實驗四+高等植物光合色素含量的測定

1、實實驗驗背背景景K652 = 34.5實驗?zāi)康膶嶒災(zāi)康?掌握用分光光度計測定葉綠素含量的方法。掌握用分光光度計測定葉綠素含量的方法。實驗原理實驗原理 混合液中的兩個或多各組分，只要它們的光譜吸收峰不互相重疊，仍混合液中的兩個或多各組分，只要它們的光譜吸收峰不互相重疊，仍然可以根據(jù)然可以根據(jù)Lambert-Beer定律（定律（A = k L C）求出各組分含量。）求出各組分含量。Lambert定律：定律：A = k L；Beer定律定律A = k C。葉綠素。葉綠素a、b在在80%丙酮丙酮溶液中的溶液中的Amax分別為分別為663nm、645nm，由此得出：見推導(dǎo)過程，由此得出：見推導(dǎo)過程 Ca

2、 = 12.7 A663 2.69 A645 ；Cb = 22.9 A645 4.68 A663 Ca+b = 8.02 A663 + 20.20 A645實驗儀器及藥品實驗儀器及藥品實驗材料：植物葉片實驗材料：植物葉片A663 = Ca.ka1 + Cb.kb1 A645 = Cb.kb2 + Ca.ka2 分光光度計測出，故求二元一次方程組可得到此公式。分光光度計測出，故求二元一次方程組可得到此公式。k比吸收系數(shù)比吸收系數(shù)。即溶劑和波長不變的情況下，當(dāng)物質(zhì)。即溶劑和波長不變的情況下，當(dāng)物質(zhì)的濃度的濃度(C)為為1g/L(0.1%)，比色皿的直徑，比色皿的直徑(光徑，光徑，L)為為1cm時時

3、所測出的吸光度即為比吸收系數(shù)。故其單位為：所測出的吸光度即為比吸收系數(shù)。故其單位為：摩爾吸收系數(shù)摩爾吸收系數(shù)。即溶劑和波長不變的情況下，當(dāng)物即溶劑和波長不變的情況下，當(dāng)物質(zhì)的濃度質(zhì)的濃度(C)為為1mol/L，比色皿的直徑，比色皿的直徑(光徑，光徑，L)為為1cm時所時所測出的吸光度即為摩爾吸收系數(shù)。故其單位為：測出的吸光度即為摩爾吸收系數(shù)。故其單位為：cmgL.由于由于k是一個常數(shù)，而是一個常數(shù)，而A可以通過可以通過返回cmmolL.方法及步驟方法及步驟方法一：快速測定法方法一：快速測定法 由于葉綠素由于葉綠素a、b在在652nm處有共同吸收，處有共同吸收，k = 34.5 L g-1. c

4、m-1?？芍薄？芍苯佑帽銛y式葉綠素測定儀測定植物葉片的葉綠素含量，最后濃度單位接用便攜式葉綠素測定儀測定植物葉片的葉綠素含量，最后濃度單位為為mg/dm2方法二方法二: 分光光度計法分光光度計法色素提?。簩⑸鲜鲋参锶~片洗凈并用濾紙吸干，準(zhǔn)確稱取色素提?。簩⑸鲜鲋参锶~片洗凈并用濾紙吸干，準(zhǔn)確稱取已知已知的葉的葉圓片圓片0.05g左右左右，加入少許，加入少許CaCO3和石英砂及和石英砂及80%丙酮丙酮2ml，充分研磨，充分研磨，轉(zhuǎn)入離心管中轉(zhuǎn)入離心管中（離心機使用），（離心機使用），再用再用5ml 80%丙酮洗研缽，轉(zhuǎn)入離心丙酮洗研缽，轉(zhuǎn)入離心管中，平衡，管中，平衡，5000rpm離心離心10mi

5、n，上清液定容至，上清液定容至10ml備用。備用。測定測定：以以1cm比色皿分別測定比色皿分別測定A663、A645。使。使A控制在控制在0.1 0.8之間。之間。結(jié)果與討論結(jié)果與討論 1、根據(jù)原理中計算出三類色素的濃度（、根據(jù)原理中計算出三類色素的濃度（mg / L）。）。2、根據(jù)公式、根據(jù)公式 分別分別計算出各種植物葉片色素含量。計算出各種植物葉片色素含量。思考題思考題 1、一般正常的植物葉片，、一般正常的植物葉片，Chla / Chlb = 3 / 1，你所測，你所測定的結(jié)果符合此比例嗎？為什么？定的結(jié)果符合此比例嗎？為什么？ 2、兩種測定方法含量有何不同？為什么？、兩種測定方法含量有何

6、不同？為什么？ 3、怎樣把方法一中的葉綠素含量、怎樣把方法一中的葉綠素含量mg/dm2轉(zhuǎn)換為方法二中轉(zhuǎn)換為方法二中的的mg / g FW ？怎樣測定不同形態(tài)的植物葉片的葉面積？怎樣測定不同形態(tài)的植物葉片的葉面積？WVC Chl content = (mg.g-1FW)附附1.葉面積的計算葉面積的計算選取單位面積重量是一個常數(shù)的打印紙如選取單位面積重量是一個常數(shù)的打印紙如A4或或16K。一。一般般A4打印紙為打印紙為70105GSM（g/m2）。用鉛筆輕輕地沿著葉緣在用鉛筆輕輕地沿著葉緣在A4紙上紙上劃線劃線。用剪刀沿著葉緣用剪刀沿著葉緣剪下剪下A4紙紙。稱稱所剪下的所剪下的A4紙的紙的重重量量W (g)。計算計算：附附2.高速冷凍離心機的使用方法高速冷凍離心機的使用方法)2/()(mgGSMgW 葉葉面面積積溫度調(diào)節(jié)1、插上電源插座2、按T接通電源3、按功能鍵調(diào)節(jié)溫度