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文檔簡(jiǎn)介
1、(選修一 生物技術(shù)實(shí)踐)專題一 傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)的應(yīng)用課題1 果酒和果醋的制作1、發(fā)酵:通過(guò)微生物技術(shù)的培養(yǎng)來(lái)生產(chǎn)大量代謝產(chǎn)物的過(guò)程。2、有氧發(fā)酵:醋酸發(fā)酵 谷氨酸發(fā)酵 無(wú)氧發(fā)酵:酒精發(fā)酵 乳酸發(fā)酵 果酒3、酵母菌是 微生物(真菌) () · 酵母菌的生殖方式: 生殖(主要);分裂生殖;孢子生殖()。4、在有氧條件下,酵母菌進(jìn)行有氧呼吸,大量繁殖。 C6H12O66O26CO26H2O5、在無(wú)氧條件下,酵母菌能進(jìn)行酒精發(fā)酵。 C6H12O62C2H5OH6CO26、20左右最適宜酵母菌繁殖,酒精發(fā)酵時(shí)一般將溫度控制在18-25()。7、在葡萄酒自然發(fā)酵的過(guò)程中,起主要作用的是附著在葡萄皮
2、表面的野生型酵母菌。在發(fā)酵過(guò)程中,隨著酒精濃度的提高,紅葡萄皮的色素也進(jìn)入發(fā)酵液,使葡萄酒呈現(xiàn)深紅色。在缺氧、呈酸性的發(fā)酵液中,酵母菌可以生長(zhǎng)繁殖,而絕大多數(shù)其他微生物都因無(wú)法適應(yīng)這一環(huán)境而受到制約()。果醋8、醋酸菌是單細(xì)胞細(xì)菌(原核生物),代謝類型是 型,生殖方式為 裂()。9、當(dāng)氧氣、糖源都充足時(shí),醋酸菌將葡萄汁中的糖分解成醋酸();當(dāng)缺少糖源時(shí),醋酸菌將乙醇變?yōu)橐胰賹⒁胰┳優(yōu)榇姿?)。C2H5OHO2CH3COOHH2O10、控制發(fā)酵條件的作用:醋酸菌對(duì)氧氣的含量特別敏感,當(dāng)進(jìn)行深層發(fā)酵時(shí),即使只是短時(shí)間中斷通入氧氣,也會(huì)引起醋酸菌死亡。醋酸菌最適生長(zhǎng)溫度為3035(),控制好發(fā)酵
3、溫度,使發(fā)酵時(shí)間縮短,又減少雜菌污染的機(jī)會(huì)。有兩條途徑生成醋酸:直接氧化和以酒精為底物的氧化。11、實(shí)驗(yàn)流程:挑選葡萄沖洗榨汁酒精發(fā)酵果酒(醋酸發(fā)酵果醋)()12、酒精檢驗(yàn):果汁發(fā)酵后是否有酒精產(chǎn)生,可以用 (橙紅色)來(lái)檢驗(yàn)()。在酸性條件下,重鉻酸鉀與酒精反應(yīng)呈現(xiàn)灰綠色。先在試管中加入發(fā)酵液2L,再滴入物質(zhì)的量濃度為3mol/L的H2SO4 3滴,振蕩混勻,最后滴加常溫下飽和的重鉻酸鉀溶液3滴,振蕩試管,觀察顏色。疑難解答(1)你認(rèn)為應(yīng)該先沖洗葡萄還是先除去枝梗?為什么? (2)你認(rèn)為應(yīng)該從哪些方面防止發(fā)酵液被污染? (3)制葡萄酒時(shí),為什么要將溫度控制在1825?制葡萄醋時(shí),為什么要將溫度
4、控制在3035? 課題2 腐乳的制作1、腐乳制作的原理:多種微生物參與了豆腐的發(fā)酵,如青霉,酵母,曲霉,毛霉等其中起主要作用的是毛霉(一種絲狀真菌,需氧型生物)()。課題3 制作泡菜并檢測(cè)亞硝酸鹽含量1、制作泡菜所用微生物是 ,其代謝類型是 ,在無(wú)氧條件下,將葡萄糖分解為乳酸,分裂方式是 分裂()。反應(yīng)式為:C6H12O62C3H6O3+能量2、含抗生素牛奶不能生產(chǎn)酸奶的原因是抗生素殺死乳酸菌。3、常見(jiàn)的乳酸菌有乳酸鏈球菌和乳酸桿菌。 常用于生產(chǎn)酸奶。4、膳食中的亞硝酸鹽一般不會(huì)危害人體健康,國(guó)家規(guī)定肉制品中不超過(guò)30mg/kg,醬腌菜中不超過(guò)20mg/kg,嬰兒奶粉中不超過(guò)2mg/kg。亞硝
