)) + h M*(激發(fā)態(tài))M(基態(tài)) + h M*(激發(fā)態(tài))這個(gè)過(guò)程即是物質(zhì)對(duì)光的吸收。由于分子、原子或離子的能級(jí)是量子化的，不連續(xù)的，只有光子的能量(h)與被照射物質(zhì)粒子的基態(tài)和激發(fā)態(tài)能量之差(E)相等時(shí)，才能被吸收。不同物質(zhì)的基態(tài)和激發(fā)態(tài)的能量差不同，選擇吸收光子的能量也不同，即吸收的波長(zhǎng)不同。2、光的種類(lèi)具有單一波長(zhǎng)的光叫單色光，比如紅光，藍(lán)光等。 由不同波長(zhǎng)的光組成的光叫復(fù)色光。比如日光等 如果兩種適當(dāng)顏色的單

14、色光按適當(dāng)?shù)膹?qiáng)度比例混合能得到白光，則這兩種顏色的光叫做互補(bǔ)色光。互補(bǔ)色光紫紫紅紅橙橙黃黃綠綠青青藍(lán)藍(lán)青藍(lán)青藍(lán)白光溶液的顏色溶液的顏色KMnO綠光紫色紫色2、吸收光譜曲線(xiàn)、吸收光譜曲線(xiàn)溶液的光吸收曲線(xiàn)溶液的光吸收曲線(xiàn)最大吸收波長(zhǎng)最大吸收波長(zhǎng) maxKMnO4溶液的溶液的 max=525nm max / nm吸吸收收強(qiáng)強(qiáng)度度吸吸收收強(qiáng)強(qiáng)度度特點(diǎn): 具有最大吸收波長(zhǎng)。不同濃度的同一種物質(zhì)，其吸收曲線(xiàn)形狀相似，max不變。但是不同物質(zhì)，其吸收曲線(xiàn)形狀和max不一樣，所以可作為定性分析的依據(jù)。 不同濃度的同一種物質(zhì)，在max處吸光度隨濃度變化的幅度最大，測(cè)定的靈敏度最高，所以通常選取在max處測(cè)量。v

15、3、常用術(shù)語(yǔ)v1）生色團(tuán)：）生色團(tuán)：含有鍵的不飽和基團(tuán)，簡(jiǎn)單的生色團(tuán)由雙鍵或三鍵組成（如乙烯基、乙炔基等）v2）助色團(tuán)：）助色團(tuán)：本身沒(méi)有生色功能（不能吸收波長(zhǎng)大于200nm的光），但當(dāng)與生色團(tuán)連接時(shí)，有增強(qiáng)生色團(tuán)生色能力的基團(tuán)（如OH，NH2，NHR等）3）藍(lán)移（或紫移）：）藍(lán)移（或紫移）：指吸收峰向短波長(zhǎng)方向移動(dòng)，指吸收峰向短波長(zhǎng)方向移動(dòng)， 紅移：紅移：指吸收峰向長(zhǎng)波長(zhǎng)方向移動(dòng)。指吸收峰向長(zhǎng)波長(zhǎng)方向移動(dòng)。 吸收峰強(qiáng)度變化包括增色效應(yīng)和減色效應(yīng)。前吸收峰強(qiáng)度變化包括增色效應(yīng)和減色效應(yīng)。前者指吸收強(qiáng)度增加，后者指吸收強(qiáng)度減小。各種因素者指吸收強(qiáng)度增加，后者指吸收強(qiáng)度減小。各種因素對(duì)吸收譜帶的影

16、響結(jié)果下圖對(duì)吸收譜帶的影響結(jié)果下圖 4、常見(jiàn)有機(jī)化合物的紫外可見(jiàn)吸收光譜、常見(jiàn)有機(jī)化合物的紫外可見(jiàn)吸收光譜（1）270-750nm 無(wú)吸收峰。飽和化合物，單烯。無(wú)吸收峰。飽和化合物，單烯。（2） 270-350 nm有吸收峰（有吸收峰（=10-100L/（mol*cm），），n* 躍遷，含有一個(gè)簡(jiǎn)單的非共軛且含有躍遷，含有一個(gè)簡(jiǎn)單的非共軛且含有n電子的生色團(tuán)電子的生色團(tuán)（3） 250-300 nm 有中等強(qiáng)度的吸收峰有中等強(qiáng)度的吸收峰,（=200-2000L /（mol*cm ），如苯環(huán)。），如苯環(huán)。（4） 210-250 nm有強(qiáng)吸收峰，表明可能含有有強(qiáng)吸收峰，表明可能含有2個(gè)共軛雙鍵；個(gè)共

