苦參總黃酮體內(nèi)外抗腫瘤作用實(shí)驗(yàn)研究

1、苦參總黃酮體內(nèi)外抗腫瘤作用實(shí)驗(yàn)研究 09-08-13 14:39:00 編輯：studa20 作者：孫明瑜, 左劍, 段繼峰, 韓軍, 范士明, 張煒, 朱麗芳, 姚明輝【關(guān)鍵詞】 苦參; 黃酮類; 抗腫瘤藥; 小鼠 Objective: To explore the antitumor activities of kushen (Sophora flavescens) flavonoids (KS-Fs) in vivo and in vitro. Methods: Cell proliferation was assayed by using methyl thiazolyl tetraz

2、olium (MTT) method. H22 hepatocellular carcinoma and S180 sarcoma were induced in ICR mice. Lewis lung carcinoma was induced in C57BL/6 mice. H460 and Eca-109 tumor were induced in Balb/c nude mice by injecting 5105 or 5106 tumor cells in the right flank, respectively. Results: KS-Fs could inhibit t

3、he growth of a variety of human tumor cell lines (A549, SPC-A-1, NCI-H460, etc.) in vitro. The antitumor efficacies were confirmed in the mice models of H22, S180 and Lewis lung tumors and the nude mice models of human H460 and Eca-109 xenografted tumors. The oral or intravenous maximum tolerated do

4、se of KS-Fs was more than 2.8 g/kg or 750 mg/kg respectively, far more than the oral medial lethal dose of kushen alkaloids (1.18 g/kg). No adverse reactions were observed. Conclusion: These results suggest that KS-Fs or kurarinone may be developed as a novel antitumor agent. Keywords: Sophora flave

5、scens; flavones; antineoplastic agents; mice 苦參（Sophora flavescens Aiton）為豆科槐屬植物，是中國傳統(tǒng)常用中藥之一，始載于神農(nóng)本草經(jīng)，列為中品，常用于治療急、慢性炎癥和癌癥等疾病。苦參主要含有生物堿和黃酮兩大類化學(xué)成分1。1992年以苦參堿和氧化苦參堿為主的苦參總堿注射液嗎特靈（92）衛(wèi)藥試字X-10（2）號(hào)已作為抗腫瘤藥批準(zhǔn)上市。相對(duì)于苦參堿，苦參黃酮的研究較遲?，F(xiàn)已從苦參根中分離出56種黃酮類化合物，其中大部分化合物的A環(huán)上存在異戊烯基側(cè)鏈2-14。研究表明異戊烯基側(cè)鏈黃酮有抗病原微生物、抗炎、抗腫瘤（體外）等生物活性2

6、-14。 一系列從苦參中分離出的含異戊烯基側(cè)鏈的苦參黃酮在體外對(duì)一些人腫瘤細(xì)胞株有細(xì)胞毒活性，例如人白血病HL-602、K562，小鼠白血病L121010，人乳腺癌MCF-711，非小細(xì)胞肺腺癌A549，卵巢癌SKOV-312、1A99，皮膚黑素瘤SK-MEL-2，中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤XF498，腸癌HCT12，子宮頸癌HeLa10，鼻咽上皮癌KB，KB-Vin（drug-resistant variant KB）等細(xì)胞株10。這些黃酮還可以抑制一些酶的活性，例如phospholipase C17，diacylglycerol acyltransferase9，13，tyrosinase5，14，

7、testosterone 5-reductase6，cGMP phosphodiesterase 58。但苦參黃酮在體內(nèi)是否有抑制腫瘤作用，目前國內(nèi)外均沒有相關(guān)報(bào)道。 本研究提取分離苦參總黃酮（kushen flavonoids, KS-Fs）和苦參酮（kurarinone, Kur），檢測(cè)KS-Fs和Kur對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖的影響，并比較KS-Fs與市售苦參堿（kushen alkaloids, KS-As）制劑（主要成分為苦參生物堿或氧化苦參堿）的細(xì)胞毒作用。考察KS-Fs和Kur對(duì)小鼠S180肉瘤、H22肝癌和Lewis肺癌及裸小鼠人移植腫瘤非小細(xì)胞肺癌H460和食管癌Eca-109的影響。

8、 1 材料和方法 1.1 材料 1.2 方法 5 kg苦參用乙醇滲漉、溶劑萃取得到KS-Fs粗提物126 g，得率為2.52%，黃酮含量超過55%。乙醇重溶解，過大孔樹脂得到KS-Fs，UV方法檢測(cè)黃酮含量，純度超過80%。KS-Fs經(jīng)過聚酰胺和硅膠柱聯(lián)用層析分離提取得到Kur。KS-Fs主要含有Kur，降苦參酮（norkurarinone, NKur）和二甲氧基苦參酮（2-methoxy-kurarinone, MKur）及其他黃酮，其中Kur、NKur和MKur的含量分別是29.5%、4.6%和1.4%。見圖1。 圖1 KS-Fs的高效液相圖譜和主要化合物結(jié)構(gòu) Figure 1 High-performance liquid chromatograms and chemical structures of compounds in KS-Fs 分別收集對(duì)數(shù)生長期S180和H22細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞數(shù)為5106/ml。ICR小鼠腹腔注射細(xì)胞懸液，每只0.2 ml。體內(nèi)腹水傳兩代后，無菌條件下抽取生長良好的S180肉瘤或肝癌H22小鼠腹水，用生理鹽水稀釋至5106/ml，充分混勻種植于小鼠右前腋下，每只0.2 ml。 收集對(duì)數(shù)生長期Lewis肺癌細(xì)胞，以5106/ml種植于C57BL/6小鼠右前腋下，每只0.2 ml。動(dòng)物種植腫瘤細(xì)胞后，每天觀察小鼠情況