5、酸鹽被吸收后隨尿液排出體外,但在適宜pH、溫度和一定微生物作用下形成致癌物質(zhì)亞硝胺()。5、測(cè)定亞硝酸鹽含量的原理是在鹽酸酸化條件下,亞硝酸鹽與對(duì)氨基苯磺酸發(fā)生重氮化反應(yīng)后,與 N-1-萘基乙二胺鹽酸鹽結(jié)合形成玫瑰紅色染料,與已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)顯色液目測(cè)比較,再計(jì)算泡菜中亞硝酸鹽含量()。6、一般在腌制 10 天后亞硝酸鹽含量開(kāi)始降低(),故在10天之后食用最好。專題二 微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用課題一 微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)1、培養(yǎng)基:人們按照微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的不同需求,配制出供其生長(zhǎng)繁殖的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì),是進(jìn)行微生物培養(yǎng)的物質(zhì)基礎(chǔ)。2·培養(yǎng)基按照物理性質(zhì)可分為液體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基()。
6、3、在液體培養(yǎng)基中加入凝固劑 ()(是從紅藻中提取的一種多糖,在配制培養(yǎng)基中用作凝固劑)后,制成瓊脂固體培養(yǎng)基。微生物在固體培養(yǎng)基表面生長(zhǎng),可以形成肉眼可見(jiàn)的菌落。根據(jù)菌落的特征可以判斷是哪一種菌。4、液體培養(yǎng)基應(yīng)用于工業(yè)或生活生產(chǎn);固體培養(yǎng)基應(yīng)用于微生物的分離和鑒定();半固體培養(yǎng)基則常用于觀察微生物的運(yùn)動(dòng)及菌種保藏等。5、按照成分培養(yǎng)基可分為人工合成培養(yǎng)基和天然培養(yǎng)基。合成培養(yǎng)基是用成分已知的化學(xué)物質(zhì)配制而成,其中成分的種類比例明確,常用于微生物的分離鑒定。天然培養(yǎng)基是用化學(xué)成分不明的天然物質(zhì)配制而成,常用于實(shí)際工業(yè)生產(chǎn)。6、按照培養(yǎng)基的用途,可將培養(yǎng)基分為_(kāi)培養(yǎng)基和 _培養(yǎng)基。選擇培養(yǎng)基
7、是指在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì),以抑制不需要的微生物生長(zhǎng),促進(jìn)所需要的微生物的生長(zhǎng)。鑒別培養(yǎng)基是根據(jù)微生物的特點(diǎn),在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品配制而成的,用以鑒別不同類別的微生物。7、培養(yǎng)基的化學(xué)成分包括水、無(wú)機(jī)鹽、碳源、氮源、生長(zhǎng)因子等()。8、碳源:能為微生物的代謝提供碳元素的物質(zhì)。如CO2、NaHCO3等無(wú)機(jī)碳源;糖類、石油、花生粉餅等有機(jī)碳源。異養(yǎng)微生物只能利用有機(jī)碳源,自養(yǎng)微生物能利用無(wú)機(jī)碳源。單質(zhì)碳不能作為碳源。9、氮源:能為微生物的代謝提供氮元素的物質(zhì)。如N2、NH3、NO3-、NH4+(無(wú)機(jī)氮源)蛋白質(zhì)、氨基酸、尿素、牛肉膏、蛋白胨(有機(jī)氮源)等。只有固氮微生物才能利用N
8、2。10、培養(yǎng)基還要滿足微生物生長(zhǎng)對(duì)PH、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求。例如,a.培養(yǎng)乳酸桿菌時(shí)需要在培養(yǎng)基中添加維生素,b.培養(yǎng)霉菌時(shí)須將培養(yǎng)基的pH調(diào)至酸性,c.培養(yǎng)細(xì)菌是需要將pH調(diào)至中性或微堿性,細(xì)菌 pH 6.5-7.5 真菌5-6 放線菌7.5-8.5 d.培養(yǎng)厭氧型微生物是則需要提供無(wú)氧的條件無(wú)菌技術(shù)獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止外來(lái)雜菌的入侵,要注意以下幾個(gè)方面:對(duì)實(shí)驗(yàn)操作的空間、操作者的衣著和手,進(jìn)行清潔和消毒。將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等器具進(jìn)行滅菌。為避免周圍環(huán)境中微生物的污染,實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在酒精燈火焰附近進(jìn)行。實(shí)驗(yàn)操作時(shí)應(yīng)避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與周圍的物品相接