17、軛雙鍵；在在260nm,300 nm,330 nm有強(qiáng)吸收峰，說(shuō)明是有強(qiáng)吸收峰，說(shuō)明是3個(gè)或個(gè)或3個(gè)以上雙個(gè)以上雙鍵的共軛體系。鍵的共軛體系。 （5)若吸收峰延伸至可見(jiàn)光區(qū)，則可能是長(zhǎng)鏈共軛或稠環(huán)化若吸收峰延伸至可見(jiàn)光區(qū)，則可能是長(zhǎng)鏈共軛或稠環(huán)化合物合物v一、朗伯-比爾定律v v 朗伯-比爾定律是說(shuō)明物質(zhì)對(duì)單色光吸收的強(qiáng)弱與吸光物質(zhì)的濃度和液層厚度間關(guān)系的定律第三節(jié)第三節(jié) 紫外可見(jiàn)分光光度法的定量紫外可見(jiàn)分光光度法的定量分析分析1、透光率和吸光度入射光強(qiáng)度I0，吸收光強(qiáng)度Ia，透過(guò)光強(qiáng)度It， 反射光強(qiáng)度為IrI0 Ia + It + Ir被測(cè)溶液和參比溶液的吸收池同樣材料和厚度，反射光強(qiáng)度影

18、響相互抵消，上式簡(jiǎn)化為I0 Ia + It 透射光的強(qiáng)度 It與入射光的強(qiáng)度I0的 比值稱(chēng)為透光率(T)透光率愈大，溶液對(duì)光的吸收愈少。透光率的負(fù)對(duì)數(shù)稱(chēng)為 吸光度(A)吸光度愈大，溶液對(duì)光的吸收愈多。0tITI0lglgtIATI 1760 年， Lambert 指出：一束平行單色光通過(guò)有色溶液后，光的吸收程度與溶液液層的厚度成正比。A = k1 b1852年，Beer 指出：一束平行單色光通過(guò)有色溶液后，光的吸收程度與溶液的濃度成正比。A = k2 c將 Lambert 定律和 Beer 定律合并起來(lái)，就得到 Lambert-Beer定律。A = K b c2、光的吸收定律、光的吸收定律(L

19、ambert-Beer定律定律)A = K b c c：物質(zhì)的量濃度(mol L-1)b：為液層厚度(cm) K:吸光系數(shù)。v應(yīng)用的條件：v入射光必須是單色光；v吸收發(fā)生在稀的均勻的介質(zhì)中；v吸收過(guò)程中，吸收物質(zhì)互相不發(fā)生作用。3、吸光系數(shù) 其數(shù)值的大小，與物質(zhì)的性質(zhì)、入射光波長(zhǎng)、溶劑種類(lèi)及溶液溫度等因素有關(guān)。當(dāng)波長(zhǎng)等其他因素一定時(shí)，只與物質(zhì)的性質(zhì)有關(guān)。 兩種表示方法： a：質(zhì)量吸光系數(shù)(Lg-1cm-1) ； ：摩爾吸光系數(shù)(Lmol-1cm-1)。特點(diǎn)：v不隨濃度和液層厚度的改變而改變，作為定性鑒別的參數(shù)；v在 max處的摩爾吸光系數(shù)，常用max表示，。不同物質(zhì)的vmax有時(shí)可能相同，但m

20、ax不一定相同，作為定性的依據(jù)；vmax越大表明該物質(zhì)的吸光能力越強(qiáng)，用光度法測(cè)定該物質(zhì)的靈敏度越高例：Cd2+濃度為140 umol L-1 ，雙硫腙法顯色測(cè)定波長(zhǎng)為520nm，液層厚度2cm，吸光度為0.22，求 和T。解：(1)A = b c 0.22 = 2 140 10-6 = 785.7 L mol-1 cm-1(2) A =lgT = 0.22lgT = 0.22T = 100.22 = 0.60 = 60%例例 一有色溶液的濃度為一有色溶液的濃度為c mol/L，透光率為，透光率為T(mén) 。求濃度為原來(lái)的求濃度為原來(lái)的1/2時(shí)，透光率為多少？時(shí)，透光率為多少？解：解： T = 10