9、觸。消毒與滅菌的區(qū)別()1. 消毒指使用較為溫和的物理或化學(xué)方法僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分對(duì)人體有害的微生物(不包括芽孢和孢子)。消毒方法常用煮沸消毒法,巴氏消毒法(對(duì)于一些不耐高溫的液體)還有化學(xué)藥劑(如酒精、氯氣、石炭酸等)消毒、紫外線消毒。2. 滅菌則是指使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物,包括芽孢和孢子。滅菌方法有灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌。滅菌方法()接種環(huán)、接種針、試管口等使用灼燒滅菌法;玻璃器皿、金屬用具等使用干熱滅菌法,所用器械是干熱滅菌箱 ; 培養(yǎng)基、無(wú)菌水等使用高壓蒸汽滅菌法,所用器械是高壓蒸汽滅菌鍋 。表面滅菌和空氣滅菌等使用紫外線滅菌法,所用器械是紫外燈
10、。比較項(xiàng)理化因素的作用強(qiáng)度消滅微生物的數(shù)量芽孢和孢子能否被消滅消毒較為溫和部分生活狀態(tài)的微生物不能滅菌強(qiáng)烈全部微生物能制作牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基(1)方法步驟:計(jì)算、稱量、溶化、滅菌、倒平板()。(2)倒平板操作的步驟:將滅過(guò)菌的培養(yǎng)皿放在火焰旁的桌面上,右手拿裝有培養(yǎng)基的錐形瓶,左手拔出棉塞。右手拿錐形瓶,將瓶口迅速通過(guò)火焰。用左手的拇指和食指將培養(yǎng)皿打開(kāi)一條稍大于瓶口的縫隙,右手將錐形瓶中的培養(yǎng)基(約1020mL)倒入培養(yǎng)皿,左手立即蓋上培養(yǎng)皿的皿蓋。等待平板冷卻凝固,大約需510min。然后,將平板倒過(guò)來(lái)放置,使培養(yǎng)皿蓋在下、皿底在上。純化大腸桿菌(1)微生物接種的方法最常用的是 和 (
11、)。(2) 是通過(guò)接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作。將聚集的菌種逐步稀釋分 散到培養(yǎng)基的表面。在數(shù)次劃線后培養(yǎng),可以分離到由一個(gè)細(xì)胞繁殖而來(lái)的肉眼 可見(jiàn)的子細(xì)胞群體,這就是菌落。(3) 是將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋,然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂 固體培養(yǎng)基的表面,進(jìn)行培養(yǎng)。分為系列稀釋操作和涂布平板操作兩步。(4)用平板劃線法和稀釋涂布平板法接種的目的是(): 課題二 土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)尿素是一種重要的農(nóng)業(yè)氮肥,尿素并不能直接被農(nóng)作物吸收。只有當(dāng)土壤中的細(xì)菌將尿素分解成氨之后,才能被植物利用。土壤中的細(xì)菌之所以能分解尿素,是因?yàn)樗麄兡芎铣呻迕?。在以尿素為唯一氮源?/p>
12、培養(yǎng)基中加入粉紅指示劑(如果pH升高,指示劑變紅)()。篩選菌株(1)實(shí)驗(yàn)室中微生物的篩選應(yīng)用的原理人為提供有利于目的菌株生長(zhǎng)的條件(包括營(yíng)養(yǎng)、溫度、pH等),同時(shí)抑制或阻止其他微生物生長(zhǎng)。(2)選擇性培養(yǎng)基()在微生物學(xué)中,將允許特定種類的微生物生長(zhǎng),同時(shí)抑制或阻止其他種類微生物生長(zhǎng)的培養(yǎng)基,稱作選擇培養(yǎng)基。(3)配制選擇培養(yǎng)基的依據(jù)根據(jù)選擇培養(yǎng)的菌種的生理代謝特點(diǎn)加入某種物質(zhì)以達(dá)到選擇的目的。例如,培養(yǎng)基中不加入有機(jī)物可以選擇培養(yǎng)自養(yǎng)微生物;培養(yǎng)基中不加入氮元素,可以選擇培養(yǎng)能固氮的微生物;加入高濃度的食鹽可選擇培養(yǎng)金黃色葡萄球菌等()。統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目(1)測(cè)定微生物數(shù)量的常用方法有 法和
13、()。(2)稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)樣品中活菌的數(shù)目的原理當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí),培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落,來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。通過(guò)統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù),就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活細(xì)菌。為了保證結(jié)果準(zhǔn)確,一般設(shè)置35個(gè)平板,選擇菌落數(shù)在30300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù),并取平均值。統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低(),因此,統(tǒng)計(jì)結(jié)果一般用菌落數(shù)而不是活菌數(shù)來(lái)表示。 (C÷v)×M設(shè)置對(duì)照設(shè)置對(duì)照的主要目的是排除實(shí)驗(yàn)組中非測(cè)試因素(即無(wú)關(guān)變量)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響,提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度()。對(duì)照實(shí)驗(yàn)是指除了被測(cè)試的條件以外,其他條件都相同的實(shí)驗(yàn),其作用是對(duì)照試驗(yàn)組,排除任何其他可
14、能原因的干擾,證明確實(shí)是所測(cè)試的條件引起相應(yīng)的結(jié)果。課題三 分解纖維素的微生物的分離纖維素,一種由葡萄糖首尾相連而成的高分子化合物,是地球上含量最豐富的多糖類物質(zhì)。纖維素酶是一種復(fù)合酶,一般認(rèn)為它至少包括三種組分,即C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶,前兩種酶使纖維素分解成纖維二糖,第三種酶將纖維二糖分解成葡萄糖。纖維素最終被水解成葡萄糖,為微生物的生長(zhǎng)提供營(yíng)養(yǎng)。纖維素分解菌的篩選(1)篩選方法: ()。能夠通過(guò)顏色反應(yīng)直接對(duì)微生物進(jìn)行篩選。(2)剛果紅染色法篩選纖維素分解菌的原理剛果紅是一種染料,它可以與像纖維素這樣的多糖物質(zhì)形成紅色復(fù)合物,但并不和水解后的纖維二糖和葡萄糖發(fā)生這種反應(yīng)。當(dāng)我們?cè)诤?/p>
15、纖維素的培養(yǎng)基中加入剛果紅時(shí),剛果紅能與培養(yǎng)基中的纖維素形成紅色復(fù)合物。當(dāng)纖維素被纖維素酶分解后,剛果紅纖維素的復(fù)合物就無(wú)法形成,培養(yǎng)基中會(huì)出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈()。這樣,我們就可以通過(guò)是否產(chǎn)生透明圈來(lái)篩選纖維素分解菌。專題三 植物的組織培養(yǎng)技術(shù)課題一 菊花的組織培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)的基本過(guò)程1. 細(xì)胞分化:在生物個(gè)體發(fā)育過(guò)程中,細(xì)胞在形態(tài)、結(jié)構(gòu)和生理功能上出現(xiàn)穩(wěn)定性差異的過(guò)程。(基因的選擇性表達(dá)的結(jié)果)()2. 離體的植物組織或細(xì)胞,在培養(yǎng)了一段時(shí)間以后,會(huì)通過(guò)細(xì)胞分裂,形成_。愈傷組織的細(xì)胞排列疏松而無(wú)規(guī)則,是一種高度液泡化的呈無(wú)定形狀態(tài)的薄壁細(xì)胞。(1)由高度分化的植物組織或細(xì)胞