21、 - bc c T 例例 有色溶液的液層厚度增加一倍后，透光率和吸有色溶液的液層厚度增加一倍后，透光率和吸光度的改變?yōu)槎嗌?？光度的改變?yōu)槎嗌?？解：解?T = 10 - bc b T A 1/2cT 1/2T2 2A2b4、對(duì)朗伯、對(duì)朗伯比耳定律的偏離比耳定律的偏離v標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)法測(cè)定未知溶液的濃度時(shí)，發(fā)現(xiàn)：標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)常發(fā)生彎曲（尤其當(dāng)溶液濃度較標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)法測(cè)定未知溶液的濃度時(shí)，發(fā)現(xiàn)：標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)常發(fā)生彎曲（尤其當(dāng)溶液濃度較高時(shí)），這種現(xiàn)象稱(chēng)為對(duì)朗伯高時(shí)），這種現(xiàn)象稱(chēng)為對(duì)朗伯比耳定律的偏離。比耳定律的偏離。v 引起這種偏離的因素（兩大類(lèi)）：引起這種偏離的因素（兩大類(lèi)）：v （1）物理性因素，即儀器的非理想

22、引起的；）物理性因素，即儀器的非理想引起的；v （2）化學(xué)性因素。）化學(xué)性因素。1.非單色光引起的偏離非單色光引起的偏離abA2A1A3A4 1 2 3A正偏離正偏離負(fù)偏離負(fù)偏離Ac標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)非單色光的影響非單色光的影響（1）物理性因素物理性因素 單色光不純，導(dǎo)致負(fù)偏差。單色光不純，導(dǎo)致負(fù)偏差。 散射光的影響，膠體、乳濁液或懸濁液散射光的影響，膠體、乳濁液或懸濁液由于散射的作用使吸光度增大，或入射光不由于散射的作用使吸光度增大，或入射光不是垂直通過(guò)比色皿（是垂直通過(guò)比色皿（非平行入射光非平行入射光）產(chǎn)生正偏差）產(chǎn)生正偏差為克服非單色光引起的偏離，首先應(yīng)選擇比較好的單色器為克服非單色光引起

23、的偏離，首先應(yīng)選擇比較好的單色器此外還應(yīng)將入射波長(zhǎng)選定在待測(cè)物質(zhì)的最大吸收波長(zhǎng)且吸此外還應(yīng)將入射波長(zhǎng)選定在待測(cè)物質(zhì)的最大吸收波長(zhǎng)且吸收曲線(xiàn)較平坦處。收曲線(xiàn)較平坦處。(2) (2) 化學(xué)性因素化學(xué)性因素吸光質(zhì)點(diǎn)的相互作用，吸光質(zhì)點(diǎn)的相互作用，濃度較大時(shí)，產(chǎn)生負(fù)偏差，濃度較大時(shí)，產(chǎn)生負(fù)偏差， 朗伯朗伯-比爾定律只適合于稀溶液比爾定律只適合于稀溶液（C 12 Fe(OH)3 沉淀pH1pHpH2選擇曲線(xiàn)中吸光度較大且恒定的平坦區(qū)選擇曲線(xiàn)中吸光度較大且恒定的平坦區(qū)ApH五五.干擾離子的影響及其消除方法干擾離子的影響及其消除方法A、控制溶液酸度、控制溶液酸度B、加入掩蔽劑、加入掩蔽劑C、利用氧化還原反應(yīng)

24、，改變干擾離子的價(jià)態(tài)、利用氧化還原反應(yīng)，改變干擾離子的價(jià)態(tài)D、利用校正系數(shù)、利用校正系數(shù)E、利用參比溶液、利用參比溶液F、選擇適當(dāng)?shù)牟ㄩL(zhǎng)、選擇適當(dāng)?shù)牟ㄩL(zhǎng)G、增加顯色劑用量、增加顯色劑用量H、采用適當(dāng)?shù)姆蛛x方法，分離干擾離子、采用適當(dāng)?shù)姆蛛x方法，分離干擾離子 E.參比溶液參比溶液(空白溶液空白溶液)在測(cè)定時(shí)用空白溶液調(diào)節(jié)儀器在測(cè)定時(shí)用空白溶液調(diào)節(jié)儀器A=0(T =100%),以消除溶液中其它物質(zhì)的干擾以消除溶液中其它物質(zhì)的干擾,抵消比色皿對(duì)光反射、吸收抵消比色皿對(duì)光反射、吸收.1)溶劑參比溶劑參比 試液、試劑、顯色劑均無(wú)色試液、試劑、顯色劑均無(wú)色(無(wú)吸收無(wú)吸收) 則可用溶劑如純水作參比溶液則可用

25、溶劑如純水作參比溶液. 2)試劑參比試劑參比 試液無(wú)色試液無(wú)色, 顯色劑或其它試劑有色顯色劑或其它試劑有色(有吸收有吸收), 則應(yīng)選試劑空白則應(yīng)選試劑空白.3)試液參比試液參比 試劑、顯色劑均無(wú)色試劑、顯色劑均無(wú)色(無(wú)吸收無(wú)吸收),試試液中其它組分有色液中其它組分有色, 則應(yīng)采用不加顯則應(yīng)采用不加顯色劑的試液作參比溶液色劑的試液作參比溶液.v選擇參比溶液的總原則是選擇參比溶液的總原則是:使試液的使試液的吸光度能真正反映待測(cè)組分的濃度吸光度能真正反映待測(cè)組分的濃度.1:16:57例例1取咖啡酸，在取咖啡酸，在165干燥至恒重，精密稱(chēng)取干燥至恒重，精密稱(chēng)取10.00mg，加少，加少量乙醇溶解，轉(zhuǎn)移

26、至量乙醇溶解，轉(zhuǎn)移至200mL容量瓶中，加水至刻度線(xiàn)，取此溶容量瓶中，加水至刻度線(xiàn)，取此溶 液液5.00mL，置于，置于50mL容量瓶中，加容量瓶中，加6mol/L的的HCL 4mL，加水，加水至刻度線(xiàn)。取此溶液于至刻度線(xiàn)。取此溶液于1cm比色池中，在比色池中，在323nm處測(cè)定吸光度為處測(cè)定吸光度為0.463，已知該波長(zhǎng)處的，已知該波長(zhǎng)處的 ，求咖啡酸百分含量。，求咖啡酸百分含量。1%1927.9cmE解：解：460.4634.900 10/1004.900 10/927.9 1iCgmLg mL3610.00 1055.000 10/20050Cg mL樣664.900 10%100%10

27、0%98.0%5.000 10iCC樣咖啡酸1520050注：稀釋因子1 1、雙光束分光光度計(jì)與單光束分光光度計(jì)相比，其突、雙光束分光光度計(jì)與單光束分光光度計(jì)相比，其突出優(yōu)點(diǎn)是出優(yōu)點(diǎn)是 ( )( )(1) (1) 可以擴(kuò)大波長(zhǎng)的應(yīng)用范圍可以擴(kuò)大波長(zhǎng)的應(yīng)用范圍(2) (2) 可以采用快速響應(yīng)的檢測(cè)系統(tǒng)可以采用快速響應(yīng)的檢測(cè)系統(tǒng)(3) (3) 可以抵消吸收池所帶來(lái)的誤差可以抵消吸收池所帶來(lái)的誤差(4) (4) 可以抵消因光源的變化而產(chǎn)生的誤差可以抵消因光源的變化而產(chǎn)生的誤差1 1、雙光束分光光度計(jì)與單光束分光光度計(jì)相比，其突、雙光束分光光度計(jì)與單光束分光光度計(jì)相比，其突出優(yōu)點(diǎn)是出優(yōu)點(diǎn)是 ( )(

28、)(1) (1) 可以擴(kuò)大波長(zhǎng)的應(yīng)用范圍可以擴(kuò)大波長(zhǎng)的應(yīng)用范圍(2) (2) 可以采用快速響應(yīng)的檢測(cè)系統(tǒng)可以采用快速響應(yīng)的檢測(cè)系統(tǒng)(3) (3) 可以抵消吸收池所帶來(lái)的誤差可以抵消吸收池所帶來(lái)的誤差(4) (4) 可以抵消因光源的變化而產(chǎn)生的誤差可以抵消因光源的變化而產(chǎn)生的誤差2 2、雙波長(zhǎng)分光光度計(jì)的輸出信號(hào)是、雙波長(zhǎng)分光光度計(jì)的輸出信號(hào)是 ( )( )(1) (1) 試樣吸收與參比吸收之差試樣吸收與參比吸收之差(2) (2) 試樣在試樣在 1 1和和 2 2處吸收之差處吸收之差(3) (3) 試樣在試樣在 1 1和和 2 2處吸收之和處吸收之和(4) (4) 試樣在試樣在 1 1的吸收與參