16、產(chǎn)生愈傷組織的過(guò)程,稱為植物細(xì)胞的_,或者叫做去分化()。(2)脫分化產(chǎn)生的愈傷組織繼續(xù)進(jìn)行培養(yǎng),又可以重新分化成根或芽等器官,這個(gè)過(guò)程叫做_()。(3)再分化形成的試管苗,移栽到地里,可以發(fā)育成完整的植物體。3. 植物組織培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用有:實(shí)現(xiàn)優(yōu)良品種的快速繁殖;培育脫毒作物;制作人工種子;培育作物新品種以及細(xì)胞產(chǎn)物的工廠化生產(chǎn)等()。比較根尖分生組織和愈傷組織的異同組織類型細(xì)胞來(lái)源細(xì)胞形態(tài)細(xì)胞結(jié)構(gòu)細(xì)胞排列細(xì)胞去向根尖分生組織受精卵正方形無(wú)液泡緊密分化成多種細(xì)胞組織愈傷組織高度分化細(xì)胞無(wú)定形高度液泡化疏松再分化成新個(gè)體相同點(diǎn)都通過(guò)有絲分裂進(jìn)行細(xì)胞增殖影響植物組織培養(yǎng)的條件1. 材料:不同的植
17、物組織,培養(yǎng)的難易程度差別很大。植物材料的選擇直接關(guān)系到試驗(yàn)的成敗。植物的種類、材料的年齡和保存時(shí)間的長(zhǎng)短等都會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果()。菊花組織培養(yǎng)一般選擇未開(kāi)花植物的莖上部新萌生的側(cè)枝作材料。一般來(lái)說(shuō),容易進(jìn)行無(wú)性繁殖的植物容易進(jìn)行組織培養(yǎng)。選取生長(zhǎng)旺盛嫩枝進(jìn)行組培的是嫩枝生理狀態(tài)好,容易誘導(dǎo)脫分化和再分化()。2. 營(yíng)養(yǎng):離體的植物組織和細(xì)胞,對(duì)營(yíng)養(yǎng)、環(huán)境等條件的要求相對(duì)特殊,需要配制適宜的培養(yǎng)基。常用的培養(yǎng)基是_,其中含有的大量元素是N、P、S、K、Ca、Mg,微量元素是Fe、Mn、B、Zn、Cu、Mo、I、Co,有機(jī)物有甘氨酸、煙酸、肌醇、維生素、蔗糖等。3. 激素:植物激素中生長(zhǎng)素和細(xì)胞分
18、裂素是啟動(dòng)細(xì)胞分裂、脫分化和再分化的關(guān)鍵性激素()。在生長(zhǎng)素存在的情況下,細(xì)胞分裂素的作用呈現(xiàn)加強(qiáng)趨勢(shì)。在培養(yǎng)基中需要添加生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素等植物激素,其濃度、使用的先后順序、用量的比例等都影響結(jié)果。使用順序?qū)嶒?yàn)結(jié)果先生長(zhǎng)素,后細(xì)胞分裂素有利于分裂但不分化先細(xì)胞分裂素,后生長(zhǎng)素細(xì)胞既分裂也分化同時(shí)使用分化頻率提高生長(zhǎng)素/細(xì)胞分裂素比值與結(jié)果比值高時(shí)促根分化,抑芽形成比值低時(shí)促芽分化,抑根形成比值適中促進(jìn)愈傷組織生長(zhǎng) +4. 環(huán)境條件:PH、溫度、光照等環(huán)境條件。 不同的植物對(duì)各種條件的要求往往不同。進(jìn)行菊花的組織培養(yǎng),一般將pH控制在5.8左右,溫度控制在1822,并且每日用日光燈照射12h。
19、()外植體在培養(yǎng)過(guò)程中可能會(huì)被污染,原因有:外植體消毒不徹底;培養(yǎng)基滅菌不徹底;接種中被雜菌污染;錐形瓶密封性差等()。專題五 DNA和蛋白質(zhì)技術(shù)凝膠電泳(了解內(nèi)容):(1)原理:不同蛋白質(zhì)的帶電性質(zhì)、電量、形狀和大小不同,在電場(chǎng)中受到的作用力大小、方向、阻力不同,導(dǎo)致不同蛋白質(zhì)在電場(chǎng)中的運(yùn)動(dòng)方向和運(yùn)動(dòng)速度不同。(2)分離方法:瓊脂糖凝膠電泳、聚丙烯酰胺凝膠電泳等。(3)分離過(guò)程:在一定pH下,使蛋白質(zhì)基團(tuán)帶上正電或負(fù)電;加入帶負(fù)電荷多的SDS,形成“蛋白質(zhì)SDS復(fù)合物”,使蛋白質(zhì)遷移速率僅取決于分子大小。注意事項(xiàng):電泳技術(shù)就是在電場(chǎng)的作用下,利用待分離樣品中各種分子帶電性質(zhì)以及分子本身大小、形狀等性質(zhì)的差異,使帶電分子產(chǎn)生不同的遷移速度,從而達(dá)到對(duì)樣品進(jìn)行分離、鑒定或提純的目的。課題1 DNA的粗提取與鑒定1. DNA粗體提取的原理():DNA和蛋白質(zhì)等其他
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