29、比在的吸收與參比在 2 2的吸收之差的吸收之差 3 3、物質(zhì)的顏色是由于選擇性地吸收了白光中的某些波、物質(zhì)的顏色是由于選擇性地吸收了白光中的某些波長(zhǎng)所致，長(zhǎng)所致，CuSOCuSO4 4 溶液呈藍(lán)色是由于它吸收了白光中的溶液呈藍(lán)色是由于它吸收了白光中的（ ） (1) (1) 藍(lán)色光藍(lán)色光 (2) (2) 綠色光綠色光 (3) (3) 黃色光黃色光 (4) (4) 紅色光紅色光2 2、雙波長(zhǎng)分光光度計(jì)的輸出信號(hào)是、雙波長(zhǎng)分光光度計(jì)的輸出信號(hào)是 ( )( )(1) (1) 試樣吸收與參比吸收之差試樣吸收與參比吸收之差(2) (2) 試樣在試樣在 1 1和和 2 2處吸收之差處吸收之差(3) (3)

30、試樣在試樣在 1 1和和 2 2處吸收之和處吸收之和(4) (4) 試樣在試樣在 1 1的吸收與參比在的吸收與參比在 2 2的吸收之差的吸收之差 3 3、物質(zhì)的顏色是由于選擇性地吸收了白光中的某些波、物質(zhì)的顏色是由于選擇性地吸收了白光中的某些波長(zhǎng)所致，長(zhǎng)所致，CuSOCuSO4 4 溶液呈藍(lán)色是由于它吸收了白光中的溶液呈藍(lán)色是由于它吸收了白光中的（ ） (1) (1) 藍(lán)色光藍(lán)色光 (2) (2) 綠色光綠色光 (3) (3) 黃色光黃色光 (4) (4) 紅色光紅色光2 2、雙波長(zhǎng)分光光度計(jì)的輸出信號(hào)是、雙波長(zhǎng)分光光度計(jì)的輸出信號(hào)是 ( )( )(1) (1) 試樣吸收與參比吸收之差試樣吸收

31、與參比吸收之差(2) (2) 試樣在試樣在 1 1和和 2 2處吸收之差處吸收之差(3) (3) 試樣在試樣在 1 1和和 2 2處吸收之和處吸收之和(4) (4) 試樣在試樣在 1 1的吸收與參比在的吸收與參比在 2 2的吸收之差的吸收之差 3 3、物質(zhì)的顏色是由于選擇性地吸收了白光中的某些波、物質(zhì)的顏色是由于選擇性地吸收了白光中的某些波長(zhǎng)所致，長(zhǎng)所致，CuSOCuSO4 4 溶液呈藍(lán)色是由于它吸收了白光中的溶液呈藍(lán)色是由于它吸收了白光中的（ ） (1) (1) 藍(lán)色光藍(lán)色光 (2) (2) 綠色光綠色光 (3) (3) 黃色光黃色光 (4) (4) 紅色光紅色光5、K O4法氧化法氧化Mn

32、2+到到MnO4，然后用分光光度法，然后用分光光度法測(cè)定，選擇合適的空白為（測(cè)定，選擇合適的空白為（ ） (1) 蒸餾水蒸餾水 (2) 試劑空白試劑空白 (3) 除除K 外的試劑空白外的試劑空白 (4) 不含不含K O4的溶液空白的溶液空白 6、現(xiàn)有紫外可見(jiàn)吸收光譜相互干擾的、現(xiàn)有紫外可見(jiàn)吸收光譜相互干擾的A和和B兩組分，它兩組分，它們的最大波長(zhǎng)分別為們的最大波長(zhǎng)分別為 A和和 B，若用雙波長(zhǎng)測(cè)定，若用雙波長(zhǎng)測(cè)定A組分的含組分的含量，則下面哪一種選擇量，則下面哪一種選擇 1和和 2的方法是正確的？的方法是正確的？( ) （1）使）使 1和和 2分別等于分別等于 A和和 B （2）選）選 1等于等于 A，選，選 2使使B組分在組分在 2的吸光度和它在的吸光度和它在 1處處 的吸光度相等的吸光度相等 （